Способ получения лекарственного средства для коррекции нарушений функций щитовидной железы

Способ получения лекарственного средства для коррекции нарушений функций щитовидной железы

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Известно, что увеличение заболеваний щитовидной железы связано с геохимическими, социальными, экологическими и другими факторами [4]. Щитовидная железа является не только одним из самых крупных эндокринных органов по своим размерам и массе, но и одним из наиболее значимых с позиций роли для организма секретируемых гормонов - йодтиронинов. В наибольшей степени на частоту тиреоидной патологии влияет уровень потребления йода населением. Во всем мире дополнительным средством профилактики является йодирование пищевой поваренной соли, а также назначение таблетированных препаратов йода наиболее уязвимым слоям населения (дети, беременные и кормящие женщины). В России более 30% территории, где почти у 80% населения наблюдается массовое поражение щитовидной железы, в основном, это эндемический зоб. По мировой статистике различными заболеваниями щитовидной железы (повышенная или пониженная функция железы, узловые образования) страдают не менее 3% населения. Известно, что недостаточное содержание в организме тиреоидных гормонов приводит к расстройству структурно-функциональных взаимосвязей нервной, сердечно-сосудистой, иммунной и других систем [5]. Гормоны щитовидной железы крайне необходимы для роста тканей, в процессах закладки и функционировании мозга, формировании интеллекта, регуляции и поддержании обмена веществ. Фармакологическая коррекция гипотиреоидного состояния организма основана на восполнении дефицита йода и тиреоидных гормонов. Несмотря на обширный арсенал современных лекарственных средств с тиреотропным действием, применяемых для лечения заболеваний щитовидной железы, необходимость в эффективных и безопасных средствах сохраняется. Учитывая клинические проявления, при гипотиреозе целесообразно использовать комплексный подход в лечении, целью которого является не только нормализация тиреоидного гормонального статуса, но и улучшение состояния нейровегетативной, сердечно-сосудистой, иммунной систем, коррекция когнитивных нарушений и эмоционально-аффективных расстройств. При комплексном лечении больных с указанным профилем расстройств назначают эффективную седативную и метаболическую терапию. Для этой цели используют седативные препараты растительного происхождения, анаболические препараты, транквилизаторы, преимущественно бензодиазепинового ряда, антидепрессанты. Используемые препараты не всегда отличаются достаточной клинической эффективностью и при длительном применении могут вызывать побочные эффекты. В связи с этим оправдан значительный интерес к поиску новых средств, способных предупреждать и корригировать гипофункцию щитовидной железы.

Лекарственные растения являются наиболее перспективным источником биологически активных веществ тиреотропного действия. Одним из растений, применяемых в народной медицине для лечения и профилактики заболеваний щитовидной железы, является лапчатка белая (Potentilla alba L., семейство розоцветные - Rosaceae). Установлено, что извлечения из Potentilla alba L. могут применяться при коррекции гипофункции и гиперфункции щитовидной железы [3, 6]. Наряду с этим, учитывая зависимость ментальных процессов и клинических проявлений гипотиреоза от уровня тиреоидных гормонов в крови, развития вторичного иммунодефицита, целесообразными представляются вопросы коррекции патологических проявлений гипотиреоза средствами, обладающими иммуномодулирующим (Rodiola) и ноотропным (Scutellaria,) действием. Объектом исследования служило комплексное растительное средство «Тиреотон-1» (условное название), состоящее из экстракта лапчатки белой сухого, экстракта шлемника байкальского сухого и экстракта родиолы розовой сухого в соотношении 50%, 25%, 25% соответственно и его влияние на течение экспериментального гипотиреоза. В «Тиреотоне-1» основным действующим компонентом является лапчатка белая, а шлемник байкальский и родиола розовая являются усиливающими и модулирующими действие первого.

В качестве прототипа использовали ламинарию в таблетках («Эвалар», Россия) в дозе 3 мг/кг, которая компенсирует суточную норму йода на 133% (согласно аннотации к препарату).

Технический результат изобретения - расширение ассортимента лекарственных средств растительного происхождения, имеющих надежную и обеспеченную сырьевую базу и корректирующих нарушения функций щитовидной железы, влияя на основные звенья патогенеза заболевания за счет многокомпонентности лекарственного средства. Заявляемое лекарственное средство включает высушенный измельченный экстракт из следующих растений: корневищ и корней лапчатки белой, корневищ и корней родиолы розовой, корней шлемника байкальского. Для достижения указанной цели, растительное сырье - корневища и корни лапчатки белой, соответствующие требованиям проекта ГОСТ Р 51074-2003, корневища и корни родиолы розовой, соответствующие требованиям ГФ XI вып. 2, ст. 75, и корни шлемника байкальского, соответствующие требованиям ФС 42-453-91, взятые в соотношении 50, 25, 25% соответственно, измельчают на мельнице для размола сухих проб МРП-2 до размера частиц не более 2 мм и экстрагируют 50-60% этиловым спиртом в соотношении сырье-экстрагент, равном 1:(14-16) (с учетом коэффициента водопоглощения), при температуре 55-65°C и постоянном перемешивании. Процесс повторяют трижды. Время экстракции при 1-ом и 2-ом контактах фаз - 60 мин, при 3-ем контакте фаз - 30 мин. Извлечения фильтруют через серошинельное сукно, объединяют, упаривают до 1/3 первоначального объема и очищают сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема, высушивают в вакуумной сушилке и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Выход готового продукта составляет 27.0±0.5% от массы растительного сырья. Конечный продукт представляет собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета с приятным запахом и горьковатым вяжущим вкусом, с содержанием влаги не более 5%. Полученный нами продукт характеризуется как средство, корректирующее нарушения функций щитовидной железы.

Для качественной оценки полученного фитоэкстракта нами были использованы: хроматография в тонком слое сорбента. Хроматографический анализ проводили на пластинках «Сорбфил ПТСХ-АФ-А-УФ» с использованием различных систем растворителей: хлороформ - этанол - вода (26:16:3), н-бутанол - ледяная уксусная кислота - вода (4:1:2).

Фитостериновые соединения детектировали после обработки хроматографических пластинок 20% раствором серной кислоты и нагревания при 100°C в течение 15 минут в виде розовых пятен с величиной Rf около 0,7 на уровне стандартного образца β-ситостерина. Идентифицированы - β-ситостерин и олеаноловая кислота.

Фенольные соединения детектировались после обработки хроматографических пластин раствором алюминия хлорида в виде желто-зеленых пятен. Идентифицировали рутин; кверцетин; цинарозид.

Фенолы производные детектировали в системе растворителей (хлороформ-метанол-вода (26:14:3)) после обработки хроматограммы 10% раствором натрия карбоната и нагревали в сушильном шкафу при 100°C две минуты, затем опрыскивали пластинку диазотированным сульфацилом и еще нагревали при 110°C в течение 2 минут. На хроматограмме 1 пятно красноватого цвета с Rf 0.42, соответствующее салидрозиду [1].

Количественное определение.

Простые фенолы (Салидрозид). К 0.5 г экстракта сухого «Тиреотон-1» добавляли 10 мл воды и нагревали на водяной бане с обратным холодильником 15 минут. Охлажденный фильтрат помещали в колбу, объемом 50 мл, добавляли 6 мл 10% раствора ацетата свинца, 2 мл насыщенного раствора натрия сульфата, перемешивали, доводили водой до метки (А). 5 мл раствора А переносили в колбу, объемом 25 мл, добавляли 2.5 мл 2% раствора натрия карбоната, 2.5 мл диазотированного сульфанила, доводили объем раствора водой до метки, перемешивали и измеряли оптическую плотность раствора при длине волны 486 нм, в кювете с толщиной слоя 10 мм, в качестве раствора сравнения использовали воду. Содержание салидрозида (X %) вычисляли по формуле:

, где

D - оптическая плотность испытуемого раствора;

k^v - коэффициент разведения, равный 250;

М - навеска экстракта;

253 - удельный показатель поглощения салидрозида;

W - потеря массы при высушивании.

Стероиды (β-ситостерин). К 0.5 г экстракта сухого «Тиреотон-1» добавляли 10 мл хлороформа и нагревали на водяной бане с обратным холодильником 15 минут. Хлороформное извлечение, упаренное до сухого остатка, помещали в колбу объемом 25 мл и растворяли в концентрированной серной кислоте. Полученный раствор перемешивали и измеряли оптическую плотность при длине волны 310 нм, в кювете с толщиной слоя 10 мм, в качестве раствора сравнения использовали концентрированную серную кислоту. Содержание стериновых соединений (Х%), в пересчете на β-ситостерин рассчитывали по формуле:

, где

D₀ - оптическая плотность испытуемого раствора;

k^v - коэффициент разведения экстракта, равный 25;

D₁ - оптическая плотность на β-ситостерина;

k^vст - коэффициент разведения β-ситостерина, равный 25;

М - навеска экстракта;

W - потеря массы при высушивании экстракта.

Определено, что количественное содержание стериновых соединений в пересчете на β-ситостерин составило около 3,4%.

Методика количественного определения суммарного содержания флавоноидов.

0.5 г экстракта сухого «Тиреотон-1» помещали в коническую плоскодонную колбу вместимостью 100 мл с притертой пробкой, прибавляли 60 мл 60% спирта этилового, нагревали содержимое колбы на кипящей водяной бане в течение 1 ч. После охлаждения извлечение фильтровали в мерную колбу вместимостью 200 мл через бумажный фильтр, который промывали 10 мл 60% спирта этилового. Извлечение повторяли в тех же условиях еще раз и доводили объем объединенного фильтрата до метки 60% спиртом этиловым (раствор А). 2 мл раствора А переносили в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводили до метки 60% спиртом этиловым (раствор Б). Оптическую плотность раствора Б измеряли на спектрофотометре при длине волны 281 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения использовали 60% спирт этиловый. Параллельно определяли оптическую плотность раствора стандартного образца байкалина при длине волны 281 нм. Суммарное содержание флавоноидов (X, %) в пересчете на байкалин и абсолютно сухое сырье рассчитывали по формуле

, где

D₀ - оптическая плотность испытуемого раствора;

k^v - коэффициент разведения экстракта, равный 2500;

Е - удельный показатель поглощения байкалина, равный 610;

М - навеска экстракта, г;

W - потеря массы при высушивании экстракта.

Определено, что количественное содержание флавоноидов в пересчете на байкалин в экстракте сухом «Тиреотон-1» составило 4.15%.

Количественная оценка проводилась по выходу флавоноидов, в пересчете на байкалин, фенолов, в пересчете на салидрозид, и экстрактивных веществ. Метрологические характеристики представлены в таблице 1.

Известен способ получения сухого экстракта «Тиреотон» [1], однако нами предложен более экономичный ресурсосберегающий вариант, позволяющий увеличить выход биологически активных веществ (табл. 2)

Пример 1.

500 г корневищ и корней лапчатки белой, соответствующих требованиям ГОСТ Р 51074-2003, 250 г корневищ и корней родиолы розовой, соответствующих требованиям ГФ XI вып. 2, ст. 75, и 250 г корней шлемника байкальского соответствующего требованиям ФС 42-453-91, взятые в соотношении 50, 25, 25% соответственно, измельчают на мельнице для размола сухих проб МРП-2 до размера частиц не более 2 мм (сито №20 ГОСТ 214-83). Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 14 л 50% этилового спирта в соотношении сырье-экстрагент, равном 1:14 с учетом коэффициента водопоглощения сырья. Экстрагируют при температуре 60°C и постоянном перемешивании в течение 60 мин. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Проводят еще две экстракции в течение 60 и 30 мин, подавая каждый раз в экстрактор 50% спирт в количестве, равном объему слитого извлечения (1-ый слив - 10.85 л, 2-ой слив - 11.05 л, 3-ий слив - 9.87 л). Объединенные извлечения упаривают до 1/3 первоначального объема и очищают сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема, высушивают в вакуумной сушилке при температуре 60°C в течение 8 ч и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 270.3 г готового продукта, что составляет 27.3% от веса исходного сырья. Сухой экстракт представляет собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета с приятным запахом и горьковатым вяжущим вкусом, комкуется, содержание влаги - 4.5%.

Острую токсичность «Тиреотона-1» определяли с использованием метода Першина [6] на белых крысах линии Wistar массой 180±11 г. Животные находились под постоянным наблюдением в течение 14 дней. В результате проведенных экспериментов установлено, что DL50 «Тиреотон-1» - 450 мг/кг. Животные погибали преимущественно на 1-2 сутки. При этом в первые часы после введения испытуемого средства у животных наблюдали признаки интоксикации в виде снижения двигательной активности, тахикардии, учащения дыхания. Гибель животных наступала от остановки дыхания. При макроскопическом исследовании внутренних органов наблюдались полнокровие сосудов с явлениями стаза, мелкоточечные кровоизлияния под эпикардом, вздутие петель кишечника, полнокровие мезентериальных сосудов и печени. При патоморфологическом исследовании внутренних органов отмечали резкое полнокровие осмотренных органов, более выраженное в легких и печени.

При введении белым крысам «Тиреотон-1» per os в максимально возможных дозах 4500 мг/кг гибели животных в течение 14 суток не наблюдали. В первые 2-5 часов после введения животным «Тиреотон-1» отмечали явления гиподинамии, учащенное мочеиспускание, отказ от корма.

Таким образом, полученные данные позволяют отнести «Тиреотон-1» к группе малотоксичных веществ по действующей классификации.

Учитывая DL50 «Тиреотон-1», составляющую 450 мг/кг, результаты предыдущих экспериментов для изучения влияния его на течение экспериментального гипотиреоза крыс были использованы дозы 10 и 50 мг/кг. В качестве препарата сравнения использовали ламинарию в таблетках («Эвалар», Россия) в дозе 3 мг/кг, что компенсирует суточную норму йода на 133% (согласно аннотации к препарату).

Для изучения тиреотропного действия «Тиреотон-1» воспроизведена модель экспериментального гипотиреоза [7]. В результате введения мерказолила перорально белым крысам линии Wistar в дозе 10 мг/кг в течение 28 дней отмечается достоверное снижение Т₃ на 15%, Т₄ - на 43%, увеличение ТТГ в 6,0 раз по сравнению с данными животных интактной группы. Введение животным «Тиреотон-1» перорально в дозе 50 мг/кг в течение 21 дня сопровождается повышением уровня Т₄ в крови крыс в 2,2 раза, Т₃ - на 47%, ТТГ уменьшается на 50% по сравнению с данными контрольной группы. Индекс дейодирования составил 7,02, что практически соответствует индексу дейодирования интактной группы животных (7,12). «Тиреотон» в дозе 10 мг/кг оказывает менее выраженную фармакотерапевтическую эффективность по сравнению с таковой в дозе 50 мг/кг. Уровень Т₄ повышается на 55,1%, Т₃ - на 15%, но уровень ТТГ при этом оставался высоким, уменьшаясь всего на 5% по сравнению с показателями животных контрольной группы. Масса тела крыс уменьшалась незначительно по сравнению с контролем. Полученные данные приведены в табл. 3.

Таким образом, в результате проведенного эксперимента установлено, что «Тиреотон-1» повышает функциональную активность щитовидной железы, нормализуя уровень тиреоидных гормонов. Курсовое введение «Тиреотон-1» в дозе 50 мг/кг приводит к повышению индекса дейодирования и практически соответствует таковому интактной группы крыс. «Тиреотон-1» оказывает аналогичное действие в сравнении с ламинарией.

Пример 2.

500 г корневищ и корней лапчатки белой, соответствующих требованиям ГОСТ Р 51074-2003, 250 г корневищ и корней родиолы розовой, соответствующих требованиям ГФ XI вып. 2, ст. 75, и 250 г корней шлемника байкальского, соответствующего требованиям ФС 42-453-91, взятые в соотношении 50, 25, 25% соответственно, измельчают на мельнице для размола сухих проб МРП-2 до размера частиц не более 2 мм (сито №20 ГОСТ 214-83). Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 14 л 60% этилового спирта в соотношении сырье-экстрагент, равном 1:15 с учетом коэффициента водопоглощения сырья. Экстрагируют при температуре 60°C и постоянном перемешивании в течение 60 мин. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Проводят еще две экстракции в течение 60 и 30 мин, подавая каждый раз в экстрактор 60% спирт в количестве равном объему слитого извлечения (1-ый слив - 10.95 л, 2-ой слив - 11.35 л, 3-ий слив - 9.95 л). Объединенные извлечения упаривают до 1/3 первоначального объема и очищают сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема, высушивают в вакуумной сушилке при температуре 60°C в течение 8 ч и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 27.1 г готового продукта, что составляет 27.1% от веса исходного сырья. Сухой экстракт представляет собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета с приятным запахом и горьковатым вяжущим вкусом; комкуется, содержание влаги - 4.12%.

Далее рассматривается возможность влияния «Тиреотон-1» на состояние центральной нервной системы крыс при экспериментальном гипотиреозе. Исследование проводили с помощью методик: «открытое поле», «приподнятый крестообразный лабиринт» (ПКЛ), УРПИ.

Трехнедельное введение белым крысам «Тиреотона» в дозе 50 мг/кг приводит к повышению практически всех показателей. Общая двигательная активность (горизонтальная и вертикальная) увеличивается в 4,5 раза, появился норковый рефлекс, указывающий на появление исследовательской активности. Уменьшение актов груминга на 31% с предшествующей исследовательской активностью говорит о «комфортной» природе груминга. Уровень дефекации также снижается в опытной группе. Ориентировочно-исследовательская активность крыс опытной группы превышает таковые показатели в группе сравнения.

«Приподнятый крестообразный лабиринт» позволяет выявить степень тревожности животного. В настоящем разделе сравним показатели теста ПКЛ опытных групп, получавших на фоне экспериментального гипотиреоза «Тиреотон», «Тиреотон-1» в дозе 50 мг/кг и ламинарию в дозе 3 мг/кг.

Как видно из таблицы 5, курсовое введение «Тиреотон-1» в дозе 50 мг/кг в течение 21 дня уменьшает время проведения в закрытых рукавах лабиринта на 20% по сравнению с контролем. Достоверно увеличивается время проведения в открытых рукавах и на центральной площадке лабиринта в 4,0 раза по сравнению с показателями контрольной группы животных. Также необходимо отметить, что при введении «Тиреотон-1» увеличивается время пребывания в открытых рукавах лабиринта, количество выходов в открытый рукав лабиринта по сравнению с показателями животных в контрольной группе. Отмечена наибольшая исследовательская активность крыс, выраженная в количестве свешиваний и заглядываний под лабиринт. Тем самым можно утверждать о наличии более выраженной анксиолитической активности «Тиреотон-1», по сравнению с экстрактом лапчатки белой, что обусловлено входящими в его состав экстрактами шлемника байкальского и родиолы розовой, которые усиливают и модулируют действие первого.

В тесте УРПИ достоверно отмечено, что «Тиреотон-1» способствует сохранению памятного следа в эксперименте. Так, выявлено, что через 24 часа латентный период увеличился на 70%, на 3 сутки - в 2,7 раза, на 7 сутки - в 2 раза по сравнению с показателями контрольной группы (табл. 6). Данные показатели были аналогичными таковым у препарата сравнения.

Таким образом, введение «Тиреотон-1» на фоне экспериментального гипотиреоза способствует увеличению ориентировочно-исследовательской активности, стимулированию анксиолитической активности и выработке и сохранению памятного следа.

Пример 3.

500 г корневищ и корней лапчатки белой, соответствующих требованиям ГОСТ Р 51074-2003, 250 г корневищ и корней родиолы розовой, соответствующих требованиям ГФ XI вып. 2, ст. 75, и 250 г корней шлемника байкальского, соответствующего требованиям ФС 42-453-91, взятые в соотношении 50, 25, 25%, соответственно, измельчают на мельнице для размола сухих проб МРП-2 до размера частиц не более 2 мм (сито №20 ГОСТ 214-83). Измельченное сырье загружают в экстракционный аппарат с мешалкой и внешним паровым обогревом. Заливают 16 л 65% этилового спирта в соотношении сырье-экстрагент, равном 1:16 с учетом коэффициента водопоглощения сырья. Экстрагируют при температуре 60°C и постоянном перемешивании в течение 60 мин. Извлечение фильтруют через серошинельное сукно в сборник. Проводят еще две экстракции в течение 60 и 30 мин, подавая каждый раз в экстрактор 65% спирт в количестве, равном объему слитого извлечения (1-ый слив - 11.85 л, 2-ой слив - 11.65 л, 3-ий слив - 10.00 л). Объединенные извлечения упаривают до 1/3 первоначального объема и очищают сепарированием. Очищенный экстракт доупаривают до 1/5 первоначального объема, высушивают в вакуумной сушилке при температуре 60°C в течение 8 ч и измельчают на мельнице пропеллерного типа. Получают 26.6. г готового продукта, что составляет 26.6% от веса исходного сырья. Сухой экстракт представляет собой мелкодисперсный порошок коричневого цвета с приятным запахом и горьковатым вяжущим вкусом, комкуется, содержание влаги - 4.55%.

Изучение особенностей функционирования оксидантно-антиоксидантных систем организма крыс проводили при экспериментальном гипотиреозе и в условиях коррекции лекарственных средств «Тиреотон» и «Тиреотон-1». Определяли концентрацию МДА, уровень каталазы и восстановленного глутатиона в сыворотке крови и СОД в эритроцитах крови.

При курсовом введении «Тиреотон-1» в течение 21 дня при экспериментальном гипотиреозе отмечается тенденция к уменьшению содержания МДА в сыворотке крови на 21% с одновременным увеличением активности каталазы в сыворотке крови в 1,4 раза и СОД - в 2,1 раза по сравнению с данными показателями в контрольной группе. Уровень восстановленного глутатиона увеличивается на 7% по сравнению с контролем (табл. 7). Такие данные позволяют сделать вывод о повышении антиоксидантной системы организма и уменьшении свободнорадикальных процессов при коррекции экспериментального гипотиреоза «Тиреотоном-1».

Таким образом, курсовое введение «Тиреотон-1» в дозе 50 мг/кг повышает функциональную активность щитовидной железы при экспериментальном гипотиреозе, повышая уровень тиреоидных гормонов в сыворотке крови крыс и уменьшая уровень ТТГ в два раза по сравнению с показателями контрольной группы. Также «Тиреотон» способствует улучшению показателей поведенческих реакций животных на фоне гипотиреоидного состояния: увеличению ориентировочно-исследовательской активности, снижению тревожности животных, сохранению памятного следа в эксперименте, стимулированию антиоксидантной системы организма при экспериментальном гипотиреозе.

Таким образом, экспериментально установлено, что «Тиреотон-1» оказывает комплексное воздействие на организм при экспериментальном гипотиреозе, влияя на основные звенья патогенеза заболевания.

Используемая литература

1. Архипова Э.В. Влияние экстракта Potentilla alba L. и комплексного средства "Тиреотон" на течение экспериментального гипотиреоза. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук / Институт общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук. - Улан-Удэ, 2012. - 20 с.

2. Государственная фармакопея СССР: вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье. 11-е изд., доп. - М., 1987. - 400 с.

3. Захария А.В. Исследование лапчатки белой как перспективного средства для лечения заболеваний щитовидной железы: Автореф. дисс… канд. биол. наук. - Львов, 1997. - 24 с.

4. Мелик-Гусейнов В.В. Атлас растений. Растения в народной медицине России и сопредельных государств. Пятигорск: СНЕГ, 2011. 607 с.

5. Приходько Е.И. Лечение больных тиреотоксикозом травой пестрач белый применяющейся при заболеваниях щитовидной железы // Врачебное дело. №6. 1976. С. 66-71.

6. Семенова Е.Ф. Химический состав лапчатки белой и применение ее с лечебной целью / Е.Ф. Семенова, Е.В. Преснякова // Химия и компьютерное моделирование. Бутлеровские сообщения. - 2001. - №5. - С. 32-34.

7. Требования по доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических веществ. - М., 1984. - 49 с.

8. Чугунова Л.Г., Рябков А.Н., Савилов К.В. Способ моделирования гипотиреоза // Патент 2165648 Российская Федерация. МПК G09B 23/28, A61K 31/4164. - Рязанский государственный медицинский университет. - №97120428/14. - 2001.

Способ получения лекарственного средства для коррекции нарушений функций щитовидной железы путем экстрагирования растительного материала, отличающийся тем, что в качестве растительного материала используют корни и корневища лапчатки белой, корни шлемника байкальского и корни и корневища родиолы розовой в соотношении 50 масс.%, 25 масс.%, 25 масс.% соответственно, которые измельчают до размера частиц не более 2 мм и экстрагируют 50-60% этиловым спиртом в соотношении растительный материал - экстрагент, равном 1:(14-16), первый и второй раз по 60 минут, третий - 30 минут при температуре 60-65°С.