Мыши с ограниченной тяжелой цепью иммуноглобулина

Мыши с ограниченной тяжелой цепью иммуноглобулина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники, к которой относится настоящее изобретение

Не относящиеся к человеку животные, которые генетически сконструированы в локусе (или в трансгене) вариабельной области (V) тяжелой цепи иммуноглобулина для получения антител из ограниченного ряда вариабельных сегментов (V_H) (или одного сегмента V_H) тяжелой цепи иммуноглобулинов и/или их вариантов. Не относящиеся к человеку животные, которые содержат вариабельный домен тяжелой цепи человека, полученный из единственного вариабельного генного сегмента тяжелой цепи иммуноглобулина, например, генного сегмента V_H1-69 иммуноглобулина человека или генного сегмента V_H1-2 человека. Способы получения последовательностей антител у не относящихся к человеку животных, которые применимы для связывания патогенов, включая в себя патогены человека.

Предшествующий уровень техники настоящего изобретения

Не относящиеся к человеку животные, например мыши, были генетически модифицированы, чтобы быть пригодными инструментами в способах получения последовательностей антител для использования в терапевтических средствах для людей на основе антител. Мышей с гуманизированными локусами вариабельной области (например, V_H, D_H и J_H гены, и V_L и J_L гены) используют для создания родственных вариабельных доменов тяжелой и легкой цепи для использования в терапевтических средствах на основе антител. Доступны другие мыши, которые продуцируют полностью человеческие антитела с родственными тяжелыми и легкими цепями.

Терапевтические средства на основе антител для лечения человека разрабатывают на основе требуемых характеристик в отношении определенных заранее выбранных антигенов. Гуманизированных мышей иммунизируют предварительно выбранными антигенами, и иммунизированных мышей используют для получения популяций антител, из которых идентифицируют высокоаффинные родственные тяжелые и легкие вариабельные домены с требуемыми характеристиками связывания. Некоторые гуманизированные мыши, такие как те, у которых гуманизированы только вариабельные области в эндогенных локусах мыши, продуцируют популяции В-клеток, которые схожи по характеру и количеству с популяциями В-клеток мыши дикого типа. В результате чрезвычайно большая и разнородная популяция В-клеток доступна у тех мышей, у которых подвергают скринингу антитела, отражая большое количество различных реаранжировок иммуноглобулина для определения тяжелых и легких вариабельных доменов с наиболее необходимыми характеристиками.

Но не все антигены вызывают иммунный ответ, который проявляет очень большое количество реаранжировок из широкого выбора вариабельных сегментов (V). Другими словами, гуморальный иммунный ответ человека на определенные антигены практически ограничен. Ограничение отражается в клональной селекции В-клеток, которые экспрессируют только определенные сегменты V, связывающие определенный антиген с достаточно высокой аффинностью и специфичностью. Некоторые такие антигены клинически значимы, т.е. ряд из них представляет собой хорошо известные патогены человека. Возникает предположение, что сегмент V, экспрессированный при иммунном ответе человека, представляет собой сегмент V, который в сочетании с человеческим сегментом D и J более вероятно продуцирует применимое высоаффинное антитело, чем случайно выбранный сегмент V, который не наблюдался в ответе антитела человека на этот антиген.

Предполагается, что естественный отбор в течение тысячелетий выбрал наиболее эффективную основу или основание, из которого разрабатывается наиболее эффективное оружие для нейтрализации человеческих патогенов - клонально выбранный сегмент V. В настоящей области техники существует потребность в увеличении и улучшении антител, которые связываются и/или нейтрализуют такие антигены, как рассмотренные выше патогены. Существует потребность в более быстром получении применимых последовательностей из определенных сегментов V, включающих полиморфные и/или соматически мутированные определенные V сегменты, и в более быстром получении применимых популяций В-клеток, содержащих реаранжировки V сегментов с различными сегментами D и J, в том числе соматически мутированными их модификациями, и в частности, реаранжировки с уникальными и применимыми CDR3. Существует потребность в биологических системах, например, не относящихся к человеку животных (таких как, например, мыши, крысы, кролики и т.д.), которые могут продуцировать терапевтически применимые последовательности вариабельной области антитела из предварительно выбранных сегментов V в увеличенном количестве и разнообразии, чем, например, может быть получено у существующих модифицированных животных. Существует потребность в конструкциях биологических систем, содержащих коммитированную гуморальную иммунную систему для клонального выбора вариабельных последовательностей антител, полученных из ограниченных, заранее выбранных сегментов V, включая без ограничения родственные вариабельные области тяжелой и легкой цепи человека, применимые в производстве терапевтических средств на основе антител человека против определенных антигенов, включая определенные патогены человека.

В настоящей области техники существует потребность в терапевтических антителах, которые способны нейтрализовать вирусные антигены, например, ВИЧ и ВГС, включая антигенспецифические антитела, содержащие тяжелые цепи, полученные из одного вариабельного сегмента человека, и в системе, которая продуцирует разнообразный источник антител, из которых выбирают последовательности терапевтических антител. Существует также потребность в дополнительных способах и не относящихся к человеку животных для получения применимых антител, включающих антитела, которые содержат репертуар тяжелых цепей, полученных из одного V_H сегмента человека, и содержащие разнообразный набор последовательностей CDR, и включая такие тяжелые цепи, которые экспрессируют с родственными вариабельными областями легкой цепи человека. Требуются способы для отбора CDR для связывающих белков на основе иммуноглобулинов, которые предусматривают повышенное разнообразие связывающих белков, из которых производят выбор, и повышенное разнообразие вариабельных доменов иммуноглобулинов, включая композиции и способы для создания соматически мутированных и клонально отобранных вариабельных доменов иммуноглобулинов, для использования, например, в получении терапевтических средств для людей.

Краткое раскрытие изобретения

Предусматриваются генетически модифицированные локусы иммуноглобулинов, которые содержат некоторое ограниченное количество различных генных сегментов вариабельной области тяжелой цепи (т.е. генов V, генов V_H, генных сегментов V_H или генных сегментов V), например, не более одного, двух или трех различных генов V; или не более одного представителя семейства генных сегментов V присутствующего, например, в единственной копии или во множественных копиях и/или содержащий один или несколько полиморфизмов.

Предусматриваются локусы, которые способны к реаранжировке и образованию гена, кодирующего вариабельную область тяжелой цепи, полученного из рестриктированного репертуара генов V_H, например, представляющих собой один генный сегмент V_H или выбранных из множества полиморфных вариантов одного генного сегмента V_H. Предусматриваются модифицированные локусы иммуноглобулинов, которые включают в себя локусы, содержащие последовательности иммуноглобулинов человека, например, сегмент V человека, функционально связанный с константной 4 последовательностью человеческого (или химеры человеческого/не относящегося к человеку) или не относящегося к человеку иммуноглобулина (и функционально связанный, например, с сегментом D и/или J). Предусматриваются модифицированные локусы, которые содержат множественные копии одного генного сегмента V_H, включая при этом одну или несколько копий, содержащих полиморфный вариант. Предусматриваются модифицированные локусы, которые включают множественные копии одного сегмента V_H, функционально связанного с одним или несколькими сегментами D и одним или несколькими сегментами J, функционально связанными с константной последовательностью не относящегося к человеку иммуноглобулина, например, последовательностью мыши или крысы. Также предусматриваются не относящиеся к человеку животные, содержащие такие гуманизированные локусы.

Предусматриваются не относящиеся к человеку животные, которые содержат редуцированную вариабельность генного сегмента тяжелой цепи иммуноглобулина (т.е. ограниченное количество вариабельных генных сегментов тяжелой цепи или ограниченный репертуар вариабельных генов тяжелой цепи), причем редуцированная вариабельность генного сегмента тяжелой цепи иммуноглобулина характеризуется наличием не более одного или не более двух вариабельных генных сегментов тяжелой цепи, и при этом присутствующие вариабельные гены тяжелой цепи функционально связаны с человеческой или не относящейся к человеку последовательностью константной области.

Предусматриваются не относящиеся к человеку животные, которые содержат редуцированную вариабельность генного сегмента тяжелой цепи иммуноглобулина (например, один генный сегмент V_H или ограниченное число генных сегментов V_H, которые представляют собой полиморфные варианты одного генного сегмента V_H), причем редуцированная вариабельность генного сегмента тяжелой цепи иммуноглобулина характеризуется наличием единственного генного сегмента V_H или множества генных сегментов V_H, которые представляют собой полиморфные формы единственного генного сегмента V_H (например, генные сегменты V_H, ассоциированные с высоким числом копий и/или полиморфизмом у людей), и при этом присутствующие вариабельные гены тяжелой цепи функционально связаны с человеческой или не относящейся к человеку последовательностью константной области. Согласно различным вариантам осуществления присутствующие вариабельные гены тяжелой цепи функционально связаны с одним или несколькими генными сегментами D и/или одним или несколькими генными сегментами J в зародышевой линии не относящегося к человеку животного.

Предусматриваются не относящиеся к человеку животные, которые содержат вариабельный локус тяжелой цепи иммуноглобулина (например, на трансгене или в качестве вставки или замещения в эндогенном вариабельном локусе тяжелой цепи не относящегося к человеку животного), который содержит единственный сегмент V_H, функционально связанный с генным сегментом D и/или J. Согласно различным вариантам осуществления единственный сегмент V_H функционально связан с одним или несколькими генными сегментами D и/или с одним или несколькими генными сегментами J в эндогенном вариабельном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина не относящегося к человеку животного.

Предусматриваются не относящиеся к человеку животные, которые модифицированы в локусах вариабельной области тяжелой цепи их иммуноглобулина для удаления всех или по существу всех (например, всех функциональных сегментов или практически всех функциональных сегментов) эндогенных сегментов V_H иммуноглобулина и которые содержат сегмент V_H1-69 человека (или сегмент V_H1-2 человека), функционально связанный с сегментом D и J или сегментом J в эндогенном вариабельном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина не относящегося к человеку животного.

Также предусматриваются не относящиеся к человеку животные, которые модифицированы в локусах вариабельной области тяжелой цепи их иммуноглобулина для приведения эндогенных локусов вариабельной области в состояние неспособности к реаранжировке с образованием функциональной тяжелой цепи, содержащей эндогенные генные сегменты вариабельной области; при этом не относящиеся к человеку животные содержат единственный вариабельный генный сегмент человека (V_H1-2 человека или генный сегмент V_H1-69 человека), функционально связанный с сегментом D и J или сегментом J в эндогенном вариабельном локусе тяжелой цепи иммуноглобулина не относящегося к человеку животного.

Предусматриваются не относящиеся к человеку животные, которые содержат ограниченное количество (например, не более одного или не более двух) генных сегментов тяжелой цепи, функционально связанных с последовательностью человеческой или не относящейся к человеку константной области. Согласно одному варианту осуществления не более одного или не более двух генных сегментов тяжелой цепи, связанных с последовательностью константной области, находятся на трансгене, например, находятся в положении, отличном от эндогенного локуса тяжелой цепи.

Предусматриваются способы получения последовательностей иммуноглобулина человека от не относящихся к человеку животных. Согласно различным вариантам осуществления последовательности иммуноглобулина человека получают из репертуара последовательностей V иммуноглобулина, которые состоят преимущественно из единственного человеческого сегмента V, например, V_H1-69 или V_H1-2, и одного или нескольких сегментов D и J или одного или нескольких сегментов J. Предусматриваются способы получения последовательностей иммуноглобулина человека от не относящихся к человеку животных, тканей и клеток, причем последовательности человеческого иммуноглобулина связывают патоген.

Предусматриваются способы получения мышей, характеризующихся ограниченным локусом тяжелой цепи иммуноглобулина, причем ограничение касается числа генных сегментов V_H иммуноглобулина. Согласно различным аспектам ограничение относится к одному или не более двум, или к единственному представителю семейства генов V_H (например, к одному или нескольким аллелям V_H, вариантам или их полиморфным вариантам). Согласно различным аспектам локус тяжелой цепи дополнительно содержит один или несколько генных сегментов D_H и один или несколько генных сегментов jh. Согласно различным аспектам генные сегменты V_H, D_H и J_H представляют собой генные сегменты человека. Согласно различным аспектам генные сегменты V_H, D_H и J_H функционально связаны с не относящейся к человеку константной областью (например, IgM и/или IgG). Согласно различным аспектам константная область представляет собой константную область мыши или крысы.

Согласно одному аспекту предусмотрен способ получения мыши, содержащей ограниченный локус тяжелой цепи иммуноглобулина, предусматривающий введение описанной в настоящем документе конструкции нуклеиновой кислоты в эмбриональную стволовую (ES) клетку мыши и выделение или идентификацию ES клетки мыши, содержащей конструкцию нуклеиновой кислоты.

Согласно одному варианту осуществления конструкция нуклеиновой кислоты содержит единственный генный сегмент V_H человека, один или несколько генных сегментов D_H человека, а также один или несколько генных сегментов J_H человека. Согласно одному варианту осуществления конструкция нуклеиновой кислоты содержит один или несколько сайтов сайт-специфической рекомбинации (например, сайт LoxP или Frt).

Согласно одному аспекту предусматривается мышь, полученная с использованием описанного в настоящем документе нацеливающего вектора, нуклеотидной последовательности или клетки. Согласно различным вариантам осуществления нацеливающий вектор, нуклеотидная последовательность или клетка содержит последовательность ДНК, которая содержит единственный генный сегмент V_H человека (или его полиморфные варианты), один или несколько генных сегментов D_H человека, и один или несколько генных сегментов J_H человека, функционально связанные с не относящимся к человеку константным геном.

Согласно одному аспекту предусматривается способ получения мыши, содержащей ограниченный локус тяжелой цепи иммуноглобулина, включающий замещение локуса тяжелой цепи иммуноглобулина мыши человеческой геномной последовательностью, содержащей единственный генный сегмент V_H человека (или его полиморфные варианты), один или несколько генных сегментов D_H человека, и один или несколько генных сегментов J_H человека, причем генные сегменты V_H, D_H и J_H человека, способны к реаранжировке с формированием химерной тяжелой цепи, содержащей вариабельную область человека, функционально связанную с не относящейся к человеку константной областью. Согласно одному варианту осуществления не относящаяся к человеку константная область представляет собой константную область мыши или крысы.

Согласно различным аспектам не относящиеся к человеку животные представляют собой грызунов. Согласно различным аспектам грызуны представляют собой мышей и/или крыс.

Согласно одному аспекту предусматривается модифицированный локус тяжелой цепи иммуноглобулина, который содержит репертуар сегментов V тяжелой цепи, ограниченный по отношению к идентичности V сегмента, и который содержит один или несколько D сегментов и один или несколько сегментов J или один или несколько сегментов J. Согласно одному варианту осуществления сегмент V тяжелой цепи представляет собой сегмент человека. Согласно одному варианту осуществления один или несколько сегментов D представляют собой сегменты D человека. Согласно одному варианту осуществления один или несколько сегментов J представляют собой сегменты J человека. Согласно одному варианту осуществления один или несколько сегментов D и один или несколько сегментов J представляет собой сегменты D и J человека.

Согласно одному варианту осуществления модифицированный локус представляет собой не относящийся к человеку локус. Согласно одному варианту осуществления не относящийся к человеку локус модифицируют по меньшей мере с одной последовательностью иммуноглобулина человека.

Согласно одному варианту осуществления ограничение касается одного представителя семейства сегментов V. Согласно одному варианту осуществления один представитель семейства сегментов V присутствует в двух или более копиях. Согласно одному варианту осуществления один представитель семейства сегментов V присутствует в виде двух или более вариантов (например, две или более полиморфные формы представителя семейства сегментов V). Согласно одному варианту осуществления один сегмент V представляет собой представителя семейства сегментов V человека. Согласно одному варианту осуществления один представитель семейства сегментов V присутствует в нескольких вариантах, как это наблюдается в человеческой популяции, по отношению к этому варианту. Согласно одному варианту осуществления представителя семейства сегментов V выбирают из таблицы 1. Согласно одному варианту осуществления представитель семейства сегментов V присутствует в нескольких вариантах, как показано для каждого сегмента V, в нескольких аллелях от одной аллели до нескольких аллелей, показанных в правой колонке таблицы 1.

Согласно одному варианту осуществления ограничение относится к генному сегменту V_H1-69 человека. Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V_H1-69 человека присутствует в двух или более копиях. Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V_H1-69 человека присутствует в двух или более вариантах (например, две или более полиморфные формы гена V_H1-69 человека). Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V_H1-69 человека присутствует в нескольких вариантах, как это наблюдается в человеческой популяции, по отношению к генному сегменту V_H1-69 человека. Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V_H1-69 человека выбирают из таблицы 2. Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V_H1-69 человека присутствует в нескольких вариантах, как показано для каждого генного сегмента V_H1-69, в нескольких аллелях от одной аллели до нескольких аллелей, показанных в таблице 2.

Согласно одному варианту осуществления ограничение относится к генному сегменту V_H1-2 человека. Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V_H1-2 человека присутствует в двух или более копиях. Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V_H1-2 человека присутствует в двух или более вариантов (например, две или более полиморфные формы гена V_H1-2 человека). Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V_H1-2 человека присутствует в нескольких вариантах, как это наблюдается в человеческой популяции, по отношению к генному сегменту V_H1-2 человека. Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V_H1-2 человека выбирают из таблицы 3. Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V_H1-2 человека присутствует в нескольких вариантах, как показано для каждого генного сегмента V_H1-2, в нескольких аллелях от одной аллели до нескольких аллелей, показанных в таблице 3.

Согласно одному аспекту предусматривается локус тяжелой цепи иммуноглобулина, который содержит единственный функциональный сегмент V человека. Согласно одному варианту осуществления единственный функциональный сегмент V человека выбирают из сегментов V_H1-2, V_H1-3, V_H1-8, V_H1-18, V_H1-24, V_H1-45, V_H1-46, V_H1-58, V_H1-69, V_H2-5, V_H2-26, V_H2-70, V_H3-7, V_H3-9, V_H3-11, V_H3-13, V_H3-15, V_H3-16, V_H3-20, V_H3-21, V_H3-23, V_H3-30, V_H3-30-3, V_H3-30-5, V_H3-33, V_H3-35, V_H3-38, V_H3-43, V_H3-48, V_H3-49, V_H3-53, V_H3-64, V_H3-66, V_H3-72, V_H3-73, V_H3-74, V_H4-4, V_H4-28, V_H4-30-1, V_H4-30-2, V_H4-30-4, V_H4-31, V_H4-34, V_H4-39, V_H4-59, V_H4-61, V_H5-51, V_H6-1, V_H7-4-1 и V_H7-81. Согласно одному варианту осуществления единственный функциональный сегмент V человека представляет собой сегмент V_H1-69; согласно конкретному варианту осуществления единственный функциональный сегмент V человека присутствует в 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12 или 13 полиморфных формах, обнаруженных в человеческой популяции. Согласно одному варианту осуществления единственный функциональный сегмент V человека представляет собой сегмент V_H1-2; согласно конкретному варианту осуществления один функциональный сегмент V человека присутствует в 1, 2, 3, 4 или 5 полиморфных формах, обнаруженных в человеческой популяции.

Согласно одному варианту осуществления локус тяжелой цепи иммуноглобулина представляет собой модифицированный локус не относящегося к человеку животного. Согласно одному варианту осуществления модифицированный не относящийся к человеку локус тяжелой цепи иммуноглобулина присутствует у не относящегося к человеку животного в положении в геноме, в котором находится соответствующий немодифицированный не относящийся к человеку локус у не относящегося к человеку животного дикого типа. Согласно одному варианту осуществления модифицированный не относящийся к человеку локус тяжелой цепи иммуноглобулина присутствует на трансгене у не относящегося к человеку животного.

Согласно одному варианту осуществления один функциональный генный сегмент V человека представляет собой генный сегмент V_H1-69. Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V_H1-69 содержит SEQ ID NO: 34. Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V_H1-69 происходит из SEQ ID NO: 34. Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V_H1-69 по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 98% идентичен SEQ Ю NO: 34.

Согласно одному варианту осуществления один функциональный генный сегмент V человека кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 34.

Согласно одному варианту осуществления один функциональный генный сегмент V человека представляет собой генный сегмент V_H1-2. Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V_H1-2 содержит SEQ ID NO: 60. Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V_H1-2 происходит из SEQ ID NO: 60. Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V_H1-2 по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 98% идентичен SEQ ID NO: 60.

Согласно одному варианту осуществления один функциональный генный сегмент V человека кодируется нуклеотидной последовательностью SEQ ID NO: 60.

Согласно одному варианту осуществления один функциональный генный сегмент V человека функционально связан с одним или несколькими сегментами D и одним или несколькими сегментами J, или одним или несколькими сегментами J. Согласно одному варианту осуществления сегмент V и один или несколько сегментов D и/или J функционально связаны с последовательностью константной области тяжелой цепи иммуноглобулина. Согласно одному варианту осуществления последовательность константной области тяжелой цепи иммуноглобулина выбирают из последовательности C_H1, шарнира, C_H2, C_H3 и их комбинации. Согласно одному варианту осуществления каждый из C_H1, шарнира, C_H2, C_H3 или их комбинации представляет собой не относящиеся к человеку эндогенные константные последовательности. Согласно одному варианту осуществления по меньшей мере один из C_H1, шарнира, C_H2, C_H3 или их комбинации представляет собой последовательность человека. Согласно конкретному варианту осуществления C_H1 и/или шарнир представляют собой последовательности человека.

Согласно одному аспекту предусматривается модифицированный эндогенный не относящийся к человеку локус тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащий замещение всех функциональных генных сегментов V одним генным сегментом V человека (или один генный сегмент V человека присутствует во множественных полиморфных формах или числе копий), причем локус тяжелой цепи не относящегося к человеку иммуноглобулина не способен к реаранжировке с образованием вариабельного гена тяжелой цепи, который происходит от генного сегмента V, отличного от единственного генного сегмента V человека (или одного из полиморфных форм или копий).

Согласно одному варианту осуществления единственный генный сегмент V человека представляет собой V_H1-69. Согласно одному варианту осуществления единственный генный сегмент V человека представляет собой V_H1-2.

Согласно одному варианту осуществления локус содержит по меньшей мере один генный сегмент D_H человека или не относящийся к человеку, и один генный сегмент J_H человека или не относящийся к человеку. Согласно конкретному варианту осуществления локус содержит генный сегмент D_H человека и генный сегмент J_H человека. Согласно конкретному варианту осуществления локус содержит генный сегмент J_H человека. Согласно другому конкретному варианту осуществления локус содержит генный сегмент V_H1-69 человека (присутствует в виде единственной копии или множественных копий различных полиморфных вариантов), все функциональные генные сегменты D_H человека, и все функциональные генные сегменты J_H человека. Согласно другому конкретному варианту осуществления локус содержит генный сегмент V_H1-2 человека (присутствует в виде единственной копии или множественных копий различных полиморфных форм), все функциональные генные сегменты D_H человека и все функциональные генные сегменты J_H человека. Согласно одному варианту осуществления генные сегменты V, D и J человека (или генные сегменты V и J) функционально связаны с геном константной области в эндогенном локусе тяжелой цепи мыши. Согласно конкретному варианту осуществления локус тяжелой цепи мыши содержит репертуар последовательностей константной области иммуноглобулина мыши дикого типа.

Согласно одному аспекту предусматривается генетически модифицированное не относящееся к человеку животное, причем только функциональный генный сегмент V тяжелой цепи иммуноглобулина не относящегося к человеку животного выбирают из генных сегментов V_H1-2, V_H1-3, V_H1-8, V_H1-18, V_H1-24, V_H1-45, V_H1-46, V_H1-58, V_H1-69, V_H2-5, V_H2-26, V_H2-70, V_H3-7, V_H3-9, V_H3-11, V_H3-13, V_H3-15, V_H3-16, V_H3-20, V_H3-21, V_H3-23, V_H3-ЗО, V_H3-ЗО-З, V_H3-30-5, V_H3-33, V_H3-35, V_H3-38, V_H3-43, V_H3-48, V_H3-49, V_H3-53, V_H3-64, V_H3-66, V_H3-72, V_H3-73, V_H3-74, V_H4-4, V_H4-28, V_H4-30-1, V_H4-30-2, V_H4-30-4, V_H4-31, V_H4-34, V_H4-39, V_H4-59, V_H4-61, V_H5-51, V_H6-1, V_H7-4-1 и V_H7-81 человека. Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V тяжелой цепи представляет собой генный сегмент V_H1-69 человека. Согласно одному варианту осуществления генный сегмент V тяжелой цепи представляет собой генный сегмент V_H1-2 человека.

Согласно одному аспекту предусматривается генетически модифицированное не относящееся к человеку животное, причем не относящееся к человеку животное содержит один функциональный генный сегмент V_H человека (присутствует в виде единственной копии или множественных копий различных полиморфных форм), и причем не относящееся к человеку животное по существу не способно к образованию реаранжированного гена вариабельного домена тяжелой цепи иммуноглобулина, который не содержит единственного функционального генного сегмента V_H человека (или одну из полиморфных форм или копий).

Согласно одному аспекту предусматривается генетически модифицированное не относящееся к человеку животное, причем только вариабельная область тяжелой цепи иммуноглобулина, экспрессируемая у не относящегося к человеку животного, происходит от одного сегмента человека, выбранного из генных сегментов V_H1-2, V_H1-3, V_H1-8, V_H1-18, V_H1-24, V_H1-45, V_H1-46, V_H1-58, V_H1-69, V_H2-5, V_H2-26, V_H2-70, V_H3-7, V_H3-9, V_H3-11, V_H3-13, V_H3-15, V_H3-16, V_H3-20, V_H3-21, V_H3-23, V_H3-30, V_H3-30-3, V_H3-30-5, V_H3-33, V_H3-35, V_H3-38, V_H3-43, V_H3-48, V_H3-49, V_H3-53, V_H3-64, V_H3-66, V_H3-72, V_H3-73, V_H3-74, V_H4-4, V_H4-28, V_H4-30-1, V_H4-30-2, V_H4-30-4, V_H4-31, V_H4-34, V_H4-39, V_H4-59, V_H4-б1, V_H5-51, V_H6-1, V_H7-4-1 и V_H7-81 человека. Согласно одному варианту осуществления сегмент человека представляет собой сегмент V_H1-69. Согласно одному варианту осуществления сегмент человека представляет собой сегмент V_H1-2. Согласно одному варианту осуществления единственный вариабельный участок тяжелой цепи иммуноглобулина, экспрессируемый мышью, происходит от единственного представителя семейства сегментов V, и согласно одному варианту осуществления только вариабельную область тяжелой цепи иммуноглобулина получают из полиморфного варианта единственного представителя семейства сегментов V.

Согласно одному аспекту предусматривается не относящееся к человеку животное, содержащее ограниченный репертуар генных сегментов V тяжелой цепи иммуноглобулина, причем не относящееся к человеку животное дополнительно содержит один или несколько вариабельных сегментов (Vκ) легкой цепи κ иммуноглобулина человека. Согласно одному варианту осуществления один или несколько сегментов Vκ функционально связаны с одним или несколькими сегментами J человека. Согласно конкретному варианту осуществления сегменты J представляют собой сегменты J человека. Согласно другому конкретному варианту осуществления не относящееся к человеку животное не экспрессирует легкую цепь λ иммуноглобулина. Согласно другому конкретному варианту осуществления не относящееся к человеку животное не содержит функциональный человеческий или функциональный эндогенный вариабельный локус легкой цепи λ иммуноглобулина.

Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное представляет собой грызуна. Согласно одному варианту осуществления грызун представляет собой мышь.

Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит замещение в эндогенном локусе Vκ не относящегося к человеку иммуноглобулина всех или по существу всех функциональных эндогенных сегментов Vκ одним или несколькими функциональными сегментами Vκ человека. Согласно дополнительному конкретному варианту осуществления замещение представляет собой замещение всеми или по существу всеми функциональными сегментами Vκ иммуноглобулина человека.

Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит замещение в эндогенном локусе Vκ не относящегося к человеку иммуноглобулина всех или по существу всех функциональных эндогенных генных сегментов Vκ генными сегментами Vκ человека, выбранными из Vκ4-1, Vκ5-2, Vκ7-3, Vκ2-4, Vκ1-5, Vκ1-6, Vκ3-7, Vκ1-8, Vκ1-9, Vκ2-10, Vκ3-11, Vκ1-12, Vκ1-13, Vκ2-14, Vκ3-15, VK-1-16, VK1-17, VK2-18, VK2-19, Vκ3-20, Vκ6-21, Vκ1-22, Vκ1-23, Vκ2-24, Vκ3-25, Vκ2-26, Vκ1-27, Vκ2-28, W2-29, Vκ2-30, Vκ3-31, Vκ1-32, Vκ1-33, Vκ3-34, Vκ1-35, Vκ2-36, Vκ1-37, Vκ2-38, Vκ1-39, Vκ2-40 и их комбинации.

Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит замещение в эндогенном локусе Jκ не относящегося к человеку иммуноглобулина всех или по существу всех функциональных эндогенных сегментов Jκ не относящегося к человеку иммуноглобулина одним или несколькими функциональными сегментами Jκ иммуноглобулина человека. Согласно дополнительному конкретному варианту осуществления замещение представляет собой замещение всеми или по существу всеми функциональными сегментами Jκ иммуноглобулина человека.

Согласно одному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит замещение в эндогенном локусе Jκ не относящегося к человеку иммуноглобулина всех или по существу всех функциональных эндогенных генных сегментов Jκ не относящегося к человеку иммуноглобулина генными сегментами Jκ человека, выбранными из Jκ1, Jκ2, Jκ3, Jκ4, Jκ5 и их комбинации.

Согласно конкретному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит локус вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, который содержит репертуар сегментов V, состоящих преимущественно из единственного сегмента V и/или его полиморфных вариантов. Согласно конкретному варианту осуществления единственный сегмент V тяжелой цепи иммуноглобулина представляет собой V_H1-69 сегмент человека, и не относящееся к человеку животное дополнительно содержит замещение всех не относящихся к человеку функциональных сегментов D_H всеми функциональными сегментами D_H человека, и дополнительно содержит замещение всех не относящихся к человеку функциональных сегментов J_H всеми функциональными сегментами J_H человека, и причем локус вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина функционально связан с генной последовательностью константной области человека или не относящейся к человеку. Согласно конкретному варианту осуществления генная последовательность константной области представляет собой эндогенную генную последовательность не относящейся к человеку константной области. Согласно конкретному варианту осуществления не относящееся к человеку животное реаранжирует сегменты в локусе тяжелой цепи не относящегося к человеку иммуноглобулина с образованием гена, кодирующего вариабельную область тяжелой цепи, содержащую последовательность V_H1-69 человека, последовательность D_H человека, последовательность J_H человека и последовательность константной области мыши.

Согласно конкретному варианту осуществления не относящееся к человеку животное содержит локус вариабельной области тяжелой цепи иммуноглобулина, который содержит репертуар сегментов V, состоящих преимущественно из единственного сегмента V и/или его полиморфных вариантов. Согласно конкретному варианту осуществления единственный сегмент V тяжелой цепи иммуноглобулина представляет собой сегмент V_H1-2 человека, и не относящееся к человеку животное дополнительно содержит замещение всех не относящихся к человеку функциональных сегментов D_H всеми функциональными сегментами D_H человека, и дополнительно содержит замещение всех не относящихся к человеку функциональны