Терапевтические dll4-связывающие белки

Терапевтические dll4-связывающие белки

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Перекрестная ссылка на родственные заявки

По данной заявке испрашивается приоритет по предварительной заявке США № 61/309494, зарегистрированной 2 марта 2010 года, полное содержание которой включено в настоящее описание в качестве ссылки.

Список последовательностей

Настоящая заявка содержит список последовательностей, предоставляемый в формате ASCII посредством EFS-Web и включенный, таким образом, в качестве ссылки в полном объеме. Указанная копия ASCII, созданная 24 февраля 2011 года, названа 10920WOO1.txt, и ее размер составляет 111426 байтов.

Область изобретения

Настоящее изобретение относится к разработке и применению DLL4-связывающих белков в ингибировании, профилактике и/или лечении злокачественных новообразований, опухолей, других ангиогенез-зависимых заболеваний, ангиогенез-независимых заболеваний, дегенерации желтого пятна и заболеваний, связанных с возрастной дегенерацией желтого пятна, отличающихся аномальной экспрессией или активностью DLL4.

Предпосылки изобретения

Межклеточные взаимодействия необходимы для многих биологических процессов, таких как дифференцировка, пролиферация и гомеостаз. Одной системой, используемой широким диапазоном эукариот, является путь передачи сигнала Notch. Этот путь, особенно рецептор Notch, также является критичным для эффективного ангиогенеза в опухоли. Таким образом, ингибирование функций рецептора Notch, блокирование рецептора Notch и/или блокирование пути передачи сигнала Notch представляют собой потенциальные стратегии для противоопухолевых композиций и способов терапии. Доказано, что низкомолекулярные ингибиторы рецептора Notch являются токсичными, т.к. они супрессируют экспрессию рецепторов Notch дикого типа в ткани (нормальную) во всем организме. Таким образом, различных участников пути передачи сигнала Notch следует считать потенциальными мишенями для терапевтических средств.

Лигандом рецептора Notch в сосудистой системе является Дельта 4 или Дельта-подобный лиганд 4 (DLL4). Широко экспрессирующийся в сосудистой системе DLL4 является критичным для развития сосудов (Yan et al., Clin. Cancer Res., 13(24): 7243-7246 (2007); Shutter et al., Genes Dev., 14(11): 1313-1318 (2000); Gale et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(45): 15949-15954 (2004); Krebs et al., Genes Dev., 14(11): 1343-1352 (2000)). Мыши, гетерозиготные по DLL4, погибают в эмбриогенезе по причине обширных дефектов в развитии сосудов (Gale et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(45): 15949-15954 (2004); Duarte et al., Genes Dev., 18(20): 2474-2478 (2004); Krebs etal., Genes Dev., 18(20): 2469-2473 (2004)). Экспрессию DLL4 можно индуцировать посредством VEGF (Liu et al., Mol. Cell Biol., 23(1): 14-25 (2003); Lobov et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 104(9): 3219-3224 (2007)). В общем, DLL4 может отрицательно регулировать передачу сигнала VEGF, частично через подавление VEGFR2 и стимуляцию VEGFR1 (Harrington et al., Microvasc. Res., 75(2): 144-154 (2008); Suchting et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 104(9): 3225-3230 (2007)). Точная координация между DLL4 и VEGF необходима для эффективного ангиогенеза.

В дополнение к его физиологической роли, DLL4 подвергается положительной регуляции в кровеносных сосудах опухоли (Gale et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 101(45): 15949-15954 (2004); Mailhos et al., Differentiation, 69(2-3): 135-144 (2001); Patel et al., Cancer Res., 65(19): 8690-8697 (2005); Patel et al., Clin. Cancer Res., 12(16): 4836-4844 (2006); Noguera-Troise et al., Nature, 444(7122): 1032-1037 (2006)). Блокирование DLL4 теоретически ингибирует первичный рост опухоли на множестве моделей (Noguera-Troise et al., Nature, 444 (7122): 1032-1037 (2006); Ridgway et al., Nature, 444 (7122): 1083-1087 (2006); Scehnet et al., Blood, 109 (11): 4753-4760 (2007)). Ингибирование DLL4 являлось эффективным даже против опухолей, устойчивых к терапии против VEGF. Комбинированное ингибирование DLL4 и VEGF обеспечивало повышенную противоопухолевую активность. Что интересно, в отличие от ингибирования VEGF, снижающего образование сосудов опухоли, блокирование DLL4 приводит к повышению плотности сосудов опухоли, где сосуды являются аномальными, не могут поддерживать эффективный транспорт веществ кровью и, по существу, являются нефункциональными. Таким образом, DLL4 представляет потенциальную мишень для лечения злокачественных опухолей.

В данной области существует потребность в терапевтических средствах, способных воздействовать на путь передачи сигнала DLL4-Notch и, таким образом, ингибировать или даже предотвращать ангиогенез и рост опухолей.

Сущность изобретения

Изобретение относится к белкам, связывающим DLL4 человека. DLL4-связывающие белки по изобретению включают, в качестве неограничивающих примеров, моноклональные антитела крысы, химерные антитела, антитела с пересаженными CDR, гуманизированные антитела, приматизированные антитела, аффинно-зрелые антитела и их фрагменты, способные связывать DLL4 человека. Предпочтительно, связывающий белок, приведенный в настоящем описании, связывает DLL4 человека с высокой аффинностью. Более предпочтительно, связывающий белок по изобретению способен нейтрализовать DLL4 человека. Изобретение также относится к способам получения и применения DLL4-связывающих белков.

Один из аспектов изобретения относится к связывающему белку, способному связывать DLL4 человека, где связывающий белок содержит по меньшей мере одну аминокислотную последовательность, выбранную из группы аминокислотных последовательностей, состоящей из SEQ ID NO:157, SEQ ID NO:158, SEQ ID NO:159, SEQ ID NO:160, SEQ ID NO:161, SEQ ID NO:162, SEQ ID NO:163 и SEQ ID NO:164.

Аспект настоящего изобретения относится к связывающему белку, содержащему антигенсвязывающий домен, где связывающий белок способен связывать DLL4 человека и указанный антигенсвязывающий домен содержит по меньшей мере одну или более (т.е. две, три, четыре, пять или шесть) CDR, где:

CDR-H1 выбрана из группы, состоящей из:

X₁-X₂-X₃-X₄-X₅ (SEQ ID NO:151), где

X₁ является N, H или Y;

X₂ является F;

X₃ является P;

X₄ является M;

X₅ является A или S;

остатков 31-35 SEQ ID NO:157 (CDR-H1 38H12);

остатков 31-35 SEQ ID NO:161 (CDR-H1 37D10);

остатков 31-35 SEQ ID NO:163 (CDR-H1 32C7);

остатков 31-35 SEQ ID NO:165 (CDR-H1 14G1);

остатков 31-35 SEQ ID NO:167 (CDR-H1 14A11);

остатков 31-35 SEQ ID NO:169 (CDR-H1 15D6);

остатков 31-35 SEQ ID NO:171 (CDR-H1 VH.1 1A11);

остатков 31-35 SEQ ID NO:172 (CDR-H1 VH.1a 1A11);

остатков 31-35 SEQ ID NO:173 (CDR-H1 VH.1b 1A11);

остатков 31-35 SEQ ID NO:174 (CDR-H1 VH.2a 1A11);

остатков 31-35 SEQ ID NO:179 (CDR-H1 VH.1 38H12);

остатков 31-35 SEQ ID NO:180 (CDR-H1 VH.1A 38H12);

остатков 31-35 SEQ ID NO:181 (CDR-H1 VH.1b 38H12);

остатков 31-35 SEQ ID NO:182 (CDR-H1 VH.2a 38H12);

остатков 31-35 SEQ ID NO:187 (CDR-H1 h1A11VH.1);

остатков 31-35 SEQ ID NO:188 (CDR-H1 h1A11.A6);

остатков 31-35 SEQ ID NO:189 (CDR-H1 h1A11.A8);

остатков 31-35 SEQ ID NO:190 (CDR-H1 h1A11.C6);

остатков 31-35 SEQ ID NO:191 (CDR-H1 h1A11.A11);

остатков 31-35 SEQ ID NO:192 (CDR-H1 h1A11.B5);

остатков 31-35 SEQ ID NO:193 (CDR-H1 h1A11.E12);

остатков 31-35 SEQ ID NO:194 (CDR-H1 h1A11.G3);

остатков 31-35 SEQ ID NO:195 (CDR-H1 h1A11.F5); и

остатков 31-35 SEQ ID NO:196 (CDR-H1 h1A11.H2);

CDR-H2 выбрана из группы, состоящей из:

X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁-X₁₂-X₁₃-X₁₄-X₁₅-X₁₆-X₁₇ (SEQ ID NO:152), где

X₁ является T или S;

X₂ является I;

X₃ является S;

X₄ является S или G;

X₅ является S;

X₆ является D;

X₇ является G, A, D, S или E;

X₈ является T или W;

X₉ является T, P или A;

X₁₀ является Y, S, T или N;

X₁₁ является Y или I;

X₁₂ является R или G;

X₁₃ является D;

X₁₄ является S;

X₁₅ является V;

X₁₆ является K; и

X₁₇ является G;

остатков 50-66 SEQ ID NO:157 (CDR-H2 38H12);

остатков 50-68 SEQ ID NO:161 (CDR-H2 37D10);

остатков 50-66 SEQ ID NO:163 (CDR-H2 32C7);

остатков 50-66 SEQ ID NO:165 (CDR-H2 14G1);

остатков 50-66 SEQ ID NO:167 (CDR-H2 14A11);

остатков 50-66 SEQ ID NO:169 (CDR-H2 15D6);

остатков 50-66 SEQ ID NO:171 (CDR-H2 VH.1 1A11);

остатков 50-66 SEQ ID NO:172 (CDR-H2 VH.1a 1A11);

остатков 50-66 SEQ ID NO:173 (CDR-H2 VH.1b 1A11);

остатков 50-66 SEQ ID NO:174 (CDR-H2 VH.2a 1A11);

остатков 50-66 SEQ ID NO:179 (CDR-H2 VH.1 38H12);

остатков 50-66 SEQ ID NO:180 (CDR-H2 VH.1A 38H12);

остатков 50-66 SEQ ID NO:181 (CDR-H2 VH.1b 38H12);

остатков 31-35 SEQ ID NO:182 (CDR-H2 VH.2a 38H12);

остатков 50-66 SEQ ID NO:187 (CDR-H2 h1A11VH.1);

остатков 50-66 SEQ ID NO:188 (CDR-H2 h1A11.A6);

остатков 50-66 SEQ ID NO:189 (CDR-H2 h1A11.A8);

остатков 50-66 SEQ ID NO:190 (CDR-H2 h1A11.C6);

остатков 50-66 SEQ ID NO:191 (CDR-H2 h1A11.A11);

остатков 50-66 SEQ ID NO:192 (CDR-H2 h1A11.B5);

остатков 50-66 SEQ ID NO:193 (CDR-H2 h1A11.E12);

остатков 50-66 SEQ ID NO:194 (CDR-H2 h1A11.G3);

остатков 50-66 SEQ ID NO:195 (CDR-H2 h1A11.F5); и

остатков 50-66 SEQ ID NO:196 (CDR-H2 h1A11.H2);

CDR-H3 выбрана из группы, состоящей из:

X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉ (SEQ ID NO:153), где

X₁ является G;

X₂ является Y;

X₃ является Y;

X₄ является N;

X₅ является S;

X₆ является P;

X₇ является F;

X₈ является A; и

X₉ является Y, F или S;

остатков 99-107 SEQ ID NO:157 (CDR-H3 38H12);

остатков 101-111 SEQ ID NO:161 (CDR-H3 37D10);

остатков 99-105 SEQ ID NO:163 (CDR-H3 32C7);

остатков 99-105 SEQ ID NO:165 (CDR-H3 14G1);

остатков 99-110 SEQ ID NO:167 (CDR-H3 14A11);

остатков 99-110 SEQ ID NO:169 (CDR-H3 15D6);

остатков 99-107 SEQ ID NO:171 (CDR-H3 VH.1 1A11);

остатков 99-107 SEQ ID NO:172 (CDR-H3 VH.1a 1A11);

остатков 99-107 SEQ ID NO:173 (CDR-H3 VH.1b 1A11);

остатков 99-107 SEQ ID NO:174 (CDR-H3 VH.2a 1A11);

остатков 99-107 SEQ ID NO:179 (CDR-H3 VH.1 38H12);

остатков 99-107 SEQ ID NO:180 (CDR-H3 VH.1A 38H12);

остатков 99-107 SEQ ID NO:181 (CDR-H3 VH.1b 38H12);

остатков 99-107 SEQ ID NO:182 (CDR-H3 VH.2a 38H12);

остатков 99-107 SEQ ID NO:187 (CDR-H3 h1A11VH.1);

остатков 99-107 SEQ ID NO:188 (CDR-H3 h1A11.A6);

остатков 99-107 SEQ ID NO:189 (CDR-H3 h1A11.A8);

остатков 99-107 SEQ ID NO:190 (CDR-H3 h1A11.C6);

остатков 99-107 SEQ ID NO:191 (CDR-H3 h1A11.A11);

остатков 99-107 SEQ ID NO:192 (CDR-H3 h1A11.B5);

остатков 99-107 SEQ ID NO:193 (CDR-H3 h1A11.E12);

остатков 99-107 SEQ ID NO:194 (CDR-H3 h1A11.G3);

остатков 99-107 SEQ ID NO:195 (CDR-H3 h1A11.F5); и

остатков 99-107 SEQ ID NO:196 (CDR-H3 h1A11.H2);

CDR-L1 выбрана из группы, состоящей из:

X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉-X₁₀-X₁₁ (SEQ ID NO:154), где

X₁ является R;

X₂ является A;

X₃ является S;

X₄ является E или Q;

X₅ является D или E;

X₆ является I;

X₇ является Y или W;

X₈ является S, I, Y, N или R;

X₉ является N;

X₁₀ является L; и

X₁₁ является A;

остатков 24-34 SEQ ID NO:158 (CDR-L1 38H12);

остатков 24-34 SEQ ID NO:162 (CDR-L1 37D10);

остатков 24-34 SEQ ID NO:164 (CDR-L1 32C7);

остатков 24-34 SEQ ID NO:166 (CDR-L1 14G1);

остатков 23-37 SEQ ID NO:168 (CDR-L1 14A11);

остатков 23-37 SEQ ID NO:170 (CDR-L1 15D6);

остатков 24-34 SEQ ID NO:175 (CDR-L1 VL.1 1A11);

остатков 24-34 SEQ ID NO:176 (CDR-L1 VL.1a 1A11);

остатков 24-34 SEQ ID NO:177 (CDR-L1 VL.1b 1A11);

остатков 24-34 SEQ ID NO:178 (CDR-L1 VL.2a 1A11);

остатков 24-34 SEQ ID NO:183 (CDR-L1 VL.1 38H12);

остатков 24-34 SEQ ID NO:184 (CDR-L1 VL.1a 38H12);

остатков 24-34 SEQ ID NO:185 (CDR-L1 VH.1b 38H12);

остатков 24-34 SEQ ID NO:186 (CDR-L1 VL.2a 38H12);

остатков 24-34 SEQ ID NO:197 (CDR-L1 h1A11VL.1);

остатков 24-34 SEQ ID NO:198 (CDR-L1 h1A11.A2);

остатков 24-34 SEQ ID NO:199 (CDR-L1 h1A11.A12);

остатков 24-34 SEQ ID NO:200 (CDR-L1 h1A11.A7);

остатков 24-34 SEQ ID NO:201 (CDR-L1 h1A11.B4);

остатков 24-34 SEQ ID NO:202 (CDR-L1 h1A11.B5); и

остатков 24-34 SEQ ID NO:203 (CDR-L1 h1A11.E12);

CDR-L2 выбрана из группы, состоящей из:

X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇ (SEQ ID NO:155), где

X₁ является D;

X₂ является T;

X₃ является N или S;

X₄ является N, D, S, I, Y или V;

X₅ является L;

X₆ является A; и

X₇ является D;

остатков 50-56 SEQ ID NO:158 (CDR-L2 38H12);

остатков 50-56 SEQ ID NO:162 (CDR-L2 37D10);

остатков 50-56 SEQ ID NO:164 (CDR-L2 32C7);

остатков 50-56 SEQ ID NO:166 (CDR-L2 14G1);

остатков 53-59 SEQ ID NO:168 (CDR-L2 14A11);

остатков 53-59 SEQ ID NO:170 (CDR-L2 15D6);

остатков 50-56 SEQ ID NO:175 (CDR-L2 VL.1 1A11);

остатков 50-56 SEQ ID NO:176 (CDR-L2 VL.1a 1A11);

остатков 50-56 SEQ ID NO:177 (CDR-L2 VL.1b 1A11);

остатков 50-56 SEQ ID NO:178 (CDR-L2 VL.2a 1A11);

остатков 50-56 SEQ ID NO:183 (CDR-L2 VL.1 38H12);

остатков 50-56 SEQ ID NO:184 (CDR-L2 VL.1a 38H12);

остатков 50-56 SEQ ID NO:185 (CDR-L2 VH.1b 38H12);

остатков 50-56 SEQ ID NO:186 (CDR-L2 VL.2a 38H12);

остатков 50-56 SEQ ID NO:197 (CDR-L2 h1A11VL.1);

остатков 50-56 SEQ ID NO:198 (CDR-L2 h1A11.A2);

остатков 50-56 SEQ ID NO:199 (CDR-L2 h1A11.A12);

остатков 50-56 SEQ ID NO:200 (CDR-L2 h1A11.A7);

остатков 50-56 SEQ ID NO:201 (CDR-L2 h1A11.B4);

остатков 50-56 SEQ ID NO:202 (CDR-L2 h1A11.B5); и

остатков 50-56 SEQ ID NO:203 (CDR-L2 h1A11.E12);

и CDR-L3 выбрана из группы, состоящей из:

X₁-X₂-X₃-X₄-X₅-X₆-X₇-X₈-X₉ (SEQ ID NO:156), где

X₁ является Q;

X₂ является Q;

X₃ является Y;

X₄ является N, D или T;

X₅ является N, Y или W;

X₆ является Y или V;

X₇ является P;

X₈ является P; и

X₉ является T;

остатков 89-97 SEQ ID NO:158 (CDR-L3 38H12);

остатков 89-97 SEQ ID NO:162 (CDR-L3 37D10);

остатков 89-97 SEQ ID NO:164 (CDR-L3 32C7);

остатков 89-98 SEQ ID NO:166 (CDR-L3 14G1);

остатков 92-100 SEQ ID NO:168 (CDR-L3 14A11);

остатков 92-100 SEQ ID NO:170 (CDR-L3 15D6);

остатков 89-97 SEQ ID NO:175 (CDR-L3 VL.1 1A11);

остатков 89-97 SEQ ID NO:176 (CDR-L3 VL.1a 1A11);

остатков 89-97 SEQ ID NO:177 (CDR-L3 VL.1b 1A11);

остатков 89-97 SEQ ID NO:178 (CDR-L3 VL.2a 1A11);

остатков 89-97 SEQ ID NO:183 (CDR-L3 VL.1 38H12);

остатков 89-97 SEQ ID NO:184 (CDR-L3 VL.1a 38H12);

остатков 89-97 SEQ ID NO:185 (CDR-L3 VH.1b 38H12);

остатков 89-97 SEQ ID NO:186 (CDR-L3 VL.2a 38H12);

остатков 89-97 SEQ ID NO:197 (CDR-L3 h1A11VL.1);

остатков 89-97 SEQ ID NO:198 (CDR-L3 h1A11.A2);

остатков 89-97 SEQ ID NO:199 (CDR-L3 h1A11.A12);

остатков 89-97 SEQ ID NO:200 (CDR-L3 h1A11.A7);

остатков 89-97 SEQ ID NO:201 (CDR-L3 h1A11.B4);

остатков 89-97 SEQ ID NO:202 (CDR-L3 h1A11.B5); и

остатков 89-97 SEQ ID NO:203 (CDR-L3 h1A11.E12).

Предпочтительно, DLL4-связывающий белок по изобретению содержит по меньшей мере одну CDR, содержащую аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

остатков 31-35 SEQ ID NO:157 (CDR-H1 38H12); остатков 50-66 SEQ ID NO:157 (CDR-H2 38H12); остатков 99-107 SEQ ID NO:157 (CDR-H3 38H12); остатков 24-34 SEQ ID NO:158 (CDR-L1 38H12); остатков 50-56 SEQ ID NO:158 (CDR-L2 38H12); остатков 89-97 SEQ ID NO:158 (CDR-L3 38H12); остатков 31-35 SEQ ID NO:159 (CDR-H1 1A11); остатков 50-66 SEQ ID NO:159(CDR-H2 1A11); остатков 99-107 SEQ ID NO:159 (CDR-H3 1A11); остатков 24-34 SEQ ID NO:160 (CDR-L1 1A11); остатков 50-56 SEQ ID NO:160 (CDR-L2 1A11); остатков 89-97 SEQ ID NO:160 (CDR-L3 1A11); остатков 31-35 SEQ ID NO:161 (CDR-H1 37D10); остатков 50-68 SEQ ID NO:161 (CDR-H2 37D10); остатков 101-111 SEQ ID NO:161 (CDR-H3 37D10); остатков 24-34 SEQ ID NO:162 (CDR-L1 37D10); остатков 50-56 SEQ ID NO:162 (CDR-L2 37D10); остатков 89-97 SEQ ID NO:162 (CDR-L3 37D10); остатков 31-35 SEQ ID NO:163 (CDR-H1 32C7); остатков 50-66 SEQ ID NO:163 (CDR-H2 32C7); остатков 99-105 SEQ ID NO:163 (CDR-H3 32C7); остатков 24-34 SEQ ID NO:164 (CDR-L1 32C7); остатков 50-56 SEQ ID NO:164 (CDR-L2 32C7); остатков 89-98 SEQ ID NO:164 (CDR-L3 32C7); остатков 31-35 SEQ ID NO:165 (CDR-H1 14G1); остатков 50-66 SEQ ID NO:165 (CDR-H2 14G1); остатков 99-105 SEQ ID NO:165 (CDR-H3 14G1); остатков 24-34 SEQ ID NO:166 (CDR-L1 14G1); остатков 50-56 SEQ ID NO:166 (CDR-L2 14G1); остатков 89-98 SEQ ID NO:166 (CDR-L3 14G1); остатков 31-35 SEQ ID NO:167 (CDR-H1 14A11); остатков 50-66 SEQ ID NO:167 (CDR-H2 14A11); остатков 99-110 SEQ ID NO:167 (CDR-H3 14A11); остатков 23-37 SEQ ID NO:168 (CDR-L1 14A11); остатков 53-59 SEQ ID NO:168 (CDR-L2 14A11); остатков 92-100 SEQ ID NO:168 (CDR-L3 14A11); остатков 31-35 SEQ ID NO:169 (CDR-H1 15D6); остатков 50-66 SEQ ID NO:169 (CDR-H2 15D6); остатков 99-110 SEQ ID NO:169 (CDR-H3 15D6); остатков 23-37 SEQ ID NO:170 (CDR-L1 15D6); остатков 53-59 SEQ ID NO:170 (CDR-L2 15D6); остатков 92-100 SEQ ID NO:170 (CDR-L3 15D6); остатков 31-35 SEQ ID NO:171 (CDR-H1 VH.1 1A11); остатков 50-66 SEQ ID NO:171 (CDR-H2 VH.1 1A11); остатков 99-107 SEQ ID NO:171 (CDR-H3 VH.1 1A11); остатков 31-35 SEQ ID NO:172 (CDR-H1 VH.1a 1A11); остатков 50-66 SEQ ID NO:172 (CDR-H2 VH.1a 1A11); остатков 99-107 SEQ ID NO:172 (CDR-H3 VH.1a 1A11); остатков 31-35 SEQ ID NO:173 (CDR-H1 VH.1b 1A11); остатков 50-66 SEQ ID NO:173 (CDR-H2 VH.1b 1A11); остатков 99-107 SEQ ID NO:173 (CDR-H3 VH.1b 1A11); остатков 31-35 SEQ ID NO:174 (CDR-H1 VH.2a 1A11); остатков 50-66 SEQ ID NO:174 (CDR-H2 VH.2a 1A11); остатков 99-107 SEQ ID NO:174 (CDR-H3 VH.2a 1A11); остатков 24-34 SEQ ID NO:175 (CDR-L1 VL.1 1A11); остатков 50-56 SEQ ID NO:175 (CDR-L2 VL.1 1A11); остатков 89-97 SEQ ID NO:175 (CDR-L3 VL.1 1A11); остатков 24-34 SEQ ID NO:176 (CDR-L1 VL.1a 1A11); остатков 50-56 SEQ ID NO:176 (CDR-L2 VL.1a 1A11); остатков 89-97 SEQ ID NO:176 (CDR-L3 VL.1a 1A11); остатков 24-34 SEQ ID NO:177 (CDR-L1 VL.1b 1A11); остатков 50-56 SEQ ID NO:177 (CDR-L2 VL.1b 1A11); остатков 89-97 SEQ ID NO:177 (CDR-L3 VL.1b 1A11); остатков 24-34 SEQ ID NO:178 (CDR-L1 VL.2a 1A11); остатков 50-56 SEQ ID NO:178 (CDR-L2 VL.2a 1A11); остатков 89-97 SEQ ID NO:178 (CDR-L3 VL.2a 1A11); остатков 31-35 SEQ ID NO:179 (CDR-H1 VH.1 38H12); остатков 50-66 SEQ ID NO:179 (CDR-H2 VH.1 38H12); остатков 99-107 SEQ ID NO:179 (CDR-H3 VH.1 38H12); остатков 31-35 SEQ ID NO:180 (CDR-H1 VH.1A 38H12); остатков 50-66 SEQ ID NO:180 (CDR-H2 VH.1A 38H12); остатков 99-107 SEQ ID NO:180 (CDR-H3 VH.1A 38H12); остатков 31-35 SEQ ID NO:181 (CDR-H1 VH.1b 38H12); остатков 50-66 SEQ ID NO:181 (CDR-H2 VH.1b 38H12); остатков 99-107 SEQ ID NO:181 (CDR-H3 VH.1b 38H12); остатков 31-35 SEQ ID NO:182 (CDR-H1 VH.2a 38H12); остатков 50-66 SEQ ID NO:182 (CDR-H2 VH.2a 38H12); остатков 99-107 SEQ ID NO:182 (CDR-H3 VH.2a 38H12); остатков 24-34 SEQ ID NO:183 (CDR-L1 VL.1 38H12); остатков 50-56 SEQ ID NO:183 (CDR-L2 VL.1 38H12); остатков 89-97 SEQ ID NO:183 (CDR-L3 VL.1 38H12); остатков 24-34 SEQ ID NO:184 (CDR-L1 VL.1a 38H12); остатков 50-56 SEQ ID NO:184 (CDR-L2 VL.1a 38H12); остатков 89-97 SEQ ID NO:184 (CDR-L3 VL.1a 38H12); остатков 24-34 SEQ ID NO:185 (CDR-L1 VL.1b 38H12); остатков 50-56 SEQ ID NO:185 (CDR-L2 VL.1b 38H12); остатков 89-97 SEQ ID NO:185 (CDR-L3 VL.1b 38H12); остатков 24-34 SEQ ID NO:186 (CDR-L1 VL.2a 38H12); остатков 50-56 SEQ ID NO:186 (CDR-L2 VL.2a 38H12); остатков 89-97 SEQ ID NO:186 (CDR-L3 VL.2a 38H12); остатков 31-35 SEQ ID NO:187 (CDR-H1 h1A11VH.1), остатков 50-66 SEQ ID NO:187 (CDR-H2 h1A11VH.1); остатков 99-107 SEQ ID NO:187 (CDR-H3 h1A11VH.1); остатков 31-35 SEQ ID NO:188 (CDR-H1 h1A11.A6), остатков 50-66 SEQ ID NO:188 (CDR-H2 h1A11.A6); остатков 99-107 SEQ ID NO:188 (CDR-H3 h1A11.A6); остатков 31-35 SEQ ID NO:189 (CDR-H1 h1A11.A8), остатков 50-66 SEQ ID NO:189 (CDR-H2 h1A11.A8); остатков 99-107 SEQ ID NO:189 (CDR-H3 h1A11.A8); остатков 31-35 SEQ ID NO:190 (CDR-H1 h1A11.C6), остатков 50-66 SEQ ID NO:190 (CDR-H2 h1A11.C6); остатков 99-107 SEQ ID NO:190 (CDR-H3 h1A11.C6); остатков 31-35 SEQ ID NO:191 (CDR-H1 h1A11.A11), остатков 50-66 SEQ ID NO:191 (CDR-H2 h1A11.A11); остатков 99-107 SEQ ID NO:191 (CDR-H3 h1A11.A11); остатков 31-35 SEQ ID NO:192 (CDR-H1 h1A11.B5), остатков 50-66 SEQ ID NO:192 (CDR-H2 h1A11.B5); остатков 99-107 SEQ ID NO:192 (CDR-H3 h1A11.B5); остатков 31-35 SEQ ID NO:193 (CDR-H1 h1A11.E12), остатков 50-66 SEQ ID NO:193 (CDR-H2 h1A11.E12); остатков 99-107 SEQ ID NO:193 (CDR-H3 h1A11.E12); остатков 31-35 SEQ ID NO:194 (CDR-H1 h1A11.G3), остатков 50-66 SEQ ID NO:194 (CDR-H2 h1A11.G3); остатков 99-107 SEQ ID NO:194 (CDR-H3 h1A11.G3); остатков 31-35 SEQ ID NO:195 (CDR-H1 h1A11.F5), остатков 50-66 SEQ ID NO:195 (CDR-H2 h1A11.F5); остатков 99-107 SEQ ID NO:195 (CDR-H3 h1A11.F5); остатков 31-35 SEQ ID NO:196 (CDR-H1 h1A11.H2), остатков 50-66 SEQ ID NO:196 (CDR-H2 h1A11.H2); остатков 99-107 SEQ ID NO:196 (CDR-H3 h1A11.H2); остатков 24-34 SEQ ID NO:197 (CDR-L1 h1A11VL.1), остатков 50-56 SEQ ID NO:197 (CDR-L2 h1A11VL.1); остатков 89-97 SEQ ID NO:197 (CDR-L3 h1A11VL.1); остатков 24-34 SEQ ID NO:198 (CDR-L1 h1A11.A2), остатков 50-56 SEQ ID NO:198 (CDR-L2 h1A11.A2); остатков 89-97 SEQ ID NO:198 (CDR-L3 h1A11.A2); остатков 24-34 SEQ ID NO:199 (CDR-L1 h1A11.A12), остатков 50-56 SEQ ID NO:199 (CDR-L2 h1A11.A12); остатков 89-97 SEQ ID NO:199 (CDR-L3 h1A11.A12); остатков 24-34 SEQ ID NO:200 (CDR-L1 h1A11.A7), остатков 50-56 SEQ ID NO:200 (CDR-L2 h1A11.A7); остатков 89-97 SEQ ID NO:200 (CDR-L3 h1A11.A7); остатков 24-34 SEQ ID NO:201 (CDR-L1 h1A11.B4), остатков 50-56 SEQ ID NO:201 (CDR-L2 h1A11.B4); остатков 89-97 SEQ ID NO:201 (CDR-L3 h1A11.B4); остатков 24-34 SEQ ID NO:202 (CDR-L1 h1A11.B5), остатков 50-56 SEQ ID NO:202 (CDR-L2 h1A11.B5); остатков 89-97 SEQ ID NO:202 (CDR-L3 h1A11.B5); остатков 24-34 SEQ ID NO:203 (CDR-L1 h1A11.E12), остатков 50-56 SEQ ID NO:203 (CDR-L2 h1A11.E12); и остатков 89-97 SEQ ID NO:203 (CDR-L3h1A11.E12).

В варианте осуществления DLL4-связывающий белок по изобретению содержит по меньшей мере три CDR, приведенных в настоящем описании (выше или ниже). В неограничивающем примере DLL4-связывающий белок по изобретению содержит три CDR, приведенных в настоящем описании, где три CDR являются CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3, как приведено в настоящем описании. В другом неограничивающем примере DLL4-связывающий белок по изобретению содержит три CDR, приведенных в настоящем описании, где три CDR являются CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, как приведено в настоящем описании.

В варианте осуществления DLL4-связывающий белок по изобретению содержит одну или более CDR, приведенных в настоящем описании (выше или ниже), например, одну, две, три, четыре, пять или шесть CDR, приведенных в настоящем описании. В предпочтительном варианте осуществления DLL4-связывающий белок по изобретению содержит шесть CDR, приведенных в настоящем описании, например, CDR-H1, CDR-H2, CDR-H3, CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3, как приведено в настоящем описании.

В другом варианте осуществления DLL4-связывающий белок по изобретению содержит три CDR, выбранных из набора CDR вариабельного домена, где набор CDR вариабельного домена выбран из группы наборов CDR вариабельного домена, состоящей из:

Набора CDR VH 38Н12

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:157

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:157

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:157

Набора CDR VL 38Н12

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:158

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:158

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:158

Набора CDR VH 1А11

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:159

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:159

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:159

Набора CDR VL 1А11

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:160

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:160

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:160

Набора CDR VH 37D10

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:161

CDR-H2: остатки 50-68 SEQ ID NO:161

CDR-H3: остатки 101-111 SEQ ID NO:161

Набора CDR VL 37D10

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:162

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:162

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:162

Набора CDR VH 32C7

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:163

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:163

CDR-H3: остатки 99-105 SEQ ID NO:163

Набора CDR VL 32C7

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:164

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:164

CDR-L3: остатки 89-98 SEQ ID NO:164

Набора CDR VH 14G1

CDR-H1: остатки 31 -35 SEQ ID NO:165

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:165

CDR-H3: остатки 99-105 SEQ ID NO:165

Набора CDR VL 14G1

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:166

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:166

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:166

Набора CDR VH 14A11

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:167

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:167

CDR-H3: остатки 99-110 SEQ ID NO:167

Набора CDR VL 14A11

CDR-L1: остатки 23-37 SEQ ID NO:168

CDR-L2: остатки 53-59 SEQ ID NO:168

CDR-L3: остатки 92-100 SEQ ID NO:168

Набора CDR VH 15D6

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:169

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:169

CDR-H3: остатки 99-110 SEQ ID NO:169

Набора CDR VL 15D6

CDR-L1: остатки 23-37 SEQ ID NO:170

CDR-L2: остатки 53-59 SEQ ID NO:170

CDR-L3: остатки 92-100 SEQ ID NO:170

Набора CDR VH VH.1 1A11

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:171

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:171

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:171

Набора CDR VH VH.1a 1A11

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:172

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:172

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:172

Набора CDR VH VH.1b 1A11

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:173

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:173

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:173

Набора CDR VH VH.2a 1A11

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:174

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:174

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:174

Набора CDR VL VL.1 1A11

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:175

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:175

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:175

Набора CDR VL VL.1a 1A11

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:176

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:176

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:176

Набора CDR VL VL.1b 1A11

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:177

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:177

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:177

Набора CDR VL VL.2a 1A11

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:178

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:178

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:178

Набора CDR VH VH.1 38H12

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:179

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:179

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:179

Набора CDR VH VH.1a 38H12

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:180

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:180

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:180

Набора CDR VH VH.1b 38H12

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:181

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:181

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:181

Набора CDR VH VH.2a 38H12

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:182

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:182

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:182

Набора CDR VL VL.1 38H12

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:183

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:183

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:183

Набора CDR VL VL.1a 38H12

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:184

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:184

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:184

Набора CDR VL VL.1b 38H12

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:185

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:185

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:185

Набора CDR VL VL.2a 38H12

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:186

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:186

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:186

Набора CDR VH hA11VH.1

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:187

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:187

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:187

Набора CDR VH hA11.A6

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:188

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:188

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:188

Набора CDR VH hA11.A8

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:189

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:189

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:189

Набора CDR VH hA11.C6

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:190

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:190

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:190

Набора CDR VH hA11.All

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:191

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:191

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:191

Набора CDR VH hA11.B5

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:192

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:192

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:192

Набора CDR VH hA11.E12

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:193

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:193

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:193

Набора CDR VH hA11.G3

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:194

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:194

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:194

Набора CDR VH hA11.F5

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:195

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:195

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:195

Набора CDR VH hA11.H2

CDR-H1: остатки 31-35 SEQ ID NO:196

CDR-H2: остатки 50-66 SEQ ID NO:196

CDR-H3: остатки 99-107 SEQ ID NO:196

Набора CDR VL h1A11VL.1

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:197

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:197

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:197

Набора CDR VL h1A11.A2

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:198

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:198

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:198

Набора CDR VL h1A11.A12

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:199

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:199

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:199

Набора CDR VL h1A11.A7

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:200

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:200

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:200

Набора CDR VL h1A11.B4

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:201

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:201

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:201

Набора CDR VL h1A11.B5

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:202

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:202

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:202

и

Набора CDR VL h1A11.E12

CDR-L1: остатки 24-34 SEQ ID NO:203

CDR-L2: остатки 50-56 SEQ ID NO:203

CDR-L3: остатки 89-97 SEQ ID NO:203

В варианте осуществления DLL4-связывающий белок содержит CDR по меньшей мере из двух наборов CDR вариабельного домена из указанной выше группы.

В другом варианте осуществления DLL4-связывающий белок по изобретению содержит три CDR, выбранные из любого набора VH трех CDR в указанной выше группе, и три CDR, выбранные из любого набора VL трех CDR в указанной выше группе.

В другом варианте осуществления DLL4-связывающий белок по изобретению содержит набор трех CDR VH, как описано выше, и набор трех CDR VL, как описано выше, из пары наборов CDR VH и VL, выбранных из группы, состоящей из:

Набора CDR VH 38H12 и набора CDR VL 38H12,

Набора CDR VH 1A11 и набора CDR VL 1A11,

Набора CDR VH 37D10 и набора CDR VL 37D10,

Набора CDR VH 32C7 и набора CDR VL 32C7,

Набора CDR VH 14G1 и набора CDR VL 14G1,

Набора CDR VH 14A11 и набора CDR VL 14A11,

Набора CDR VH 15D6 и набора CDR VL 15D6,

Набора CDR VH VH.1 1A11 и набора CDR VL VL.1 1A11,

Набора CDR VH VH.1 1A11 и набора CDR VL VL.1a 1A11,

Набора CDR VH VH.1 1A11 и набора CDR VL VL.1b 1A11,

Набора CDR VH VH.1 1A11 и набора CDR VL VL.2a 1A11,

Набора CDR VH VH.1a 1A11 и набора CDR VL VL.1 1A11,

Набора CDR VH VH.1a 1A11 и набора CDR VL VL.1a 1A11,

Набора CDR VH VH.1a 1A11 и набора CDR VL VL.1b 1A11,

Набора CDR VH VH.1a 1A11 и набора CDR VL VL.2a 1A11,

Набора CDR VH VH.1b 1A11 и набора CDR VL VL.1 1A11,

Набора CDR VH VH.1b 1A11 и набора CDR VL VL.1a 1A11,

Набора CDR VH VH.1b 1A11 и набора CDR VL VL.1b 1A11,

Набора CDR VH VH.1b 1A11 и набора CDR VL VL.2a 1A11,

Набора CDR VH VH.2a 1A11 и набора CDR VL VL.1 1A11,

Набора CDR VH VH.2a 1A11 и набора CDR VL VL.1a 1A11,

Набора CDR VH VH.2a 1A11 и набора CDR VL VL.1b 1A11,

Набора CDR VH VH.2a 1A11 и набора CDR VL VL.2a 1A11,

Набора CDR VH VH.1 38H12 и набора CDR VL VL.1 38H12,

Набора CDR VH VH.1 38H12 и набора CDR VL VL.1a 38H12,

Набора CDR VH VH.1 38H12 и набора CDR VL VL.1b 38H12,

Набора CDR VH VH.1 38H12 и набора CDR VL VL.2a 38H12,

Набора CDR VH VH.1a 38H12 и набора CDR VL VL.1 38H12,

Набора CDR VH VH.1a 38H12 и набора CDR VL VL.1a 38H12,

Набора CDR VH VH.1a 38H12 и набора CDR VL VL.1b 38H12,

Набора CDR VH VH.1a 38H12 и набора CDR VL VL.2a 38H12,

Набора CDR VH VH.1b 38H12 и набора CDR VL VL.1 38H12,

Набора CDR VH VH.1b 38H12 и набора CDR VL VL.1a 38H12,

Набора CDR VH VH.1b 38H12 и набора CDR VL VL.1b 38H12,

Набора CDR VH VH.1b 38H12 и набора CDR VL VL.2a 38H12,

Набора CDR VH VH.2a 38H12 и набора CDR VL VL.1 38H12,

Набора CDR VH VH.2a 38H12 и набора CDR VL VL.1a 38H12,

Набора CDR VH VH.2a 38H12 и набора CDR VL VL.1b 38H12,

Набора CDR VH VH.2a 38H12 и набора CDR VL VL.2a 38H12,

Набора CDR VH h1A11.A6 и набора CDR VL h1A11VL.1,

Набора CDR VH h1A11.C6 и набора CDR VL h1A11VL.1,

Набора CDR VH h1A11.A11 и набора CDR VL h1A11VL.1,

Набора CDR VH h1A11.A8 и набора CDR VL h1A11VL.1,

Набора CDR VH h1A11VH.1 и набора CDR VL h1A11.B4,

Набора CDR VH h1A11VH.1 и набора CDR VL h1A11.A7,

Набора CDR VH h1A11VH.1 и набора CDR VL h1A11.A12,

Набора CDR VH h1A11VH.1 и набора CDR VL h1A11.A2,

Набора CDR VH h1A11.B5 и набора CDR VL h1A11.B5,

Набора CDR VH h1A11.E12 и набора CDR VL h1A11.E12,

Набора CDR VH h1A11.G3 и набора CDR VL h1A11.E12,

Набора CDR VH h1A11.F5 и набора CDR VL h1A11.E12, и

Набора CDR VH h1A11.H2 и набора CDR VL h1A11.E12.

В предпочтительном варианте осуществления DLL4-связывающий белок обладает DLL4-антигенсвязывающим доменом (или участком связывания), содержащим шесть CDR, где CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 находятся в вариабельной области тяжелой цепи (VH), и CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 находятся в вариабельной области легкой цепи (VL), и где соединение областей VH и VL образует функциональный DLL4-антигенсвязывающий домен DLL4-связывающего белка. В дополнительном неограничивающем примере этого варианта осуществления DLL4-связывающий белок, обладающий двумя DLL4-антигенсвязывающими доменами, содержит два набора областей VH и VL и, таким образом, содержит двенадцать CDR.

В другом варианте осуществления DLL4-связывающий белок обладает DLL4-антигенсвязывающим доменом, содержащим шесть CDR, где CDR-H1, CDR-H2 и CDR-H3 находятся в вариабельной области тяжелой цепи (VH), и CDR-L1, CDR-L2 и CDR-L3 находятся в вариабельной области легкой цепи (VL), и где остальные последовательности в каждой вариабельной области составляют каркасную область (FR) таким образом, что каждая CDR находится между двумя последовательностями FR-областей всего для четырех последовательностей FR, т.е. FR1, FR2, FR3 и FR4. В этом варианте осуществления расположение последовательностей FR и CDR в вариабельной области представляет собой FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4. В этом варианте осуществления связывающий домен, образованный соединением области VH и области VL, содержит восемь последовательностей FR и шесть CDR.

DLL4-связывающие белки по изобретению включают антитела с пересаженными CDR, где пересаживают одну или более областей CDR VH и/или VL антитела одних видов (донорных видов) и замещают соответствующими CDR VH и/или VL антитела других (акцепторных) видов с использованием рекомбинантных способов, доступных в этой области. Примером молекул донорных видов является моноклональное антитело крысы против DLL4 человека, приведенное в настоящем описании, и примером молекул акцепторных видов является молекула иммуноглобулина гамма (IgG) человека, где последовательности FR человека областей VH и VL молекулы IgG человека являются акцепторными каркасными последовательностями человека, получающими пересаженные CDR от донорного моноклонального антитела крысы. Акцепторные каркасные последовательности человека полученного антитела с пересаженными CDR можно дополнительно подвергать мутагенезу для улучшения одного или более свойств антитела с пересаженными CDR. В качестве неограничивающих примеров, один или более остатков одной или более последовательностей FR антитела с пересаженными CDR можно подвергать мутагенезу для улучшения аффинности связывания с DLL4 или снижения иммуногенности антитела с пересаженными CDR у человека.

В варианте осуществления изобретения DLL4-связывающий белок, содержащий одну или более описываемых выше CDR, дополнительно содержит акцепторную каркасную последовательность человека. Предпочтительно, DLL4-связывающий белок содержит одну или более (например, одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь, или восемь) акцепторных каркасных последовательностей человека.

Акцепторная каркасная последовательность человека, присутствующая в DLL4-связывающем белке по изобретению, может содержать один или более аминокислотных остатков, подвергнутых обратному мутагенезу в один или более соответствующих аминокислотных остатков, присутствующих в моноклональном антителе крысы, связывающем DLL4, и/или подвергнутых мутагенезу в одном или более аминокислотных остатках, уменьшающих или устраняющих участок(и) для нежелательных реакций, например, для уменьшения или устранения участка нежелательного гликозилирования, и/или участка нежелательного образования N-концевого пироглутамата, и/или участка потенциально сниженного риска иммуногенности.

В варианте осуществления DLL4-связывающий белок, содержащий одну или более описываемых выше CDR, дополнительно содержит одну или более (например, любую одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь или восемь) акцепторных каркасных последовательностей человека, выбранных из группы акцепторных каркасных последовательностей человека в таблицах 3 и 4 ниже. Одна или более акцепторных каркасных последовательностей человека из таблиц 3 и 4, присутствующих в DLL4-связывающем белке по изобретению, может дополнительно содержать один или более аминокислотных остатков, подвергнутых обратному мутагенезу в один или более соответствующих аминокислотных остатков, присутствующих в моноклональном антителе крысы, связывающем DLL4, и/или подвергнутых мутагенезу в одну или более аминокислот, уменьшающих или устраняющих участок(и) для нежелательной реакции, например, для уменьшения или устранения участка нежелательного гликозилирования, и/или участка нежелательного образования N-концевого пироглутамата, и/или участка потенциально сниженного риска иммуногенности.

В другом варианте осуществления изобретение относится к DLL4-связывающему белку, содержащему одну или более описываемых выше CDR, где связывающий белок также содержит одну или более (например, любую одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь или восемь на связывающий домен) акцепторных каркасных последовательностей человека, выбранных из любой каркасной последовательности, присутствующей в последовательности вариабельной области, выбранной из группы, состоящей из:

В еще одном варианте осуществления изобретения DLL4-связывающий белок дополнительно содержит одну или более (например, любую одну, две, три, четыре, пять, шесть, семь или восемь) акцепторных каркасных последовательностей, выбранных из группы, состоящей из:

каркаса тяжелой цепи-1 (H-FR1):

E-V-Q-L-V-E-S-G-G-G-L-V-Q-P-G-G-S-L-R-L-S-C-A-A-S-G-F-T-F-X₃₀ (SEQ ID NO:143), где X₃₀ является S, R или G;

каркаса тяжелой цепи-2 (H-FR2): W-V-R-Q-A-P-G-K-G-L-E-W-V-A (SEQ ID NO:144);

каркаса тяжелой цепи-3 (H-FR3):

R-F-T-I-S-R-D-N-A-K-X₁₁-S-L-Y-L-Q-M-N-S-L-R-A-E-D-T-A-V-Y-Y-C-X₃₁-R (SEQ ID NO:145), где

X₁₁ является Ν или S; и

X₃₁ является A или S;

каркаса тяжелой цепи-4 (H-FR4): W-G-Q-G-T-L-V-T-V-S-S (SEQ ID NO:146);

каркаса легкой цепи-1 (L-FR1):

D-I-Q-M-T-Q-S-P-S-S-L-S-A-S-V-G-D-R-V-T-I-T-C (SEQ ID NO:147);

каркаса легкой цепи-2 (L-FR2): W-Y-Q-Q-K-P-G-K-X₉-P-K-L-L-I-X₁₅ (SEQ ID NO:148), где

X₉ является A или S; и

X₁₅ является F или Y;

каркаса легкой цепи-3 (L-FR3):

G-V-P-S-R-F-S-G-S-G-S-G-T-D-X₁₅-T-L-T-I-S-S-L-Q-P-E-D-F-A-T-Y-Y-C (SEQ ID NO:149), где

X₁₅ является F или S; и

каркаса легкой цепи-4 (L-FR4): F-G-Q-G-T-K-L-E-I-K (SEQ ID NO:150).

В другом варианте осуществления DLL4-связывающий белок, содержащий одну или более описываемых выше CDR, также содержит описываемую выше акцепторную каркасную последовательность человека, где акцепторная каркасная последовательность человека содержит по меньшей мере одну замену аминокислоты в каркасной области в ключевом остатке, где ключевой остаток выбран из группы, состоящей из остатка, смежного с CDR, остатка в участке гликозилирования, редкого остатка, остатка, способного взаимодействовать с DLL4 человека, остатка, способного взаимодействовать с CDR, канонического остатка, контактного остатка между вариабельной областью тяжелой цепи и вариабельной областью легкой цепи, остатка в зоне Вернье и остатка в области, перекрывающейся для CDR1 вариабельной области тяжелой цепи, определенного по Chothia, и первой каркасной областью тяжелой цепи, определяемой по Kabat.

В другом варианте осуществления акцепторная каркасная последовательность человека DLL4-связывающего белка, приведенная в настоящем описании, содержит по меньшей мере одну замену аминокислоты в каркасной области, где аминокислотная каркасная последовательность является по меньшей мере на 65% идентичной акцепторной каркасной последовательности зародышевой линии человека и содержит по меньшей мере 70 аминокислотных остатков, идентичных акцепторной каркасной последовательности зародышевой линии человека. В другом варианте осуществления DLL4-связывающий белок по изобретению содержит консенсусную последовательность вариабельного домена человека.

В варианте осуществления изобретение относится к DLL4-связывающему белку, содержащему акцепторную каркасную последовательность человека, где связывающий белок содержит по меньшей мере один вариабельный домен с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из:

В другом варианте осуществления DLL4-связывающий белок по изобретению содержит два или более описываемых выше вариабельных домена. В предпочтительном варианте осуществления DLL4-связывающий белок по изобретению содержит два вариабельных домена, где два вариабельных домена имеют аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из:

В варианте осуществления DLL4-связывающий белок по изобретению содержит по меньшей мере один вариабельный домен с аминокислотной последовательностью, выбранной из группы, состоящей из:

В другом варианте осуществления DLL4-связывающий белок по изобретению содержит два вариабельных домена, где два вариабельных домена имеют аминокислотные последовательности, выбранные из группы, состоящей из:

В варианте осуществления DLL4-связывающий белок по изобретению содержит два вариабельных домена с аминокислотными последовательностями, выбранными из группы, состоящей из:

SEQ ID NO:188 (h1A11.A6 VH) и SEQ ID NO:197 (h1A11VL.1),

SEQ ID NO:190 (h1A11.C6 VH) и SEQ ID NO:197 (h1A11VL.1) и

SEQ ID NO:191 (h1A11.A11 VH) и SEQ ID NO:197 (h1A11.VL.1).

В варианте осуществления DLL4-связывающий белок по изобретению содержит два вариабельных домена с аминокислотными последовательностями SEQ ID NO:181 (VH.1b 38H12) и SEQ ID NO:185 (VL.1b 38H12).

По изобретению вариабельные домены тяжелой цепи (VH) и вариабельные домены легкой цепи (VL) любого из DLL4-связывающих белков, приведенных в настоящем описании, также можно перетасовывать с использованием доступных в этой области рекомбинантных способов для получения и селекции дополнительных DLL4-связывающих белков, содержащих различные комбинации доменов VH и VL, приведенные в настоящем описании.

В вариа