Замещенные метил (2-{ 4-[3-(3-метансульфониламино-2-фтор-5-хлор-фенил)-1н-пиразол-4-ил]пиримидин-2-иламино} -этил)карбаматы, способ их получения и применения

Замещенные метил (2-{ 4-[3-(3-метансульфониламино-2-фтор-5-хлор-фенил)-1н-пиразол-4-ил]пиримидин-2-иламино} -этил)карбаматы, способ их получения и применения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Настоящее изобретение относится к замещенным метил (2-{4-[3-(3-метансульфониламино-2-фтор-5-хлор-фенил)-1Н-пиразол-4-ил]-пиримидин-2-иламино}-этил)карбаматам, их фармацевтически приемлемым солям, сольватам и гидратам, которые могут быть полезны при лечении или профилактике заболевания или медицинского состояния, обусловленных мутацией и гиперактивацией BRAF киназы. Такие соединения и их соли, сольваты и гидраты, обладающие способностью ингибировать BRAF, могут быть пригодны для лечения или профилактики ряда различных видов рака, в частности меланомы. Изобретение также относится к фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения и их соли, сольваты и гидраты, полиморфные формы этих соединений и их солей, к способам их получения и к способам лечения заболеваний, обусловленных различными мутациями и гиперактивацией BRAF, с помощью указанных соединений и их солей, в том числе с использованием адъювантной (дополнительной) терапии рака.

Ингибиторы BRAF киназ делят на 2 типа по тому, с какой конформацией фермента они связываются. Ингибиторы 2-го типа (Сорафениб, RAF265) мутантных форм BRAF не показали клинической эффективности: в дозах, необходимых для ингибирования МАРK сигнального пути, наблюдалась существенная токсичность из-за неспецифичности ингибирования киназ. Ингибиторы 1-го типа связываются с активной конформацией киназ и ингибируют BRAF, и MAPK активность в дозах существенно ниже МПД. В настоящее время 3 таких препарата используются в клинической практике или проходят завершающие стадии клинических исследований: Вемурафениб (Vemurafenib), Дабрафениб (Dabrafenib) и Энкорафениб (Encorafenib) (LGX818).

До сих пор остается потребность в синтетически более доступных соединениях, которые являются ингибиторами BRAF киназ первого типа ввиду выявленного развития резистентности к известным препаратам.

Заявители неожиданно обнаружили, что новые замещенные метил (2-{4-[3-(3-метансульфониламино-2-фтор-5-хлор-фенил)-1Н-пиразол-4-ил]-пиримидин-2-иламино}-этил)карбаматы имеют высокую эффективность в ингибировании BRAF киназы.

Новые соединения могут быть особенно полезными в лечении болезненных состояний, связанных с гиперактивацией BRAF киназы, например, в лечении рака.

Ниже приведены определения терминов, которые использованы в описании этого изобретения.

«Активный компонент» (лекарственное вещество, лекарственная субстанция, drug-substance) означает физиологически активное вещество синтетического или иного (биотехнологического, растительного, животного, микробного и прочего) происхождения, обладающее фармакологической активностью и являющееся активным началом фармацевтической композиции, используемой для производства и изготовления лекарственного препарата (средства).

«Алкил» означает алифатическую углеводородную линейную или разветвленную группу с 1-12 атомами углерода в цепи. Разветвленная означает, что алкильная цепь имеет один или несколько «низших алкильных» (С₁-С₆)алкильных заместителей. Предпочтительными алкильными группами являются (С₁-С₆)алкил, еще более предпочтительными (С₁-С₃)алкил, метил, этил, н-пропил, изопропил, н-бутил, изобутил, втор-бутил, трет-бутил, циклопропилметил, циклобутилметил, циклопентилметил, н-пентил, 2-пентил, 3-пентил, неопентил, н-гексил, циклогексил. Алкил может иметь заместители.

«Аминогруппа» означает R₁R₂N- группу, замещенную или незамещенную необязательно одинаковыми заместителями R₁ и R₂. Аминогруппа может иметь заместители.

«Арил» означает ароматическую моноциклическую или полициклическую систему, включающую от 6 до 14 атомов углерода, преимущественно от 6 до 10 атомов углерода. Арил может содержать один или более «заместителей циклической системы», которые могут быть одинаковыми или разными.

«Галоген» означает фтор, хлор, бром и йод. Предпочтительными являются фтор, хлор и бром.

«Гетероцикл» означает ароматическую или неароматическую насыщенную или частично насыщенную моноциклическую или полициклическую систему, включающую от 3 до 10 атомов углерода, преимущественно от 3 до 6 атомов углерода, в которой один или несколько атомов углерода заменены на гетероатом, такой как азот, кислород, сера, фосфор. Приставка «аза», «окса» или «тиа» перед гетероциклилом означает наличие в циклической системе атома азота, атома кислорода или атома серы соответственно. Гетероциклил может иметь один или несколько заместителей, которые могут быть одинаковыми или разными. Атомы азота и серы, находящиеся в гетероциклиле, могут быть окислены до N-оксида, S-оксида или S-диоксида. Представителями гетероциклилов являются пиперидинил, пирролидинил, пиперазинил, морфолинил, тиоморфолинил, тиазолидинил, 1,4-диоксан-2-ил, тетрагидрофурил, тетрагидротиенил, пиримидинил, пиразолил, оксетанил, тетрагидропиранил и др.

«Замещенная оксикарбонильная группа» (оксикарбонил) означает R-O-C(=O)-группу, в которой заместитель R может быть представлен необязательно замещенными алкилом, циклоалкилом, арилом и гетероциклилом, значение которых определено в данном разделе. Предпочтительными оксикарбонильными группами являются метоксикарбонил, этоксикарбонил, трет-бутилоксикарбонил и бензилоксикарбонил.

«Лекарственное средство (препарат)» - вещество (или смесь веществ в виде фармацевтической композиции) в виде таблеток, капсул, инъекций, мазей и других готовых форм, предназначенное для восстановления, исправления или изменения физиологических функций у человека и животных, а также для лечения и профилактики болезней, диагностики, анестезии, контрацепции, косметологии и прочего.

«Сульфонил» означает R-SO₂- группу, в которой заместитель R может быть представлен необязательно замещенными С₁-С₅алкилом, С₁-С₅циклоалкилом, необязательно замещенным арилом, необязательно замещенным гетероциклилом или аминогруппой R'R''N, значение которых определено в данном разделе.

«Фармацевтическая композиция» обозначает композицию, включающую в себя соединение формулы 1 и, по крайней мере, один из компонентов, выбранных из группы, состоящей из фармацевтически приемлемых и фармакологически совместимых наполнителей, растворителей, разбавителей, носителей, вспомогательных, распределяющих и воспринимающих средств, средств доставки, таких как консерванты, стабилизаторы, наполнители, измельчители, увлажнители, эмульгаторы, суспендирующие агенты, загустители, подсластители, отдушки, ароматизаторы, антибактериальные агенты, фунгициды, лубриканты, регуляторы пролонгированной доставки, выбор и соотношение которых зависит от природы и способа назначения и дозировки. Примерами суспендирующих агентов являются этоксилированный изостеариловый спирт, полиоксиэтилен, сорбитол и сорбитовый эфир, микрокристаллическая целлюлоза, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар и трагакант, а также смеси этих веществ. Защита от действия микроорганизмов может быть обеспечена с помощью разнообразных антибактериальных и противогрибковых агентов, например, таких как, парабены, хлорбутанол, сорбиновая кислота и подобные им соединения. Композиция может включать также изотонические агенты, например сахара, хлористый натрий и им подобные. Пролонгированное действие композиции может быть обеспечено с помощью агентов, замедляющих абсорбцию активного начала, например моностеарат алюминия и желатин. Примерами подходящих носителей, растворителей, разбавителей и средств доставки являются вода, этанол, полиспирты, а также их смеси, растительные масла (такие, как оливковое масло) и инъекционные органические сложные эфиры (такие, как этилолеат). Примерами наполнителей являются лактоза, молочный сахар, цитрат натрия, карбонат кальция, фосфат кальция и им подобные. Примерами измельчителей и распределяющих средств являются крахмал, альгиновая кислота и ее соли, силикаты. Примерами лубрикантов являются стеарат магния, лаурилсульфат натрия, тальк, а также полиэтиленгликоль с высоким молекулярным весом. Фармацевтическая композиция для перорального, сублингвального, трансдермального, внутримышечного, внутривенного, подкожного, местного или ректального введения активного начала, одного или в комбинации с другим активным началом, может быть введена животным и людям в стандартной форме введения в виде смеси с традиционными фармацевтическими носителями. Пригодные стандартные формы введения включают пероральные формы, такие как таблетки, желатиновые капсулы, пилюли, порошки, гранулы, жевательные резинки и пероральные растворы или суспензии, сублингвальные и трансбуккальные формы введения, аэрозоли, имплантаты, местные, трансдермальные, такие как мази и кремы, подкожные, внутримышечные, внутривенные, интраназальные или внутриглазные формы введения и ректальные формы введения.

«Фармацевтически приемлемая соль» означает относительно нетоксичные органические и неорганические соли кислот и оснований, заявленных в настоящем изобретении. Эти соли могут быть получены in situ в процессе синтеза, выделения или очистки соединений или приготовлены специально. В частности, соли оснований могут быть получены специально, исходя из очищенного свободного основания заявленного соединения и подходящей органической или неорганической кислоты. Примерами полученных таким образом солей являются гидрохлориды, гидробромиды, сульфаты, бисульфаты, фосфаты, нитраты, ацетаты, оксалаты, валериаты, олеаты, пальмитаты, стеараты, лаураты, бораты, бензоаты, лактаты, тозилаты, цитраты, малеаты, фумараты, сукцинаты, тартраты, мезилаты, малонаты, салицилаты, пропионаты, этансульфонаты, бензолсульфонаты, сульфаматы и им подобные (Подробное описание свойств таких солей дано в Berge S.M., et al., "Pharmaceutical Salts" J. Pharm. Sci. 1977, 66: 1-19). Соли заявленных кислот также могут быть специально получены реакцией очищенной кислоты с подходящим основанием, при этом могут быть синтезированы соли металлов и аминов. К металлическим относятся соли натрия, калия, кальция, бария, цинка, магния, лития и алюминия, наиболее желательными из которых являются соли натрия и калия. Подходящими неорганическими основаниями, из которых могут быть получены соли металлов, являются гидроксид, карбонат, бикарбонат и гидрид натрия, гидроксид и бикарбонат калия, поташ, гидроксид лития, гидроксид кальция, гидроксид магния, гидроксид цинка. В качестве органических оснований, из которых могут быть получены соли заявленных кислот, выбраны амины и аминокислоты, обладающие достаточной основностью, чтобы образовать устойчивую соль, и пригодные для использования в медицинских целях (в частности, они должны обладать низкой токсичностью). К таким аминам относятся аммиак, метиламин, диметиламин, триметиламин, этиламин, диэтиламин, триэтиламин, бензиламин, дибензиламин, дициклогексиламин, пиперазин, этилпиперидин, трис(гидроксиметил)аминометан и подобные им. Кроме того, для солеобразования могут быть использованы гидроокиси тетраалкиламмония, например, такие как холин, тетраметиламмоний, тетраэтиламмоний и им подобные. В качестве аминокислот могут быть использованы основные аминокислоты - лизин, орнитин и аргинин.

«Циклоалкил» означает неароматическую моно- или полициклическую систему, включающую от 3 до 10 атомов углерода. Циклоалкил может иметь один или несколько «заместителей циклической системы», которые могут быть одинаковыми или разными. Представителями циклоалкильных групп являются циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, декалин, норборнил, адамант-1-ил и т.п. Циклоалкил может быть аннелирован с ароматическим циклом или гетероциклом. Предпочтительными «заместителями циклической системы» являются алкил, аралкокси, гидрокси или R_k^aR_k+1^aN, значение которых определено в данном разделе.

Цель настоящего изобретения заключается в создании новых синтетически доступных и эффективных модуляторов BRAF для лечения рака.

Поставленная цель достигается новыми замещенными метил (2-{4-[3-(3-метансульфониламино-2-фтор-5-хлор-фенил)-1Н-пиразол-4-ил]-пиримидин-2-иламино}-этил)карбаматами общей формулы 1, их энантиомерами, полиморфными формами, фармацевтически приемлемыми солями, сольватами и гидратами

где:

R¹ представляет собой С₁-С₄алкил, циклопропил, циклобутил, 3-оксетанил;

R² и R³ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют необязательно замещенный С₃-С₆циклоалкил, один из атомов которого может быть заменен на атом кислорода, группу NH или NCH₃.

Более предпочтительными являются ингибиторы BRAF общей формулы 1, выбранные из:

Метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамата (1.1),

Метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклобутил]карбамата (1.2),

Метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопентил]карбамата (1.3),

Метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклогексил]карбамата (1.4),

Метил [3-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)оксетан-3-ил]карбамата (1.5),

Метил [4-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)тетрагидро-2Н-пиран-4-ил]карбамата (1.6),

Метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-метил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамата (1.7),

Метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-этил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамата (1.8),

Метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изобутил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамата (1.9),

Метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-оксетан-3-ил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамата (1.10),

Метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-оксетан-3-ил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклобутил]карбамата (1.11),

Метил [3-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-оксетан-3-ил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)оксетан-3-ил]карбамата (1.12)

или их полиморфных форм, фармацевтически приемлемых солей, сольватов и гидратов

Примеры фармацевтически приемлемых солей включают, но не ограничиваются ими, соли минеральных или органических кислот соединений формулы 1, таких как карбоновых кислот, например, дихлоруксусной кислоты, а также соли хлористого водорода, фосфорной кислоты или сульфокислоты. Фармацевтически приемлемые соли по настоящему изобретению включают обычные нетоксичные соли исходного соединения, образованные, например, из нетоксичных неорганических или органических кислот. Фармацевтически приемлемые соли по настоящему изобретению могут быть синтезированы из исходного соединения, которое содержит основную или кислотную группу, обычными химическими способами. Как правило, такие соли могут быть получены взаимодействием свободных кислотных и основных форм соединений общей формулы 1 со стехиометрическим количеством соответствующего основания или кислоты в воде или в органическом растворителе или в смеси двух растворителей. Как правило, предпочтительны неводные среды, такие как эфир, этилацетат, этанол, изопропанол, ацетон или ацетонитрил (ACN). Списки подходящих солей можно найти в справочнике фармацевтических солей [Р.Н. Stahl, C.G. Wermuth (Eds.). Handbook of Pharmaceutical Salts, Properties, Selection, and Use. VHCA, Verlag Helvetica Chimica Acta, Zürich, Switzerland, and Wiley-VCH, Weinheim, Germany. 2002.].

Соединения общей формулы 1 и их фармацевтически приемлемые соли могут существовать в сольватированных и несольватированных формах. Например, в виде гидрата. Настоящее изобретение охватывает все такие сольватированные и несольватированные формы.

Неожиданно соединения общей формулы 1 и их фармацевтически приемлемые соли в сопоставимых условиях имеют более высокую ингибирующую активность по отношению к BRAF и более высокую селективность (ЕС₅₀^RAF1/EC₅₀^{BRAF V599E}) по сравнению с наиболее продвинутым в клинике ингибитором Encorafenib [http://adisinsight.springer.com/drugs/800035043]. Так, например, по сравнению с Encorafenib новый ингибитор метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамат (1.1) показал более высокую активность по отношению к BRAF, сравнимую активность по отношению к BRAF V599E и более высокую селективность.

Соединения общей формулы 1 могут быть синтезированы по схеме 1, включающей взаимодействие соединения общей формулы 2 с амином 3 в присутствии основания, последующую реакцию соединения 4 с соответствующим арилбороновым эфиром в присутствии палладиевого катализатора, последующее удаление трет-бутилоксикарбонильной защитной группы у соединения 5 и взаимодействие образующихся аминов 6 с мезилхлоридом в присуствии основания.

Схема 1

где: R¹, R² и R³ имеют вышеуказанные значения.

Предметом данного изобретения являются также соединения общей формулы 4

где:

R¹, R² и R³ имеют вышеуказанные значения, a Hal представляет собой галоген, выбранный из Cl, Br или I.

Как видно из схемы 1, соединения общей формулы 1 и их промежуточные продукты 3-6 не содержат оптически активных атомов углерода, что исключает образование оптических изомеров и необходимость их разделения и очистки. Это значительно упрощает синтез и очистку целевых продуктов 1 и 4 и делает их более доступными.

Предметом данного изобретения является противораковый ингредиент для приготовления фармацевтических композиций и лекарственных форм, представляющий собой соединение общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, как определено выше.

Предметом данного изобретения является также фармацевтическая композиция, которая включает соединение общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемую соль, сольват, гидрат, как определено выше, в сочетании с фармацевтически приемлемым разбавителем или носителем.

Композиции по изобретению могут быть в форме, подходящей для перорального применения (например, в виде таблеток, пластинок, твердых или мягких капсул, водных или масляных суспензий, эмульсий, диспергируемых порошков или гранул, сиропов или эликсиров), для местного применения (например, в виде кремов, мазей, гелей или водных или масляных растворов или суспензий), для введения путем ингаляции (например, в виде тонкоизмельченного порошка или жидкого аэрозоля), для введения путем инсуффляции (например, в виде тонкоизмельченного порошка) или для парентерального введения (например, в виде стерильного водного или масляного раствора для внутривенного, подкожного или внутримышечного введения дозы или в виде суппозиториев для ректального введения дозы).

Композиции по изобретению могут быть получены обычными способами с использованием обычных фармацевтических наполнителей, хорошо известных в данной области. Таким образом, композиции, предназначенные для перорального применения, могут содержать, например, один или несколько окрашивающих, подслащивающих, вкусовых агентов и/или консервантов.

Соединение общей формулы 1 обычно вводят пациенту в единичной дозе в диапазоне 5-5000 мг/м² площади тела, то есть примерно 0,1-100 мг/кг, и это обычно обеспечивает терапевтически эффективная доза. Форма единичной дозы, такая как таблетка или капсула, обычно содержит, например, 1-250 мг активного ингредиента. Суточная доза обязательно будет варьироваться в зависимости от пациента, конкретного пути введения и тяжести заболевания, которое лечат. Соответственно, доктор, который лечит конкретного пациента, может определить оптимальную дозу.

Соединения общей формулы 1 и их фармацевтически приемлемые соли, ингибирующие активность киназы BRAF, как ожидается, будут полезны при лечении заболеваний или медицинских состояний, обусловленных полностью или частично повышенной активностью и мутациями BRAF, например рака. Типы рака, которые могут быть восприимчивы к лечению с использованием соединения общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемой соли, включают, но не ограничиваются ими, меланому, рак прямой кишки, рак легких, рак щитовидной железы.

Метод лечения указанных здесь типов рака заключается во введении соединения формулы 1 млекопитающему, более предпочтительно человеку.

Аналогично использование соединения общей формулы 1 для лечения указанных здесь типов рака предполагает введение соединения общей формулы 1 млекопитающему, более предпочтительно человеку.

Предметом данного изобретения является также применение соединения общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата или сольвата в качестве лекарственного средства.

Предметом данного изобретения является также применение соединения общей формулы 1, как определено выше, или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата или сольвата для лечения заболевания, обусловленного гиперактивацией и мутацией BRAF киназы, например, для лечения рака, в том числе адъювантного лечения рака.

Предметом данного изобретения является также использование соединения общей формулы 1, как определено выше, или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата или сольвата, для изготовления лекарственного средства для лечения заболевания, обусловленного гиперактивацией и мутацией BRAF киназы, например, для лечения рака.

Предметом данного изобретения является также использование соединения общей формулы 1, как определено выше, или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата или сольвата для лечения рака.

Предметом данного изобретения является также способ получения противоракового эффекта у теплокровного животного, такого как человек, нуждающегося в таком лечении, который включает введение ему эффективного количества соединения общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата или сольвата.

В любом из аспектов или вариантов, упомянутых здесь, указанный рак может быть выбран из меланомы, рака прямой кишки, рака легких, рака щитовидной железы.

Описанное выше лечение рака может быть как единственная терапия или может включать в дополнение к соединению общей формулы 1 по настоящему изобретению адъювантную терапию: обычную хирургию или лучевую терапию или химиотерапию или иммунотерапию. Химиотерапия может использоваться одновременно, последовательно или раздельно с лечением соединением общей формулы 1 по изобретению и может включать один или более противоопухолевых агентов, в том числе: антипролиферативные/противоопухолевые препараты и их комбинации, используемые в медицинской онкологии, такие как алкилирующие агенты, антиметаболиты, противоопухолевые антибиотики, антимитотические агенты и ингибиторы топоизомеразы; цитостатические агенты, такие как антиэстрогены, антиандрогены, антагонисты или агонисты LHRH, ингибиторы ароматазы и ингибиторы 5а-редуктазы; ингибиторы функции фактора роста и др. препараты.

Таким образом, предметом настоящего изобретения является фармацевтическая композиция, включающая соединение общей формулы 1, как определено выше, или его фармацевтически приемлемую соль, гидрат или сольват и дополнительное противоопухолевое вещество для совместного лечения рака в виде таблеток, капсул или инъекций. Здесь термин "совместное лечение" используют по отношению к комбинированной терапии, следует понимать, что это может относиться к одновременному, раздельному или последовательному введению препаратов.

Таким образом, в одном из вариантов осуществления изобретения предлагается использование соединения общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата или сольвата и дополнительно противоопухолевого вещества для совместного лечения рака.

Предметом настоящего изобретения является способ получения противоракового эффекта у теплокровного животного, такого как человек, который нуждается в таком лечении, который включает введение указанному млекопитающему соединения общей формулы 1 или его фармацевтически приемлемой соли, гидрата или сольвата и одновременно, раздельно или последовательно введение дополнительного противоопухолевого вещества указанному млекопитающему.

Изобретение поясняется чертежами

Фиг. 1. Ингибирующая активность по отношению к BRAF и селективность нового ингибитора 1.1.

Фиг. 2. Ингибирующая активность по отношению к BRAF и селективность препарата Энкорафениб (Encorafenib).

Ниже изобретение иллюстрируется с помощью конкретных примеров. Следующие примеры представлены с целью иллюстрации и не предназначены для ограничения изобретения каким-либо образом. Специалисты в данной области техники легко поймут различные некритические параметры, которые могут быть изменены или модифицированы, чтобы получить те же результаты.

Пример 1. Метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамат (1.1) получают по схеме 1.

Перемешивают при 90°С в течение 16 ч 0.258 г (0.74 ммоль) 2-хлор-4-(3-иод-1-изопропил-1H-пиразол-4-ил)пиримидина 2, 0.16 г (1.11 ммоль) метил [1-(аминометил)циклопропил]-карбамата (3.1, ¹Н NMR (400 MHz, DMSO-d₆): δ 0.53 (m, 2Н), 0.61 (m, 2Н), 2.55 (m, 2Н), 3.48 (s, 3Н), 7.35 (br s, 1H)) и 0.353 г (3.33 ммоль) карбоната натрия в 10 мл диметилсульфоксида.

Реакционную массу охлаждают, разбавляют 50 мл этилацетата и дважды экстрагируют водой по 50 мл. Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают фильтрат в вакууме. Получают 0.22 г (65%) метил [1-({[4-(3-иод-1-изопропил-1H-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамата (4, LC-MS m/z 457 (М+Н)), который используют в следующей стадии без дополнительной очистки.

В колбу помещают трет-бутил [5-хлор-2-фтор-3-(4,4,5,5-тетраметил-1,3,2-диоксаборолан-2-ил)фенил]карбамат (0.573 г, 1.54 ммоль) в виде раствора в 20 мл толуола и метил [1-({[4-(3-иод-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамат (4, 220 мг, 0.48 ммоль). К полученной смеси при перемешивании добавляют раствор карбоната натрия (0.192 г, 1.82 ммоль) в 5 мл воды. Содержимое колбы промывают аргоном и добавляют PdCl₂(dppf) (19 мг, 0.029 ммоль), после чего реакционную массу перемешивают при кипении в течение 4 часов. Реакционную смесь охлаждают, разбавляют 20 мл этилацетата и дважды промывают водой по 20 мл. Органический слой сушат над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают фильтрат в вакууме. Остаток после упаривания очищают хроматографически на колонке с силикагелем, используя в качестве элюента смесь хлороформ : метанол = 39:1. Получают 66 мг (24%) метил[1-({[4-(3-{3-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-5-хлор-2-фторфенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамата (5, LC-MS m/z 575 (М+Н)), который используют в следующей стадии без дополнительной очистки.

Перемешивают при комнатной температуре в течение 16 часов раствор метил[1-({[4-(3-{3-[(трет-бутоксикарбонил)амино]-5-хлор-2-фторфенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамата (5, 66 мг, 0.11 ммоль) в дихлорметане (2 мл) и трифторуксусной кислоте (2 мл). После завершения реакции растворители отгоняют в вакууме и остаток обрабатывают раствором бикарбоната натрия (20 мл). Полученную суспензию дважды экстрагируют по 10 мл дихлорметана. Органические экстракты объединяют, сушат над сульфатом натрия, фильтруют и упаривают фильтрат в вакууме. Получают 55 мг (100%) метил {1-[({4-[3-(3-амино-5-хлор-2-фторфенил)-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил]пиримидин-2-ил}амино)метил]циклопропил}карбамата (6, LC-MS m/z 475 (М+Н)), который используют в следующей стадии без дополнительной очистки.

При комнатной температуре и перемешивании к раствору метил {1-[({4-[3-(3-амино-5-хлор-2-фторфенил)-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил]пиримидин-2-ил}амино)метил]циклопропил}карбамата (6, 55 мг, 0.11 ммоль) и триэтиламина (56 мг, 0.55 ммоль) в дихлорметане (3 мл) добавляют по каплям мезилхлорид (31 мг, 0.28 ммоль) и затем продолжают перемешивание при комнатной температуре в течение 16 часов. По завершении реакции реакционную массу экстрагируют 5 мл воды, органическую фазу отделяют и концентрируют в вакууме. Осадок после отгонки растворителя растворяют в тетрагидрофуране (10 мл) и обрабатывают гидроксидом натрия (44 мг, 1.1 ммоль) в 1 мл воды при комнатной температуре и энергичном перемешивании в течение 5 часов. Нейтрализуют реакционную массу разбавленной хлористоводородной кислотой до кислой реакции и дважды экстрагируют этилацетатом по 10 мл. Объединенные экстракты сушат над сульфатом натрия, фильтруют и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток после упаривания очищают хроматографически на колонке с силикагелем, используя в качестве элюента смесь дихлорметан : метанол = 19:1. Получают 19 мг (31%) метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамата (1.1, LC-MS m/z 553 (М+Н)).

Аналогично получают метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]-фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклобутил]карбамат (1.2, LC-MS m/z 567 (М+Н))), используя на первой стадии схемы 1 метил [1-(аминометил)циклобутил]карбамат вместо метил [1-(аминометил)циклопропил]-карбамата (3.2), метил [3-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)оксетан-3-ил]карбамат (1.5, LC-MS m/z 569 (М+Н)), используя на первой стадии метил [1-(аминометил)оксетан-3-ил]карбамат вместо метил [1-(аминометил)циклопропил]карбамата (3.3) и другие продукты общей формулы 1.

Пример 2. Анализ активности соединений общей формулы 1 по отношению к киназам BRAF, BRAF V599E и cRAF[Y340D][Y341D].

Вещества испытывали на ингибирующую активность киназ BRAF, BRAF V599E и cRAF[Y340D][Y341D] (Invitrogen, кат. номера PV3848, PV3849 и PV3805, соответственно) в соответствии со скрининговой платформой LanthaScreen™ Eu kinase binding assay (Invitrogen). Концентрация ДМСО в реакционной смеси составляла 1%. В киназном буфере (50 мМ HEPES рН 6.5, 0.01% BRIJ-35, 10 мМ MgCl₂, 1 мМ EGTA) приготовили 2-кратный раствор 4нМ LanthaScreen™Eu-anti-GST антитела (Invitrogen, кат. номер PV5594). Необходимую аликвоту отобрали для использования в качестве отрицательного контроля (отсутствие связывания киназы с субстратом). Оставшийся объем делили на три части, в каждую из которых добавляли соответствующую киназу до 10 нМ. По 7.5 мкл 2-кратной смеси Антитело/Киназа (из расчета 2 нМ LanthaScreen™Eu-anti-GST и по 5 нМ киназ в финальной реакционной смеси) добавляли в 384-луночные планшеты (белые, малого объема, производство Corning, кат. #3674). В 36 мкл киназного буфера были разбавлены в 10 раз 4 мкл 100-кратных стоков исследуемых веществ в 100% ДМСО и затем 1.5 мкл разбавленных веществ добавляли к смеси Антитело/Киназа (в лунках положительного контроля использовали ДМСО вместо раствора веществ в ДМСО). Вещества преинкубировали с киназами в течение 10 мин при комнатной температуре. После этого добавляли 6 мкл 2.5-кратного раствора киназного трейсера 178 (Invitrogen, кат. номер PV5593) (из расчета 20 нМ в финальной реакционной смеси для BRAF и BRAF V599E и 10 нМ для RAF1[Y340D][Y341D]). После 30 секундного перемешивания реакционной смеси на шейкере плашки инкубировали в течение 60 мин при комнатной температуре в темноте. Измеряли флуоресценцию при возбуждении длиной волны 340 нм и эмиссии при 665 и 615 нм. Степень связывания киназы с трейсером оценивается по отношению сигналов эмиссий при 665 нм к 615 нм (чем выше ингибирование связывания, тем ниже отношение эмиссий).

Пример 3. Получение лекарственного средства в виде таблеток.

Спрессовывали смесь 1600 мг крахмала, 1600 мг измельченной лактозы, 400 мг талька и 1000 мг ингибитора 1.1. Полученный брусок измельчали в гранулы и просеивали через сито, собирая гранулы размером 14-16 меш. Полученные гранулы таблетировали в таблетки пригодных форм, весом 500 мг каждая.

Пример 4. Получение лекарственного средства в форме капсул.

Ингибитор 1.1 тщательно смешивали с порошком лактозы в соотношении 2:1. Полученную порошкообразную смесь упаковывали по 600 мг в желатиновые капсулы подходящего размера.

Пример 5. Получение лекарственного средства в виде композиций для внутримышечных, внутрибрюшинных или подкожных инъекций.

Смешали 500 мг ингибитора 1.1, 300 мг хлорбутанола, 2 мл пропиленгликоля и 100 мл инъекционной воды. Раствор фильтровали и помещали в 1 мл ампулы и укупоривали.

Специалисты в данной области техники легко поймут различные некритические параметры, которые могут быть изменены или модифицированы, чтобы получить те же результаты. Различные модификации изобретения в дополнение к описанным здесь станут очевидными специалистам в данной области техники из приведенного выше описания.

1. Метил (2-{4-[3-(3-метансульфониламино-2-фтор-5-хлор-фенил)-1Н-пиразол-4-ил]-пиримидин-2-иламино}-этил)карбаматы общей формулы 1 и их фармацевтически приемлемые соли

где

R¹ представляет собой C₁-С₄алкил, 3-оксетанил;

R² и R³ вместе с атомом углерода, к которому они присоединены, образуют С₃-С₆циклоалкил, один из атомов которого может быть заменен на атом кислорода.

2. Соединения по п. 1, выбранные из

метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамата (1.1),

метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклобутил]карбамата (1.2),

метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопентил]карбамата (1.3),

метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклогексил]карбамата (1.4),

метил [3-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)оксетан-3-ил]карбамата (1.5),

метил [4-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изопропил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)тетрагидро-2Н-пиран-4-ил]карбамата (1.6),

метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-метил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамата (1.7),

метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-этил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамата (1.8),

метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-изобутил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамата (1.9),

метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-оксетан-3-ил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклопропил]карбамата (1.10),

метил [1-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-оксетан-3-ил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)циклобутил]карбамата (1.11),

метил [3-({[4-(3-{5-хлор-2-фтор-3-[(метилсульфонил)амино]фенил}-1-оксетан-3-ил-1Н-пиразол-4-ил)пиримидин-2-ил]амино}метил)оксетан-3-ил]карбамата (1.12)

или их фармацевтически приемлемых солей.

3. Противораковый ингредиент, обладающий свойствами ингибитора BRAF-киназы, представляющий собой соединение по п. 1 или 2 для приготовления фармацевтической композиции и/или лекарственного препарата.

4. Фармацевтическая композиция, содержащая противораковый ингредиент по п. 3 в терапевтически эффективном количестве.

5. Фармацевтическая композиция по п. 4 для использования в виде таблеток, капсул или инъекций, помещенных в фармацевтически приемлемую упаковку.

6. Лекарственное средство, представляющее собой соединение по п. 1 или 2, обладающее противораковой активностью, опосредованной BRAF-киназой.

7. Способ профилактики и/или лечения рака, включающий введение эффективного количества соединения по пп. 1 и/или 2.

8. Способ профилактики и/или лечения рака, включающий введение эффективного количества противоракового ингредиента по п. 3 или фармацевтической композиции по п. 4.

9. Способ по п. 7 или 8, включающий профилактику и/или лечение злокачественных меланом.

10. Спосо