Ингибитор скопления жидкости в полостях организма

Ингибитор скопления жидкости в полостях организма

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники

Настоящее изобретение относится к ингибитору скопления жидкости в полостях организма.

Уровень техники

В животном теле содержится большое количество воды; и внеклеточную жидкость, в основном заполняющую пространства между тканями или полости организма, тракты или циркуляторные системы (например, тканевую жидкость, жидкость полостей организма, кровь или лимфу) называют «жидкостью организма». В частности, жидкость, заполняющую полости организма, называют «жидкостью полостей организма» (например, плевральный выпот, асцит, перикардиальный выпот). Известно, что большие количества жидкостей организма обнаружены у пациентов, например, с заболеванием печени, заболеванием почек, сердечными заболеваниями, раком или воспалительными заболеваниями, тогда как малые количества жидкостей организма присутствуют у здоровых людей. Из-за развития процессов скопления жидкости организма возникают такие симптомы, как боль в груди, боль в области живота, чувство переполнения и затрудненность дыхания. Вследствие того что такого рода симптомы значительно снижают качество жизни пациента, на ранних стадиях необходимо лечение по удалению жидкости из полостей организма.

В то время как основным направлением лечения скопления жидкости в полости организма является лекарственная терапия с введением диуретиков, в случае серьезных симптомов используют введение трубки непосредственно в полость организма для прямого удаления жидкости из полости организма путем ее отсасывания. В ходе клинических исследований в полость организма пациента, например, с раком пищеварительной системы или раком яичников вводят местно высокую дозу интерферона-α или интерферона-β с целью подавления процесса скопления ракового (или злокачественного) плеврального выпота или асцитов (непатентные документы 1-3). Однако эффект подавления процесса скопления жидкости в полости организма, полезный в клинической практике, достигнут не был.

Были исследованы содержащие интерферон, используемый в качестве терапевтического средства для опосредованных вирусом заболеваний печени, рассеянного склероза или рака, препараты интерферона с повышенной устойчивостью in vivo, достигнутой путем ковалентного связывания интерферона и полиэтиленгликоля (патентные документы 1-6 и непатентные документы 4 и 5).

Список цитированной литературы

Патентные документы

Патентный документ 1: патент США № 4917888

Патентный документ 2: международная публикация WO 1987/00056

Патентный документ 3: международная публикация WO 1999/55377

Патентный документ 4: международная публикация WO 2000/23114

Патентный документ 5: JP Н9-25298 А (1997)

Патентный документ 6: патент Японии № 4850514

Непатентные документы

Непатентный документ 1: Cavin et al., Cancer, (1993) Vol. 71, pp. 2027-2030

Непатентный документ 2: Wakui et al., Biotherapy, (1998) Vol. 2, pp. 339-347

Непатентный документ 3: Gebbia et al., in Vivo, (1991) Vol. 5, pp. 579-582

Непатентный документ 4: Pepinsky et al., The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, (2001) Vol. 297, pp. 1059-1066

Непатентный документ 5: Bailon et al., Bioconjugate Chemistry, (2001) Vol. 12, pp. 195-202

Краткое изложение изобретения

Проблемы, решаемые с помощью изобретения

Однако в ходе введения диуретиков с целью лечения скопления жидкости в полостях организма пациент подвергается риску из-за нарушения электролитного баланса, что, таким образом, вызывает ухудшение самочувствия пациента. В этом случае присутствует проблема: если выведение мочи из организма становится затруднительным, усиливается скопление жидкости в полостях организма. В дополнение влияние диуретиков на удаление жидкости из полостей организма является недостаточным в случаях перитонеальной диссеминации или асцитов, и их терапевтические эффекты ограничены. Кроме того, что процедура пункции является очень затруднительной для пациента, удаление жидкости из полостей организма путем ее прямого отсасывания имеет кратковременный эффект, а также нарушает условия питания или иммунитет вследствие потери организмом альбумина и глобулина.

В случаях злокачественного плеврального выпота, а также асцитов, ни разовое введение интерферона-β (непатентный документ 3), ни болюсное введение интерферона-α (непатентный документ 1), ни внутрибрюшинное введение интерферона-α не приводило к уменьшению количества жидкости в полостях организма до клинически значимых уровней. В случаях злокачественных асцитов местное введение 6000000 единиц интерферона-β 3 раза в неделю, также использованное для снятия других показателей, не вызвало никаких значительных терапевтических эффектов. Кроме того, результатом ежедневного и местного введения дозы в 18000000 единиц стала частота ответа меньшая, чем 50% (непатентный документ 2). Даже в случаях местного и непрерывного введения интерферона в полость организма не удалось достичь достаточного эффекта подавления скопления жидкости в полостях организма, полезного в клинической практике.

Таким образом, целью настоящего изобретения является предоставление ингибитора скопления жидкости в полостях организма, проявляющего лекарственную эффективность в процессах скопления жидкости в полостях организма, устойчивого к введению диуретиков и проявляющего терапевтические эффекты даже при системном введении.

Способы решения проблемы

Заявители настоящего изобретения провели глубокие исследования с целью решения данной проблемы. В результате чего они обнаружили, что ковалентное связывание интерферона с полиалкиленгликолем оказывает превосходный ингибиторный эффект на процесс скопления жидкости в полостях организма, включающий в качестве действующего вещества ковалентный конъюгат интерферона с полиалкиленгликолем.

Предпочтительно полиалкиленгликоль представляет собой полиэтиленгликоль.

Предпочтительно интерферон представляет собой интерферон I типа или интерферон-λ и особенно предпочтительно, если интерферон-α или интерферон-β выбирают среди различных видов интерферона I типа.

Ингибитор скопления жидкости в полостях организма предпочтительно подавляет процесс скопления плеврального выпота или асцитов, а плевральный выпот или асциты предпочтительно представляют собой рефрактерный плевральный выпот или асциты, образовавшиеся в результате рака, цирроза или почечной недостаточности.

В частности, в большинстве случаев рефрактерного плеврального выпота или асцитов невозможно полагаться на эффект, опосредованный введением диуретиков, и, таким образом, лечение с использованием ингибиторов скопления жидкости в полостях организма имеет большую клиническую значимость.

Ингибитор скопления жидкости в полостях организма вводят местно в полость организма, но предпочтительным является его системное введение. В этом случае предпочтительно, если процесс системного введения выбирают из группы, состоящей из подкожного введения, внутрикожного введения, внутримышечного введения, внутривенного введения и внутриартериального введения.

Путем системного введения снижаются риски неправильной пункции внутренних органов в ходе местного введения в полость организма, внутриполостной инфекции и ускорения метастазирования в присутствии раковых клеток в полости организма. По сравнению с применением внутриполостного введения возможность использования системного введения способствует расширению диапазона необходимого медицинского оборудования и набора специалистов в области здравоохранения. В дополнение внутримышечное введение или подкожное введение осуществляют посредством самоинъекций.

В то время как ингибитор скопления жидкости в полости организма можно вводить ежедневно с периодичностью один или два раза в день, предпочтительным является его дробное введение с периодичностью один раз в два или более дней, более предпочтительным является его дробное введение с периодичностью от одного раза в два дня до одного раза в месяц, еще более предпочтительным является его дробное введение с периодичностью от одного раза или двух раз в неделю до одного раза в месяц и особенно предпочтительным является его дробное введение с периодичностью один или два раза в неделю.

В дополнение использование ингибитора процесса скопления жидкости в полости организма в комбинации с противоопухолевым средством является эффективным. В этом случае противоопухолевое средство предпочтительно представляет собой как минимум одно противоопухолевое средство, выбранное из группы, состоящей из 5-фторурацила, тегафур-урацила, тегафур-гимерацил-отерацила и капецитабина.

Эффекты изобретения

В соответствии с настоящим изобретением ингибитор скопления жидкости в полости организма обладает способностью подавления процесса скопления жидкости в полости организма и удаления жидкости из полости организма путем системного введения так же, как и путем местного введения. Таким образом, в соответствии с настоящим изобретением ингибитор скопления жидкости в полости организма оказывает терапевтические эффекты на процесс скопления жидкости в полости организма и облегчать боль в груди, боль в области живота, чувство переполнения и затрудненность дыхания, воздействуя на процесс скопления жидкости в полости организма.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1 показывает эффекты внутрибрюшинного введения ковалентного конъюгата интерферона-β с полиэтиленгликолем для подавления процесса скопления асцитов, наблюдаемые на моделях мышей с брюшинными метастазами при раке желудка.

Фиг. 2 показывает эффекты подкожного введения ковалентного конъюгата интерферона-β с полиэтиленгликолем для подавления процесса скопления асцитов, наблюдаемые на моделях мышей с брюшинными метастазами при раке желудка.

Фиг. 3 показывает эффекты подкожного введения ковалентного конъюгата интерферона-α с полиэтиленгликолем для подавления процесса скопления асцитов, наблюдаемые на моделях мышей с брюшинными метастазами при раке желудка.

Фиг. 4 показывает эффекты внутрибрюшинного введения ковалентного конъюгата интерферона-β с полиэтиленгликолем для подавления процесса повторного появления скопления асцитов (т.е. повторного скопления жидкости после парацентеза асцитической жидкости), наблюдаемые на моделях мышей с брюшинными метастазами при раке желудка.

Фиг. 5 показывает эффекты подкожного введения ковалентного конъюгата интерферона-β с полиэтиленгликолем для подавления процесса повторного появления скопления асцитов (т.е. повторного скопления жидкости после парацентеза асцитической жидкости), наблюдаемые на моделях мышей с брюшинными метастазами при раке желудка.

Фиг. 6 показывает эффекты подкожного введения ковалентного конъюгата интерферона-β с полиэтиленгликолем для увеличения коэффициента выживаемости, наблюдаемые на моделях мышей с брюшинными метастазами при раке яичников.

Варианты осуществления изобретения

В соответствии с настоящим изобретением ингибитор скопления жидкости в полости организма характеризуется содержанием в нем в качестве действующего вещества ковалентного конъюгата интерферона с полиалкиленгликолем.

Одна или две или более молекул полиалкиленгликоля присоединяются к одной молекуле интерферона. Общая молекулярная масса молекул полиалкиленгликоля, присоединенных к одной молекуле интерферона, предпочтительно составляет от 5000 до 240000, более предпочтительно от 10000 до 80000, еще более предпочтительно от 39000 до 45000. В настоящем документе ковалентное присоединение двух молекул полиалкиленгликоля, каждая из которых имеет молекулярную массу 20000, к одной молекуле интерферона означает, что полиалкиленгликоль с молекулярной массой 40000 ковалентно присоединен к одной молекуле интерферона.

Одна или две или более молекул интерферона присоединяются к одной молекуле интерферона. Даже в этом случае молекулярная масса одной молекулы полиалкиленгликоля предпочтительно составляет от 5000 до 520000, более предпочтительно от 10000 до 200000, еще более предпочтительно от 39000 до 45000.

Одна молекула полиалкиленгликоля состоит из многих повторяющихся фрагментов, и молекулярная масса полиалкиленгликоля в основном варьируется от одной отдельной молекулы до другой отдельной молекулы. Таким образом, молекулярную массу полиалкиленгликоля выражают как среднюю молекулярную массу. В данном описании соответственно под молекулярной массой полиалкиленгликоля понимают среднюю молекулярную массу.

Наряду с полиалкиленгликолем предпочтительно используют полимерное соединение, применяемое в качестве носителя лекарственных средств, инертное или имеющее предельно низкую активность в живом организме и являющееся нетоксичным или имеющим предельно низкую токсичность.

Примеры интерферона включают белок, имеющий аминокислотную последовательность, аналогичную таковой природного интерферона (далее в настоящем документе обозначаемого как «природный интерферон»); интерферон с измененным составом аминокислот, имеющий аминокислотную последовательность, полученную из аминокислотной последовательности природного интерферона путем делеции, замены или добавления одной или нескольких аминокислот и обладающий биологической активностью интерферона (далее в настоящем документе обозначаемой «активностью интерферона»); интерферон с половиной аминокислотной цепи, отличной от таковой природного интерферона; и интерферон без половины аминокислотной цепи.

Примеры интерферона также включают рекомбинантный интерферон, полученный путем генной инженерии на основе аминокислотной последовательности или нуклеотидной последовательности природного интерферона.

Интерферон получают при помощи общепринятых технологий, таких как экстракция из ткани, белковый синтез путем генной инженерии или биологическое производство с использованием натуральной или рекомбинантной клетки, экспрессирующей интерферон. Также в качестве интерферона используют доступный в продаже интерферон.

Интерферон предпочтительно представляет собой интерферон I типа, или интерферон-λ. Примеры интерферонов I типа включают: интерферон-α, интерферон-β, интерферон-ω, интерферон-ε и интерферон-κ; и более предпочтительными являются интерферон-α или интерферон-β.

Термин «ковалентный конъюгат интерферона с полиалкиленгликолем» обозначает конъюгат одной или двух или более молекул полиалкиленгликоля, ковалентно присоединенный к одной молекуле интерферона и имеющий интерферонную активность; или конъюгат одной, двух или более молекул интерферона, ковалентно присоединенный к одной молекуле полиалкиленгликоля и имеющий интерферонную активность. Предпочтительным является конъюгат одной или двух или более молекул полиалкиленгликоля, ковалентно присоединенный к одной молекуле интерферона и имеющий интерферонную активность. Ковалентный конъюгат интерферона с полиалкиленгликолем представляет собой конъюгат интерферона, напрямую присоединенный к полиалкиленгликолю, или конъюгат интерферона, присоединенный к полиалкиленгликолю через связующее вещество, или т.п.

Дозу ковалентного конъюгата интерферона с полиалкиленгликолем выражают в титрах интерферона (условные единицы, далее в настоящем документе показанные как «U») или в массе (г). Ковалентный конъюгат интерферона с полиалкиленгликолем предпочтительно сохраняет как минимум 10% специфичной активности интерферона (т.е. активности интерферона на массу) по сравнению с интерфероном до ковалентного присоединения к полиалкиленгликолю.

В данном описании под присоединением полимерного соединения к белку также понимают химическую модификацию или модификацию белка с полимерным соединением. Под ковалентным конъюгатом интерферона с полиалкиленгликолем также понимают интерферон, химически модифицированный с полиалкиленгликолем, или просто модифицированный интерферон. В частности, под ковалентным конъюгатом интерферона с полиэтиленгликолем (далее в настоящем документе сокращенно PEG) также понимают PEG-модифицированный интерферон, пегилированный интерферон или PEG-присоединенный интерферон.

Интерферон ковалентно присоединен к полиалкиленгликолю при помощи, например, аминогруппы, тиольной группы, N-конца, C-конца или аминокислотной цепи интерферона. В качестве альтернативного участка ковалентного связывания используют неприродную аминокислоту, введенную в молекулу интерферона путем известной технологии генной инженерии.

Интерферонную активность ковалентного конъюгата интерферона с полиалкиленгликолем испытывают путем известной техники биологического анализа. В частности, для определения интерферонной активности высокочувствительные к интерферону клетки (например, FL-клетки) обрабатывают анализируемым веществом, содержащим интерферон; к анализируемым клеткам с целью их инфицирования добавляют известное количество инфекционного Sindbis вируса, Vesicular stomatitis вируса (сокращенно «VSV») и оценивают степень устойчивости клеток против вирусов, индуцированных интерфероном (далее в настоящем документе обозначаемую как «противовирусная активность»). Противовирусную активность оценивают с использованием в качестве индикатора степени ингибирования вируса и выражают как титр интерферона (U), основанный на факторе разведения анализируемого вещества, ингибирующего 50% цитопатических эффектов (сокращенно ЦПЭ), для уничтожения клеток в результате роста вируса (Shigeyasu Kobayashi et al., «Menneki Seikagaku Jikkenhou in Zoku Seikagaku Jikken Koza 5 (Successive Course on Biochemical Experiment 5: Experimental Approaches in Immunobiochemistry))», Japanese Biochemical Soc. ed., Tokyo Kagaku Dojin, (1986) p. 245).

Ковалентный конъюгат интерферона с полиалкиленгликолем получают путем известной технологии. Например, метод ковалентного присоединения полиалкиленгликоля к аминогруппе интерферона описан в патенте США № 4917888 и международной публикации WO 1987/00056. Метод ковалентного присоединения полиалкиленгликоля к тиольной группе интерферона описан в международной публикации WO 1999/55377. Метод ковалентного присоединения полимера к N-концу интерферона описан в международной публикации WO 2000/23114 и JP H09-25298 A (1997). Метод ковалентного присоединения полиалкиленгликоля к аминокислотной цепи интерферона описан в Macromolecular Chemistry (1978) Vol. 179, p. 301 и патентах США №№ 4101380 и 4179337. Метод ковалентного присоединения полиалкиленгликоля к неприродной аминокислоте, введенной в молекулу интерферона, описан в Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters (2004) Vol. 14, pp. 5743-5745. Ковалентное присоединение полиалкиленгликоля к С-концу интерферона осуществляют путем присоединения цистеина или неприродной аминокислоты к С-концу или близко к нему.

Необходимо активировать концевую часть полиалкиленгликоля для того, чтобы подвергнуть ее реакции ковалентного присоединения, в зависимости от способа образования связи между интерфероном и полиалкиленгликолем. Производное полиалкиленгликоля, содержащее концевую часть, активированную гидроксисукцинимидным эфиром, нитробензолсульфонатным эфиром, малеимидом, йодоацетамидом, карбоновой кислотой, азидом, фосфином, или амин используют для ковалентного связывания интерферона и полиалкиленгликоля; и такого рода производное полиалкиленгликоля получают при помощи известных технологий.

Ковалентный конъюгат интерферона с полиалкиленгликолем предпочтительно представляет собой ковалентный конъюгат интерферона с PEG. Предпочтительно, если в ковалентном конъюгате интерферона с PEG одна молекула PEG с молекулярной массой, составляющей от 5000 до 240000, предпочтительно от 10000 до 80000 и более предпочтительно от 39000 до 45000, присоединена к одной молекуле интерферона.

Предпочтительный пример ковалентного конъюгата интерферона с PEG представляет собой ковалентный конъюгат человеческого интерферона-β с PEG, который получают при помощи метода, описанного, например, в патенте JP № 4850514. PEG предпочтительно присоединен к молекуле человеческого интерферона-β через аминогруппу лизина в положении 19 или 134 аминокислотной последовательности человеческого интерферона-β; и ковалентный конъюгат одной молекулы PEG ковалентно присоединен к молекуле человеческого интерферона-β через наиболее предпочтительный участок. Конкретным примером является ковалентный конъюгат одной молекулы PEG с молекулярной массой 40000 или более (предпочтительно 42000), ковалентно присоединенный к молекуле человеческого интерферона-β через аминогруппу лизина в положении 134 его аминокислотной последовательности.

Под термином «лизин в положении 134 аминокислотной последовательности человеческого интерферона-β», использованным в настоящем документе, заявитель понимает аминокислоту лизин, стоящую в 134 положении относительно N-концевой аминокислоты (метионин, обозначенный как положение 1) аминокислотной последовательности человеческого интерферона-β, состоящей из 166 аминокислот (SEQ ID NO: 1). В данном документе позиции аминокислотных остатков в молекуле интерферона обозначены относительно N-терминальной аминокислоты, положение которой принято за положение 1.

Другой предпочтительный пример ковалентного конъюгата интерферона с PEG представляет собой ковалентный конъюгат человеческого интерферона-α с PEG. Конкретные примеры включают ковалентный конъюгат интерферона-α с PEG, в котором одна разветвленная молекула PEG с молекулярной массой, равной примерно 40000, ковалентно присоединена к молекуле человеческого интерферона-α-2а через один из остатков лизина (основные участки: положения 31, 121, 131 и 134) посредством амидного мостика (основное название Пегинтерферон альфа-2а); и ковалентный конъюгат интерферона-α с PEG, в котором одна метокси-PEG молекула с молекулярной массой, равной примерно 12000, ковалентно присоединена к молекуле человеческого интерферона-α-2b через один из аминокислотных остатков (цистеин в положении 1, гистидин в положении 7, лизин в положении 31, гистидин в положении 34, лизин в положении 49, лизин в положении 83, лизин в положении 112, лизин в положении 121, тирозин в положении 129, лизин в положении 131, лизин в положении 133, лизин в положении 134, серин в положении 163 или лизин в положении 164) через карбонильную группу (основное название Пегинтерферон-α-2b).

Под термином «полость организма» заявитель понимает область тела животного, находящуюся в изолированном состоянии от внешней среды, что включает полость грудной клетки, брюшную полость и перикардиальную полость. Под термином «жидкость полости организма» заявитель понимает жидкость, находящуюся в полости организма; и жидкость в полости грудной клетки, брюшной полости или перикардиальной полости обозначают как плевральный выпот, асциты или перикардиальный выпот соответственно.

Под термином «скопление жидкости в полости организма» заявитель подразумевает, что количество жидкости в полости организма превышает ее нормальное количество. Под термином «ингибитор скопления жидкости в полости организма» заявитель понимает лекарственное средство, обладающее эффектом подавления процесса скопления жидкости в полости организма и удаления жидкости из полости организма.

Подавляющий эффект ингибитора на процесс скопления жидкости в полости организма измеряют с использованием моделей основных заболеваний, вызывающих скопление жидкости в полости организма (например, рак). Примеры такого рода моделей заболеваний включают модели мышей с брюшинными метастазами при раке желудка (Cancer Science, (2003) Vol. 94, pp. 112-118) и модели мышей с брюшинными метастазами при раке яичников (Molecular cancer therapeutics, (2007) Vol. 6, pp. 2959-2966).

Ингибитор скопления жидкости в полости организма используют для профилактики или лечения скопления жидкости в полости организма, его также используют для избегания рецидива после физического удаления жидкости полости организма. Ингибитор скопления жидкости в полости организма предпочтительно используют при лечении от скопления плеврального выпота или асцитов.

Примеры основных заболеваний, вызывающих скопления жидкости в полости организма, включают рак, инфекционные заболевания (например, бактериальную, туберкулезную, грибковую инфекцию, атипичную пневмонию, вирус или паразитическую инфекцию), воспалительные заболевания (например, панкреатит, саркоидоз или асбестоз легких), диффузные болезни соединительной ткани (например, ревматизм, системную красную волчанку, синдром Шегрена, гранулематоз Вегенера или синдром Чарга-Стросса), эндокринные заболевания (например, микседему), заболевания печени (например, цирроз), заболевания почек (например, нефротический синдром) и сердечные заболевания (например, застойную сердечную недостаточность). Ингибитор скопления жидкости в полости организма оказывает терапевтический эффект на процесс скопления жидкости в полости организма, вызванный такого рода заболеваниями.

В дополнение ингибитор скопления жидкости в полости организма также оказывает терапевтический эффект на рефрактерное скопление жидкости в полости организма, особенно предпочтительно использование этого эффекта при лечении от рефрактерного плеврального выпота или скопления асцитов. Под термином «рефрактерное скопление жидкости в полости организма» заявитель понимает скопление жидкости в полости организма, контролирование которого путем медицинского лечения, например диуретиками, затруднительно (т.е. устойчивое к действию диуретиков или непереносящее действие диуретиков); этот термин включает рефрактерный плевральный выпот или асциты, скопления которых образовались вследствие рака, цирроза или почечной недостаточности.

Среди рефрактерных плевральных выпотов или рефрактерных асцитов, в частности плевральный выпот и асциты, скопления которых образовались вследствие рака, относятся к раковому (или злокачественному) плевральному выпоту и раковым (или злокачественным) асцитам соответственно; их симптомы известны серьезностью. Однако ингибитор скопления жидкости в полости организма также оказывает терапевтические эффекты на скопление злокачественного плеврального выпота или злокачественных асцитов. Злокачественный плевральный выпот или злокачественные асциты образуются в результате внутригрудных или брюшинных метастазов рака или плеврита или перитонита, вызванных раком.

Особенно предпочтительно использование ингибитора скопления жидкости в полости организма для лечения или профилактики среди рефрактерных плевральных выпотов или рефрактерных асцитов, злокачественного плеврального выпота или злокачественных асцитов.

Ингибитор скопления жидкости в полости организма используют в смеси с другими средствами в равных пропорциях или в комбинации с другими средствами с целью дополнения или усиления эффектов подавления процесса скопления жидкости в полости организма или снижения дозы.

Примеры лекарственных средств, которые используют в комбинации с ингибитором скопления жидкости в полости организма, включают средства, в основном используемые для лечения основных заболеваний, вызывающих скопление жидкости в полости организма. Например, в случае подавления процесса скопления жидкости в полости организма при раке ингибитор используют в комбинации с противоопухолевым средством. Примеры предпочтительных противоопухолевых средств, которые используют в комбинации, включают молекулярные мишени; алкилирующие средства; антиметаболиты; средства, ингибирующие микротрубочки; ингибиторы топоизомеразы; препараты платины и канцеростатические средства. Примеры наиболее предпочтительных противоопухолевых средств включают, в частности, цисплатин, карбоплатин, иринотекана гидрохлорид, 5-фторурацил, тегафур-урацил, тегафур-гимерацил-отерацил, капецитабин, таксол, таксотер, иматиниб и сунитиниб. Тегафур-гимерацил-отерацил натрия (торговое название TS-1^®) является наиболее предпочтительной формой тегафур-гимерацил-отерацила. Ингибитор процесса скопления жидкости в полости организма, использованный в комбинации с противоопухолевым средством, вводят одновременно с противоопухолевым средством. С целью усиления эффекта подавления образования асцитов в качестве альтернативы ингибитор вводят отдельно от противоопухолевого средства, перед или после введения противоопухолевого средства.

В соответствии с настоящим изобретением ингибитор скопления жидкости в полости организма можно вводить в одну область в виде комбинации с противоопухолевым средством. В качестве альтернативы эти средства можно вводить раздельно в одну область или различные области.

Дозу (титр) и частоту введения ингибитора для лечения скопления жидкости в полости организма в достаточной степени определяют исходя из возраста, массы тела и симптомов пациента, а также лекарственной формы, пути введения и т.п. Средство можно вводить человеку в дозе от 10000 U до 18000 U/доза с интервалом в один или два раза в день. Прерывистое введение предпочтительно проводят с интервалом один раз в два или более дней, более предпочтительно с интервалом один раз в два дня за один месяц, еще более предпочтительно с интервалом один раз или два раза в неделю за один месяц и особенно предпочтительно с интервалом один раз или два раза в неделю.

Ингибитор скопления жидкости в полости организма можно использовать в медицине для лечения и профилактики скопления жидкости в полости организма у млекопитающих (например, у мышей, крыс, хомяков, кроликов, собак, обезьян, коров, овец или человека).

В клинической практике ковалентный конъюгат интерферона с полиалкиленгликолем можно использовать напрямую или в форме фармацевтической композиции в смеси с известным фармакологически приемлемым носителем, вспомогательным веществом и т.п.

Ингибитор скопления жидкости в полости организма можно вводить системно или местно. В данном документе местное введение обозначает введение в область организма, где желательно достижение прямого эффекта, т.е. в такую область, где начинается или уже начался процесс скопления жидкости. Например, внутрибрюшинное введение ингибитора для лечения скопления жидкости в полости организма при асцитах относится к местному введению. Системное введение обозначает способ введения, посредством которого лекарственное вещество абсорбируется через пищеварительный тракт или отличный от пищеварительного тракта путь и оказывает эффект на весь организм (не местно) в области, отличной от области, где достигается желаемый прямой эффект; т.е. в области, отличной от области, где возникает или уже возникло скопление жидкости. Примеры системного введения включают пероральное введение, внутрибрюшинное введение (включая случаи скопления асцитов), подкожное введение, внутрикожное введение, внутримышечное введение, внутривенное введение и внутриартериальное введение. Необходимо отметить, что внутрибрюшинное введение ингибитора для лечения скопления жидкости при асцитах относится к местному введению. Предпочтительно, если ингибитор скопления жидкости в полости организма вводят системным путем, и более предпочтительно, если ингибитор вводят подкожно, внутрикожно, внутримышечно, внутривенно или внутриартериально.

Предпочтительные примеры ингибиторов скопления жидкости в полости организма включают ингибиторы скопления жидкости в полости организма, содержащие в качестве действующего вещества ковалентный конъюгат интерферона с PEG и вводимые в организм системно или прерывисто с интервалом в два или более дней. В наиболее предпочтительном примере ингибитор скопления жидкости в полости организма содержит в качестве действующего вещества ковалентный конъюгат интерферона-α или интерферона-β с PEG; его вводят в организм подкожным или прерывистым путем с интервалом в два или более дней. В особенно предпочтительном примере ингибитор скопления жидкости в полости организма содержит в качестве действующего вещества ковалентный конъюгат интерферона-α или интерферона-β с PEG; его вводят в организм подкожным путем с интервалом один или два раза в неделю с целью подавления процесса скопления рефрактерного плеврального выпота или асцитов.

Примеры лекарственных форм ингибиторов скопления жидкости в полости организма, вводимых пероральным путем, включают таблетки, пилюли, капсулы, гранулы, сиропы, эмульсии и суспензии. Лекарственные формы, изготавливаемые в соответствии с известными технологиями, включают в себя носитель или вспомогательное вещество, обычно используемое в фармакологической области. Примеры носителей и вспомогательных веществ, используемых для получения таблеток, включают лактозу, мальтозу, сахарозу, крахмал и стеарат магния.

Примеры лекарственных форм ингибиторов скопления жидкости в полости организма, вводимых парентеральным путем, включают инъекционные препараты, глазные капли, мази, припарки, суппозитории, трансназальные абсорбенты, транспульмональные абсорбенты, трансдермальные абсорбенты и местные средства с контролируемым высвобождением; их изготавливают в соответствии с известными технологиями. Жидкие препараты получают, например, путем растворения ковалентного конъюгата интерферона с полиалкиленгликолем в стерильном водном растворе для инъекционных препаратов или суспендируют конъюгат в растворе для экстракции и эмульгируют для помещения конъюгата в липосому. Твердые препараты получают, например, путем добавления вспомогательных веществ, таких как маннитол, трехалоза, сорбитол, лактоза или глюкоза, к ковалентному конъюгату интерферона с полиалкиленгликолем с получением лиофилизованных продуктов. Затем такого рода лиофилизованные продукты превращают в порошок и используют. В качестве альтернативы порошок смешивают с полимолочной кислотой или гликолевой кислотой; результат смешивания используют после его отвердевания. Гелевые средства получают, например, путем растворения ковалентного конъюгата интерферона с полиалкиленгликолем в загустителе или полисахариде, таком как глицерин, PEG, метилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, гиалуроновая кислота или хондроитина сульфат.

Стабилизаторы, такие как сывороточный альбумин человека, иммуноглобулин человека, α2-макроглобулин или аминокислота, добавляют к одному из перечисленных выше препаратов; также добавляют диспергирующие средства или абсорбирующие вещества, такие как спирт, сахароспирт, ионное поверхностно-активное вещество или неионное поверхностно-активное вещество; получаемая интерферонная активность не ухудшается. Также дополнительно добавляют следы металлов или соли органических кислот.

Примеры

Настоящее изобретение более подробно описано в нижеследующих примерах, но техническая область настоящего изобретения не ограничена данными примерами.

Пример 1: Получение ковалентного конъюгата интерферона-β с PEG

В соответствии со способом, описанным в примере 6 патента JP № 4850514, получали «ковалентный конъюгат интерферона-β с PEG», в котором одна молекула PEG с молекулярной массой 42000 ковалентно присоединена к аминогруппе лизина в положении 134 аминокислотной последовательности рекомбинантного человеческого интерферона-β (SEQ ID NO: 1). Более конкретно этиленгликоль (итоговая концентрация: 20%) добавляли к рекомбинантному человеческому интерферону-β (итоговая концентрация: 200 мкг/мл), растворенному в 100 мМ ацетатного буфера (рН 5,0), содержащего 0,5 М хлорида натрия; уровень рН довели до 7,6 путем добавления 1 М раствора вторичного кислого фосфата натрия. PEG, активированный гидроксисукцинимидным эфиром (молекулярная масса 42000; Product № 61G99122B01; NOF Corporation), добавляли к данной смеси и перемешивали, затем подвергали реакции связывания при 4°С в течение ночи. К раствору реакции связывания добавляли 10 мМ ацетатный буфер (рН 4,5) в количестве, в 5 раз большем, чем объем смеси; результат вносили в катионообменную колонну (Toyo Pearl CM 650 (S); Tosoh Corporation), уравновешенную 10 мМ ацетатным буфером (рН 4,5). Протеины были элюированы и фракционированы с использованием проявляющих растворителей, описанных ниже.

Проявляющие растворители

Растворитель А: 10 мМ ацетатный буфер (рН 4,5)

Растворитель В: 10 мМ ацетатный буфер (рН 4,5), содержащий 1М хлорид натрия

Во время прохождения смеси растворителя А и растворителя В через катионообменную колонну в количестве, в 40 раз большем количества смолы в колонне, концентрация растворителя В, требуемая для подвода жидкости, последовательно увеличивалась с 0% до 65% для осуществления процесса элюции. Элюированную фракцию вносили в SP-5PW колонну (Tosoh Corporation) и «ковал