Способ количественного определения метоклопрамида

Способ количественного определения метоклопрамида

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Целью данного изобретения явилась разработка фотометрической методики определения метоклопрамида в лекарственных формах, воде и биологических жидкостях.

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения медицинского препарата метоклопрамида при контроле его в процессе производства и реализации, а также при проведении медико-биологических исследований.

Метоклопрамид (4-Амино-5-хлор-N-[2-(диэтиламино)этил]-2-меток-сибензамида гидрохлорид)

Является специфическим блокатором дофаминовых (Д₂) рецепторов, а также серотониновых (5-НТ₃) рецепторов [Машковский М.Д. Лекарственные средства: в 2 т. Т. 1. 14-ое издание, переработанное, исправленное и дополненное // М: ООО «Издательство Новая Волна»: Издатель С.Б. Дивов. 2002. 540 с.].

Число методов определения метоклопрамида незначительно. Для идентификации метоклопрамида предложено использовать методы ИК-спектроскопии, тонкослойной хроматографии с использованием для выявления пятен метоклопрамида раствора 4-диметиламинобензальдегида, реакцию на хлориды, реакцию на первичную ароматическую аминогруппу (взаимодействие продукта диазотирования препарата с щелочным раствором 2-нафтола) [British Pharmacopea, the Pharmaceutical Press, London // 1993. P. 429, 1010-1011].

Известен способ идентификации и количественного определения метоклопрамида, основанный на образовании метоклопрамидом соединения, окрашенного в лимонно-желтый цвет (λ_макс=380 нм), при его диазотировании [Болотов В.В., Мороз В.П., Петухова I.Ю. Iдентифiкацiя i визначення метоклопрамiду за допомогою реакцii дiaзoтyвaння та електронноi спектроскопii // Харкiв: Вicник фармацii. 2002. №1(29). С. 21-23].

Разработан способ количественного определения церукала (метоклопрамида), который наиболее близко подходит к нашему решению и взятый в качестве прототипа. Определение проводят путем обработки анализируемой пробы раствором органического реагента в кислой среде с последующим фотометрированием полученного раствора. Кислую среду создают путем добавления цитратного буферного раствора до pH 1,2-4,0, затем добавляют последовательно п-диметиламинокоричный альдегид до концентрации 4,56·10^-5-4,56·10^-4 М и додецилсульфат натрия до концентрации 4·10^-3-4·10^-2 М и фотометрируют при 540 нм [RU №2070720. Кл. G01N 21/78, G01N 33/15. Опубл. 20.12.1996]. Метод обладает высокой чувствительностью, позволяет проводить определение метоклопрамида не только в фармпрепаратах и воде, но и в различных биологических жидкостях. Вместе с тем, использование сложных аналитических форм, образующихся при использовании различных поверхностно-активных веществ в качестве модификаторов окрашенных систем, делает окраску новых аналитических форм малоустойчивыми и любое незначительное отклонение в методике проведения анализа, несомненно, приводит к ошибкам определения.

Предлагается способ определения метоклопрамида, основанный на образовании им азосоединения при взаимодействии диазотированного метоклопрамида с хромотроповой кислотой.

Реакция проходит по схеме:

Получение раствора азосоединения (азокрасителя)

1) Приготовление раствора метоклопрамида. 1 таблетку, содержащую 10 мг определяемого вещества, измельчают, взмучивают в 20 см³ воды, перемешивают 5 минут.

2) Получение диазотированного метоклопрамида. В полученный раствор последовательно вносят 20 г льда, 1,0 см³ 0,1% водного раствора нитрита натрия и 1 каплю 36% раствора соляной кислоты.

3) Приготовление раствора хромотроповой кислоты. В стакане емкостью 100 см³ в 20 см³ воды растворяют 0,04 г хромотроповой кислоты. Добавляют 1-2 кристаллика карбоната натрия и 20 г льда.

4) Получение азосоединения. В стакан емкостью 200 см³ переносят полученные растворы диазотированного метоклопрамида и хромотроповой кислоты и добавляют туда же 2 см³ 0,5% водного раствора гидроксида натрия, и доводят объем раствора азосоединения до 100 см³. Раствор окрашен в красный цвет, окраска устойчива длительное время (часы, дни), 1 см³ полученного раствора красителя соответствует содержанию 0,1 мг метоклопрамида.

Спектры поглощения раствора азосоединения

Отбирают 1 см³ раствора полученного азосоединения и доводят объем до 10 см³ водой. Измеряют спектры поглощения в кювете толщиной 1 см относительно воды в пределах от 400 до 600 нм при pH 3; 7,2 и 11 (рис. 1).

Рис. 1. Спектры поглощения красителя: 1 - раствор при pH 3; 2 - pH 7,2; 3 - pH 11. Кювета 1 см, измерения относительно воды при 298 К.

Концентрация красителя и, соответственно, метоклопрамида в пробе c=2,97·10^-5 моль/л. Оптическая плотность А=0,843 при pH=7,2, толщина слоя l=1 см, молярный коэффициент светопоглощения ε=2,84·10⁴.

Характеристики разработанных методик определения метоклопрамида в различных объектах показаны на следующих примерах.

Пример 1. Методика определения метоклопрамида в таблетках

Градуировочный график. В 10 пробирок вносят 0; 0,05; 0,10; 0,15; 0,20; 0,40; 0,50; 0,60; 0,80; 1,00 см³ полученного раствора красителя и доводят объем проб 1 н раствором уксусной кислоты до 10 см³. Через 5 минут измеряют оптические плотности растворов при длине волны 520 нм в кювете толщиной 1 см относительно воды (рис. 2). Опыт повторяют 6 раз.

Рис. 2. Градуировочный график для определения метоклопрамида в воде. 1-6 - экспериментальные данные, 7 - рассчитанный градуировочный график (жирная линия).

Выполнение определения. Размалывают 1 таблетку препарата и диспергируют ее в 20 см³ воды. Далее в полученный раствор последовательно вносят 20 г льда, 1,0 см³ 0,1% водного раствора нитрита натрия и 1 каплю 36% раствора соляной кислоты. В стакане емкостью 100 см³ в 20 см³ воды растворяют 0,04 г хромотроповой кислоты, добавляют 1-2 кристаллика карбоната натрия и 20 г льда. В стакан емкостью 200 см³ переносят полученные растворы диазотированного метоклопрамида и хромотроповой кислоты и добавляют туда же 2 см³ 0,5% водного раствора гидроксида натрия. Полученная смесь окрашивается в красный цвет. Доводят объем раствора до 100 см³ водой.

Из полученного раствора красителя отбирают 6 проб по 0,2 см³ и доводят их объемы 1 н уксусной кислотой до 10 см³. Измеряют оптические плотности при 520 нм, в кювете толщиной 1 см относительно воды. По результатам измерений находят среднюю величину оптической плотности, рассчитывают среднеквадратичное отклонение S и с использованием критерия Стьюдента t_p=2,57 рассчитывают доверительный интервал σ = t p S n . Аналогичные расчеты проводятся для объема взятых проб 0,4; 0,6; 0,8 и 1,0 см³.

Правильность методики определения препарата в таблетках проверена методом «введено-найдено» (таблица 1).

Пример 2. Методика определения метоклопрамида в моче

Градуировочный график. В 10 стаканчиков, содержащих по 50 см³ мочи, вносят по 0; 0,05; 0,10; 0,20; 0,40; 0,60; 0,70; 0,80; 0,90; 1,00 см³ раствора метоклопрамида, полученного растворением 1 таблетки препарата в 100 см³ воды. Далее все пробы обрабатывают как в условиях определения.

Выполнение определения. К 50 см³ мочи приливают 0,1 см³ 10% раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ), центрифугируют при 1500 об/мин в течение двух минут, центрифугаты объединяют, добавляют туда 1 см³ раствора, в котором содержится 0,04 г хромотроповой кислоты. Отдельно приготавливают 0,1% раствор нитрита натрия, для этого 0,1 г нитрита натрия растворяют в 100 см³ воды.

Отбирают отдельно в стаканчик объемом 100 см³ 1 см³ раствора нитрита натрия, добавляют 20 г льда, вносят туда обработанный биологический материал. В раствор хромотроповой кислоты вносят 20 г льда. Все растворы смешивают в одном стакане, где находится нитрит натрия, добавляют 2 см³ 0,5% раствор гидроксида натрия и перемешивают. Раствор окрашивается в красный цвет. Через 5 минут отбирают 5 см³ полученного раствора, вносят 5 см³ 1 н раствора уксусной кислоты и измеряют оптическую плотность при 520 нм в кювете толщиной 1 см относительно воды.

Правильность методики определения метоклопрамида в моче проверена методом «введено-найдено» (табл. 2).

Пример 3. Методика определения метоклопрамида в слюне

Градуировочный график. 10 отобранных проб слюны по 1 см³ разбавляют водой до 50 см³ и вносят туда 0; 0,05; 0,10; 0,20; 0,40; 0,60; 0,70; 0,80; 0,90; 1,00 см³ раствора метоклопрамида, полученный растворением 1 таблетки препарата в 100 см³ воды. Далее проводят все операции, описанные для анализа мочи.

Выполнение определения. Около 1 см³ слюны разбавляют водой до 50 см³. Далее проводят все операции, описанные для градуировочного графика.

Правильность методики определения метоклопрамида в слюне проверена методом «введено-найдено» (табл. 3).

Способ количественного определения метоклопрамида в лекарственных формах, воде, моче, слюне, включающий добавление в анализируемую пробу 20 г льда, 1 см³ 0,1% водного раствора нитрита натрия и 1 капли 36% раствора соляной кислоты, внесение раствора хромотроповой кислоты, полученного путем растворения 0,04 г хромотроповой кислоты в 20 см³ воды с добавлением 1-2 кристаллика карбоната натрия и 20 г льда, далее добавляют 2 см³ 0,5% водного раствора гидроксида натрия и доводят объем азосоединения до 100 см³, фотометрируют при длине волны 520 нм, при этом в случае определения метоклопрамида в таблетках, таблетку препарата диспергируют в воде, в случае определения метоклопрамида в моче в 50 см³ мочи добавляют 0,1 см³ 10% раствора трихлоруксусной кислоты и центрифугируют.