Способ экспериментального моделирования аутотрансплантации селезеночной ткани в печень

Способ экспериментального моделирования аутотрансплантации селезеночной ткани в печень

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к области медицины и найдет применение в экспериментальной хирургии для моделирования аутотрансплантации селезеночной ткани в печень, изучения патогенеза и возможности определения жизнеспособности аутолиентрансплантата под капсулу печени.

Единственным способом профилактики синдрома послеоперационного гипоспленизма является аутотрансплантация селезеночной ткани. Большинство существующих на сегодняшний день способов аутолиентрасплантации доступны при широкой лапаротомии. Тогда как активное развитие лапароскопии заставляет искать новые оперативные решения, доступные миниинвазивной хирургии. Спорным остается вопрос об оптимальной массе аутолиентрансплантата, позволяющей купировать развитие синдрома послеоперационного гипоспленизма.

Известен способ профилактики постспленэктомического синдрома в эксперименте (патент РФ №2247567, опубликован 10.03.2005), при котором осуществляют забор селезенки у эмбриона, которую отмывают в питательной среде №199, помещают в свежую среду №199, и получают гомогенат в тефлоновом гомогенизаторе, который подвергают центрифугированию; выделяют верхний, средний и нижний слои; отсасывают средний слой и верхнюю часть нижнего слоя; полученную смесь клеток разводят в питательной среде №199, которую затем вводят инъекционно в брыжейку тонкой кишки или прямую мышцу живота. Известный способ трудоемок, не применим в экстренной хирургии.

Известен способ аутотрансплантации селезеночной ткани в печень (патент РФ №2305502, опубликован 10.09.2007), при котором производят аутотрансплантацию перфорированного фрагмента селезеночной ткани в рану печени с последующей фиксацией этого фрагмента П-образными швами через сохраненную в периферической части капсулу селезеночного трансплантата. Однако данный способ доступен только при одномоментном повреждении селезенки и печени и широком лапаротомном доступе.

Известен способ моделирования очагов диссеминированного постспленэктомического спленоза (патент РФ №2481645, опубликован 10.05.2013), при котором выполняют открытую спленэктомию и обсеменение органов брюшной полости кровью из удаленной селезенки. При этом создаются условия, схожие с излитием крови селезенки в брюшную полость при ее повреждении, и условия для активации механизмов роста «неоселезеночной» ткани, наиболее приближенные к имеющим место при патологии у человека. Недостатком известного способа является неконтролируемый спленолиз, который может привести к развитию гиперспленизма, спаечной кишечной непроходимости.

Задачей заявляемого изобретения является моделирование способа аутотрансплантации селезеночной ткани в печень, применимого в лапароскопической хирургии.

Задача достигается тем, что после лапароскопической спленэктомии и фрагментации декапсулированной селезеночной ткани до 0,2 см приготавливают гомогенат путем добавления физиологического раствора к измельченной селезеночной ткани в соотношении 2:1. Затем полученный гомогенат вводят субкапсулярно в передненаружную поверхность правой доли печени в объеме от 1/14 до 1/20 первоначальной массы селезеночной ткани, позволяющем профилактировать развитие послеоперационного гипоспленизма.

Изобретение иллюстрируется фотографиями.

На фото 1 изображен этап иммобилизации селезенки.

На фото 2 изображен этап спленэктомии.

На фото 3 изображен этап аутолиентрансплантации под капсулу печени.

На фото 4 - вид печени с зоной аутолиентрансплантата.

Нa фото 5 - гистологический препарат печени кролика с участком аутолиентрансплантата через 30 суток после операции, увеличение 1×100.

На фото 6 - гистологический препарат печени кролика с участком аутолиентрансплантата через 60 суток после операции, увеличение 1×40.

На фото 7 - гистологический препарат печени кролика с участком аутолиентрансплантата через 30 суток после операции, увеличение 1×100.

На фото 8 - гистологический препарат печени кролика с участком аутолиентрансплантата через 60 суток после операции, увеличение 1×40.

Способ экспериментального моделирования аутотрансплантации селезеночной ткани в печень осуществляется следующим образом.

Измельченную после лапароскопической спленэктомии (фото 1, фото 2), селезеночную ткань до 0,2 см в объеме от 1/14 до 1/20 первоначальной массы селезеночной ткани помещают в цилиндр системы для пункционной биопсии печени с внутренним диаметром просвета иглы 1,8 мм (может быть использован одноразовый стерильный шприц для инъекций и игла с внутренним диаметром просвета 2 мм, углом среза иглы 45°). Фрагменты селезеночной ткани в цилиндре (шприце) смешиваются с физиологическим раствором в соотношении 2:1, перемешиваются легким покачиванием до однородной массы. Затем выполняется пункционное введение полученного гомогената селезеночной ткани в передненаружную часть правой доли печени субкапсулярно следующим образом. После введения иглы на глубину 0,1 см-0,2 см на протяжении 3,0 см-5,0 см (фото 3) под капсулу печени начинают извлечение иглы с одновременным введением гомогената. Таким образом, субкапсулярно получается трансплантат селезеночной ткани длиной (3-5) см, шириной (1,0-1,5) см, (фото 4). Подобным образом вводится оставшаяся часть гомогената селезеночной ткани.

Пример из практики №1.

Кролик, 6 месяцев, масса 3500 г.

После медикаментозной седации препаратами, разрешенными в ветеринарии, и соответствующей обработки операционного поля выполнена срединная лапаротомия длиной 10,0 см, сосуды селезенки взяты на зажимы, пересечены. Селезеночная ткань измельчена и помещена в цилиндр устройства для пункционной биопсии печени. После чего по вышеописанной методике выполнено пункционное введение гомогената в передненаружную поверхность печени. Контроль гемостаза. Лапаротомная рана ушита наглухо.

Гистологическое исследование зоны аутотрансплантации:

через 1 месяц определяется слабовыраженная граница аутотрансплантата выраженная фибробластами, разрастание лимфоидной ткани, единичные синусы (фото 5).

Через 2 месяца определяются новообразованные синусы с небольшим просветом и умеренным кровенаполнением (фото 6).

Пример из практики №2.

Кролик, 6 месяцев, 3750 гр.

После соответствующей обработки операционного поля через разрез 1,0 см в средней точке передней брюшной стенки и наложения карбоперитонеума наложены дополнительные доступы в типичных для спленэктомии точках. После спленэктомии, помещении в резервуар и удалении селезенки из брюшной полости выполнено ее размельчение и приготовление гомогената путем добавления 0,9% физиологического раствора в соотношении 2:1. Под видеоконтролем в проекции передненаружной поверхности печени системой для пункционной биопсии печени выполнен прокол передней брюшной стенки, гомогенат введен субкапсулярно на протяжении 3,0 см, пункционная система удалена. Контроль гемостаза. Троакары удалены из брюшной полости. Швы на кожу.

Гистологическое исследование зоны аутотрансплантации:

через 1 месяц определяется слабовыраженная граница аутотрансплантата, выраженная фибробластами, разрастание лимфоидной ткани, единичные синусы (фото 7).

Через 2 месяца определяются новообразованные синусы с небольшим просветом и умеренным кровенаполнением (фото 8).

Таким образом, данный способ имеет существенные преимущества перед существующими способами аутолиентрансплантации, заключающиеся в возможности выполнения лапароскопически. Так, после спленэктомии лапароскопическим способом и приготовлением гомогената из спленэктомированной ткани под видеоконтролем выполняется прокол передней брюшной стенки в проекции передненаружной поверхности печени и введение гомогената вышеописанным способом, что позволяет минимизировать инвазивность оперативного вмешательства, снизить риск развития гнойно-септических осложнений, облегчить течение послеоперационного периода.

Способ экспериментального моделирования аутотрансплантации селезеночной ткани в печень путем лапароскопической спленэктомии, декапсуляции и фрагментации селезеночной ткани, отличающийся тем, что полученный путем добавления физиологического раствора к измельченной селезеночной ткани в соотношении 2:1 гомогенат вводят субкапсулярно в передненаружную поверхность правой доли печени в объеме от 1/14 до 1/20 первоначальной массы селезеночной ткани.