Фармацевтический продукт, содержащий экстракт(ы) аллергена клещей, и способ его получения

Фармацевтический продукт, содержащий экстракт(ы) аллергена клещей, и способ его получения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к фармацевтическому продукту, подходящему для лечения и/или профилактики аллергии на клещей домашней пыли и аллергической астмы, вызванной клещами домашней пыли, содержащему аллерген клещей, и к способу его получения.

Уровень техники

В странах с западным образом жизни аллергия является основной проблемой для здоровья людей. Более того, частота распространения аллергического заболевания возрастает в этих странах. Несмотря на то, что аллергию в общем нельзя рассматривать в качестве угрожающего жизни заболевания, ежегодно астма является причиной значительного числа смертей. Исключительно высокое распространение аллергии примерно у 30% подростков приводит к существенной потере качества жизни, рабочих дней и финансов, и служит основанием для классификации ее как большой проблемы со здоровьем в западных странах.

Клинически аллергия и ее симптомы проявляются несколькими путями и могут различаться в зависимости от конкретного сенсибилизированного индивидуума и причин аллергии. Распространенными симптомами являются отек, зуд, покраснение и истечения из глаз и носа (ринит и конъюнктивит) и симптомы со стороны верхних и нижних дыхательных путей, такие как одышка, кашель, затрудненное дыхание, кожные проявления, такие как экзема, крапивница и зуд. Также имеют место другие симптомы, такие как утомление или бессонница. Симптоматическое лечение направлено на снижение или воздействие на тяжесть симптомов или снижение необходимости в использовании других лекарственных препаратов, назначенных параллельно. Лекарственные препараты для симптоматического лечения включают антигистаминные препараты, такие как антагонисты Н₁- и Н₂-рецепторов, кортикостероиды для интраназального и системного введения, нестероидные противовоспалительные препараты, противоотечные средства для снятия заложенности носа, такие как агонисты адренорецепторов. Лечение и ослабление одного или более симптомов аллергии и/или снижение потребности в другом лечении является дополнительной целью данного изобретения.

Аллерген-специфическая иммунотерапия (также относящаяся к иммунотерапии аллергенами, иммунотерапии аллергии, специфической вакцинации от аллергии (SAV), гипосенсибилизации или десенсибилизации) является лечением аллергического заболевания, направленным на его причину. Она оказывает влияние на основные иммунологические механизмы, приводя к стойкому или долгосрочному улучшению иммунного статуса пациента. Таким образом, протективный эффект специфической вакцинации от аллергии сохраняется дольше, чем только в периоде лечения в противоположность симптоматическому лечению препаратами. Некоторые пациенты, получая такое лечение, излечиваются и, кроме того, у большинства пациентов имеет место ослабление тяжести и симптомов заболевания, или, по меньшей мере, остановка обострения заболевания. Иммунотерапия аллергенами также обладает профилактическими эффектами, снижающими риск сенной лихорадки, переходящей в астму, и снижающими риск развития новой чувствительности.

Обычную иммунотерапию аллергенами проводят с использованием многократного введения аллергена, применяемого в течение длительного периода времени.

Длительное применение иммунотерапии аллергенами проводят инъекционным путем (также называется SCIT, SIT или подкожная иммунотерапия). Обычно аллерген вводят подкожно в возрастающих дозах до достижения поддерживающей дозы, но также используют лечебные схемы с групповым введением или без повышения дозы. Аллерген можно вводить в течение периода времени до 3 лет или более до завершения или прекращения лечения в зависимости от применяемой схемы лечения.

Альтернативным путем введения является сублингвальное введение (SLIT), которое является более удобным для пациентов, поскольку его можно проводить дома.

Продукты для иммунотерапии для применения в иммунотерапии, как правило, содержат в качестве активного ингредиента аллерген, который вызывает аллергию у пациента или его производные, который можно формулировать различными способами соответственно выбранному пути введения, такие как водные композиции, суспензии гидроксида алюминия или аллергоиды. Активный ингредиент может представлять, например, водный экстракт пыльцы, содержащий аллергены пыльцы и/или водный экстракт клещей, содержащий аллергены клещей.

Наиболее распространенные клещи домашней пыли, относящиеся к семейству Pyroglyphidae, включают Euroglyphus maynei, Dermatophagoides pteronyssinus и Dermatophagoides farinae. Их можно найти в большинстве стран мира, включая Европу, США, Китай и многие другие страны, и аллергия и аллергическая астма, вызванные клещами домашней пыли, являются распространенными заболеваниями, поражающими 25% населения.

Некоторые пациенты сенсибилизируются к Euroglyphus maynei, Dermatophagoides pteronyssinus, некоторые другие к Dermatophagoides farinae, и другие к обоим видам.

Обычно пациенты сенсибилизируются (хотя, в различной степени) к двум основным аллергенам клещей домашней пыли, то есть, аллергену группы 1 и/или аллергену группы 2.

Клещи домашней пыли содержат более 20 различных аллергенов. Однако два основных аллергена группы 1 и группы 2 являются наиболее важными аллергенами, за счет большого количества пациентов, сенсибилизированных к этим двум аллергенам, количества продуцированного IgE в ответ на эти аллергены и их содержания в природных экстрактах.

При иммунотерапии пациентов аллергенами их лечат аллергенами, к которым они сенсибилизированы. Способность аллергенов вызывать опосредованные IgE иммунные ответы делает важным контроль содержания аллергенов, в частности, аллергенов группы 1 и группы 2 в экстрактах аллергенов, вводимых пациентам с аллергией во избежание проявления побочных эффектов.

Аллергены группы 1 и группы 2 из Der f и Der p тесно связаны между собой, но не идентичны, см. «Allergens and Allergen Immunotherapy, Clinical Allergy and Immunology Series 21», Lockey and Ledfors, 4^th ed., page 162-164.

В настоящее время все продукты на рынке средств для иммунотерапии пациентов с аллергией на клещи домашней пыли содержат водные экстракты аллергенов, содержащие аллерген клещей группы 1 и группы 2. Многие продукты содержат экстракты обоих клещей Dermatophagoides pteronyssinus и Dermatophagoides farinae.

Экстракты аллергенов клещей обычно готовят культивированием клещей в подходящей для клещей среде с последующей экстракцией целой культуры клещей или экстракцией ее фракции тел клещей, «Allergens and Allergen Immunotherapy, Fourth Edition, Clinical Allergy and immunotherapy, series 21», Lockey and Ledfors, 4^th ed., страница 286.

В производстве экстракта аллергена является важным контролировать вариабельность и достичь постоянства и воспроизводимости для обеспечения оптимальной безопасности и эффективности при последующем клиническом применении. Стандартизация экстракта аллергена является сложной проблемой и в принципе включает полную производственную цепь процессов, включая установление надежных и воспроизводимых производственных процедур, см. «Allergy Methods and Protocols», Jones and Lympany (2008), chapter 12 and 13. Поскольку способность экстракта аллергена связываться с IgE связана с содержанием одного или нескольких основных аллергенов, то общая стратегия стандартизации обычно включает стандартизацию экстракта в отношении содержания выбранных данных основных аллергенов в дополнении к общей способности связывания IgE и состава. В данной области хорошо известны соответствующие методы для оценки экстрактов аллергенов, и они включают иммуноэлектрофорез, такой как CIE, CRIE, FRIE, CLIE, количественные методы с использованием моно- или полиспецифических антител, такие как SRID, RIS, QIE, а также способы получения эталонов для стандартизации. Международные стандарты существуют ограниченно, одним примером является стандарты Управления за контролем продуктов и лекарств; стандарт CBER, обеспеченный для производств экстрактов для стандартизации и метки их продукта с получением метки по биологической активности AI или BAU (единицы аллергии и биоэквивалентные единицы аллергии).

Имеется значительная вариабельность от партии к партии в весовом количестве аллергенов группы 1 и группы 2 в экстрактах аллергенов, и весовое количество аллергена группы 1 в данных экстрактах аллергенов, как правило, выше по сравнению с весовым количеством аллергена группы 2.

Хорошо известно, что аллергены клещей домашней пыли группы 1 и группы 2 обнаруживаются в телах и в фекальных частицах клещей, продуцированных клещами во время культивирования. Также хорошо известно, что аллерген группы 1 ассоциирован с фекальными частицами, и аллерген группы 2 ассоциирован с телами клещей; см. Batard et al., Int. Arch. Allergy Immunol., 2006, 140, p. 295-305.

Как уже упоминалось выше, имеется значительная вариабельность от партии к партии в содержании аллергенов группы 1 и группы 2 в партиях экстрактов целых культур клещей, включая экстракты тел клещей, что делает затруднительным приготовление экстрактов клещей с постоянным и заранее определенным содержанием аллергена группы 1 и группы 2. Конечно, это является серьезной проблемой для промышленного или крупномасштабного получения фармацевтического продукта, который будет содержать как можно более одинаковое количество активного ингредиента(в) в каждой партии.

Следовательно, усовершенствованные способы и продукт(ы) являются важными для получения максимальной эффективности производства, а также для обеспечения продуктов высокого качества в отношении эффективности и безопасности у конечного потребителя.

Сущность изобретения

Следовательно, настоящее изобретение относится к фармацевтическому продукту, содержащему экстракт аллергена или его аллергоида, который содержит, по меньшей мере, один экстракт тел клещей, выбранный из следующих групп (а)-(b):

(а) экстракт тел клещей Der p,

(b) экстракт тел клещей Der f,

и, по меньшей мере, один экстракт культур клещей, выбранный из следующих групп (с)-(g):

(с) экстракт фекальных частиц Der p,

(d) экстракт фекальных частиц Der f,

(е) экстракт целой культуры клещей Der f,

(f) экстракт целой культуры клещей Der p,

(g) комбинацию экстрактов (с)-(f).

Настоящее изобретение также относится к фармацевтическому продукту, содержащему экстракт аллергена или его аллергоида, который содержит, по меньшей мере, один экстракт тел клещей, выбранный из следующих групп (а)-(b):

(а) экстракт тел клещей Der p,

(b) экстракт тел клещей Der f,

и, по меньшей мере, один экстракт фекальных частиц клещей, выбранный из следующих групп (с)-(d):

(с) экстракт фекальных частиц Der p,

(d) экстракт фекальных частиц Der f.

Изобретение также относится к фракции тел клещей, содержащей больше чем 70% об./об. тел клещей, более предпочтительно больше чем 75% об./об. тел клещей, более предпочтительно больше чем 80% об./об. тел клещей, предпочтительно больше чем 85% об./об. тел клещей, предпочтительно больше чем 90% об./об. тел клещей, предпочтительно больше чем 95% об./об. тел клещей и наиболее предпочтительно больше чем 98% об./об. тел клещей.

Изобретение также относится к фракции фекальных частиц клещей, содержащей больше чем 70% об./об. фекальных частиц, предпочтительно больше чем 75% об./об. фекальных частиц, предпочтительно больше чем 80% об./об. фекальных частиц, предпочтительно больше чем 85% об./об. фекальных частиц, предпочтительно больше чем 90% об./об. фекальных частиц, более предпочтительно больше чем 95% об./об. фекальных частиц и наиболее предпочтительно больше чем 98% об./об. фекальных частиц.

Изобретение также относится к способу производства экстракта аллергена клещей, содержащего аллерген Der p 1 и Der p 2, где данный способ включает следующие стадии:

(а) выделение фракции(й) тел клещей Der p из культур клещей Der p, где указанная фракция(и) содержит больше чем 70% об./об. тел клещей Der p, более предпочтительно больше чем 75% об./об. тел клещей Der p, более предпочтительно больше чем 80% об./об. тел клещей Der p, предпочтительно больше чем 85% об./об. тел клещей Der p, предпочтительно больше чем 90% об./об. тел клещей Der p, предпочтительно больше чем 95% об./об. тел клещей Der p и наиболее предпочтительно больше чем 98% об./об. тел клещей Der p;

(b) необязательно объединение нескольких указанных фракций тел клещей Der p; и

(с) экстракция аллергенов из указанной фракции(й) тел клещей Der p, полученной на стадии (а) или стадии (b), как описано выше, с получением указанного экстракта аллергена клещей.

Изобретение также относится к способу производства экстракта аллергена клещей, содержащего аллергены Der f 1 и Der f 2, где способ включает следующие стадии:

(а) выделение фракции(й) тел клещей Der f из культур клещей Der f, где указанная фракция(и) содержит больше чем 70% об./об. тел клещей Der f, более предпочтительно больше чем 75% об./об. тел клещей Der f, более предпочтительно больше чем 80% об./об. тел клещей Der f, предпочтительно больше чем 85% об./об. тел клещей Der f, предпочтительно больше чем 90% об./об. тел клещей Der f, предпочтительно больше чем 95% об./об. тел клещей Der f и наиболее предпочтительно больше чем 98% об./об. тел клещей Der f;

(b) необязательно объединение нескольких указанных фракций тел клещей Der f; и

(с) экстракция аллергенов из указанной фракции(й) тел клещей Der f, полученной на стадии (а) или стадии (b), как описано выше, с получением указанного экстракта аллергена клещей.

Изобретение также относится к способу производства фармацевтической композиции для лечения и/или профилактики аллергии или аллергической астмы, вызванной клещами домашней пыли, которая содержит экстракт аллергена или его аллергоиды, имеющий заранее определенное и контролируемое содержание аллергенов, выбранных из аллергенов Der f 1, Der f 2, Der p 1 и Der p 2, и включающему следующие стадии:

(а) выделение фракций тел клещей Der p и/или фракций фекальных частиц клещей Der p из культур клещей Der p, и/или выделение фракций тел клещей Der f и/или фракций фекальных частиц клещей Der f из культур клещей Der f; необязательно

(b) объединение нескольких фракций тел клещей Der p, необязательно объединение нескольких фракций фекальных частиц Der p, необязательно объединение нескольких фракций тел клещей Der f, необязательно объединение нескольких фракций фекальных частиц Der f;

(с) экстракция аллергенов из фракции(й) тел клещей, полученной на стадии (а) или стадии (b), как описано выше, и/или экстракция аллергенов из фракции(й) фекальных частиц клещей, полученной на стадии (а) или стадии (b), как описано выше, и затем

(d) определение концентрации (мас./об.) аллергена группы 1 и группы 2 в экстрактах аллергена клещей, полученных на стадии (с), как описано выше; и необязательно

(е) смешивание одного или более экстрактов тел клещей с одним или более экстрактами фекальных частиц, полученными на стадии (с), как описано выше, с получением смеси экстрактов аллергена с заранее определенной концентрацией (мас./об.) аллергена группы 1 к аллергену группы 2, и необязательно

(f) превращение экстракта в аллергоиды экстракта.

Изобретение также относится к экстракту аллергена из серии экстрактов аллергена для применения в фармацевтическом продукте аллергена для лечения и/или профилактики аллергии и аллергической астмы, вызванной клещами домашней пыли, где каждый экстракт аллергена, содержит, по меньшей мере, один экстракт тел клещей, и, по меньшей мере, один экстракт фекальных частиц клещей, или экстракт тел клещей из фракции тел, содержащей меньше чем 70% об./об. тел клещей, или целой культуры клещей, где указанный экстракт аллергена имеет заранее определенное соотношение аллергена группы 1 и группы 2, и где коэффициент вариабельности указанного соотношения составляет не более чем 25, 20, 15, 10 или 7,5% для серии экстрактов.

Изобретение также относится к экстракту аллергена из серии экстрактов аллергена для применения в фармацевтическом продукте аллергена для диагностики аллергии, вызванной клещами домашней пыли, где каждый экстракт аллергена, содержит, по меньшей мере, один экстракт тел клещей, и, по меньшей мере, один экстракт фекальных частиц клещей, или экстракт тел клещей из фракции тел, содержащей меньше чем 70% об./об. тел клещей, или целой культуры клещей, где указанный экстракт аллергена имеет заранее определенное соотношение аллергена группы 1 и группы 2, и где коэффициент вариабельности указанного соотношения составляет не более чем 25, 20, 15, 10 или 7,5% для серии экстрактов.

Краткое описание фигур

На фиг.1 показана установка, дополнительно описанная в примере 2.

Определения

В том смысле, в котором в данном документе используется термин «клещ», он относится к клещам домашней пыли. Примерами таких клещей являются Dermatophagoides farinae и/или Dermatophagoides pteronyssinus, и/или Euroglyphus maynel или другие распространенные виды, относящиеся к семейству Pyroglyphidae.

В том смысле, в котором в данном документе используется термин «Der p», он означает Dermatophagoides pteronyssinus, «Der p 1» означает «аллерген Der p группы 1», и «Der p 2» означает «аллерген Der p группы 2».

В том смысле, в котором в данном документе используется термин «Der f», он означает Dermatophagoides farinae, «Der f 1» означает «аллерген Der f группы 1», и «Der f 2» означает «аллерген Der f группы 2».

Аллергены группы 1 и аллергены группы 2 двух видов клещей Der f и Der p существуют в природе в виде ряда изоформ, см., например, www.allergen.org по источникам аллергенов (Animalia Anthropoda/Astigmata/Dermatophagoides farinae или Dermatophagoides farinae). В том смысле, в котором в данном документе используются термины «аллерген группы 1», «группа 1», «аллерген группы 2» и «группа 2», они включают все встречающиеся в природе изоформы каждого из аллергенов группы 1 и группы 2, включая упомянутые на сайте www.allergen.org.

В том смысле, в котором в данном документе используется термины «культура клещей» или «клещевая культура», «целая культура клещей» и «целая культура», «культура клещей Der p» и «культура клещей Der f», и «культуры клещей Der p» и «культуры клещей Der f», они означают материал, полученный после культивирования Der p или Der f на подходящей среде, и он включает целые культуры, в том числе, клещей, фрагменты клещей, фекальные частицы, яйца, компоненты среды для клещей и т.д.

В том смысле, в котором в данном документе используются термины «культуральные среды или среда для клещей» или «среды или среда для клещей», они означают среду, подходящую для культивирования клещей домашней пыли.

В том смысле, в котором в данном документе используются термины «экстракт тел клещей», «экстракт тел клещей Der p» и «экстракт тел клещей Der f», они означают соответственно «экстракт одной фракции или в большей степени объединенных фракций тел клещей», «экстракт одной фракции или в большей степени объединенных фракций тел клещей Der p» и «экстракт одной фракции или в большей степени объединенных фракций тел клещей Der f».

В том смысле, в котором в данном документе используются термины «экстракт фекальных частиц клещей», «экстракт фекальных частиц», «экстракт фекальных клещей Der p» и «экстракт фекальных частиц клещей Der f», они означают соответственно «экстракт одной или более объединенных фракций фекальных частиц клещей», «экстракт одной фракции или в большей степени объединенной фракции(й) фекальных частиц клещей», «экстракт одной фракции или в большей степени объединенной фракции(й) фекальных частиц клещей Der p» и «экстракт одной фракции или в большей степени объединенной фракции(й) фекальных частиц клещей Der f».

В том смысле, в котором в данном документе используются термины «экстракт аллергена» и «экстракт аллергена (I)», то они используются взаимозаменяемо и означают экстракт, по меньшей мере, один «экстракт тел клещей» или «экстракт фекальных частиц» необязательно в комбинации с дополнительными экстрактами клещей и в любой комбинации.

В том смысле, в котором в данном документе используется термин «фракция(и) тел клещей», он означает одну или более объединенных фракций культур клещей, которые содержат больше чем 50% об./об. тел клещей, «фракция(и) тел клещей Der p» означает одну или более объединенных фракций культур клещей Der p, которые содержат больше чем 50% об./об. тел клещей Der p, и «фракция(и) тел клещей Der f» означает одну или более объединенных фракций культур клещей Der f, которые содержат больше чем 50% об./об. тел клещей Der f.

В том смысле, в котором в данном документе используются термины «фракция(и) фекальных частиц клещей» и «фракция(и) фекальных частиц», они означают одну или более объединенных фракций культур клещей, которые содержат больше чем 50% об./об. фекальных частиц клещей, «фракция(и) фекальных частиц Der p» означает одну или более объединенных фракций культур клещей Der p, которые содержат больше чем 50% об./об. фекальных частиц Der p, и «фракция(и) фекальных частиц Der f» означает одну или более объединенных фракций культур Der f, которые содержат больше чем 50% об./об. фекальных частиц Der f.

В том смысле, в котором в данном документе используется термин «s» в конце слова, он означает слово в единственной или множественной форме.

В том смысле, в котором в данном документе используется термин «лечение», он означает «излечивание или ослабление симптомов аллергии».

В том смысле, в котором в данном документе используется термин «быстро распадающаяся сублингвальная таблетка», он относится к прессованным и непрессованным лекарственным формам, которые распадаются в течение меньше чем примерно 90 сек, предпочтительно меньше чем примерно 60 сек, предпочтительно меньше чем примерно 30 сек, более предпочтительно меньше чем примерно 20 сек, еще более предпочтительно меньше чем примерно 10 сек в ротовой полости, еще более предпочтительно меньше чем примерно 5 сек и наиболее предпочтительно меньше чем примерно 2 сек после помещения под язык в ротовой полости. Такие быстро распадающиеся сублингвальные таблетки описаны в международной заявке WO 04/77994.

В том смысле, в котором в данном документе используется термин «CV», он означает коэффициент вариабельности, выраженный в процентах.

Подробное описание изобретения

Фармацевтические продукты по изобретению являются подходящими для лечения и/или профилактики аллергии на клещей домашней пыли и аллергической астмы, вызванной клещами домашней пыли.

Как уже указывалось выше, имеется высокая вариабельность от партии к партии в содержании аллергенов клещей группы 1 и группы 2 в партиях экстрактов целых культур клещей, включая экстракты тел клещей, что делает очень затруднительным готовить экстракты клещей с постоянным и заранее определенным содержанием аллергена группы 1 и группы 2.

В настоящее время было установлено, что посредством получения нескольких, например, двух экстрактов для каждой партии культуры клещей, например, выделением фракции культуры клещей, содержащей преимущественно тела клещей, и фракции культуры клещей, содержащей в основном фекальные частицы клещей, с последующей отдельной экстракцией фракции тел клещей и фракции фекальных частиц клещей, обеспечивается возможность контролировать соотношение аллергена группы 1 к аллергену группы 2 в конечном экстракте аллергена смешиванием экстракта тел клещей с экстрактом фекальных частиц клещей до достижения требуемого весового соотношения.

Также было установлено, что если культуру клещей, полученную культивированием клещей, очищают с получением фракции тел клещей, содержащей больше чем 70% об./об. или более предпочтительно больше чем 80% об./об. тел клещей, то экстракция данной очищенной фракции тел клещей обычно будет давать экстракт тел клещей, который содержит равное весовое количество аллергена группы 1 и группы 2 или больше аллергена группы 2, чем аллергена группы 1.

Экстракт тел клещей с большим весовым содержанием аллергена группы 2, чем аллергена группы 1 можно обогатить экстрактом фекальных частиц клещей, который обычно содержит больше аллергена группы 1, чем группы 2 по массе, с получением смеси экстрактов с заранее определенным и, если требуется, более равными весовыми количествами аллергена группы 1 и группы 2.

Примером экстрактов, которые обычно содержат больше по массе аллергена группы 1, чем аллергена группы 2 и которые можно использовать для обогащения, является экстракт целой культуры клещей или фракции(й) тел, содержащих меньше чем 70% об./об. тел клещей.

Экстракт тел клещей с большим содержанием аллергена группы 2, чем аллергена группы 1 также можно обогатить экстрактом целой культуры клещей или фракции тел клещей, содержащих меньше чем 70% об./об. тел клещей, которые обычно обе содержат больше по массе аллергена группы 1, чем аллергена группы 2, с получением смеси экстрактов с заранее определенными и, если требуется, более равными весовыми количествами аллергена группы 1 и группы 2.

Посредством смешения экстрактов тел клещей и другой фракции, предпочтительно фракции фекальных частиц, можно получить смесь экстрактов, которая имеет весовые соотношения аллергена группы 1 к группе 2 в более широких пределах, таких как от 1:0,6 до 1:1,6; от 1:0,7 до 1:1,5; от 1:0,8 до 1:1,4; от 1:0,9 до 1:1,3; от 1:0,95 до 1:1,2; от 1:0,98 до 1:1,15, включая смесь, которая содержит равные весовые количества аллергенов группы 1 и группы 2, т.е. смесь Der p 1, Der p 2, Der f 1 и Der f 2 в соотношении 1:1:1:1.

В одном аспекте изобретение относится к способу производства смеси экстрактов аллергена клещей для фармацевтического продукта, имеющего заранее определенное, контролируемое весовое количество аллергенов Der f 1, Der f 2, Der p 1 и Der p 2.

Изобретение также относится к фармацевтическому продукту, содержащему экстракты аллергена, выбранные, по меньшей мере, из одного экстракта тел клещей и необязательно, по меньшей мере, одного экстракта фекальных частиц клещей, выбранных из: (а) экстракта тел клещей Der p; (b) экстракта фекальных частиц Der p; (с) экстракта тел клещей Der и (d) экстракта фекальных частиц Der f, где основные аллергены Der p 1, Der p 2, Der f 1 и/или Der f 2 находятся в заранее определенных, контролируемых количествах.

В некоторых вариантах осуществления экстракты по изобретению отличаются большим весовым содержанием аллергена группы 2 по сравнению с продуктами, имеющимися на рынке. Авторы настоящей заявки обеспечили промышленный или крупномасштабный способ получения экстрактов аллергенов с измененным весовым соотношением аллергена группы 1 и группы 2.

Было установлено, что если отдельные экстракты тел клещей и фекальных частиц клещей готовят для каждого из двух видов клещей, и достаточно чистую фракцию тел клещей (и фракцию фекальных частиц клещей) используют для экстракции, то возможно получить экстракты клещей с весовым соотношением аллергена группы 1 к аллергену группы 2, которое находится в пределах от 1:0,6 до 1:1,6 для каждого вида клещей.

Посредством объединения экстрактов обоих видов можно достичь весового соотношения Der p 1, Der p 2, Der f 1 и Der f 2, которое составляет 1:1:1:1.

Такие продукты являются преимущественными, поскольку содержание аллергенов в фармацевтических продуктах хорошо контролируется.

Ранее экстракты аллергена клещей, как правило, содержали больше аллергена группы 1, чем аллергена группы 2 по массе, что могло быть причиной малоэффективного лечения пациентов с аллергией, которые, в частности, сенсибилизированы аллергеном группы 2.

Согласно изобретению обеспечивается промышленный способ получения экстрактов с более высоким весовым содержанием аллергена группы 2, чем аллергена группы 1, которое обычно находится в экстрактах.

Соответственно фармацевтический продукт, описанный выше, содержит, по меньшей мере, один экстракт тел клещей и, по меньшей мере, один экстракт фекальных частиц клещей, выбранных из групп (а)-(d), представленных выше.

Предпочтительно экстракт аллергена клещей содержит экстракт тел клещей Der p, экстракт фекальных частиц Der p, экстракт тел клещей Der f и экстракт фекальных частиц Der f.

Согласно дополнительным вариантам осуществления изобретения экстракт аллергена клещей включает:

- экстракт тел клещей Der p и экстракт фекальных частиц Der p и необязательно без экстрактов тел клещей Der f и без экстрактов фекальных частиц Der f; или

- экстракт тел клещей Der f и экстракт фекальных частиц Der f и необязательно без экстрактов тел клещей Der p и без экстрактов фекальных частиц Der p; или

- экстракт тел клещей Der p и экстракт тел клещей Der f и необязательно без экстракта фекальных частиц; или

- экстракт тел клещей Der p и без экстракта тел клещей Der f и необязательно без экстракта фекальных частиц клещей; или

- экстракт тел клещей Der f и без экстракта тел клещей Der p и необязательно без экстракта фекальных частиц клещей.

В предпочтительном варианте осуществления изобретения экстракт тел клещей Der p готовят из одной или более фракций тел клещей Der p, где экстракция фракции(й) тел клещей Der p приводит к тому, что экстракт содержит равные весовые количества аллергена группы 1 и группы 2 или больше аллергена группы 2, чем аллергена группы 1 по массе, и/или экстракт тел клещей Der f готовят из одной или более фракций тел клещей Der f, и где экстракция фракции(й) тел клещей Der f приводит к тому, что экстракт содержит равные весовые количества аллергена группы 1 и группы 2, или больше аллергена группы 2, чем аллергена группы 1 по массе.

В предпочтительном варианте осуществления:

- экстракт тел клещей Der p соответственно готовят из одной фракции или объединенных фракций культур клещей Der p, где указанная фракция(и) содержит больше чем 70% об./об. тел клещей Der p, более предпочтительно больше чем 75% об./об. тел клещей Der p, более предпочтительно больше чем 80% об./об. тел клещей Der p, предпочтительно больше чем 85% об./об. тел клещей Der p, предпочтительно больше чем 90% об./об. тел клещей Der p, предпочтительно больше чем 95% об./об. тел клещей Der p и наиболее предпочтительно больше чем 98% об./об. тел клещей Der p, и/или

- экстракт тел клещей Der f соответственно готовят из одной фракции или объединенной фракции(й) культур клещей Der f, где указанные фракции содержат больше чем 70% об./об. тел клещей Der f, предпочтительно больше чем 75% об./об. тел клещей Der f, предпочтительно больше чем 80% об./об. тел клещей Der f, предпочтительно больше чем 85% об./об. тел клещей Der f, предпочтительно больше чем 90% об./об. тел клещей Der f, более предпочтительно больше чем 95% об./об. тел клещей Der f и предпочтительно больше чем 98% об./об. тел клещей Der f; и/или

- экстракт фекальных частиц Der p соответственно готовят из одной фракции или объединенной фракции(й) культур клещей Der p, где указанная фракция(и) содержит больше чем 70% об./об. фекальных частиц Der p, предпочтительно больше чем 75% об./об. фекальных частиц Der p, предпочтительно больше чем 80% об./об. фекальных частиц Der p, предпочтительно больше чем 85% об./об. фекальных частиц Der p, предпочтительно больше чем 90% об./об. фекальных частиц Der p, более предпочтительно больше чем 95% об./об. фекальных частиц Der p, наиболее предпочтительно больше чем 98% об./об. фекальных частиц Der p; и/или

- экстракт фекальных частиц Der f соответственно готовят из одной фракции или объединенной фракции(й) культур клещей Der f, где указанная фракция(и) содержит больше чем 70% об./об. фекальных частиц Der f, предпочтительно больше чем 75% об./об. фекальных частиц Der f, предпочтительно больше чем 80% об./об. фекальных частиц Der f, предпочтительно больше чем 85% об./об. фекальных частиц Der f, предпочтительно больше чем 90% об./об. фекальных частиц Der f, предпочтительно больше чем 95% об./об. фекальных частиц Der f и более предпочтительно больше чем 98% об./об. фекальных частиц Der f.

В одном варианте осуществления изобретения фракция фекальных частиц не является такой чистой, как фракция тел.

В предпочтительном варианте осуществления каждая из фракций или объединенных фракций, описанных выше, содержит менее 10% об./об. частиц культуральной среды для клещей.

Фракция тел клещей или объединенные фракции тел клещей могут содержать до 20% об./об. фрагментов клещей (конечности, яйца и т.д.), среды и фекальных частиц (т.е. любое, что не является телами клещей или является нежелательными примесями), при условии, что количество частиц среды составляет менее 10% об./об.

Фракция фекальных частиц клещей или объединенные фракции фекальных частиц клещей содержат до 20% об./об. фрагментов клещей (конечности, яйца и т.д.) и частиц среды (т.е. любое, что не является фекальными частицами клещей или является нежелательными примесями), при условии, что количество частиц среды составляет менее 10% об./об.

В дополнительном варианте осуществления каждая из фракций или объединенных фракций в целом содержит не более чем 1,0% мас./мас. детектируемых чужеродных веществ. Фекальные частицы клещей, фрагменты клещей, тела клещей или среда для клещей не рассматриваются в качестве чужеродных веществ.

Объемные проценты тел клещей и фекальных частиц клещей во фракциях тел клещей и фекальных частиц определяют микроскопией. Подсчитывают число частиц (например, число тел или фекальных частиц клеща) и выражают в % об./об. умножением на число, которое представляет средний объем данной частицы (например, тела или фекальной частицы клеща).

Подсчет частиц микроскопией во фракциях тел клещей

Образец взвешивают и суспендируют в глицерине, содержащем раствор (25% глицерин, 5% Игепал). Образец выливают на фильтр с нанесенной сеткой под вакуумом для удаления жидкости и иммобилизации частиц на фильтре. Затем фильтр высушивают для повышения видимости при микроскопии. Произвольно выбирают сетки для подсчета и подсчитывают все частицы в выбранной сетке. Сетки выбирают, пока не будет подсчитано, по меньшей мере, 800 частиц. Описанную выше процедуру можно проводить на нескольких образцах, например, двух, трех, четырех или пяти независимых образцах. При подсчете результатов вариабельность между образцами должна удовлетворять требуемым критериям приемлемости анализа (например, больше чем 80% об./об. целых тел клещей и/или меньше чем 10% об./об. частиц среды) для гарантии совпадения данных между образцами. Если результаты для образцов совпадают, то тогда выводят среднее число, дающее общий результат анализа.

Необъемные числа переводят в объемы с использованием заранее установленных объемов для тел клещей, частиц фекалий и среды.

Подсчет частиц микроскопией во фракциях фекальных частиц

Образец взвешивают, помещают в счетную камеру с нанесенной сеткой и смешивают с парафиновым маслом с получением однородного слоя. Произвольно выбирают сетки для подсчета и подсчитывают все частицы в выбранной сетке. Сетки выбирают, пока не будет подчитано, по меньшей мере, 800 частиц. Описанную выше процедуру можно проводить на нескольких образцах, например, двух, трех, четырех или пяти независимых образцах. При подсчете результатов вариабельность между образцами должна удовлетворять требуемым критериям приемлемости анализа (например, больше чем 80% об./об. целых тел клещей и/или меньше чем 10% об./об. частиц среды) для гарантии совпадения данных между образцами. Если результаты по образцам совпадают, то тогда выводят среднее число, дающее общий результат анализа. Необъемные числа переводят в объемы с использованием заранее установленных объемов тел клещей, частиц фекалий и среды.

Объемы, установленные для тел клещей, фекальных частиц, частиц среды для клещей, являются следующими:

тела клещей Der f: 21132000 кубических микрометров

тела клещей Der p: 12926000 кубических микрометров

частицы среды для клещей во фракциях тел: 6721000 кубических микрометров

частицы среды для клещей в фекальных фракциях: 19000 кубических микрометров

фекальные частицы: 19000 кубических микрометров

Как указывалось выше, настоящее изобретение основано на установлении того, что посредством очистки фракции(й) тел клещей таким образом, чтобы они содержали больше чем 70% об./об. тел клещей или более предпочтительно больше чем 80% об./об, возможно приготовить экстракт частиц тел из такой фракции тел клещей или объединенных фракций, в котором весовое количество аллергена группы 1 в экстракте ниже чем весовое количество аллергена группы 2 или весовая концентрация аллергена группы 1 и группы 2 является равной.

Согласно предпочтительному варианту осуществления весовое количество аллергена группы 1 ниже, чем весовое количество аллергена группы 2 в экстракте(х) тел клещей и весовое количество аллергена группы 1 значительно выше, чем аллергена группы 2 в экстрактах фекальных частиц клещей.

Соответственно весовое соотношение аллергена группы 1 к аллергену группы 2 ближе к весовому соотношению аллергена группы 1 к аллергену группы 2 в экстрактах тел клещей, чем весовое соотношение аллергена группы 1 к аллергену группы 2 в экстрактах фекальных частиц клещей, которые используют для его приготовления.

Согласно и