Антитело против ксф-1r

Антитело против ксф-1r

Иллюстрации

Показать все

Реферат

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Эта заявка является частичным продолжением Заявки США №12/922,441, поданной 13 сентября 2010 г., которая является заявкой США в национальной фазе на основании заявки PCT/EP2009/001733, поданной 11 марта 2009 г., которая заявляет приоритет Европейской заявки №08360005.6, поданной 14 марта 2008 г., и приоритет предварительной заявки США №61/043,884, поданной 10 апреля 2008 г.

Список последовательностей

Настоящая заявка содержит Список последовательностей, представленный через EFS-Web и включенный в это описание путем ссылки в полном объеме. Указанная ASCII-копия, созданная 30 марта 2011 г., имеет название 13026944.txt и размер 56764 байт.

Описание

КСФ-1 (Колониестимулирующий фактор-1) является цитокином, который, в частности, экспрессируется различными типами клеток. Он является фактором дифференциации, роста и выживания для клеток линии мононуклеарных фагоцитов, которые экспрессируют рецептор для КСФ-1 (КСФ-1R) (SHERR. Colony-stimulating factor-1 receptor, blood. 1990, т.75, №1, стр.1-12). КСФ-1R является рецептором тирозинкиназы, который кодируется протоонкогеном c-fms, который содержит внутриклеточный домен киназы и лиганд-связывающий внеклеточный участок, организованный в пять иммуноглобулиноподобных субдоменов. Реакция на КСФ-1 ведет к увеличению выживаемости, роста, дифференциации и обратимых изменений в функциях. Сам ген c-fms является маркером дифференциации макрофагов. Степень экспрессии c-fms выше по сравнению с другими специфическими к макрофагам генами, включая лизоцим и специфический к макрофагам белок тирозинфосфатазу (HUME, et al. Regulation of CSF-1 receptor expression. Molecular reproduction и development. 1997, т.46, №1, стр.46-52).

Помимо клеток линии мононуклеарных фагоцитов, КСФ-1R также экспрессируется многими типами опухолей человека. В случае рака молочной железы экспрессия КСФ-1R связана с большими размерами опухолей и сниженной выживаемостью (KLUGER, et al. Macrophage colony-stimulating factor-1 receptor expression is associated with poor outcome in breast cancer by large cohort tissue microarray analysis. Clinical cancer research. 2004, т.10, №1, стр.173-7; SCHOLL, et al. Anti-colony-stimulating factor-1 antibody staining in primary breast adenocarcinomas correlates with marked inflammatory cell infiltrates and prognosis. Journal of the National Cancer Institute. 1994, т.86, №2, стр.120-6). При эпителиальном раке яичников большинство первичных опухолей и метастазов сильно экспрессируют КСФ-1R, и метастазы часто коэкспрессируют КСФ-1 и КСФ-1R. КСФ-1R также экспрессируется макрофагами, которые инфильтруют в опухоли (CHAMBERS, et al. Overexpression of epithelial macrophage colony-stimulating factor (CSF-1) и CSF-1 receptor: a poor prognostic factor in epithelial ovarian cancer, contrasted with a protective effect of stromal CSF-1. Clinical Cancer Research. 1997, т.3, №6, стр.999-1007). При раке яичников и эндометрия нозерн-блоттинг показывает, что подавляющее большинство опухолей коэкспрессирует КСФ-1 и КСФ-1R, в то время, как экспрессия КСФ-1R лишь едва заметно обнаруживается в образцах нормальной ткани эндометрия (BAÏOCCHI, et al. Expression of the macrophage colony-stimulating factor и its receptor in gynecologic malignancies. Cancer. 1991, т.67, №4, стр.990-6). При карциноме шейки матки экспрессия КСФ-1R подвергается повышающей регуляции как в строме опухолей, так и в эпителии опухолей, по сравнению с нормальным эндометрием (KIRMA, et al. Elevated expression of the oncogene c-fms and its ligand, the macrophage colony-stimulating factor-1, in cervical cancer and the role of transforming growth factor-betal in inducing c-fms expression. Cancer res.. 2007, т.67, №5, стр.1918-26). При раке почек инфильтрация опухолево-ассоциированных макрофагов с высоким уровнем экспрессии КСФ-1R связана с прогрессированием опухоли (HEMMERLEIN, et al. Expression of acute и late-stage inflammatory antigens, c-fms, CSF-1, and human monocytic serine esterase 1, in tumor-associated macrophages of renal cell carcinomas. Cancer immunology, immunotherapy. 2000, т.49, №9, стр.485-92). КСФ-1R экспрессируется почти 100%-ми образцов внутриэпителиальной неоплазии предстательной железы или рака (IDE, et al. Expression of colony-stimulating factor 1 receptor during prostate development and prostate cancer progression. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.. 2002, т.99, №22, стр.14404-9). Экспрессия КСФ-1R также была обнаружена при остром миелобластном лейкозе и В-клеточном хроническом лимфоцитарном лейкозе (RAMBALDI, et al. Expression of the macrophage colony-stimulating factor and c-fms genes in human acute myeloblastic leukemia cells. Journal of Clinical Investigation. 1988, т.81, №4, стр.1030-5).

Работа, проведенная в области иммуногистохимии и in situ гибридизации, продемонстрировала специфичность экспрессии КСФ-1 в клетках инвазивного рака молочной железы, в то время, как подобное вырабатывание в клетках интраканальных или неинвазивных опухолей не наблюдалось (SCHOLL, et al. Anti-colony-stimulating factor-1 antibody staining in primary breast adenocarcinomas correlates with marked inflammatory cell infiltrates and prognosis. Journal of the National Cancer Institute. 1994, т.86, №2, стр.120-6; TANG, et al. M-CSF (monocyte colony stimulating factor) and M-CSF receptor expression by breast tumor cells: M-CSF mediated recruitment of tumor infiltrating monocytes? Journal of cellular biochemistry. 1992, т.50, №4, стр.350-6). Вырабатывание КСФ-1 клетками инвазивных опухолей коррелирует с увеличением его концентрации в плазме пациентов, где она может превышать 1000 пг/мл, по сравнению с показателем, меньшим, чем 300 пг/мл, у нормальных субъектов. Высокая концентрация в сыворотке коррелирует с запущенными стадиями болезни и неблагоприятным краткосрочным прогнозом (SCHOLL, et al. Circulating levels of colony-stimulating factor 1 as a prognostic indicator in 82 patients with epithelial ovarian cancer. British journal of cancer. 1994, т.69, №2, стр.342-6; SCHOLL. Circulating levels of the macrophage colony stimulating factor CSF-1 in primary и metastatic breast cancer patients. A pilot study. Breast cancer research and treatment. 1996, т.39, №3, стр.275-83). Кроме того, было продемонстрировано, что КСФ-1 стимулирует подвижность и инвазивность клеток опухолей (DORSCH, et al. Macrophage colony-stimulating factor gene transfer into tumor cells induces macrophage infiltration but not tumor suppression. European journal of immunology. 1993, т.23, №1, стр.186-90; WANG, et al. Induction of monocyte migration by recombinant macrophage colony-stimulating factor. Journal of immunology. 1988, т.141, №2, стр.575-9; FILDERMAN, et al. Macrophage colony-stimulating factor (CSF-1) enhances invasiveness in CSF-1 receptor-positive carcinoma cell lines. Cancer res.. 1992, т.52, №13, стр.3661-6).

КСФ-1 также имеет хемотаксическое влияние на предшественники миелоидной линии, что способствует инфильтрации моноцитов в опухоль. Однако присутствие этих моноцитов является недостаточным для наблюдения разрушения опухоли иммунной системой (DORSCH, et al. Macrophage colony-stimulating factor gene transfer into tumor cells induces macrophage infiltration but not tumor suppression. European journal of immunology. 1993, т.23, №1, стр.186-90). Обнаруживается, что при высоком содержании в сыворотке, которое обычно наблюдается у пациентов, страдающих от опухолей молочной железы, яичников или поджелудочной железы, КСФ-1 ориентирует дифференциацию этих моноцитов в макрофаги, а не в дендритные клетки, способные вырабатывать опухолевые антигены, и, следовательно, запускать эффективную цитотоксическую иммунную реакцию, направленную против клеток опухолей (SCHOLL. Circulating levels of the macrophage colony stimulating factor CSF-1 in primary и metastatic breast cancer patients. A pilot study. Breast cancer research and treatment. 1996, т.39, №3, стр.275-83; BARON, et al. Modulation of MHC class II transport and lysosome distribution by macrophage-colony stimulating factor in human dendritic cells derived from monocytes. Journal of cell science. 2001, т.114, ч. 5, стр.999-1010).

КСФ-1 также является существенным для пролиферации и дифференциации остеокластов (CECCHINI, et al. Role of CSF-1 in bone and bone marrow development. Molecular reproduction и development. 1997, т.46, №1, стр.75-83). Остеокласты являются многоядерными клетками, которые экспрессируют КСФ-1R из кроветворных клеток-посредников, которые в первую очередь отвечают за распад минерализированных костей во время развития, гомеостаза и восстановления костей. При различных нарушениях скелетных костей, таких, как остеопороз, гиперкальциемия или злокачественность, ревматоидный артрит, метастазы опухолей и болезнь Педжета, резорбция костей остеокластами превышает формирование костей остеобластами, что ведет к снижению костной массы, ломкости скелетных костей и переломов костей (BRUZZANITI, et al. Molecular regulation of osteoclast activity. Reviews in endocrine. 2006, т.7, №1-2, стр.123-39). Например, у пациентов с запущенным раком молочной железы часто развиваются метастазы в кости. Метастаз в кость ведет к хронической боли и высокому риску переломов из-за вызванной опухолью потери костной массы (остеолиза), которая вызывается повышенной активностью остеокластов (CICEK, et al. Breast cancer bone metastasis and current small therapeutics. Cancer metastasis reviews. 2006, т.25, №4, стр.635-44). Было продемонстрировано, что остеолиз связан с высоким уровнем циркулирующего КСФ-1 (KITAURA, et al. The journal of clinical investigation. M-CSF mediates TNF-induced inflammatory osteolysis. 2005, т.115, №12, стр.3418-27).

Путь КСФ-1 также является посредником кишечного воспаления при таких болезнях, как воспалительная болезнь кишечника (MARSHALL, et al. Blockade of colony stimulating factor-1 (CSF-I) leads to inhibition of DSS-induced colitis. Inflammatory bowel diseases. 2007, т.13, №2, стр.219-24), пролиферация макрофагов во время острого отторжения аллотрансплантатов (JOSE, et al. Blockade of macrophage colony-stimulating factor reduces macrophage proliferation and accumulation in renal allograft rejection. American journal of transplantation. 2003, т.3, №3, стр.294-300) и при репликации ВИЧ-1 в инфицированных макрофагах (KUTZA, et al. Macrophage colony-stimulating factor antagonists inhibit replication of HIV-1 in human macrophages. Journal of immunology. 2000, №164, стр.4955-4960).

Поэтому предлагается ингибирование активности КСФ-1 различными соединениями для лечения раки и распада костей.

Уровень техники

Документ WO 01/30381 касается применения ингибиторов активности КСФ-1 при производстве медикаментов для лечения опухолевых болезней. Два предложенных подхода к ингибированию активности КСФ-1 состоят в подавлении активности самого КСФ-1 и подавлении активности КСФ-1R. Нейтрализации антител против КСФ-1 или его рецептора отдают предпочтение для ингибирования активности КСФ-1.

В документе WO 03/059395 описываются комбинированные продукты, включающие вещество, способное ингибировать активность КСФ-1, и вещество, обладающее цитотоксической активностью, для лечения рака.

В документе WO 2005/068503 описывается способ профилактики и лечения остеолиза, метастазов рака и потери костной массы, связанной с метастазами рака, путем введения субъекту антитела против КСФ-1.

Документ EP 1488792 А касается применения соединений моно- и/или бициклического арил- или гетероарилхиназолина, которые демонстрируют избирательное ингибирование дифференциации, пролиферации или высвобождения медиатора путем эффективного ингибирования тирозинкиназной активности КСФ-1R. Эта заявка также касается применения таких соединений для производства медикамента для ингибирования избыточной пролиферации клеток.

Документ US 2005059113 касается антител и их антиген-связывающих частей, которые специфически связываются с аКСФ-1. Изобретение также касается человеческих антител против КСФ-1 и их антиген-связывающих частей. Описанное в этой заявке изобретение также обеспечивает способы генной терапии с применением молекул нуклеиновых кислот, которые кодируют молекулы тяжелого и/или легкого иммуноглобулина, которые включают человеческие антитела против КСФ-1.

В публикациях Roussel и Sherr, 1989, PNAS, 86, 7924-7927 и Ashmun et al., 1989, Blood, 73, 827-837, описываются моноклональные антитела к человеческому рецептору КСФ-1 (например, 12-3A3 и 2-4А5), которые специфически блокируют связывание КСФ-1 с человеческим рецептором, таким образом, ингибируя лиганд-зависимый рост. Распознанный эпитоп находился между позициями аминокислот 349-512.

Документ WO 2009/026303 предлагает антиген-связывающие белки, способные конкурировать с КСФ-1, и, следовательно, предотвращать связывание КСФ-1 с его рецептором и в некоторых вариантах осуществления ингибировать связывание между IL-34 и КСФ-1R. Кроме того, в экспериментальном разделе документа WO 2009/026303 указывается, что полученные авторами изобретения антитела являются связывающими эпитопами, которые находятся, главным образом, на N-конце между аминокислотами с 20 по 223 последовательности SEQ ID NO 29 (что соответствует Ig-подобной петле 1 и Ig-подобной петле 2 в WO 2009/026303) КСФ-1R и требуют присутствия участков Ig-подобной петли 1 и Ig-подобной петли 2.

Описание изобретения

Настоящее изобретение касается антитела, специфически связывающегося с КСФ-1R, более конкретно - с человеческим КСФ-1R.

По всему тексту заявки термины в форме единственного числа применяются в значении "как минимум один", "как минимум первый", "один или несколько" или "несколько" в отношении указанных компонентов или этапов, если контекстом не предусматривается иного. Например, термин "клетка" охватывает множество клеток, включая их смеси.

Термин "и/или" по всему тексту данного документа охватывает значения "и", "или" и "все или любая другая комбинация элементов, объединенных указанным термином".

Термин "около" или "приблизительно" в контексте данного описания означает в пределах 20%, в предпочтительном варианте - в пределах 10%, в более предпочтительном варианте - в пределах 5% от указанного значения или диапазона.

В контексте данного описания термины "включая" и "включать" означают, что наборы частей, продуктов, композиций и способов включают указанные компоненты или этапы, но не исключают других. Термин "состоит главным образом из…", применяемый для определения продуктов, композиций и способов, означает исключение других компонентов или этапов любого существенного значения. Таким образом, композиция, состоящая главным образом из указанных компонентов, не исключает микропримесей и фармацевтически приемлемых носителей. "Состоит из…" означает исключение других компонентов в количестве, выходящем за пределы микропримесей, или других этапов.

В контексте данного описания термин "специфически связывается с…" касается реакции связывания, являющейся определяющей для присутствия белка-мишени в присутствии гетерогенной популяции белков и других высокомолекулярных соединений. Таким образом, в указанных аналитических условиях антитело согласно изобретению предпочтительно связывается с как минимум частью КСФ-1R и не связывается в существенном количестве с другими компонентами, присутствующими в испытуемом образце. Специфическое связывание между антителом согласно изобретению и мишенью КСФ-1R означает, что аффинность связывания составляет как минимум 10³ М^-1, в предпочтительном варианте - 10⁵ М^-1, 10⁶ М^-1, 10⁷ М^-1, 10⁸ М^-1, 10⁹ М^-1 или 10¹⁰ М^-1. В особенно предпочтительном варианте осуществления аффинность связывания составляет как минимум 10⁹ М^-1 или 10¹⁰ М^-1.

В контексте данного описания термин "КСФ-1R" касается человеческого рецептора КСФ1. Человеческий рецептор КСФ-1 был секвенован, и его аминокислотная последовательность показана у SEQ ID NO: 29.

В контексте данного описания термин "антитело" или "Ab" употребляется в самом широком значении. Таким образом, "антитело" или "Ab" может быть естественным или искусственным, таким, как моноклональные антитела (mAbs), полученные с применением традиционных гибридомных технологий, рекомбинантных технологий, и/или их функциональные фрагменты. Антитела согласно настоящему изобретению охватывают как интактные молекулы иммуноглобулина, например, поликлональное антитело, моноклональное антитело (mAb), моноспецифическое антитело, биспецифическое антитело, полиспецифическое антитело, человеческое антитело, животное антитело (например, антитело камелидов), химерные антитела, а также части, фрагменты, участки, пептиды и их производные (обеспечиваемые любым известным способом, включая, помимо прочих, ферментативное расщепление, пептидный синтез или рекомбинантные технологии), например, иммуноглобулин, лишенных легких цепей (см., например, документ US 6,005,079), Fab, Fab', F(ab')₂, Fv, scFv, фрагмент антитела, диатело, Fd, CDR-участки или любая часть или пептидная последовательность антитела, способная связываться с антигеном или эпитопом. Антитело считается "способным к связыванию" с молекулой, если оно способно специфически реагировать с молекулой для связывания таким образом молекулы с антителом. Фрагменты или части антител могут не иметь Fc-фрагмента интактного антитела, быстрее выводиться из системы кровообращения и могут обладать меньшим неспецифическим тканевым связыванием по сравнению с интактным антителом. Примеры антител могут быть получены из интактных антител с применением способов, общеизвестных среди специалистов в данной области, например, путем протеолитического расщепления ферментами, такими, как папаин (для получения фрагментов Fab) или пепсин (для получения фрагментов F(ab')₂ (см., например, Wahl et al., 24 J. Nucl. Med. 316-25 (1983). Части антител могут быть получены любым из вышеуказанных способов или путем экспрессии части рекомбинантной молекулы. Например, CDR-участок (участки) рекомбинантного антитела выделяют и субклонируют в соответствующий вектор экспрессии.

В контексте данного описания термин "вариабельный участок" касается вариабельного участка или домена легкой цепи (VL) или тяжелой цепи (VH), которые содержат детерминанты для распознавания специфичности связывания. Вариабельные домены участвуют в распознавании антигенов и образуют антиген-связывающий центр. В контексте данного описания термин "каркасный участок" означает части вариабельных участков легкой и тяжелой цепи, которые являются как минимум на 85% гомологичными (то есть, отличными от CDR) среди различных антител в одном виде. В контексте данного описания термин "гомологичный" означает сравнение аминокислот двух полипептидов, которые при выравнивании с применением алгоритма Смита-Уотермана (SMITH, et al. Identification of common molecular subsequences. Journal of Molecular Biology. 1981, №147, стр.195-7.) имеют приблизительно указанный процент одинаковых аминокислот. Например, "на 85% гомологичный" означает сравнение аминокислот двух полипептидов, которые при оптимальному выравнивании имеют 85% идентичности аминокислот. Вариабельный участок тяжелой и легкой цепи разделяется на сегменты, которые включают четыре каркасных субучастка (FR1, FR2, FR3 и FR4), которые прерываются тремя отрезками гипервариабельных последовательностей или участков определения комплементарности (CDR), как определяется в базе данных Kabat (Kabat et al., op.cit.), причем CDR1 находится между FR1 и FR2, CDR2 - между FR2 и FR3, и CDR3 - между FR3 и FR4. Без указания конкретных субучастков как FR1, FR2, FR3 или FR4, каркасный участок, относительно других, представляет комбинированные FR в пределах вариабельного участка одной естественной иммуноглобулиновой цепи. В контексте данного описания FR представляет один из четырех субучастков, и FR представляет два или более из четырех субучастков, которые составляют каркасный участок. Последовательности каркасных участков разных легких или тяжелых цепей являются относительно консервативными в пределах вида. Каркасный участок антитела представляет собой комбинированные каркасные участки составляющих легких и тяжелых цепей и служит для позиционирования и выравнивания CDR. CDR в первую очередь отвечают за создание сайта связывания антитела, обеспечение специфичности связывания и аффинности к эпитопу антигена. В пределах вариабельных участков тяжелых или легких цепей, которые обеспечивают связывание антигена, участки являются меньшими последовательностями, которые называются "гипервариабельными" из-за их чрезвычайной вариабельности между антителами различной специфичности. Такие гипервариабельные участки также называются "участками определения комплементарности" или "CDR-участками". Эти CDR-участки отвечают за основную специфичность антитела к определенной структуре антигенной детерминанты. CDR представляют прерывистые отрезки аминокислот в пределах вариабельных участков, однако, независимо от вида, было обнаружено, что позиционное расположение этих критичных аминокислотных последовательностей в пределах вариабельных участков тяжелой и легкой цепей является подобным в пределах аминокислотных последовательностей вариабельных цепей. Каждая из вариабельных тяжелых и легких цепей всех антител имеет 3 CDR-участка, каждый из которых прерывается другими (которые называются L1, L2, L3, H1, Н2, Н3) для соответствующих легких (L) и тяжелых (Н) цепей. Акцептированные CDR-участки были описаны у публикации Kabat et al, 252 J. Biol. Chem. 6609-16 (1977), и CDR-петли могут распознаваться путем применения этих правил во время исследования линейной аминокислотной последовательности. Однако правила определения CDR-Н3-петли могут быть разными (см. Раздел 4, Antibody Engineering: Methods & Protocols, (Lo, ed. Humana Press, Totowa, NJ, 2004)), и фактические пределы некоторых CDR-H3-петель могут не поддаваться распознанию без экспериментов, таких, как круговой дихроизм, ядерный магнитный резонанс или рентгеновская кристаллография. У всех видов млекопитающих пептиды антител содержат постоянные (то есть высококонсервативные) и вариабельные участки, и в пределах последних существуют CDR и так называемые "каркасные участки", которые состоят из аминокислотных последовательностей в пределах вариабельного участка тяжелой или легкой цепи, но за пределами CDR. CDR-участки также могут определяться с применением номенклатуры Chothia (CHOTHIA and LESK. Canonical structures for the hypervariable regions of immunoglobulins (1987) J Mol Biol. 1987 Aug 20; 196 (4): 901-17). Таким образом, в некоторых вариантах осуществления CDR представляют собой CDR согласно определению Kabat, а в других вариантах осуществления CDR представляют собой CDR согласно определению Chothia. Относительно антигенной детерминанты, распознаваемой CDR-участками антитела, это также называется "эпитопом". Другими словами, эпитоп означает часть любой молекулы, которая может распознаваться или связываться антителом (соответствующий антитело-связывающий участок может называться паратопом). В целом эпитопы состоят из химически активных поверхностных групп молекул, например, аминокислот или сахарных боковых цепей, и обладают конкретными трехмерными структурными характеристиками, а также конкретными зарядными характеристиками.

Термин "моноклональное антитело" или "mAb" в контексте данного описания означает антитело, происходящее из одного клона. Моноклональные антитела могут быть получены с применением гибридомных технологий, таких, как описываемые в публикациях HARLOW. Antibodies: A Laboratory manual. 2nd edition. Cold Spring Harbor: Laboratory press, 1988, и HAMMERLING, et al. Monoclonal Antibodies и T Cell Hybridomas. New York: Elsevier, 1981. p.563-681.

В контексте данного описания термин "человеческое антитело" означает антитело, имеющее вариабельные и постоянные участки, которые являются взятыми из последовательностей иммуноглобулина зародышевой линии человека или являются их близкими аналогами. Человеческое антитело согласно изобретению может включать аминокислотные остатки, которые не кодируются последовательностями иммуноглобулина зародышевой линии человека (например, мутации, включенные путем случайного или сайт-специфического мутагенеза in vitro или путем соматической мутации in vivo). Таким образом, в контексте данного описания термин "человеческое антитело" означает антитело, в котором практически каждая часть белка является по сути подобной антителу зародышевой линии человека. "По сути подобное" означает антитело, имеющее нуклеиновокислотную последовательность, которая является как минимум на 80, в предпочтительном варианте - на 85, в более предпочтительном варианте - на 90, и в более предпочтительном варианте - на 95% гомологичной нуклеиновокислотной последовательности антитела зародышевой линии человека.

В контексте данного описания термин "Fab" означает участки молекул антитела, которые включают вариабельный участок тяжелой цепи и легкой цепи, и которые демонстрируют связывающую активность. "Fab" включает агрегаты одной тяжелой и одной легкой цепи (общеизвестные как Fab), независимо от того, являются ли какие-либо из вышеуказанных ковалентно или нековалентно агрегированными, при условии, что агрегация способна избирательно реагировать с конкретным антигеном или семейством антигенов. Фрагмент Fab является гетеродимером, который включает VL и второй полипептид, который включает домены VH и СН1. В предпочтительном варианте осуществления антитело представляет собой Fab' фрагмент. Fab' фрагменты отличаются от Fab фрагментов тем, что Fab' фрагмент содержит несколько остатков на карбокси-конце тяжелоцепочечного СН1-домена, включая один или несколько цистеинов из "шарнирного участка" антитела.

"F(ab')2" означает фрагмент антитела, полученного путем пепсиновой обработки антитела, или равноценный белок, полученный другими способами, такими, как рекомбинантные технологии. F(ab')2 фрагмент имеет два антиген-связывающих центра и сохраняет способность к сшиванию антигена.

"Fv" является минимальным фрагментом антитела, который содержит полный сайт распознавания и связывания антигена. Этот участок состоит из димера одного тяжело- и одного легкоцепочечного вариабельного домена в тесной нековалентной связи. Именно в этой конфигурации три CDR каждого вариабельного домена взаимодействуют для определения антиген-связывающего центра на поверхности VH-VL-димера. Вместе шесть CDR обеспечивают антиген-связывающую специфичность антитела. Однако даже один вариабельный домен (или половина Fv, включающая только три CDR, специфических к антигену) обладает способностью к распознаванию и связыванию антигена, хотя и с более низкой аффинностью по сравнению с полным сайтом связывания.

"Одноцепочечный Fv" или "scFv" означает VH- и VL-домены антитела, причем эти домены присутствуют в одной полипептидной цепи. В предпочтительном варианте scFv также включает полипептидный линкер между VH- и VL-доменами, который позволяет scFv образовывать нужную структуру для связывания антигена (LENNARD. Standard protocols for the construction of scFv libraries. Methods in molecular biology. 2002, №178, стр.59-71).

В контексте данного описания термин "фрагмент антитела" означает один или несколько фрагментов антитела, которые сохраняют способность к специфическому связыванию с КСФ-1R.

Термин "диатела" означает малые фрагменты антитела с двумя антиген-связывающими центрами, и эти фрагменты включают вариабельный домен тяжелой цепи (VH), соединенный с вариабельным доменом легкой цепи (VL) в одной полипептидной цепи (VH VL). При применении линкера, который является слишком коротким для обеспечения создания пар между двумя доменами на одной цепи, домены вынуждены образовывать пары с комплементарными доменами другого цепи и создавать два антиген-связывающие центры. Диатела могут связываться с одним или несколькими эпитопами. Диатела подробнее описываются в публикациях POLJAK. Production и structure of diabodies. Structure. 1994, т.2, №12, стр.1121-3, HUDSON, et al. High avidity scFv multimers; diabodies и triabodies. Journal of immunological methods. 1999, т.231, №1-2, стр.177-89, и KIPRIYANOV. Generation of bispecific и tandem diabodies. Methods in molecular biology. 2002, №178, стр.317-31.

Были разработаны разные технологии получения фрагментов антител. Традиционно эти фрагменты получали путем протеолитического расщепления интактных антител. Однако эти фрагменты теперь могут образовываться непосредственно рекомбинантными клетками-хозяевами. Фрагменты антител Fab, Fv и scFv могут быть экспрессированы и секретированы из Е. coli, что обеспечивает возможность выработки большого количества этих фрагментов. Технологии выработки фрагментов антител известны специалистам в данной области. В других вариантах осуществления нужным антителом является одноцепочечный Fv фрагмент (scFv).

В контексте данного описания "доменные антитела" (dAbs) состоят из наименьших функциональных связывающих единиц антител, которые отвечают вариабельным участкам тяжелых (VH) или легких (VL) цепей антител. Доменные антитела имеют молекулярную массу приблизительно 13 кДа или менее одной десятой размера полного антитела.

В контексте данного описания "Fd" означает фрагмент антитела, который состоит из доменов VH и CH1.

Термин "антитело" или "Ab" также касается других фрагментов антител, общеизвестных среди специалистов в данной области, например, описанных в публикациях HOLLIGER, et al. Engineered antibody fragments и the rise of single domains. Nature biotechnology. 2005, т.23, №9, стр.1126-36, и HOOGENBOOM, et al. Natural и designer binding sites made by phage display technology. Immunology today. 2000, т.21, №8, стр.371-8.

Согласно одному варианту осуществления, антитело согласно изобретению специфически связывается с КСФ-1R, более конкретно - с человеческим КСФ-1R, и включает:

(i) как минимум один CDR, причем вышеупомянутый CDR включает как минимум пять последовательных аминокислот последовательности, которая начинается с позиции 45 и заканчивается в позиции 54 SEQ ID NO: 2, - последовательности, которая начинается с позиции 66 и заканчивается в позиции 87 SEQ ID NO: 2, или последовательности, которая начинается с позиции 117 и заканчивается в позиции 126 SEQ ID NO: 2;

или,

(ii) как минимум один CDR, причем вышеупомянутый CDR включает как минимум пять последовательных аминокислот последовательности, которая начинается с позиции 44 и заканчивается в позиции 56 SEQ ID NO: 4, последовательности, которая начинается с позиции 66 и заканчивается в позиции 76 SEQ ID NO: 4 или последовательности, которая начинается с позиции 109 и заканчивается в позиции 117 SEQ ID NO: 4.

Согласно еще одному варианту осуществления, антитело согласно изобретению специфически связывается с КСФ-1R, более конкретно - с человеческим КСФ-1R, и включает как минимум один CDR, причем вышеупомянутые CDR являются, независимо один от другого, выбранными из группы CDR, которые включают как минимум пять последовательных аминокислот:

- последовательности, которая начинается с позиции 45 и заканчивается в позиции 54 SEQ ID NO: 2,

- последовательности, которая начинается с позиции 66 и заканчивается в позиции 87 SEQ ID NO: 2,

- последовательности, которая начинается с позиции 117 и заканчивается в позиции 126 SEQ ID NO: 2,

- последовательности, которая начинается с позиции 44 и заканчивается в позиции 56 SEQ ID NO: 4,

- последовательности, которая начинается с позиции 66 и заканчивается в позиции 76 SEQ ID NO: 4,

- или последовательности, которая начинается с позиции 109 и заканчивается в позиции 117 SEQ ID NO: 4.

Согласно предпочтительному варианту осуществления, антитело согласно изобретению специфически связывается с КСФ-1R, более конкретно - с человеческим КСФ-1R, и включает 2, 3, 4 или 5, в более предпочтительном варианте - 6 CDR, причем вышеупомянутые CDR являются, независимо один от другого, выбранными из группы CDR, которые включают как минимум пять последовательных аминокислот:

- последовательности, которая начинается с позиции 45 и заканчивается в позиции 54 SEQ ID NO: 2,

- последовательности, которая начинается с позиции 66 и заканчивается в позиции 87 SEQ ID NO: 2,

- последовательности, которая начинается с позиции 117 и заканчивается в позиции 126 SEQ ID NO: 2,

- последовательности, которая начинается с позиции 44 и заканчивается в позиции 56 SEQ ID NO: 4,

- последовательности, которая начинается с позиции 66 и заканчивается в позиции 76 SEQ ID NO: 4,

- или последовательности, которая начинается с позиции 109 и заканчивается в позиции 117 SEQ ID NO: 4.

Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления, антитело согласно изобретению специфически связывается с КСФ-1R, более конкретно - с человеческим КСФ-1R, и включает:

(i) 2, в более предпочтительном варианте - 3 CDR, причем вышеупомянутые CDR являются, независимо один от другого, выбранными из группы CDR, которые включают как минимум пять последовательных аминокислот:

- последовательности, которая начинается с позиции 45 и заканчивается в позиции 54 SEQ ID NO: 2,

- последовательности, которая начинается с позиции 66 и заканчивается в позиции 87 SEQ ID NO: 2,

- последовательности, которая начинается с позиции 117 и заканчивается в позиции 126 SEQ ID NO: 2, или

(ii) 2, в более предпочтительном варианте - 3 CDR, причем вышеупомянутые CDR являются, независимо один от другого, выбранными из группы CDR, которые включают как минимум пять последовательных аминокислот:

- последовательности, которая начинается с позиции 44 и заканчивается в позиции 56 SEQ ID NO: 4,

- последовательности, которая начинается с позиции 66 и заканчивается в позиции 76 SEQ ID NO: 4

- или последовательности, которая начинается с позиции 109 и заканчивается в позиции 117 SEQ ID NO: 4.

Согласно еще одному варианту осуществления, антитело согласно изобретению специфически связывается с КСФ-1R, более конкретно - с человеческим КСФ-1R, и включает:

(i) как минимум один CDR, выбранный, независимо от других, из группы CDR, как изложено в следующих последовательностях:

- последовательности, которая начинается с позиции 45 и заканчивается в позиции 54 SEQ ID NO: 2,

- последовательности, которая начинается с позиции 66 и заканчивается в позиции 87 SEQ ID NO: 2, и

- последовательности, которая начинается с позиции 117 и заканчивается в позиции 126 SEQ ID NO: 2;

или

(ii) как минимум один CDR, выбранный, независимо от других, из группы CDR, как изложено в следующих последовательностях:

- последовательности, которая начинается с позиции 44 и заканчивается в позиции 56 SEQ ID NO: 4,

- последовательности, которая начинается с позиции 66 и заканчивается в позиции 76 SEQ ID NO: 4, и

- последовательности, которая начинается с позиции 109 и заканчивается в позиции 117 SEQ ID NO: 4.

Согласно еще одному варианту осуществления, антитело согласно изобретению специфически связывается с КСФ-1R, более конкретно - с человеческим КСФ-1R, и включает как минимум один CDR, выбранный, независимо от других, из группы CDR, как изложено в следующих последовательностях:

- последовательности, которая начинается с позиции 45 и заканчивается в позиции 54 SEQ ID NO: 2,

- последовательности, которая начинается с позиции 66 и заканчивается в позиции 87 SEQ ID NO: 2,

- последовательности, которая начинается с позиции 117 и заканчивается в позиции 126 SEQ ID NO:2,

- последовательности, которая начинается с позиции 44 и заканчивается в позиции 56 SEQ ID NO: 4,

- последовательности, которая начинается с позиции 66 и заканчивается в позиции 76 SEQ ID NO: 4, и

- последовательности, которая начинается с позиции 109 и заканчивается в позиции 117 SEQ ID NO: 4.

Согласно еще одному варианту осуществления, антитело согласно изобретению специфически связывается с КСФ-1R, более конкретно - с человеческим КСФ-1R, и включает 2, 3, 4 или 5, в более предпочтительном варианте - 6 CDR, выбранных, независимо один от другого, из группы CDR, как изложено в следующих последовательностях:

- последовательности, которая начинается с позиции 45 и заканчивается в позиции 54 SEQ ID NO: 2,

- последовательности, которая начинается с позиции 66 и заканчивается в позиции 87 SEQ ID NO: 2,

- последовательности, которая начинается с позиции 117 и заканчивается в позиции 126 SEQ ID NO: 2,

- последовательности, которая начинается с позиции 44 и заканчивается в позиции 56 SEQ ID NO: 4,

- последовательности, которая начинается с позиции 66 и заканчивается в позиции 76 SEQ ID NO: 4, и

- последовательности, которая начинается с позиции 109 и заканчивается в позиции 117 SEQ ID NO: 4.

Согласно еще одному предпочтительному варианту осуществления, антитело согласно изобретению специфически связывается с КСФ-1R, более конкретно - с человеческим КСФ-1R, и включает:

(i) 2, в более предпочтительном варианте - 3 CDR, причем вышеупомянутые CDR являются, независимо один от другого, выбранными из группы CDR, как изложено в следующих последовательностях:

- последовательности, которая начинается с позиции 45 и заканчивается в позиции 54 SEQ ID NO: 2,

- последовательности, которая начинается с позиции 66 и заканчивается в позиции 87 SEQ ID NO:2,

- последовательности, которая начинается с позиции 117 и заканчивается в позиции 126 SEQ ID NO: 2,

или

(ii) 2, в более предпочтительном варианте - 3 CDR, причем вышеупомянутые CDR являются, независимо один от другого, выбранными из группы CDR, как изложено в следующих последовательностях:

- последовательности, которая начинается с позиции 44 и заканчивается в позиции 56 SEQ ID NO: 4,

- последовательности, которая начинается с позиции 66 и заканчивается в позиции 76 SEQ ID NO: 4,

- последовательности, которая начинается с позиции 109 и заканчивается в позиции 117 SEQ ID NO: 4.

Согласно одному варианту осуществления, антитело согласно изобретению специфически связывается с КСФ-1R, более конкретно - с человеческим КСФ-1R, и включает (i) как минимум один CDR, который включает аминокислотную последовательность, изложенную в любой из последовательностей SEQ ID NO: 11, 12 или 13; или (ii) как минимум один CDR, который включает аминокислотную последовательность, изложенную в любой из последовательностей SEQ ID NO: 14, 15 или 16.

Согласно еще одному варианту осуществления, антитело согласно изобретению специфически связывается с КСФ-1R, более конкретно - с человеческим КСФ-1R, и включает как минимум один CDR, который включает аминокислотную последовательность, изложенную в любой из последовательностей SEQ ID NO: 11, 12, 13, 14, 15 или 16.

Согласно предпочтительному варианту осуществления, антитело согласно изобретению специфически связывается с КСФ-1R, более конкретно - с человеческим КСФ-1R, и включает 2, 3, 4, 5 в более предпочтительном варианте - 6 CDR, которые включают аминокислотная последовательность, изложенную в любой из последовательностей SEQ ID NO: 11, 12, 13, 14, 15 или 16.

Согласно еще одному варианту осуществления, антитело согласно изобретению специфически связывается с КСФ-1R, более конкретно - с человеческим КСФ-1R, и включает (i) как минимум один CDR, как изложено в любой из последовательностей SEQ ID NO: 11, 12 или 13; или (ii) как минимум один CDR, как изложено в любой из последовательностей SEQ ID NO: 14, 15 или 16.

Согласно еще одному варианту осуществления, антитело согласно изобретению специфически связывается с КСФ-1R, более конкретно - с человеческим КСФ-1R, и включает как минимум один CDR, как