Трансгенное событие mon 87427 маиса и относительная шкала развития

Трансгенное событие mon 87427 маиса и относительная шкала развития

Иллюстрации

Показать все

Реферат

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

Данная заявка имеет приоритет по предварительной заявке США № 61/263526, зарегистрированной 23-го ноября 2009 г., которая, таким образом, полностью включена в настоящее описание, и по предварительной заявке США № 61/263530, зарегистрированной 23-го ноября 2009 г., которая, таким образом, полностью включена в настоящее описание.

ВКЛЮЧЕНИЕ СПИСКА ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

Список последовательностей, который содержится в файле с названием «56887-0001_seqlisting.txt», размер которого составляет 19,6 килобайт (размер, измеренный в Microsoft Windows®), и который был создан 12-го ноября 2010 г., регистрируется при этом путем электронной подачи и, таким образом, полностью включается в настоящий документ путем ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Изобретение относится к области разведения растений, их исследований и сельского хозяйства. Более конкретно, изобретение относится к трансгенному событию MON 87427 маиса и нуклеотидным молекулам, растениям, частям растения, семенам растения, клеткам растения, сельскохозяйственным продуктам и способам, связанным с трансгенным событием MON 87427 маиса. Оно также относится к прогнозу развития метелок маиса и использования этого в способах скрещивания растений, исследований и сельском хозяйстве, и полученным с помощью этого гибридным семенам маиса.

ПРЕДПОСЫЛКИ СОЗДАНИЯ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Зерновые культуры, имеющие новые желаемые признаки, полезны для скрещивания растений, исследований и сельского хозяйства. Такие культуры можно получать с использованием биотехнологических способов. Однако получение и отбор подходящего для коммерческих целей трансгенного события может требовать проведения интенсивных исследований, анализа и характеристики большого числа событий трансформации индивидуальных растений для отбора события, имеющего как желаемый признак, так и оптимальные фенотипические и агротехнические характеристики, необходимые для его соответствия коммерческим и сельскохозяйственным целям. Для данного процесса отбора события часто необходимы теплицы и полевые испытания с большим числом событий на протяжении многих лет, во множестве мест и при различных условиях, для того чтобы можно было собрать достоверное количество агротехнических, фенотипических и молекулярных данных. Полученные в результате данные и наблюдения должны быть затем проанализированы командами ученых и агрономов с целью отбора коммерчески пригодного события. Изобретение относится к такому коммерчески пригодному событию, результатом которого является новый желаемый признак у маиса.

Точное определение репродуктивной зрелости маиса также полезно для скрещивания растений, исследований и сельскохозяйственных целей, например, при получении гибридных семян маиса. Средства, обычно используемые в данной области для прогнозирования и оценки стадий роста и развития маиса, включают шкалы, например, V-стадии, которые основаны на вегетативных характеристиках, и градусо-единицы роста (GDU), которые основаны на числе градусо-дней роста. Однако оба этих подхода дают оценку стадии развития метелки, которая сильно варьирует среди генотипов маиса. Поэтому, использование указанных измерений может привести к пропуску оптимально эффективного времени в случае схем обработки, для которых стадия развития является важным фактором. Изобретение относится к Относительной шкале развития, основанной на развитии метелки, согласованной по генотипам, которая полезна для мониторинга и прогноза развития метелки у растений маиса с различными генотипами.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ СУЩНОСТИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Изобретение относится к рекомбинантной молекуле ДНК, включающей в себя молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-8. Изобретение также относится к рекомбинантной молекуле ДНК, образованной соединением встроенной гетерологичной молекулы нуклеиновой кислоты и геномной ДНК растения маиса, клетки растения или семени. Изобретение также относится к рекомбинантной молекуле ДНК, полученной из трансгенного события MON 87427 маиса, репрезентативный образец семян которого был помещен в Американскую коллекцию типовых культур (АТСС®) под номером доступа № PTA-7899. Изобретение также относится к рекомбинантной молекуле ДНК, которая представляет собой ампликон диагностический в отношении присутствия ДНК, полученной из трансгенного события MON 87427 маиса. Изобретение также относится к рекомбинантной молекуле ДНК, которая находится в растении маиса, клетке растения, семени, потомстве растения, части растения или товарном продукте, полученном из трансгенного события MON 87427 маиса.

Изобретение также относится к молекуле ДНК, включающей в себя молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность с достаточной длиной непрерывной нуклеотидной последовательности из SEQ ID NO: 10 для функционирования в качестве зонда ДНК, которая гибридизуется при жестких условиях с молекулой ДНК, включающей в себя нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, и не гибридизуется при жестких условиях с молекулой ДНК, не включающей в себя нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10.

Изобретение также относится к паре молекул ДНК, состоящей из первой молекулы ДНК и второй молекулы ДНК, отличающейся от первой молекулы ДНК, причем каждая из первой и второй молекул ДНК содержит молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность с достаточной длиной непрерывной нуклеотидной последовательности из SEQ ID NO: 10 для функционирования в качестве ДНК-праймеров при совместном использовании в реакции амплификации с ДНК, полученной из события MON 87427, чтобы получить ампликон, диагностический в отношении ДНК трансгенного события MON 87427 маиса в образце.

Изобретение также относится к способу детекции присутствия молекулы ДНК, полученной из MON 87427, в образце посредством контакта образца с зондом ДНК, подвергание указанного образца и указанного зонда ДНК жестким условиям гибридизации и детекции гибридизации зонда ДНК с молекулой ДНК в образце, причем гибридизация зонда ДНК с молекулой ДНК указывает на присутствие молекулы ДНК, полученной из трансгенного события MON 87427 маиса, в образце.

Изобретение также относится к способу детекции присутствия молекулы ДНК, полученной из трансгенного события MON 87427 маиса, в образце посредством контакта образца с парой молекул ДНК, проведения реакции амплификации, достаточной для получения ампликона ДНК, содержащего последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, и детекции присутствия ДНК-ампликона в реакции, причем присутствие ДНК-ампликона в реакции указывает на присутствие молекулы ДНК, полученной из MON 87427, в образце.

Изобретение также относится к набору для детекции ДНК, включающему в себя по меньшей мере одну молекулу ДНК, содержащую нуклеотидную последовательность с достаточной длиной непрерывной нуклеотидной последовательности из SEQ ID NO: 10 для функционирования в качестве ДНК-праймера или пробы, специфичных для детекции присутствия ДНК, полученной из трансгенного события MON 87427 маиса, причем детекция ДНК является диагностической в отношении присутствия ДНК трансгенного события MON 87427 маиса в образце.

Изобретение также относится к рекомбинантному растению маиса, его семени, клетке или части, содержащим молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10. Изобретение также относится к рекомбинантному растению маиса, семени, клетке или части растения, имеющим ткане-избрирательную устойчивость к обработке гербицидом глифосат. Изобретение также относится к рекомбинантному растению маиса, семени, клетке или части растения, геном которых продуцирует ампликон, содержащий молекулу ДНК, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, при тестировании в способе ДНК-амплификации.

Изобретение также относится к растению или семени маиса, причем растение или семя маиса получены из трансгенного события MON 87427 маиса. Изобретение также относится к растению или семени маиса, причем растение или семя маиса являются гибридом, имеющим по меньшей мере одно родительское растение, полученное из трансгенного события MON 87427 маиса.

Изобретение также относится к неживому растительному материалу, содержащему рекомбинантную молекулу ДНК, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10.

Изобретение также относится к микроорганизму, содержащему молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10.

Изобретение также относится к микроорганизму, который является растительной клеткой.

Изобретение также относится к продукту потребления, получаемому из трансгенного события MON 87427 маиса и содержащему молекулу нуклеиновой кислоты, имеющую нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, причем детекция нуклеотидной последовательности в образце, полученном из продукта потребления, определяет то, что продукт потребления получен из трансгенного события 87427 маиса. Изобретение также относится к продукту потребления, выбранному из группы, состоящей из целых или переработанных семян, питания для животных, масла, муки крупного помола, муки, хлопьев, отрубей, биомассы и топливных продуктов. Изобретение также относится к способу изготовления продукта потребления путем получения растения маиса или его части, включающих трансгенное событие MON 87427 маиса, и изготовления продукта потребления маиса из растения маиса или его части.

Изобретение также относится к способу контроля сорняков в поле путем высаживания растений MON 87427 в поле и применения эффективной дозы гербицида глифосата для контроля сорняков в поле без поражений растений трансгенного события MON 87427 маиса. Изобретение также относится к способу контроля сорняков в поле, в котором эффективная доза гербицида глифосата составляет от примерно 0,1 фунта до примерно 4 фунтов на акр.

Изобретение также относится к способу получения растения маиса, которое устойчиво к применению гербицида глифосата в результате полового скрещивания растения трансгенного события MON 87427 маиса, содержащего молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, со вторым растением маиса, таким образом получая семена, сбора семян, полученных в результате скрещивания, выращивания семян для получения множества растений-потомков, обработки растений-потомков глифосатом и отбора растения-потомка, которое устойчиво к глифосату. Изобретение также относится к способу получения растения маиса, которое устойчиво к применению гербицида глифосата самоопылением растения трансгенного события MON 87427 маиса, содержащего молекулу нуклеиновой кислоты, содержащую нуклеотидную последовательность, выбранную из группы, состоящей из SEQ ID NO: 1-10, в результате чего получаются семена, сбором семян, полученных после самоопыления, выращиванием семян для получения множества растений-потомков, обработкой растений-потомков глифосатом и отбором растения-потомка, которое устойчиво к глифосату.

Изобретение также относится к способу получения гибридного семени маиса посредством высаживания семени трансгенного события MON 87427 маиса на местность, выращивания растения маиса из семени, обработки растения эффективной дозой гербицида глифосата до образования пыльцы, для того чтобы сделать мужские соцветия стерильными, не повреждая растение, опыления растения пыльцой со второго родительского растения и сбора семян от растения, причем семя является гибридным семенем маиса, полученным скрещиванием растений трансгенного события MON 87427 маиса со вторым родительским растением. Изобретение также относится к способу получения гибридного семени маиса, причем эффективная доза гербицида глифосата составляет от примерно 0,1 фунта до примерно 4 фунтов на акр. Изобретение также относится к способу получения гибридного семени маиса, дополнительно включающему в себя высаживание семени второго родительского растения на местность и выращивание растения маиса из второго родительского растения. Изобретение также относится к способу получения гибридного семени маиса, причем второе родительское растение является устойчивым к глифосату.

Изобретение также относится к способу прогнозирования времени развития метелки маиса посредством выбора диапазона на Относительной шкале развития, причем диапазон указывает на созревание до желаемой стадии развития метелки. Изобретение также относится к способу прогнозирования времени развития метелки маиса, причем желаемой стадией развития метелки является стадия развития, оптимальная для репродуктивного скрещивания, стерилизации метелки, удаления метелки и/или проведения модулирующей развитие обработки на растении маиса. Изобретение также относится к способу прогнозирования времени развития метелки маиса, в котором определенной стадией развития цветков, используемой для создания Относительной шкалы развития, является выделение пыльцы примерно 50 процентами популяции растений маиса, и в которой диапазон составляет от примерно 0,62 и примерно до 0,75 на Относительной шкале развития. Изобретение также относится к способу прогнозирования времени развития метелки маиса, дополнительно включающему в себя проведение модулирующей развитие обработки на растении маиса на желаемой стадии развития метелки.

Изобретение также относится к способу получение гибридного семени маиса путем высаживания семени маиса для первого родительского растения на местность, выращивания первого родительского растения из семени маиса, определения времени развития метелки для первого родительского растения путем выбора диапазона, который указывает созревание до желаемой стадии развития метелки на Относительной шкале развития, использования определения времени развития метелки для своевременного проведения модулирующей развитие обработки первого родительского растения, таким образом предупреждая самоопыление первого родительского растения, проведения модулирующей развитие обработки первого родительского растения, оплодотворения первого родительского растения пыльцой второго родительского растения и сбора семян первого родительского растения, причем семя является гибридным семенем маиса, полученным скрещиванием первого родительского растения со вторым родительским растением. Изобретение также относится к гибридному семени маиса, полученному с использованием данного способа. Изобретение также относится к способу получения гибридного семени маиса, причем модулирующей развитие обработкой является обработка глифосатом, а первое родительское растение имеет тканеизбирательную устойчивость к глифосату. Изобретение также относится к способу получения гибридного семени маиса, причем первым родительским растением является растение трансгенного события MON 87427 маиса. Изобретение также относится к способу получения гибридного семени маиса, причем второе родительское растение является устойчивым к глифосату.

Нижеследующие и другие аспекты изобретения станут более очевидны из следующие подробного описания.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

На фиг. 1 проиллюстрирована организация трансгенного события MON 87427 маиса. На фигуре [A1], [A2] и [A3] соответствуют относительной позиции соответственно SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 3 и SEQ ID NO: 5, которые охватывают геномную ДНК маиса, фланкирующую 5’-конец трансгенной вставки, и 5’-участок ДНК трансгенной вставки; [B1], [B2] и [B3] соответствуют относительной позиции соответственно SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 4 и SEQ ID NO: 6, которые охватывают геномную ДНК маиса, фланкирующую 3’-конец трансгенной вставки и 3’-участок ДНК трансгенной вставки; [C] соответствует относительной позиции SEQ ID NO: 7, которая включает геномную ДНК маиса, фланкирующую 5’-конец трансгенной вставки и участок 5’-конца трансгенной вставки; [D] соответствует относительной позиции SEQ ID NO: 8, которая включает геномную ДНК маиса, фланкирующую 3’-конец трансгенной вставки и участок 3’-конца трансгенной вставки; [E] соответствует относительной позиции SEQ ID NO: 9 и различным элементам в трансгенной вставке; а [F] представляет непрерывную последовательность MON 87427, приведенную в виде SEQ ID NO: 10 и включающую SEQ ID NO: 1-9.

На фигуре 2 показана урожайность гибридов MON 87427 при скрещивании с событием маиса NK603 и двухкратной за сезон обработке глифосатом с помощью распыления в количестве 2,25 фунтов (1,02 кг) на акр (4047 м²) на каждое распыление.

На фигуре 3 проиллюстрированы стадии развития метелки, используемые в создании Относительной шкалы развития. Приблизительный размер показан между квадратными скобками. На фигуре Vg представляет собой меристему на вегетативной стадии; Т0 представляет собой переход от вегетативной к репродуктивной стадии; Т1 представляет собой видимую репродуктивную точку роста (0,9 мм); Т2 представляет собой видимые боковые примордии (1,8 мм); Т3 представляет собой видимые примордии колосков (4,1 мм); Т4 представляет собой удлинение центральной оси и боковой оси (12,9 мм); Т5 представляет собой начало дифференцировки пыльников (41,0 мм); Т6 представляет собой начало дифференцировки пыльцы (175 мм); и Т7 представляет собой раскрытие пыльников и выделение пыльцы (285,0 мм).

На фигуре 4 проиллюстрирован разброс размера метелок для трех генотипов маиса на двух стадиях развития (V8 и V10).

На фигуре 5 проиллюстрирована корреляция между требованиями GDU для стадии Т5 и этими требованиями к Р50% и более определенно показана линия регрессии, полученная с использованием корреляции между требованиями GDU к Т5 и к Р50%. Каждая точка представляет инбредную линию, усредненную по местоположению.

На фигуре 6 проиллюстрирован пример того, как Относительная шкала развития выявляет оптимальное окно эффективности химического агента для получения стерильных метелок маиса, измеряемой риском выбрасывания пыльника (АЕ-риском (%)), которое находится между 0,62 и 0,75 на Относительной шкале развития, где выполняются 62-75% общих требований GDU для достижения Р50, и в которой АЕ-риск минимизирован между инбредными линиями и группами спелости. Каждая точка представляет собой средние значения для 1 участка или двух рядов в общем из 32 растений. N=620.

На фигуре 7 проиллюстрированы Т-стадии как функция от GDU (A) и Относительной шкалы развития (В). Каждая линия регрессии представляет разную инбредную линию.

На фигуре 8 проиллюстрирован процент риска выбрасывания пыльников (ось y), измеренный на разных стадиях выметывания пестичных столбиков (ось x) для блоков MON 87427 и CMS.

На фигуре 9 проиллюстрирована генетическая чистота и чистота признака гибридных семян, полученных на MON 87427 с использованием системы гибридизации Roundup® (RHS) и с помощью CMS-системы, с 95%-ым уровнем достоверности. Черная линия на графике представляет желаемые стандарты качества для генетической чистоты и чистоты признака семян, соответственно.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

SEQ ID NO: 1 является 20-нуклеотидной последовательностью, представляющей 5’-область соединения геномной ДНК маиса и встроенной трансгенной экспрессионной кассеты.

SEQ ID NO: 2 является 20-нуклеотидной последовательностью, представляющей 3’-область соединения геномной ДНК маиса и встроенной трансгенной экспрессионной кассеты.

SEQ ID NO: 3 является 60-нуклеотидной последовательностью, представляющей 5’-область соединения геномной ДНК маиса и встроенной трансгенной экспрессионной кассеты.

SEQ ID NO: 4 является 60-нуклеотидной последовательностью, представляющей 3’-область соединения геномной ДНК маиса и встроенной трансгенной экспрессионной кассеты.

SEQ ID NO: 5 является 100-нуклеотидной последовательностью, представляющей 5’-область соединения геномной ДНК маиса и встроенной трансгенной экспрессионной кассеты.

SEQ ID NO: 6 является 100-нуклеотидной последовательностью, представляющей 3’-область соединения геномной ДНК маиса и встроенной трансгенной экспрессионной кассеты.

SEQ ID NO: 7 является 5’-последовательностью, фланкирующей встроенную ДНК MON 87427 до области и включая область трансгенной ДНК-вставки.

SEQ ID NO: 8 является 3’-последовательностью, фланкирующей встроенную ДНК в MON 87427 до области и включая область трансгенной ДНК-вставки.

SEQ ID NO: 9 является последовательностью, полностью встроенной в геномную ДНК маиса и содержащей экспрессионную ДНК-кассету.

SEQ ID NO: 10 является нуклеотидной последовательностью, представляющей контиг 5’-последовательности, фланкирующей встроенную ДНК MON 87427 (SEQ ID NO: 7), последовательности, полностью встроенной в геномную ДНК маиса и содержащей экспрессионную кассету (SEQ ID NO: 9), и 3’-последовательности, фланкирующей встроенную ДНК MON 87427 (SEQ ID NO: 8), и включает SEQ ID NO: 1-6.

SEQ ID NO: 11 является праймером 1 (SQ20052) специфичного к трансгену метода анализа события, используемого для идентификации MON 87427. ПЦР-ампликон, получаемый в результате метода анализа TAQMAN® (PE Applied Biosystems, Foster City, Calif.) с использованием комбинации праймеров SEQ ID NO: 11 и SEQ ID NO: 12, является положительным результатом на присутствие события MON 87427.

SEQ ID NO: 12 является праймером 1 (SQ20053) специфичного к трансгену метода анализа события, используемого для идентификации MON 87427.

SEQ ID NO: 13 является 6FAM-пробой (PB10016) специфичного к трансгену метода анализа события, используемого для идентификации MON 87427. Эта проба представляет собой 6FAM™-меченный синтетический олигонуклеотид. Высвобождение флуоресцентного сигнала в реакции амплификации с использованием праймеров SEQ ID NO: 11-12 в комбинации с 6FAM™-меченной пробой является диагностическим критерием события MON 87427 в методе анализа TAQMAN®.

SEQ ID NO: 14 является внутренним контрольным праймером 1 (SQ1241) специфичного к трансгену метода анализа события.

SEQ ID NO: 15 является внутренним контрольным праймером 1 (SQ1242) специфичного к трансгену метода анализа события.

SEQ ID NO: 16 является внутренней контрольной VIC-пробой (PB0084) специфичного к трансгену метода анализа события.

SEQ ID NO: 17 является праймером 1 (SQ12763) специфичного к событию метода анализа события, используемого для идентификации MON 87427. ПЦР-ампликон, получаемый в результате метода анализа TAQMAN® (PE Applied Biosystems, Foster City, Calif.) с использованием комбинации праймеров SEQ ID NO: 17 и SEQ ID NO: 18, является положительным результатом на присутствие события MON 87427.

SEQ ID NO: 18 является праймером 1 (SQ12886) специфичного к событию метода анализа события, используемого для идентификации MON 87427.

SEQ ID NO: 19 является 6FAM-пробой (PB4352) специфичного к событию метода анализа события, используемого для идентификации MON 87427.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Следующие определения и способы приведены для лучшего описания изобретения и в качестве руководства по применению изобретения на практике для средних специалистов в данной области. Если не указано иное, то термины следует понимать в соответствии с их обычным применением средними специалистами в соответствующей области.

Используемый в настоящем описании термин «маис» означает «кукурузу» или Zea mays и включает все сорта растений, которые могут быть скрещены с маисом, включая дикие виды маиса, а также растения, принадлежащие роду Zea, которые позволяют межвидовое скрещивание.

«Глифосат» относится к N-фосфонометилглицину, который представляет собой гербицид, являющийся ингбитором енолпирувилшикимат-3-фосфат синтазы (EPSPS). Глифосат нарушает синтез ароматических аминокислот, ингибируя EPSPS. Глифосат доступен в продаже как гербицид Roundup® (Monsanto Company, St. Louis, Mo.).

Изобретение относится к трансгенному событию MON 87427 маиса (также именуемому в настоящем документе MON 87427). Используемый в настоящем документе термин «событие» относится к продукту, созданному в результате встраивания трансгенной молекулы нуклеиновой кислоты в геном растения, то есть в результате трансформации растения для получения трансгенного растения. Поэтому, «событие» получают в результате действий человека: (i) трансформации растительной клетки в лаборатории молекулой нуклеиновой кислоты, которая включает представляющий интерес трансген, то есть встраивания в геном растительной клетки конструкции или молекулы нуклеиновой кислоты, (ii) регенерации популяции трансгенных растений, получающихся в результате встраивания молекулы нуклеиновой кислоты в геном растения, и (iii) отбора конкретного растения, отличающегося встраиванием молекулы нуклеиновой кислоты в определенное местоположение в геноме растения. Таким образом, событие можно однозначно и определенно описать последовательностью нуклеиновой кислоты, представляющей по меньшей мере часть непрерывной молекулы ДНК, которая получается в событии в результате встраивания молекулы нуклеиновой кислоты в конкретное местоположение генома растения, и которая включает участок геномной ДНК самого растения, который фланкирует (примыкает) и физически соединен с встроенной молекулой ДНК, и встроенную молекулу нуклеиновой кислоты. Событие является рекомбинантным, полученным в результате действия человека и не найдено в нетрансгенных растениях.

Термин «событие», поэтому, относится к исходному трансформированному растению («трансформанту»), который включает молекулу нуклеиновой кислоты, встроенную в конкретное местоположение в геноме растения. Термин «событие» также относится ко всему потомству от трансформанта, которое включает молекулу нуклеиновой кислоты, встроенную в конкретное положение в геноме растения. Такое потомство является соответственно трансгенным и содержит событие. Потомство можно получить любыми средствами, включая самоопыление, скрещивание с другим растением, которое содержит такой же или другой трансген, и/или скрещивание с нетрансгенным растением, например, растением другого сорта. Даже после многих поколений в любом растении, именуемом потомством растения MON 87427, будут присутствовать встроенная ДНК и фланкирующая ДНК из исходного трансформированного растения, и их будет легко идентифицировать.

Термин «событие» также относится к непрерывной молекуле ДНК, созданной в исходном трансформанте (содержащей встроенную ДНК и и фланкирующую геномную ДНК маиса, непосредственно примыкающую к краям встроенной ДНК) или к любой молекуле ДНК, содержащей эту последовательность нуклеиновой кислоты. Непрерывная молекула ДНК была создана в результате встраивания трансгенной молекулы нуклеиновой кислоты в геном растения, то есть в результате действия трансформации, и является специфичной и уникальной для конкретного события. Положение встроенной ДНК в MON 87427 относительно окружающей геномной ДНК растения маиса, поэтому, является специфичным и уникальным для MON 87427. Эта молекула ДНК также является неотъемлемой частью хромосомы маиса MON 87427, и как таковая является стационарной в растении и может наследоваться потомством.

Растения трансгенного события MON 87427 маиса проявляют приемлемую с коммерческой точки зрения тканеизбирательную устойчивость к глифосату. В MON 87427 вегетативные части маиса и женские репродуктивные части маиса являются устойчивыми к глифосату, но ключевые мужские репродуктивные ткани маиса, критичные для развития пыльцы маиса, не устойчивы к глифосату. Поэтому, обработанные глифосатом растения MON 87427 можно использовать в качестве женского родительского растения при получении гибридных семян.

Используемый в настоящем документе, термин «рекомбинантный» относится к неприродной ДНК и/или белку, и/или организму, которые в норме не обнаружены в природе и были созданы в результате вмешательства человека, то есть руками человека. В результате такого вмешательства человека может быть получена молекула ДНК, и/или растение или семя. В контексте настоящего документа «рекомбинантная молекула ДНК» является молекулой ДНК, содержащей комбинацию молекул ДНК, которые обычно не встречаются вместе, и является результатом вмешательства человека, например, молекулой ДНК, в которой содержится комбинация по меньшей мере двух молекул ДНК, гетерологичных друг другу, и/или молекулой ДНК, которая синтезирована искусственно и имеет нуклеотидную последовательность, отличающуюся от нуклеотидной последовательности, обычно присутствующей в природе, и/или молекулой ДНК, которая содержит молекулу нуклеиновой кислоты, искусственно встроенную в геномную ДНК клетки-хозяина и ассоциированную фланкирующую ДНК генома клетки-хозяина. Примером рекомбинантной молекулы ДНК является молекула ДНК, содержащая по меньшей мере одну последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1-10. В контексте настоящего документа «рекомбинантное растение» является растением, которое в норме не существует в природе, является результатом вмешательства человека, и содержит трансген и/или гетерологичную молекулу ДНК, включенную в его геном. В результате такого геномного изменения, рекомбинантное растение очевидно отличается от родственного растения дикого типа. Примером рекомбинантного растения является растение трансгенного события 87427 маиса.

Используемый в настоящем документе термин «трансген» относится к молекуле нуклеиновой кислоты, искусственно встроенной в геном организма в результате вмешательства человека. Такой трансген может быть гетерологичным для клетки-хозяина. Термин «трансгенный» относится к содержанию трансгена, например, «трансгенное растение» относится к растению, содержащему трансген, то есть, молекулу нуклеиновой кислоты, искусственно встроенную в геном организма в результате вмешательства человека. Используемый в настоящем документе термин «гетерологичный» относится к первой молекуле, обычно не найденной в природе в комбинации со второй молекулой. Например, молекула может быть получена из первого биологического вида и встроена в геном второго вида. Поэтому, молекула будет гетерологичной молекулой, то есть гетерологичной для организма и искусственно встроенной в геном организма.

Используемый в настоящем документе термин «химерный» относится к одной молекуле ДНК, полученной слиянием первой молекулы ДНК со второй молекулой ДНК, где ни первая, ни вторая молекулы ДНК не находятся обычно в такой конфигурации, то есть, слитыми друг с другом. Химерная молекула ДНК, поэтому, является новой молекулой ДНК, иным образом не присутствующей в природе. Примером химерной молекулы ДНК является молекула ДНК, содержащая по меньшей мере одну последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1-10.

Изобретение относится к молекулам ДНК и их соответствующим нуклеотидным последовательностям. Используемый в настоящем документе термин «ДНК», «молекула ДНК», «молекула нуклеиновой кислоты» относится к двухцепочечной молекуле ДНК геномного или синтетического происхождения, то есть полимеру из дезоксинуклеотидных оснований или нуклеотидной молекуле, читаемой с 5′ (верхнего) конца до 3′ (нижнего) конца. Используемый в настоящем документе термин «последовательность ДНК» или «нуклеотидная последовательность» относится к нуклеотидной последовательности молекулы ДНК. Используемой в настоящем документе номенклатурой является требуемая разделом 37 Свода нормативных документов США, § 1.822 и указанная в таблицах в WIPO Standard ST.25 (1998), приложение 2, таблицы 1 и 3. Как принято и в настоящем документе, нуклеотидные последовательности по изобретению, такие как приведенные как SEQ ID NO: 1-10 и их фрагменты, приведены относительно только одной цепи из двух комплементарных цепей нуклеотидной последовательности, но подразумевается, что комплементарные последовательности (то есть последовательности комплементарной цепи) также именуемые в данной области обратными комплементарными последовательностями, входят в объем изобретения и, определенно предполагается, что они входят в объем заявленного объекта изобретения. Поэтому, в контексте настоящего документа ссылки на SEQ ID NO: 1-10 и их фрагменты включают последовательность и относятся к последовательности комплементарной цепи и ее фрагментов.

Используемый в настоящем описании термин «фрагмент» относится к участку или неполной меньшей части целого. Например, фрагменты SEQ ID NO: 10 включали бы последовательности, которые составляют по меньшей мере 10 нуклеотидов, по меньшей мере 20 нуклеотидов или по меньшей мере 50 нуклеотидов полной последовательности SEQ ID NO: 10.

Нуклеотидная последовательность, соответствующая полной нуклеотидной последовательности встроенной трансгенной ДНК и достаточно большим сегментам геномной ДНК маиса, фланкирующим оба конца встроенной трансгенной ДНК, приведена в настоящем документе как SEQ ID NO: 10. Частью данной последовательности является встроенная трансгенная ДНК (также именуемая в настоящем документе как трансгенная вставка или встроенная ДНК), приведенная как SEQ ID NO: 9. Нуклеотидная последовательность геномной ДНК маиса, физически соединенная фосфодиэфирной связью и, поэтому, фланкирущая 5′-конец встроенной трансгенной ДНК и содержащая 10 нт трансгенной встроенной ДНК, изложена в SEQ ID NO: 7. Нуклеотидная последовательность геномной ДНК маиса, физически соединенная фосфодиэфирной связью и, поэтому, фланкирующая 3′-конец встроенной трансгенной ДНК и содержащая 10 нт трансгенной встроенной ДНК, изложена в SEQ ID NO: 8.

MON 87427 дополнительно содержит две области, именуемые «соединениями». «Соединение» представляет собой участок, в котором один конец встроенной трансгенной ДНК встроен в геномную ДНК и соединен с ней. Соединение охватывает, то есть перекрывает, участок встроенной трансгенной ДНК и примыкающей фланкирующей геномной ДНК, и как таковое включает в себя точку соединения этих двух элементов в виде одной непрерывной молекулы. Одно соединение находится на 5’-конце встроенной трансгенной ДНК, а другое на 3’-конце встроенной трансгенной ДНК, которые именуют в настоящем документе как 5′- и 3′-соединения, соответственно. «Последовательность соединения» или «область соединения» относятся к последовательности ДНК и/или соответствующей молекуле ДНК соединения. Специалист в данной области может подобрать последовательности соединений в MON 87427, используя SEQ ID NO: 10. Примеры последовательностей соединений в MON 87427 приведены как SEQ ID NO: 1-6. SEQ ID NO: 1 представляет собой 20-нуклеотидную последовательность перекрывающую соединение между геномной ДНК маиса и 5’-концом ДНК трансгенной вставки; SEQ ID NO: 3 представляет собой 60-нуклеотидную последовательность перекрывающую соединение между геномной ДНК маиса и 5’-концом ДНК трансгенной вставки; SEQ ID NO: 5 представляет собой 100-нуклеотидную последовательность перекрывающую соединение между геномной ДНК маиса и 5’-концом ДНК трансгенной вставки. SEQ ID NO: 2 представляет собой 20-нуклеотидную последовательность перекрывающую соединение между геномной ДНК маиса и 3’-концом ДНК трансгенной вставки; SEQ ID NO: 4 представляет собой 60-нуклеотидную последовательность перекрывающую соединение между геномной ДНК маиса и 3’-концом ДНК трансгенной вставки; SEQ ID NO: 6 представляет собой 100-нуклеотидную последовательность перекрывающую соединение между геномной ДНК маиса и 3’-концом ДНК трансгенной вставки. На фигуре 1 проиллюстрировано физическое расположение SEQ ID NO: 1-10 в направлении от 5′ до 3′. Любой сегмент ДНК, полученный из трансгенного MON 87427, который включает SEQ ID NO: 1-6, входит в объем изобретения. Изобретение, таким образом, относится к молекуле ДНК, которая содержит по меньшей мере одну из нуклеотидных последовательностей, указанных в SEQ ID NO: 1-6.

Последовательности соединений события MON 87427 присутствуют как части генома растения, семени или клетки трансгенного события MON 87427 маиса. Идентификация любой одной или нескольких из SEQ ID NO: 1-6 в образце, полученном из растения маиса, семени или части растения, определяет, что ДНК получена из MON 87427 и является диагностическим признаком присутствия в образце ДНК из MON 87427.

Изобретение относится к примерам молекул ДНК, которые можно использовать либо в качестве праймеров, либо в качестве проб для диагностики присутствия ДНК, полученной из растения события MON 87427, в образце. Такие праймеры или пробы специфичны в отношении последовательности нуклеиновой кислоты-мишени и, как таковые, их можно использовать для идентификации последовательностей нуклеиновой кислоты MON 87427 способами по изобретению, описанными в настоящем документе.

«Праймер» является молекулой нуклеиновой кислоты, кот