Лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний

Лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано для эффективного лечения и профилактики различных инфекционных вирусных заболеваний, включая профилактику инфицирования ВИЧ, профилактику и лечение заболеваний, вызываемых ВИЧ или ассоциированных с ВИЧ, в том числе СПИДа, лечение острых и хронических вирусных инфекционных заболеваний, таких как острый вирусный гепатит А, В, С и другие вирусные гепатиты, герпесвирусная инфекция, грипп различных типов и острые респираторные вирусные инфекции, а также для эффективного лечения и профилактики бактериальных инфекций, вызванных различными возбудителями, например псевдотуберкулеза, коклюша, иерсиниоза, пневмонии различной этиологии и т.д.

Из уровня техники известно лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний, в том числе вирусной этиологии, на основе активированной формы сверхмалых доз антител к интерферону (RU 2192888 C1, А61К 39/395, 20.11.2002). Однако данное лекарственное средство имеет ограниченные терапевтические возможности и малопригодно для лечения заболеваний, вызываемых ВИЧ, острых и хронических вирусных инфекций, включая вирусные гепатиты различных типов и герпесвирусные инфекции, а также для лечения и профилактики бактериальных инфекций, вызванных различными возбудителями, например псевдотуберкулеза, коклюша, иерсиниоза, пневмонии различной этиологии

Изобретение направлено на создание лекарственного средства для эффективного лечения и профилактики широкого спектра различных вирусных инфекционных заболеваний, в том профилактики инфицирования ВИЧ, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых ВИЧ или ассоциированных с ВИЧ, лечения острых и хронические вирусных инфекций, включая острый вирусный гепатит А, В, С и другие вирусные гепатиты, герпесвирусную инфекцию, а также для эффективного лечения и профилактики бактериальных инфекций, вызванных различными возбудителями, например псевдотуберкулеза, коклюша, иерсиниоза, пневмонии различной этиологии.

Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что лекарственное средство для лечения инфекционных заболеваний согласно изобретению содержит активированную - потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека в сочетании с активированной - потенцированной формой антител к CD4 рецептору Т-лимфоцитов и активированной - потенцированной формой антител к гистамину.

При этом активированную - потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека, антител к CD4 рецептору Т-лимфоцитов и антител к гистамину используют в виде гомеопатически активированного - потенцированного водного или водно-спиртового раствора, активность которого обусловлена процессом многократного разведения матричного раствора соответствующих антител в водном или водно-спиртовом растворителе в сочетании с внешним механическим воздействием каждого разведения.

Кроме того, лекарственное средство может быть выполнено в твердой лекарственной форме и содержать эффективное количество гранул нейтрального носителя, насыщенного активированной -потенцированной формой антител к гамма-интерферону человека, активированной - потенцированной формой антител к CD4 рецептору Т- лимфоцитов и активированной - потенцированной формой антител к гистамину, и фармацевтически приемлемые добавки.

При этом водные или водно-спиртовые растворы гомеопатически активированных - потенцированных форм антител к гамма-интерферону человека, антител к CD4 рецептору Т-лимфоцитов и антител к гистамину получены путем многократного последовательного разведения и промежуточного внешнего воздействия из соответствующих матричных аффинно- очищенных антител с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл.

Причем каждый из компонентов используют в виде смеси различных, преимущественно сотенных, гомеопатических разведений.

При выполнении лекарственного средства в твердой лекарственной форме фармацевтически приемлемые добавки включают лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

Лекарственное средство, содержащее активированную - потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека, антител к CD4 рецептору Т-лимфоцитов и антител к гистамину, используют для лечения вирусных инфекционных заболеваний, в том числе для профилактики инфицирования ВИЧ, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых ВИЧ или ассоциированных с ВИЧ, в том числе СПИДа; для лечения различных вирусных гепатитов; для лечения хронического вирусного гепатита С; для лечения герпесвирусной инфекции; для лечения заболеваний, вызванных вирусом гриппа; для лечения острых респираторных вирусных инфекций.

Кроме того, лекарственное средство, содержащее активированную - потенцированную форму антител к гамма-интерферону человека, антител к CD4 рецептору Т-лимфоцитов и антител к гистамину используют для лечения бактериальных инфекционных заболеваний, вызванных различными возбудителями, в том числе для лечения псевдотуберкулеза, коклюша, иерсиниоза, пневмонии различной этиологии.

Заявленное лекарственное средство является комплексным и может содержать действующие компоненты в равном объемном соотношении, при этом каждый компонент может быть приготовлен в виде смеси из трех соответствующих матричных растворов, разведенных соответственно в 100¹², 100³⁰ и 100⁵⁰ (или 100²⁰⁰) раз, что эквивалентно сотенным разведениям С12, С30, С50 (или С200), приготовленным по гомеопатической технологии.

Заявленное лекарственное средство рекомендуется принимать, предпочтительно, по 1-3 таблетке 2-6 раз в день (предпочтительно 2-4 раза в день).

Предложенное сочетание активированных - потенцированных форм антител к гамма-интерферону человека, антител к CD4 рецептору Т-лимфоцитов и антител к гистамину обеспечивает получение неожиданного синергетического терапевтического эффекта, экспериментально подтвержденного на адекватных моделях, который заключается в повышении эффективности терапевтического воздействия и снижение вирусной нагрузки как при профилактике инфицирования ВИЧ, так и при профилактике и лечении заболеваний, вызываемых ВИЧ или ассоциированных с ВИЧ, в том числе СПИДа, а также и при лечении острых и хронических вирусных заболеваний, включая герпес, острый вирусный гепатит А, В, С и другие вирусные гепатиты, грипп различных типов и острые респираторные вирусные инфекции, а также при лечении и профилактике бактериальных инфекций, вызванных различными возбудителями, например псевдотуберкулеза, коклюша, иерсиниоза, пневмонии различной этиологии. При этом заявленное лекарственное средство расширяет арсенал средств, предназначенных для дл эффективного лечения и профилактики широкого спектра различных вирусных инфекционных заболеваний, а также для эффективного лечения и профилактики бактериальных инфекций, вызванных различными возбудителями,

Возможно применение заявленного лекарственного средства в комплексной терапии в сочетании с другими противовирусными препаратами, противобактериальными препаратами и симптоматическими средствами.

Заявленное лекарственное средство готовят, преимущественно, следующим образом.

Для приготовления активированной - потенцированной формы действующих компонентов используют моноклональные или, преимущественно, поликлональные антитела, которые могут быть получены по известным технологиям - методикам, описанным, например, в книге: Иммунологические методы, под ред. Г. Фримеля, М., «Медицина», 1987, с. 9-33; или, например, в статье Laffly Ε., Sodoyer R. Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after. - 2005 - Vol. 14. - N 1-2. P. 33-55.

Поликлональные антитела могут быть получены активной иммунизацией животных. Для этого по специально разработанной схеме животным делают серию инъекций требуемым в соответствии с изобретением веществом - антигеном или конъюгированным антигеном, например гамма-интерфероном человека, CD4 рецептором, гистамином. В результате проведения такой процедуры получают моноспецифическую антисыворотку с высоким содержанием антител, которую и используют для получения активированной - потенцированной формы. При необходимости проводят очистку антител, присутствующих в антисыворотке, например, методом аффинной хроматографии, путем применения фракционирования солевым осаждением или ионообменной хроматографии.

Моноклональные антитела получают, например, с помощью гибридомной технологии. Причем начальная стадия процесса включает иммунизацию, основанную на принципах, уже разработанных при приготовлении поликлональных антисывороток. Дальнейшие этапы работы предусматривают получение гибридомных клеток, продуцирующих клоны одинаковых по специфичности антител. Их выделение проводится теми же методами, что и в случае поликлональных антисывороток.

Предпочтительным для приготовления заявленного лекарственного средства является использование поликлональных антител, которые в качестве матричного (исходного) раствора с концентрацией, предпочтительно, 0,5÷5,0 мг/мл, применяют для последующего приготовления активированной - потенцированной формы.

Предпочтительной для приготовления каждого компонента является использование смеси трех водных или водно-спиртовых разведений первичного матричного раствора антител, разведенных соответственно в 100¹², 100³⁰ и 100⁵⁰ (или 100²⁰⁰) раз, что эквивалентно сотенным разведениям С12, С30 и С50 (или С200), приготовленным по гомеопатической технологии.

При приготовлении заявленного лекарственного средства в твердой лекарственной форме на нейтральный носитель наносится смесь указанных компонентов.

Для получения поликлональных антител к гамма-интерферону человека в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов используют адъювант и, например, цельную молекулу гамма-интерферона человека следующей последовательности:

Возможно для получения поликлональных антител к гамма-интерферону человека в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов использование адъюванта и, например, одного полипептидного фрагмента гамма-интерферона человека, выбранного из следующих последовательностей:

Перед отбором крови за 7-9 дней проводят 1-3 внутривенные инъекции для повышения уровня антител. В процессе иммунизации у кроликов отбирают небольшие пробы крови для оценки количества антител. Максимальный уровень иммунного ответа на введение большинства антигенов достигается через 40-60 дней после первой инъекции. После окончания первого цикла иммунизации кроликов в течение 30 дней дают восстановить здоровье и проводят реиммунизацию, включающую 1-3 внутривенные инъекции. Для получения антисыворотки из иммунизированных кроликов собирают кровь в центрифужную пробирку объемом 50 мл. С помощью деревянного шпателя удаляют со стенок пробирки образовавшиеся сгустки и помещают палочку в сгусток, образовавшийся в центре пробирки. Кровь помещают в холодильник (температура 4°C) на ночь. На следующий день удаляют сгусток, прикрепившийся к шпателю, и центрифугируют оставшуюся жидкость при 13000g в течение 10 мин. Супернатант (надосадочная жидкость) является антисывороткой. Полученная антисыворотка должна быть желтого цвета. Можно добавлять к антисыворотке 20% NaN₃ до конечной концентрации 0,02% и хранить до использования в замороженном состоянии при температуре -20°C (или без добавления NaN₃ - при температуре -70°). Выделение из антисыворотки антител к гамма-интерферону возможно следующим образом:

1) 10 мл антисыворотки кролика разбавляют в 2 раза 0,15 Μ NaCl добавляют 6,26 г Na₂SO₄, перемешивают и инкубируют 12-16 ч при 4°C;

2) выпавший осадок удаляют центрифугированием, растворяют в 10 мл фосфатного буфера и затем диализуют против того же буфера в течение ночи при комнатной температуре;

3) после удаления осадка центрифугированием раствор наносят на колонку с ДЭАЭ-целлюлозой, уравновешенной фосфатным буфером;

4) фракцию антител определяют, измеряя оптическую плотность элюата при 280 нм.

Очистку антител производят методом аффинной хроматографии на колонке с антигеном, путем связывания антител к гамма-интерферону с антигеном (гамма-интерферон), прикрепленным к нерастворимому матриксу колонки, с последующим элюированием антител концентрированными растворами соли.

Полученный, таким образом, буферный раствор поликлональных кроличьих антитела к гамма-интерферону человека, очищенных на антигене, с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0÷3,0 мг/мл, используют в качестве матричного (исходного) раствора для последующего приготовления активированной - потенцированной формы.

Поликлональные антитела к CD4 рецептору получают по вышеуказанному способу, используя в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов адъювант и молекулу CD4 рецептора следующей аминокислотной последовательности:

Возможно для получения поликлональных антител к CD4 рецептору в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов использование адъюванта и, например, одного полипептидного фрагмента CD4 рецептора, выбранного из следующих последовательностей:

Получение поликлональных антител к гистамину может быть произведено по вышеуказанному методу получения поликлональных антител к интерферону человека с использованием в качестве иммуногена (антигена) для иммунизации кроликов адъювант и гистамин (4-(2-аминоэтил)-имидазол, или бета-имидазолил-этиламин с химической формулой C₅H₉N₃.

Предпочтительным для приготовления заявленного лекарственного средства является использование буферных растворов поликлональных антител к гамма-интерферону человека, к CD4 рецептору Т-лимфоцитов и к гистамину с концентрацией 0,5÷5,0 мг/мл, предпочтительно 2,0÷3,0 мг/мл, которые в качестве матричного (первичного) раствора используют для последующего приготовления активированной - потенцированной формы.

Активированную - потенцированную форму каждого компонента готовят путем равномерного уменьшения концентрации в результате последовательного разведения 1 части каждого подвергаемого разведению раствора, начиная с упомянутого матричного раствора, в 9 частях (для десятичного разведения D) или в 99 частях (для сотенного разведения С) или в 999 частях (для тысячного разведения М) нейтрального растворителя в сочетании с многократным вертикальным встряхиванием (потенцированием, или "динамизацией") каждого полученного разведения и использованием отдельных емкостей для каждого последующего разведения до получения требуемой потенции - кратности разведения по гомеопатическому методу (см., например, В.Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967 г., с. 14-29).

Внешнюю обработку в процессе уменьшения концентрации также можно осуществлять ультразвуком, электромагнитным или иным физическим воздействием.

Например, для приготовления 12-го сотенного разведения С12 одну часть матричного (исходного) раствора антител, например к гамма-интерферону человека, с концентрацией 2,5 мг/мл разводят в 99 частях нейтрального водного или водно-спиртового растворителя и многократно (10 и более раз) вертикально встряхивают - потенцируют, получая 1-е сотенное С1 разведение. Из 1-го сотенного С1 разведения приготовляют 2-е сотенное разведение С2. Данную операцию повторяют 11 раз, получая 12-е сотенное разведение С12. Таким образом, 12-е сотенное разведение С12 представляет собой раствор, полученный разбавлением последовательно 12 раз в разных емкостях 1-й части исходного матричного раствора антител к гамма-интерферону человека с концентрацией 2,5 мг/мл в 99-ти частях нейтрального растворителя, т.е. раствор, полученный разведением матричного раствора в 100¹² раз. Аналогичные операции с соответствующей кратностью разведения проводят для получения разведений С30 и С50 или С200.

При использовании, например, активированной - потенцированной формы антител к гамма-интерферону человека в виде смеси различных, преимущественно сотенных, разведений каждое разведение (например, С12, С30, С50) приготовляют раздельно по описанной выше технологии до разведения на 3 разведения меньше, чем конечное (соответственно, до получения С9, С27, С47), и затем вносят в соответствии с составом смеси в одну емкость по одной части каждого компонента и смешивают с требуемым количеством растворителя (соответственно, с 97 частями для сотенного разведения). Далее полученную смесь последовательно дважды разводят в соотношении 1 к 100, потенцируя полученный раствор после каждого разведения. При этом получают активированную - потенцированную форму антител, например, к гамма-интерферону человека в сверхмалой дозе, полученной разведением матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных разведений С12, С30, С50.

Возможно использование каждого компонента в виде смеси других различных разведений, например десятичных и/или сотенных, (D20, С30, С100 или С12, С30, С200 и т.д.), приготовленных по гомеопатической технологии, эффективность которых определяют экспериментально.

Для получения лекарственного средства водные или водно-спиртовые растворы смешивают, преимущественно, в равном объемном соотношении и используют в жидкой лекарственной форме.

Заявленное лекарственное средство может быть использовано и в твердой лекарственной форме в виде фармацевтической композиции, которая содержит технологически необходимое (эффективное) количество нейтрального носителя - например, лактозы - насыщенного путем пропитывания до насыщения смесью, приготовленных по вышеуказанной технологии, водных или водно-спиртовых растворов активированных - потенцированных форм антител, и фармацевтически приемлемые добавки, включающие, преимущественно, лактозу, целлюлозу микрокристаллическую и магния стеарат.

Получения твердой оральной формы заявленного лекарственного средства производят в установке кипящего слоя (например, типа «Hüttlin Pilotlab» производства компании Hüttlin GmbH) путем орошения до насыщения вводимых в псевдоожиженный - кипящий слой гранул нейтрального вещества - лактозы (молочного сахара) с размером частиц 50÷500 мкм, предварительно полученным водным или водно-спиртовым раствором активированной потенцированной формы антител компонентов, преимущественно, в соотношении 1 кг раствора антител на 5 или 10 кг лактозы (1:5-1:10) с одновременной сушкой в потоке подаваемого под решетку нагретого воздуха при температуре не выше 40°C. Расчетное количество 10÷34 масс. частей в ысушенных гранул, насыщенных активированной - потенцированной формой антител, загружают в смеситель и смешивают с 25÷85 масс. частей от общей массы загрузки «ненасыщенной» чистой лактозы (для снижения стоимости и некоторого упрощения и ускорения технологического процесса без снижения эффективности лечебного воздействия). Затем в эту смесь добавляют стеарат магния в количестве 0,1÷1 масс. частей от общей массы загрузки и микрокристаллическую целлюлозу в количестве 3÷10 масс. частей от общей массы загрузки, с формированием круглых таблеток массой 150÷500 мг, преимущественно массой 300 мг, пропитанных водно-спиртовым раствором (3,0-6,0 мг/табл.) активированной - потенцированной формы в сверхмалой дозе каждого компонента, приготовленной из матричного раствора, разведенного в 100¹², в 100³⁰ в 100⁵⁰ (или 100²⁰⁰) раз, что эквивалентно смеси сотенных разведений С12, С30 и С50 (или С200), приготовленных по гомеопатической технологии.

Для проведения экспериментальных исследований были использованы антитела, приготовленные по заказу специализированной биотехнологической фирмой.

Пример 1

Для исследования свойств заявленных лекарственных средств для лечения пациентов группы активного препарата №1 были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных - потенцированных форм поликлональных аффинно-очищенных кроличьих антител к гамма-интерферону человека (AT к ИФН-γ) и CD4 рецептору (AT к CD4) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30, С200 (СМД AT к ИФН-γ+AT к CD4); для лечения пациентов группы активного препарата №2 были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных - потенцированных форм поликлональных аффинно-очищенных кроличьих антител к гамма-интерферону человека (AT к ИФН-γ), CD4 рецептору (AT к CD4) и гистамину (AT к Η) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30, С200 (СМД AT к ИФН-γ+AT к CD4+AT к Н); для лечения пациентов группы активного препарата №3 были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные водно-спиртовым раствором (3 мг/табл.) активированной - потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к гамма-интерферону человека, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30, С50 (СМД AT к ИФН-γ).

Оценку эффективности трех препаратов, содержащих СМД AT к ИФН-γ+AT к CD4, СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4+AT к Η и СМД AT к ИФН-γ, в лечении хронического вирусного гепатита С (ХГС) проводили в ходе сравнительного исследования в параллельных группах с участием 18 больных (14 мужчин и 4 женщины) в возрасте от 27 до 52 лет. Диагноз ХГС подтверждали на основании профиля сывороточных маркеров - AT к HCV и HCV RNA. Все пациенты, включенные в исследование, имели 2 или 3 генотип HCV, малосимптомное медленно прогрессирующее течение ХГС с низкой активностью (менее 3-кратного повышения уровня сывороточных аминотрансфераз, или <100 Ед/л), ни один из пациентов ранее не получал противовирусной терапии. В исследование не включались пациенты с положительным результатом серологического анализа на HIV, RW, анти-НСА, HBsAg или HBcor Ab, с циррозом печени, тяжелыми сопутствующими заболеваниями в стадии обострения, талассемией или другой гемоглобинопатией, алкогольной и/или лекарственной/наркотической зависимостью, после трансплантации органов, постоянно принимающие иммуносупрессивные препараты, беременные и кормящие ребенка грудью женщины. Пациентам первых трех групп была назначена терапия каким-либо исследуемым препаратом в дозе 1 таблетка 3 раза в день в течение 24 недель: пациентам 1 группы (n=5) - композиция СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4; 2 группы (n=4) - композиция СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4+AT к Н; 3 группы (n=4) - СМД AT к ИФН-γ. Контрольную группу (№4) составили 5 пациентов с персистирующей виремией и стойко нормальными уровнями аминотрансфераз (<20 Ед/л), которым не назначалась какая-либо терапия. В ходе исследования проводились врачебные осмотры, контроль вирусной нагрузки и лабораторных показателей, регистрировалась сопутствующая терапия, возможные нежелательные явления. В качестве критериев эффективности лечения на 24-й неделе оценивались вирусная нагрузка HCV RNA и активность аланинаминотрансферазы (АЛТ).

Данные по вирусной нагрузке (числу копий HCV RNA), представленные таблице 1 в виде значений медианы (Me), первого и третьего квартилей (Q1, Q3), свидетельствуют о положительной ее динамике, полученной у пациентов 1-3 групп к концу 24-недельной терапии. Прием препарата СМД AT к ИФН-γ+AT к CD4 приводил к уменьшению числа копий HCV RNA у 4 из 5 человек 1 группы, при этом среднее снижение вирусной нагрузки составило 75%. Сходные показатели были получены у пациентов, которые принимали препарат СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4+AT к Η в течение 24 недель: противовирусная активность регистрировалась у всех пациентов (у 4 из 4 человек группы 2), среднее снижение вирусной нагрузки составило 70%. При этом у 2 пациентов (по одному из группы 1 и группы 2) был получен полный вирусологический ответ по окончании терапии. Противовирусная активность монокомпонентного препарата СМД AT к ИФН-γ была несколько ниже, поскольку снижение числа копий HCV RNA отмечено у 3 из 4 пациентов 3 группы, среднее снижение вирусной нагрузки составило 55%. Среди участников исследования контрольной группы положительной динамики вирусной нагрузки не выявлено.

Противовирусная активность исследуемых препаратов сочеталась с положительной динамикой уровня АЛТ, которую зарегистрировали у пациентов 1-3 групп к концу 24 недель лечения. Нормализация уровня АЛТ была отмечена у 2 пациентов группы СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4, у 1 пациента группы СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4+AT к Η и также у 1 пациента группы СМД AT к ИФН-γ. У 1 пациента контрольной группы на фоне увеличения вирусной нагрузки через 24 недели наблюдения показатель АЛТ превысил верхнюю границу нормы (>20 Ед/л).

В ходе наблюдения не было выявлено каких-либо нежелательных явлений, связанных с приемом исследуемых препаратов, что свидетельствовало о хорошей их переносимости. Отсутствие патологических отклонений со стороны анализов крови и мочи, а также биохимических показателей, включая почечные и печеночные маркеры, подтверждало безопасность лечения.

Таким образом, в результате исследования были получены данные об эффективности и безопасности препаратов СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4, СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4+AT к Η и СМД AT к ИФН-γ, в лечении больных с ХГС. Наиболее отчетливый противовирусный эффект отмечен у препарата СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4 и СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4+AT к Н, что подтверждалось положительной динамикой вирусной нагрузки, а также зарегистрированным у 2 пациентов полным вирусологическим ответом к концу 24 недель терапии. Противовирусная эффективность препаратов, содержащих СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4, СМД AT к ИФН-γ+АТ к CD4+AT к Η и СМД AT к ИФН-γ, сочеталась со снижением активности ХГС, что выражалось в снижении и даже нормализации уровня АЛТ у части пациентов к окончанию 24-недельного курса терапии.

Пример 2

Для исследования свойств заявленных лекарственных средств для лечения пациентов группы активного препарата №1 были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных - потенцированных форм поликлональных аффинно-очищенных кроличьих антител к гамма-интерферону человека (анти-IFN-γ) и CD4 рецептора (анти-CD4) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30, С200 (СМД анти-IFN-γ+анти-CD4); для лечения пациентов группы активного препарата №2 были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных - потенцированных форм поликлональных аффинно-очищенных кроличьих антител к гамма-интерферону человека (анти-IFN-γ), к CD4 рецептору (анти-CD4) и гистамину (анти-Н) в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30, С200 (СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-Н). Для лечения пациентов группы сравнения были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные водно-спиртовым раствором (3 мг/табл.) активированной - потенцированной формы поликлональных кроличьих антител к гамма интерферону человека, очищенных на антигене, в сверхмалой дозе, полученной сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100⁵⁰ раз, эквивалентной смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30, С50 (СМД анти-IFN-γ).

Антиретровирусную активность композиций СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H оценивали в ходе открытого сравнительного клинического исследования с участием пациентов, инфицированных вирусом иммунодефицита человека (ВИЧ), которые наблюдались в Территориальном центре по профилактике и борьбе со СПИДом и инфекционными заболеваниями. В исследование были включены 65 мужчин и 32 женщины (всего 97 пациентов) в возрасте от 18 до 48 лет с вирусной нагрузкой ≥150 копий РНК ВИЧ-1 в 1 мл плазмы и уровнем CD4-лимфоцитов не ниже 250 клеток/мкл (или ≥0,25×10⁹/л). 34 из 97 участников исследования наблюдались по поводу бессимптомного инфекционного статуса и ранее не получали лечения по поводу ВИЧ-инфекции (наивные пациенты). 63 из 97 пациентов находились на антиретровирусной терапии (APT) в течение 1-2 лет. В исследование не включались пациенты с циррозом печени, вирусным гепатитом С, тяжелыми сопутствующими заболеваниями в стадии обострения, беременные женщины, а также лица, принимающие внутривенно наркотические средства. Исследование проводили в осенне-зимний период, когда отмечался сезонный подъем заболеваемости гриппом и острыми респираторными инфекциями (ОРВИ).

75 пациента были рандомизированы в три группы, им была назначена терапия препаратами группы 1 и 2 или препаратом сравнения группы 3 в профилактической (в отношении гриппа/ОРВИ) дозировке - по 1 таблетке 1 раз в день в течение 6 недель, в том числе: пациентам группы 1 (n=25) была назначена композиция СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 в виде монотерапии (подгруппа 1А: наивные пациенты, n=12) или в сочетании с APT (подгруппа 1Б, n=13); пациентам группы 2 (n=23) была назначена композиция СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H, в том числе, в виде монотерапии (подгруппа 2А: наивные пациенты, n=11) или в сочетании с APT (подгруппа 2Б, n=12); пациентам группы 3 (n=27) был назначен препарат СМД анти-IFN-γ, в том числе, в виде монотерапии (подгруппа 3A: наивные пациенты, n=11) или в сочетании с APT (подгруппа 3Б, n=16). Контрольную (четвертую) группу (n=22) составили пациенты, которые продолжали получать APT по прежней схеме без добавления какого-либо изучаемого препарата (группа APT).

Исходно и через 6 недель у всех пациентов оценивали вирусную нагрузку, уровень CD4 и CD8 лимфоцитов, иммунорегуляторный индекс CD4/CD8. Для определения копий РНК ВИЧ-1 в плазме крови использовали наборы СОВ AS AMPLICOR HTV-1 MONITOR Kit, version 1,5 для автоматического ПЦР-анализатора COB AS AMPLICOR (Roche, Швейцария). Фенотипирование циркулирующих лимфоцитов периферической крови выполняли на проточном цитофлюориметре FACSCount (Becton Dickinson, США) с использованием стандартных тест-систем FACSCount Reagent Kit, содержащих антитела к CD3, CD4, CD8, меченные флюорохромами FITC, РЕ.

В таблице 2 представлены данные по вирусной нагрузке (числу копий РНК ВИЧ) в виде значений медианы (Me), первого и третьего квартилей (Q1, Q3) у пациентов исследуемых групп в динамике наблюдения. В результате исследования установлено, что 6-недельный прием композиции СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 приводил к снижению количества копий РНК ВИЧ-1 у 58% наивных пациентов (у 7 из 12 человек подгруппы 1А), при этом среднее снижение вирусной нагрузки составило 16,9%. Сочетанное применение композиции СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и APT было не менее эффективным, поскольку уменьшение количества копий РНК ВИЧ-1 отмечено у 62% участников исследования (у 8 из 13 человек подгруппы 1Б), а снижение вирусной нагрузки в среднем было 18,2% от исходного уровня. Примерно сходные показатели получены при использовании композиции СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H: противовирусная активность регистрировалась у 55% ВИЧ-инфицированных наивных пациентов (у 6 из 11 человек подгруппы 2А) и у 67% лиц, получавших комбинацию СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-Н и APT (у 8 из 12 человек подгруппы 2Б); среднее снижение вирусной нагрузки составило 17,3% и 18,9% соответственно. Антиретровирусная активность, отмеченная в первых двух группах, была несколько выше результатов лечения, полученных у пациентов группы сравнения. Монотерапия СМД анти-IFN-Y через 6 недель снижала количество копий РНК ВИЧ-1 у 36% наивных пациентов (у 4 из 11 человек подгруппы 3А), при этом уменьшение вирусной нагрузки в среднем составило 9,5%. Сочетанное применение монокомпонентного препарата СМД анти-IFN-γ и APT повышало эффективность терапии, способствуя снижению вирусной нагрузки у 50% участников исследования (у 8 из 16 человек подгруппы 3Б) в среднем на 14,2%. Аналогичные показатели лечения у лиц, получавших только APT (контрольная группа 4), составили 32% (у 7 из 22 человек группы 4) и 13,3% соответственно.

Анализ показателей субпопуляций циркулирующих лимфоцитов в динамике наблюдения (Таблица 3) показал более выраженное, чем в контрольной группе, увеличение числа CD4 лимфоцитов через 6 недель терапии при использовании СМД анти-IFN-γ+анти-CD4, СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H и СМД анти-IFN-γ в виде монотерапии у наивных пациентов (подгруппы 1А, 2А и 3А) или при сочетании с APT (подгруппы 1Б, 2Б и 3Б). При этом число CD8 через 6 недель приема препаратов (моно- либо сочетанная терапия) не менялось ни в одной из изучаемых групп. Позитивная динамика со стороны CD4-лимфоцитов в ходе лечения приводила к повышению иммунорегуляторного индекса CD4/CD8, наиболее значимому в подгруппах пациентов, принимавших композиции СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H (моно- или сочетанная терапия - группы 1 и 2) и СМД анти-IFN-γ в сочетании с APT (подгруппа 3Б).

Отсутствие у пациентов в ходе лечения нежелательных явлений, связанных с приемом исследуемых лекарственных средств, свидетельствовало о хорошей переносимости препаратов. Повторный контроль лабораторных показателей, в том числе, анализов крови и мочи, биохимических маркеров, подтверждало безопасность лечения.

Таким образом, проведенное исследование продемонстрировало антиретровирусную эффективность препарата СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и препарата СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-Н, обусловленную, очевидно, изменением функциональной активности CD4 рецепторов, что препятствует проникновению ВИЧ в клетки, а также подавлением репликации ВИЧ внутри клетки за счет активации процессов транскрипции мРНК противовирусных белков. Установлено, что снижение вирусной нагрузки, отмеченное в результате 6-недельного приема препарата СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и препарата СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-H в дозе 1 таблетка в день, превышает противовирусный эффект, который регистрируется через 6 недель приема монокомпонентного препарата СМД анти-IFN-γ в той же дозе либо продолжающейся по прежней схеме APT. Сочетание какого-либо препарата СМД анти-IFN-γ+анти-CD4, СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-Н или СМД анти-IFN с APT несколько усиливает противовирусную активность последней, что проявляется в уменьшении среднего значения вирусной нагрузки через 6 недель у большего процента участников исследования.

Показано влияние препаратов СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-Н на соотношение CD4/CD8 лимфоцитов у ВИЧ-инфицированных пациентов (за счет некоторого увеличения абсолютного количества CD4-клеток), наиболее выраженное при совместном использовании с APT. Учитывая одновременное снижение вирусной нагрузки у пациентов, принимающих препараты СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-Н, можно полагать, что увеличение количества CD4-клеток связано с пополнением популяции этих клеток за счет здоровых (неинфицированных) клеток. Сочетание APT с препаратами СМД анти-IFN-γ+анти-CD4, СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-Н или СМД анти-IFN более эффективно в отношении восстановления иммунорегуляторного индекса CD4/CD8, чем продолжающаяся APT по прежней схеме.

Антиретровирусная активность препаратов СМД анти-IFN-γ+анти-CD4 и СМД анти-IFN-γ+анти-CD4+анти-Н позволяет использовать их с профилактической и лечебной целью как у наивных ВИЧ-инфицированных пациентов, так и у лиц, получающих APT.

Пример 3

Для экспериментального изучения заявленного технического решения были использованы таблетки массой 300 мг, пропитанные фармацевтической композицией, содержащей водно-спиртовые растворы (6 мг/табл.) активированных - потенцированных форм поликлональных аффинно-очищенных кроличьих антител к гамма-интерферону человека (AT ГИ), к CD4 рецептору (AT CD4), к гистамину (AT Г), в сверхмалых дозах (СМД), полученных сверхразведением исходного матричного раствора в 100¹², 100³⁰, 100²⁰⁰ раз каждого компонента, эквивалентных смеси сотенных гомеопатических разведен