Стабильная косметическая композиция на основе иммобилизованной гиалуронидазы и способ ее получения

Стабильная косметическая композиция на основе иммобилизованной гиалуронидазы и способ ее получения

Реферат

Изобретение относится к области косметологии и касается косметических средств на основе фермента гиалуронидазы.

Фермент гиалуронидаза способен расщеплять кислые мукополисахариды, в том числе гиалуроновую кислоту. Процесс деполимеризации последней до свободных гексоз повышает тканевую и сосудистую проницаемость, что может найти применение при нарушениях и косметических дефектах, сопровождающихся ростом соединительной ткани. Известны различные источники, касающиеся использования гиалуронидазы для устранения подобных дефектов.

Патент RU 2286139, 27.10.2006 относится к средствам для ухода за кожей лица и тела, направленным на устранение гнойничковых высыпаний и рубцовых изменений кожи. Крем противоугревой содержит косметическую основу, эфтидерм, малавит, диклофенак, настойку календулы, можжевеловое масло, масло эвкалипта, кедровое масло, масло чайного дерева, рибофлавин (витамин В2), лидазу.

Патентная заявка США 20140328826 раскрывает способ лечения келоидных рубцов, гипертрофических рубцов или шрамов путем введения композиции, содержащей: низкомолекулярную гиалуроновую кислоту, гиалуронидазу и, необязательно, фармацевтически приемлемый носитель и/или наполнитель.

Однако серьезным препятствием для проникновения внутрь клетки таких высокомолекулярных соединений, как ферменты, является наружная клеточная мембрана, состоящая из белкового и липидного слоев.

Решить эти проблемы помогает создание иммобилизованных ферментов.

Основной проблемой при создании эффективных кремов на основе ферментов является повышение стабильности белковой молекулы при сохранении ее специфической активности. Признанным наиболее эффективным способом стабилизации белковых молекул и создания пролонгированных белков является иммобилизация (ковалентная конъюгация) на высокомолекулярных носителях.

Предлагаемый косметический крем содержит в своем составе иммобилизованную гиалуронидазу, вещество относящиеся к современному классу ферментативных препаратов пролонгированного действия. Технологическая новизна крема заключается в использовании иммобилизованной гиалуронидазы, в которой в качестве носителя и стабилизатора фермента используется полимерный носитель, производный полиэтиленпиперазина, относящийся к новому классу водорастворимых производных гетероцепных алифатических полиаминов.

Полимерный носитель является полимерной матрицей, которая защищает белковую молекулу фермента (действующее вещество) от многочисленных воздействий организма, понижающих специфическую активность.

Обычно иммобилизованные ферменты - это искусственно полученные комплексы или конъюгаты фермента с не растворимым в воде носителем. Иммобилизованная гиалуронидаза, вещество, которое имеет хорошую растворимость в воде и в водно-солевых растворах, способствует удерживанию воды в композиции, тем самым улучшая увлажняющие свойства крема.

- Известны косметические композиции, содержащие иммобилизованные ферменты (липолитические липазы, протеазы и протеолитические ферменты для расщепления гликопротеинов в коже и высвобождения олигосахаридов) для местного применения (US 4556554 (А) - 1985-12-03). Нет конкретного упоминания гиалуронидазы и ее назначения.

RU 2539390 20.01.2015 С1 раскрывает косметические композиции, на основе хондроитин сульфата, гиалуронидазы, липосом, бета-циклодекстринов, экстракта гарпагофитума, экстракта имбиря. В описании к источнику отмечается, что введение в состав композиции полимерного носителя способствует иммобилизации гиалуронидазы и повышению ее активности. Однако отсутствуют какие-либо данные о противорубцовом эффекте. Данные композиции разработаны для нанесения на область суставов.

В качестве ближайшего аналога может быть указан источник RU 2471867 С2, в котором описаны косметические композиции на основе гиалуронидазы. Упомянута возможность создания средств против рубцов.

Задача изобретения: разработка нового стабильного при хранении эффективного косметического средства на основе иммобилизованной гиалуронидазы.

Задача решается косметическим кремом, содержащим иммобилизованную гиалуронидазу, ковалентно связанную с активным полимерным носителем, косметическую основу, состоящую из липодерма 4/1 и воды, консервант натрия бензоат при следующих соотношениях компонентов, мас.%:

липодерм	10-20
иммобилизованная гиалуронидаза	0,2-0,6
натрия бензоат	0,05-0,1
ароматизатор	до 0,3
вода дистиллированная	остальное

Может быть использована любая ковалентно связанная с полимерным носителем гиалуронидаза. В качестве иммобилизующего полимера, например, используют различные приемлемые для нанесения на кожу полимеры, такие как полиэтиленгликоль, гидроксиэтилкрахмал, поливинилпирролидон, полисахариды, силиконы и др. (например, полученные по способам, описанным в WO 2010021570, US 7521434, RU 2409669, http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3563746/).

Предпочтительно используют иммобилизованную гиалуронидазу, в которой фермент связан ковалентной химической связью с полимерным носителем A-CO-NH-Б, где А-СО - фрагмент карбоксильной функции производного N-оксида поли-1,4-этиленпиперазина, а Б-NH - аминогруппа гиалуронидазы, и обладает гиалуронидазной активностью.

В качестве носителя может быть использовано карбоксилсодержащее производное N-оксида поли-1,4-этиленпиперазина с молекулярной массой 20000-40000 Да.

- Иммобилизация гиалуронидазы с карбоксилсодержащим производном N-оксида поли-1,4-этиленпиперазина осуществляется карбодиимидным или гидразидным методами в водых растворах.

Гидразидный метод включает реакцию азидирования гидразидного производного карбоксиалкилзамещенного N-оксида поли-1,4-этиленпиперазина (ПЭП) в присутствии нитрита натрия с последующей реакцией конъюгации активированного производного ПЭП с гиалуронидазой. Очистка иммобилизованной гиалуронидазы осуществляется ультрафильтрацией на кассете с мембранами с нижним пределом отсекания частиц 5 кДа с последующим лиофильным высушиванием очищенного раствора препарата.

Карбодиимидный метод включает реакцию конъюгации гиалуронидазы с карбоксиалкилзамещенным N-оксидом поли-1,4-этиленпиперазина в присутствии конденсирующего агента водорастворимого карбодиимида с последующей очисткой ультрафильтрацией на кассете с мембранами с нижним пределом отсекания частиц 5 кДа и лиофильным высушиванием.

Источником гиалуронидазы могут быть бычьи или овечьи семенники.

В качестве основы предложено использовать липодерм 4/1. ЛИПОДЕРМ 4/1 (LIPODERM 4/1) - самоэмульгирующая кремовая основа с выраженными смягчающими и влагоудерживающими свойствами, предназначенная для изготовления косметических и фармацевтических кремов и эмульсий типа "масло-в-воде" различной консистенции. Состав Липодерм 4/1: моностеарат глицерина, стеариловый спирт, цетиловый спирт, стеарат диэтиленгликоля, стеарат ПЭГ-400, полисорбат 20, ПЭГ-40 гидрогенизированное касторовое масло, дипропиленгликоль. Выбранная основа обуславливает эффективное смягчение кожи, повышение ее эластичности, активизацию процессов обновления клеток, разглаживание мелких морщин. Неожиданно было обнаружено, что данная основа значительно увеличивает эффективность гиалуронидазы.

В качестве ароматизатора может быть использован любой приемлемый в косметических изделиях ароматизатор, придающий приятный запах. Это может быть как вещество, придающее моноаромат (например, абрикос, апельсин, лимон, банан), так и букет ароматов (например, "шоколадный сюрприз", "ирисо-сливочный").

Предложенный крем на основе иммобилизованной гиалуронидазы имеет следующие предпочтительные области применения:

- Профилактика формирования рубцов после косметических процедур, удаления татуировок, лазерных шлифовок кожи, дермабразии, срединных и глубоких пилингов, эпиляций;

- Последствия угревой болезни;

- Дефекты ногтевой пластинки, вызванные заболеваниями негрибковой этиологии;

- Рубцы после фотодинамических процедур, ожогов, в том числе солнечных.

- Свежие и зрелые рубцы: посттравматические, послеожоговые и послеоперационные рубцы.

Технический результат: высокая эффективность, устранение или значительное уменьшение интенсивности окраски рубцового поражения по сравнению с окружающими тканями.

Технология производства:

1. Нагреть водную и жирную фазу (липодерм 4/1) раздельно до 80-85°C.

2. Перемешивать 2-5 минут при Т=80-85°C, затем охладить до Т=60-65°C и перемешать до однородного состояния.

3. При перемешивании довести эмульсию до Т=32-35°C и ввести заранее растворенную в воде активную субстанцию (иммобилизованная гиалуронидаза) и растворенный в воде консервант (натрия бензоат).

4. Продолжить перемешивание до достижения комнатной температуры эмульсии.

Возможность осуществления изобретения может быть продемонстрирована нижеследующими примерами.

Пример 1

липодерм	20
иммобилизованная гиалуронидаза	0,4
натрия бензоат	0,05
ароматизатор «Абрикос»	0,1
вода дистиллированная	до 100%

Пример 2

липодерм	10
иммобилизованная гиалуронидаза	0,6
натрия бензоат	0,1
вода дистиллированная	до 100%

Пример 3. Исследование эффективности крема для предупреждения возникновения рубцов после косметических процедур.

Были сформированы три группы пациентов после удаления татуировок, проведения лазерной шлифовки кожи, глубокого пилинга, а также после эпиляций. Группа 1 - крем по примеру 2 без иммобилизации гиалуронидазы. Группа 2 - крем по примеру 2 с иммобилизованной гиалуронидазой и основой из геля полиэтиленоксида (нужно ли приводить пример с гелем. Группа 3 - крем по примеру 2.

Пациенты наносили крем два раза в сутки, комплаентность (соблюдение указаний врача-косметолога) в группах составила примерно от 85 до 88% пациентов. Крем легко наносился и оставался на коже в течение многих часов. В исследовании практически не было отмечено побочных эффектов, связанных с применением крема.

Образование рубцов наблюдали у 94% процентов пациентов группы 1, 87% - у группы 2. При этом рубцы в группе крема отмечались только в 26% случаев и были гораздо меньше, чем в контрольной группе. Заключительная оценка в конце третьего месяца показала, что разница между двумя группами контроля и третьей группой была статистически значима.

Было отмечено, что крем по изобретению восстанавливает нормальную окраску кожи и нормализует гидратацию рубцовой ткани. При использовании других основ вместо липодерма цвет в области поражения отличался.

Предложенный крем позволяет предупредить образование рубцов и шрамов, сделать их практически малозаметными, более эластичными, а также снять зуд и боль уже в первые дни применения крема.

1. Косметический крем на основе гиалуронидазы, содержащий косметическую основу, отличающийся тем, что в качестве фермента используют иммобилизованную гиалуронидазу, ковалентно связанную с полимерным носителем и обладающую гиалуронидазной активностью, при этом в качестве косметической основы используют липодерм 4/1 и воду, в качестве консерванта натрия бензоат при следующих соотношениях компонентов, мас.%:липодерм 4/1 - 10-20иммобилизованная гиалуронидаза - 0,2-0,6натрия бензоат - 0,05-0,1вода дистиллированная - остальное.

2. Крем по п. 1, отличающийся тем, что дополнительно содержит ароматизатор до 0,3 мас.%.

3. Крем по п. 1 или 2, отличающийся тем, что используют иммобилизованную гиалуронидазу, в которой фермент связан ковалентной химической связью с полимерным носителем A-CO-NH-Б, где А-СО - фрагмент карбоксильной функции производного N-оксида поли-1,4-этиленпиперазина, а Б-NH - аминогруппа гиалуронидазы.

4. Крем по п. 1 или 2, отличающийся тем, что источником гиалуронидазы являются бычьи или овечьи семенники.

5. Крем по п. 3, отличающийся тем, что в качестве носителя используют карбоксилсодержащее производное N-оксида поли-1,4-этиленпиперазина с молекулярной массой 20000-40000 Да.

6. Способ получения косметического крема на основе гиалуронидазы по п. 1, отличающийся тем, что нагревают воду и липодерм 4/1 раздельно до 80-85°С, перемешивают 2-5 минут при 80-85°С, затем охлаждают до 60-65°С и перемешивают до однородного состояния, продолжают перемешивание до достижения температуры получаемой эмульсии до 32-35°С и вводят заранее растворенную в воде иммобилизованную гиалуронидазу и растворенный в воде натрия бензоат, продолжают перемешивание до достижения комнатной температуры.