Способ прогнозирования риска развития аденокарциномы желудка при хронических процессах язвообразования органа

Способ прогнозирования риска развития аденокарциномы желудка при хронических процессах язвообразования органа

Реферат

Изобретение относится к области медицины, а именно к гастроэнтерологии и онкологии, и предназначено для прогнозирования риска развития аденокарциономы желудка при наличии хронических язв органа.

Известен способ диагностики рака желудка на ранней стадии (см. патент РФ на изобретение №2204835, МПК G01N 33/50, C12Q 1/68, опубл. 20.05.2003), основанный на иммуногистохимическом определении в слизистой оболочке желудка экспрессии мРНК циклооксигеназы-2 (ЦОКС-2) или белка ЦОКС-2. На повышенный риск развития рака желудка указывают высокие уровни данной экспрессии по сравнению с контрольными образцами. Диагностические наборы содержат в одном случае реагенты для выделения РНК или поли-А+мРНК, специфические праймеры Цокс-2 для ОТ-ПЦР и фрагменты кДНК для изготовления пробных ДНК или РНК, а в другом - специфичные в отношении Цокс-2 поликлональные или моноклональные антитела, специфические пептиды, обладающие связывающим сродством к Цокс-2, или олигонуклеотиды, обладающие связывающим сродством к Цокс-2.

Недостатком данного способа диагностики рака желудка является его неспецифичность, травматичность (взятие биопсии тканей желудка), трудоемкость и дороговизна как в отношении использовании специфических реактивов при проведении иммуногистохимического анализа, а также секвенирования ДНК, так и самого оборудования, которое не только дорого в эксплуатации, но и требует высококвалифицированных и специально подготовленных специалистов. Оценка проведенного анализа также требует опыта гистологов, как правило, двух трех человек для постановки правильного диагноза вне зависимости от положительной иммуногистохимической реакции. Таким образом, данный метод может быть использован для уточнения диагноза рака желудка, но не заменяет рутинного традиционного опыта клиницистов в этом случае. Также данный метод за счет дороговизны может быть внедрен только в экспериментальные клинические центры, но не в широкую медицинскую практику, особенно в районные клиники.

Известен способ ранней диагностики злокачественных образований желудка (см. патент РФ на изобретение №2008791, МПК A61B 5/00, A61B 1/00, опубл. 15.03.1994), основанный на применении витальных специальных красителей при эндоскопическом обследовании желудка, что позволяет повысить надежность диагностики указанного состояния при данном виде исследования органа. Сущность изобретения основана на том, что при первых эндоскопических признаках дисплазии врач устанавливает координаты этих участков с использованием цилиндрической координатной сетки и заносит их в специальную базу данных. Если при последующем гистологическом анализе биоптатов выявляются признаки дисплазии или метаплазии, проводят повторную биопсию из ранее установленных участков и при нарастании степени дисплазии устанавливают диагноз рака желудка. Однако проводить повторные эндоскопические исследования в одном и том же участке желудка не представляется возможным. Для повышения качества и технического усовершенствования повторного эндоскопического обследования больных авторы указанного способа предложили применение специфических красителей, которые накапливаются в пораженных участках желудка и определяют тем самым необходимое положение для повторной биопсии.

Известен способ диагностики неопластических изменений слизистой оболочки пищеварительного тракта (см. патент РФ на изобретение №2491029, МПК A61B 18/20, A61K 49/00, опубл. 27.08.2013). Согласно известному способу используют орошение желудка 0,3% водным раствором конгорота в количестве 10-15 мл или 0,5% водным раствором индигокармина в количестве 10-15 мл с последующим спектрофотометрическим исследованием стенок желудка на длине волны лазерного излучения - 532 нм (для индигокармина) и на длине волны - 632 нм (для совместного использования индигокармина или конгорота).

Недостатком данных способов является их травматичность, обусловленная необходимостью проведения повторных биопсий, а также невысокая достоверность. Связано это как с качеством визуализации эффектов флуороидов на ткани желудка из-за снижения интенсивности сигнала по длине гастрокоспического зонда, так и с концентрацией применяемых флуорисцентных агентов для исследования.

Наиболее близким к предлагаемому способу является способ прогнозирования риска развития аденокарциномы желудка при хронических язвах органа (Wang LG, Su BH, Du JJ. Expression of β-arrestin 1 in gastric cardiac adenocarcinoma and its relation with progression. Asian Pac J Cancer Prev. 2012;13(11):5671-5). Авторы, используя иммуногистохимическое определение бета-аррестина-1, показали высокую экспрессию данного фактора клеточного гомеостаза на 50 пациентах с аденокарциномой кардиального отдела желудка. Сущность метода состоит в следующем. У пациентов при эндоскопическом обследовании берут биоптаты с подозреваемых участков, помещают в 10% формалин, далее в парафин и проводят иммуногистохимический анализ с применением специфических антител на бета-аррестин-1. Выявление высокой экспрессии данного фактора, о которой судят по интенсивности окрашивания гистологических срезов, делают заключение о наличии злокачественных изменений в тканях желудка.

Указанный способ по применению бета-аррестина-1 в качестве маркера аденокарциономы желудка является пионерской работой и потому представлен в качестве экспериментального образца, который не внедрен в широкую медицинскую практику в силу его дороговизны, необходимости привлечения для выполнения работ специально обученных специалистов, долговременного проведения анализа, а также отсутствия четких количественных критериев экспрессии бета-аррестина-1, что невозможно при проведении иммуногистохимии.

Эти факты послужили основанием для создания нового способа прогнозирования риска развития злокачественных образований желудка, в частности аденокарциономы у пациентов с хроническими язвенными процессами.

Сущность изобретения состоит в том, что кровь берется натощак в количестве 2 мл у пациентов, у которых за сутки исключается белковая пища. Затем кровь центрифугируется в течение 20 минут при 3000 оборотах. Из полученной надосадочной жидкости забирается 1 мл. Далее методики выполняются в соответствии со: 1) стандартным алгоритмом иммуноферментного определения бета-аррестина-1 с применением специфических антител, например, ИФА набор Beta-arrestin-1 (ARRB1) ELISA kit, 96, CSB EL002134 RA и биохимическим определением оксида азота, подробно описанном в представленном нами ранее методе (Патент РФ № 2469330).

Технический результат заключается в снижении травматического воздействия на пациента.

Указанный технический результат достигается тем, что в способе прогнозирования риска развития аденокарциномы желудка согласно решению у пациентов с хроническими язвами желудка проводят биохимическое определение содержания бета-аррестина-1 и оксида азота в крови; при уровне в крови бета-аррестина-1, превышающего 0,5 нг/мл и для оксида азота выше 0,5 мкг/мл делают заключение о риске развития аденокарциномы желудка.

Заявляемый способ позволяет спрогнозировать риск развития аденокарциономы желудка у пациентов с хроническим язвообразованием по биохимическому определению в крови концентраций бета-аррестина-1 и оксида азота. Согласно способу кровь берут в количестве 2 мл натощак (за сутки исключается белковая пища). Проводят биохимическое определение содержания бета-аррестина-1 и оксида азота в крови. При концентрации в крови бета-аррестина-1 выше 0,5 нг/мл и оксида азота выше 0,5 мкг/мл делают вывод о риске развития аденокарциономы желудка.

Способ прогнозирования риска развития аденокарциономы при хроническом язвообразовании желудка и обострении этих процессов прошел клиническую апробацию в хирургическом отделении центра гастроэнтерологии г. Саратова. Контролем служили биоптаты нормальной слизистой желудка у 17 пациентов (10 мужчин и 7 женщин, средней возраст 52 года), которые проходили эндоскопическое исследование перед проведением хирургических манипуляций, связанных с удалением пупочной грыжи. В качестве контроля служили две группы пациентов (Таблица). Первая группа включала 133 пациента (87 мужчин и 46 женщин, средний возраст 48 лет) с кровоточащими хроническими язвами желудка (степень активности кровотечения Forrest II). Вторая группа контроля включала пациентов (n=37, средний возраст 57 лет) с аденокарциономой желудка. Диагноз был установлен по гистологическому исследованию биоптатов двумя специалистами морфологами.

Показано, что при хронических язвах увеличивается в 1,3 и 1,5 раза содержание оксида азота как в крови, так и в тканях желудка, в то время как уровень бета-аррестина-1 остается в пределах нормы. При развитии аденокарциономы желудка у пациентов, длительно наблюдающихся с диагнозом хронических язв органа и проходящих лечение после остановки острого язвенного кровотечения, наблюдается повышение продукции бета-аррестина-1 в тканях желудка в 2,1 раза, что также соответствует высокому его содержанию в крови (в 1,9 раза).

На основе проведенных данных было заключено, что определение в крови оксида азота и бета-аррестина-1 является дополнительным клиническим маркером риска развития аденокарциономы желудка в группе пациентов с хроническими язвами органа и имеющими случаи кровотечения из пептических язв. Так, при язвообразовании повышается содержание оксида азота в крови и тканях желудка до 0,44±0,07 мкг/мл и 0,48±0,02 мкг/мл без изменения концентрации бета-аррестина-1. Развитие аденокарциономы сопровождается параллельным увеличением продукции оксида азота 0,5 мкг/мл и бета-аррестина-1 0,5 нг/мл, что является маркером для проведения дополнительных диагностических мероприятий по прогнозированию заболевания.

Преимуществом предлагаемого метода является его проста в выполнении, безопасность для пациентов, точность и скорость в выполнении (в течение 60 мин), не требующего специального обучения и опыта врачей лаборантов. Определение бета-аррестина-1 проводится с помощью специфических антител, рассчитанных на 96 определений и имеющих длительный срок годности. Для определения бета-аррестина-1 иммуноферментным методом требуется стандартные аппаратные комплексы, широко распространенные в городских и районных клиниках. Определение оксида азота в крови и тканях желудка требует применение спектофотометра, входящий в комплекс оборудования любой клинической лаборатории, и стандартный недорогой набор реактивов. Предлагаемый способ прогнозирования риска развития аденокарциномы желудка при хроническом язвообразовании органа и обострении этих процессов имеет также преимущества в том, что позволяет проводить многократно уточняющие анализы по крови в силу высокой корреляции изменений бета-аррестина-1 и оксида азота в тканях желудка и крови и снимает необходимость травмирования органа при повторных биопсиях.

Способ прогнозирования риска развития аденокарциномы желудка, отличающийся тем, что проводят биохимическое определение содержания бета-аррестина-1 и оксида азота в крови; при концентрации в крови бета-аррестина-1 выше 0,5 нг/мл и оксида азота выше 0,5 мкг/мл делают вывод о риске развития аденокарциономы желудка.