Пептидные антагонисты пептидных гормонов из семейства кальцитонина (кальцитонин ген-родственных пептидов (cgrp)) и их применение

Пептидные антагонисты пептидных гормонов из семейства кальцитонина (кальцитонин ген-родственных пептидов (cgrp)) и их применение

Иллюстрации

Показать все

Реферат

ПЕРЕКРЕСТНЫЕ ССЫЛКИ НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] Данная заявка испрашивает приоритет на основании предварительной заявки на патент США №61/591236, поданной 26 января 2012 г. под названием «ПЕПТИДНЫЕ АНТАГОНИСТЫ ПЕПТИДНЫХ ГОРМОНОВ ИЗ СЕМЕЙСТВА КАЛЬЦИТОНИНА (КАЛЬЦИТОНИН ГЕН-РОДСТВЕННЫХ ПЕПТИДОВ (CGRP)) И ИХ ПРИМЕНЕНИЕ» ("PEPTIDE ANTAGONISTS OF THE CALCITONIN CGRP FAMILY OF PEPTIDE HORMONES AND THEIR USE"), которая включена в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки.

ПЕРЕЧЕНЬ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТЕЙ

[0002] Настоящая заявка подается вместе с перечнем последовательностей в электронной форме. Перечень последовательностей представлен в виде файла под названием CSOAR001WOSEQLIST.TXT, созданного 24 января 2012 г., размер которого составляет приблизительно 17 КБ. Информация в электронной форме перечня последовательности включена в настоящую заявку во всей полноте посредством ссылки.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Область изобретения

[0003] Варианты реализации настоящего изобретения относятся к пептидным антагонистам пептидных гормонов из семейства кальцитонина/кальцитонин ген родственных пептидов (CT/CGRP) и их терапевтическому применению. Описание предшествующего уровня техники

[0004] Семейство пептидов CT/CGRP включает кальцитонин ген-родственный пептид (CGRP), адреномедуллин (ADM), интермедии (IM), кальцитонин (СТ) и амилин. Биологическое действие указанных пептидов опосредуется связыванием двух близкородственных G-белок-связанных рецепторов II типа - рецептора кальцитонина (CTR) и кальцитонин рецептор-подобного рецептора (CRLR) (Christopoulos, et al. 1999, Mol. Pharmacol. 56:235-242; Poyner et al. 2002 Pharmacol. Rev. 54:233-246). Хотя рецептор кальцитонина является основным медиатором действия кальцитонина, он предпочтительно связывается с амилином, когда рецептор ассоциирован с белком, модифицирующим активность рецептора (RAMP) (см., например, Tilikaratne, et al. 2000, J. Pharmacol. Exp. Ther. 294(2):61-72). Клонирование и исследования функции показали, что CGRP, ADM, IM и, в меньшей степени, амилин взаимодействуют с разными сочетаниями CRLR и трех белков, модифицирующих активность рецептора (RAMP-1, RAMP-2 и RAMP-3); (см., например, McLatchie et al. 1998, Nature 393:333-339 и Roh et al. 2004, JBC 279(8):7264-7274). Фактически для генерирования функциональных рецепторов для кальцитонин ген-родственного пептида (CGRP), адреномедуллина (ADM) и интермедина (IM) требуется совместная экспрессия кальцитонин рецептор-подобного рецептора (CRLR) и белков, модифицирующих активность рецептора (RAMP). Образование гетеродимеров между RAMP и CRLR важно для точного нацеливания на поверхность клетки и фармакологических свойств рецепторов CGRP, ADM и IM. Совместная экспрессия RAMP-1 с CRLR приводит к образованию рецептора CGRP, тогда как совместная экспрессия RAMP-2 и RAMP-3 с CRLR приводит к образованию рецепторов ADM и IM, соответственно. (Miret, et al. 2002, JBC 277(9):6881-6887). Было показано, что IM является неселективным агонистом для всех трех корецепторов RAMP/CRLR.

[0005] Физиологические функции пептидных гормонов в семействе CT/CGRP определяются специфичностью связывания с рецепторами и профилем экспрессии в тканях индивидуальных лигандов и соответствующих им рецепторов, и было показано, что они участвуют в морфогенезе сердечно-сосудистой системы, сенсорной нервной передаче, реакциях воспаления, ноцицептивном поведении и гомеостазе глюкозы (см, например, Hay, et al. 2001, Trends Pharmacol. Sci. 22:57-59; Shindo, et al. 2001, Circulation 104:1964-1971; Zhang et al. 2001, Pain 89:265-273; Salmon et al. (1999) Neuroreport 10:849-854; Salmon, et al. 2001, Nat. Neurosci. 4:357-358; and Mulder, et al. 2000, Am. J. Physiol. 278:E684-E691).

[0006] CGRP (кальцитонин ген-родственный пептид) - хорошо изученный пептид в семействе пептидных гормонов CT/CGRP - представляет собой сенсорный нейропептид с мощным сосудорасширяющим и кардиотоническим действием, как описано в патенте США №4530838, выданном Evans, et al. CGRP присутствует как в центральной, так и в периферической нервной системе и концентрируется в тех областях организма, которые получают сенсорный вход импульсов из заднего рога с ограниченным числом, ассоциированным с вегетативным входом. В головном мозге данный пептид присутствует в ядрах чувствительных и двигательных черепно-мозговых нервов и в телах клеток в гипоталамусе, в предзрительном поле, вентромедиальном таламусе, гиппокампе и подобных областях (Poyner, D. 1992, Pharmac. Ther. 56:23-51).

[0007] Предполагается, что ингибиторы CGPR на уровне рецепторов подходят для лечения патофизиологических состояний, при которых имеет место избыточная активация рецептора CGRP. Некоторые из них включают нейрогенную вазодилатацию, нейрогенное воспаление, мигрень, кластерную головную боль и другие типы головной боли, термическое повреждение, циркуляторный шок, приливы в менопаузе и астму. В частности, было показано, что активация рецептора CGRP участвует в патогенезе головных болей при мигрени (Edvinsson L. 2001, CNS Drugs 15(10):745-53; Williamson, D. J. 2001 Microsc. Res. Tech. 53:167-178.; Grant, A.D. 2002, Brit. J Pharmacol. 135:356-362). Известно, что мигрень характеризуется сильными головными болями, которые возникают при данной патологии. Предполагается, что головная боль, ассоциированная с мигренью, возникает вследствие сильного расширения сосудов головного мозга, сопровождающего приступы мигрени. Содержащие CGRP нервные волокна иннервируют сосуды головного мозга и твердой мозговой оболочки, и считается, что CGRP продлевает расширение сосудов (Moskowitz 1992, Trends Pharmacol. Sci. 13:307-311). Кроме того, уровень CGRP в сыворотке во время мигрени повышен (Goadsby, et al. 1990, Ann. Neurol. 28:183-7), a лечение противомигренозными препаратами возвращает уровень CGRP к норме и ослабляет головную боль (Gallai, et al. 1995, Cephalalgia 15:384-90). Лица, страдающие мигренью, демонстрируют повышенный базальный уровень CGRP по сравнению с контролем (Ashina, et al, 2000, Pain 86(1-2)133-8). Внутривенное введение CGRP приводит к длительным головным болям у лиц, страдающих мигренью (Lassen, et al. 2002, Cephalalgia 22(1):54-61). Таким образом, антагонисты CGRP стали центром внимания последних исследований как способ блокирования цереброваскулярных рецепторов CGRP и, как следствие, блокирования расширения сосудов, вызывающего мигрень.

[0008] Известны как низкомолекулярные, так и пептидные антагонисты рецепторов CGRP. Они включают, например, олцегепант (BIBN4096 BS) для внутривенного введения и телкагепант (MK-0974) для перорального введения, производимые компаниями «Boehringer Ingelheim Pharmaceuticals» и «Merck & Co., Inc.», соответственно. Было показано, что оба указанных низкомолекулярных антагониста CGRP были безопасны, эффективны и хорошо переносились в ранних клинических исследованиях при лечении острой мигрени (см., например, Tepper and Stillman, 2008, Headache 48(8):1259-1268; и Durham and Vause 2010, CNS Drugs 24(7):539-548.) Однако недавно испытания II фазы по оценке применения низкомолекулярного антагониста CGRP - MK-3207 - для предотвращения мигреней, было прекращено компанией «Merck & Co., Inc.» в связи с выявлением бессимптомных аномальных результатов исследований функции печени у некоторых пациентов в продолжении фармакологического испытания I фазы («Merck Updates Status of Clinical Development Programs for Investigational CGRP Receptor Antagonist Treatments for Acute Migraine; MK-3207 Clinical Development Discontinued.» Sep.10, 2009. Merck & Co., Inc. Web. June 1, 2011).

[0009] Известны другие молекулы, конкурирующие за связывание с рецепторами CGRP, - это пептиды, содержащие последовательность CGRP, но лишенные по меньшей мере первых семи аминокислот из последовательности аминокислот CGRP, например, включая, но не ограничиваясь перечисленным, CGRP (8-37), CGRP (28-37), [Tyr°]CGRP (28-37) и CGRP (12-37). Другие антагонисты CGRP включают h-α-CGRP (9-37), h-α-CGRP (10-37), h-α-CGRP (11-37) (Mimeault, M. et al, 1992, J. Med. Chem. 35:2163-2168). Еще некоторые антагонисты CGRP включают [Ala⁹]-h-α-CGRP (8-37), [Ala¹⁰]-h-α-CGRP (8-37), [Ala¹¹]-h-α-CGRP (8-37) и [Ala¹²]-h-α-CGRP (8-37), id. Дополнительные антагонисты CGRP включают h-α-CGRP (19-37), h-α-CGRP (23-37) и ацетил-h-α-CGRP (19-37) (Rovero, P. etal. 1992, Peptides 13:1025-1027).

[0010] Хотя было показано, что ряд пептидных антагонистов рецепторов CGRP эффективно конкурирует с CGRP in vitro, указанные антагонисты не показали аналогичного эффекта в моделях мигренеподобных патологий in vivo.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0011] Неожиданно было обнаружено, что некоторые конкретные аминокислоты в N-концевой части кальцитонин ген-родственного пептида, как раскрыто и описано в настоящей заявке, отвечают за агонистическую активность указанного пептида. Кроме того, замена определенных аминокислот в N-концевой части кальцитонин ген-родственного пептида может приводить к перестройке активности с агонистической на антагонистическую. Более того, было обнаружено, что дополнительные замены или модификации могут приводить к получению дополнительных желаемых свойств у антагонистов согласно настоящему изобретению.

[0012] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения предложен антагонист модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, причем указанный антагонист имеет структуру согласно формуле I:

где X¹ представляет собой N-концевой фрагмент модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида или другого члена семейства пептидов CT/CGRP, содержащий по меньшей мере от пяти до семи остатков аминокислот, где два остатка аминокислот указанного N-концевого фрагмента являются цистеинами (Cys), где концевой остаток является Cys и где остаток, идущий непосредственно перед концевым остатком Cys является заменой остатка треонина (Thr) на не треонин;

Y¹ является центральной структурой, содержащим от 15 до более чем 24, от 15 до 24, от 15 до 22, 18-22 или 19-20 остатков, причем по меньшей мере некоторые остатки центральной структуры способны при физиологических условиях образовывать α-спираль, причем по меньшей мере одна аминокислота центральной структуры является аргинином (Arg) или лизином (Lys), и указанное центральная структура содержит α-спираль; и

Z¹ является модифицированным C-концевым фрагментом модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида или другого члена семейства пептидов CT/CGRP, содержащего от пяти до семи остатков аминокислот с C-концевым амидом, где по меньшей мере один остаток аминокислот указанного C-концевого фрагмента является фенилаланином (Phe), тирозином (Tyr), пролином (Pro) или гидроксипролином (Hyp);

или его фармацевтически приемлемая соль.

[0013] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения предложен антагонист модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, содержащий:

последовательность аминокислот, по меньшей мере на 80% идентичную последовательности аминокислот в соответствии с SEQ ID №:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15, причем указанный пептид сохраняет антагонистическую активность.

[0014] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения предложена фармацевтическая композиция, содержащая фармацевтически приемлемое вспомогательное вещество и антагонист модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, как раскрыто и описано в настоящей заявке.

[0015] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения предложен способ лечения состояния, ассоциированного с аномальным уровнем CGRP, включающий введение антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, как раскрыто и описано в настоящей заявке, субъекту, способ, включающий введение указанному субъекту эффективного количества антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, как раскрыто и описано в настоящей заявке.

[0016] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения предложен антагонист модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющий структуру, выбираемую из следующих последовательностей пептидов, перечисленных в таблице 1.

[0017] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения предложен способ доставки терапевтического агента в клетку. Терапевтический агент связан с антагонистом модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, как раскрыто и описано в настоящей заявке, который селективно связывается с членом семейства рецепторов CGRP.

[0018] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения предложен конъюгат, который содержит терапевтический агент, связанный с антагонистом кальцитонин ген-родственного пептида, который раскрывается и описан в настоящей заявке, и который селективно связывается с членом семейства рецепторов CGRP. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения предложен способ идентификации рецептора CGRP, связывающегося с лигандом, путем получения антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, связанного с рецептором CGRP, получения тестируемого соединения или библиотеки тестируемых соединений и идентификации соединений, которые способны вызывать диссоциацию антагониста кальцитонин ген-родственного пептида от рецептора CGRP. Такие соединения, идентифицированные посредством указанного способа, можно в дальнейшем подвергать скринингу на другие рецепторы CGRP и рецептор CGRP-связывающие агенты для выявления лигандов, селективно связывающих рецепторы CGRP.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ПРЕДПОЧТИТЕЛЬНЫХ ВАРИАНТОВ РЕАЛИЗАЦИИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0019] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения предложен антагонист модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, причем указанный антагонист имеет структуру согласно формуле I:

где X¹ представляет собой модифицированный N-концевой фрагмент кальцитонин ген-родственного пептида или другого члена семейства пептидов CT/CGRP, содержащий по меньшей мере от пяти до семи остатков аминокислот, где два остатка аминокислот указанного N-концевого фрагмента являются цистеинами (Cys), где C-концевой остаток является Cys и где остаток, идущий непосредственно перед C-концевым остатком Cys является заменой остатка треонина (Thr) на не треонин;

Y¹ является центральной структурой, причем по меньшей мере одна аминокислота центральной структуры является аргинином (Arg) или лизином (Lys), и указанная центральная структура содержит α-спираль; и

Z¹ является модифицированным C-концевым фрагментом кальцитонин ген-родственного пептида или другого члена семейства пептидов CT/CGRP, содержащим от пяти до семи остатков аминокислот с C-концевым амидом, где по меньшей мере один остаток аминокислот указанного C-концевого фрагмента является фенилаланином (Phe), тирозином (Tyr), пролином (Pro) или гидроксипролином (Hyp);

или его фармацевтически приемлемая соль.

[0020] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения X₁ характеризуется тем, что остаток, который идет раньше C-концевого цистеина на четыре, пять или шесть положений аминокислот, также является цистеином, так что два вышеуказанных цистеина могут образовать дисульфидную связь. Остатки между двумя остатками Cys, участвующими в образовании дисульфидной связи, не ограничены по последовательности за исключением того, что остаток, идущий перед остатком Cys в C-концевом фрагменте не должен представлять собой Thr, как упоминалось выше, и что среди 7 C-концевых остатков фрагмента X1 может быть не более двух цистеинов. Вышеуказанная дисульфидная связь стабилизирует структуру X¹, облегчая как образование альфа-спирали в Y¹, описанной ниже, так и связывание X¹ с трансмембранным компонентом целевого рецептора при конкурировании с CGRP.

[0021] Введение остатка, отличного от Thr в положении непосредственно между N-концом и вторым цистеином во фрагменте X¹, описанном выше, приводит к утрате активирующей активности указанной молекулы при взаимодействии с рецептором CGRP или членом семейства рецепторов CT/CGRP по сравнению с молекулой дикого типа, которая содержит Thr в указанном положении, но может не влиять на связывание с рецептором. Как следствие, такие замены приводят к получению молекулы, которая может занимать рецептор, но которая выступает в роли антагониста, а не активирует путь сигнальной трансдукции, делая рецептор недоступным для связывания с агонистами сигнальной трансдукции.

[0022] Добавление остатков на N-конце к X¹ может не оказывать влияния на активность антагониста согласно некоторым вариантам реализации изобретения. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения добавление остатков на N-конце к X¹, например, 864-ого остатка последовательности XTENS, содержащей Ala, Glu, Gly, Pro, Ser и Thr, может влиять на стабильность лекарственного средства (Schellenberger et al., 2009, Nature Biotechnology 27(12):1186-1192). Согласно некоторым вариантам реализации изобретения добавление остатков на N-конце может увеличивать время полувыведения вводимого лекарственного средства. Указанные изменения рассматриваются в настоящей заявке; специалист в данной области техники должен знать, как это можно сделать.

[0023] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения антагонист, раскрываемый в настоящей заявке, содержит центральную структуру Y¹, содержащую от 15 до 22 остатков. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения антагонист, раскрываемый в настоящей заявке, содержит центральную структуру Y¹, содержащую более 24, от 15 до 24, от 15 до 22, 18-22, или 19-20 остатков, причем по меньшей мере некоторые остатки центральной структуры способны при физиологических условиях образовывать α-спираль. Четвертый остаток от N-конца данной центральной структуры часто является положительно заряженным остатком, либо аргинином (Arg), либо лизином (Lys). Восемнадцатый остаток часто является аргинином. Длина центральной структуры ограничена не количеством остатков самим по себе, а пространственными соображениями, которые требуют, чтобы X¹ и Z¹ располагались так, чтобы они могли взаимодействовать с целевым рецептором на поверхности мембраны клетки, и на внеклеточном домене, соответственно, при конкурировании с CGRP.

[0024] Z¹ является модифицированным C-концевым фрагментом модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида или другого члена семейства пептидов CT/CGRP, содержащим от пяти до семи остатков аминокислот или более, с C-концевым амидом, где по меньшей мере одна аминокислота указанного C-концевого фрагмента является фенилаланином (Phe), пролином (Pro), тирозином (Tyr) или гидроксипролином (Hyp). Как и описанный выше Y¹, Z¹ ограничен не по последовательности, а функциональными требованиями. В случае Z¹, для которого требуется, чтобы он взаимодействовал с целевым рецептором в сайте в его внеклеточном домене, как в случае связывания антагониста с рецептором CGRP, X¹ располагается так, чтобы взаимодействовать с рецептором на поверхности клетки, a Z¹ взаимодействует с частью RAMP рецептора.

[0025] Целый пептид может быть доставлен один или в виде его фармацевтически приемлемой соли.

[0026] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения предложен антагонист кальцитонин ген-родственного пептида, содержащий:

последовательность аминокислот, идентичную по меньшей мере на 80% последовательности аминокислот в соответствии с SEQ ID №:1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 или 15, причем указанный пептид сохраняет антагонистическую активность.

[0027] Некоторые варианты реализации изобретения включают антагонист с центральной структурой из 18-22 остатков.

[0028] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, N-концевой фрагмент содержит:

Х¹¹-Х¹²-Х¹³-Х¹⁴-Х¹⁵-Х¹⁶-Х¹⁷ (SEQ ID №:16),

где X¹¹ может быть выбран из группы, состоящей из аланина (Ala), цистеина (Cys), глицина (Gly), изолейцина (Ile), лейцина (Leu), метионина (Met), фенилаланина (Phe), пролина (Pro), триптофана (Trp) и валина (Val);

X¹² может быть выбран из группы, состоящей из цистеина (Cys), серина (Ser и тирозина (Tyr);

X¹³ может быть выбран из группы, состоящей из аргинина (Arg), аспарагина (Asn), аспарагиновой кислоты (Asp), цистеина (Cys), глутаминовой кислоты (Glu), глутамина (Gln), гистидина (His), лизина (Lys), серина (Ser), треонина (Thr), тирозина (Tyr) и валина (Val);

X¹⁴ может быть выбран из группы, состоящей из аргинина (Arg), аспарагина (Asn), аспарагиновой кислоты (Asp), глутаминовой кислоты (Glu), глутамина (Gln), гистидина (His), лейцина (Leu), лизина (Lys), фенилаланина (Phe), серина (Ser), треонина (Thr), тирозина (Tyr) и валина (Val);

X¹⁵ может быть выбран из группы, состоящей из аланина (Ala), глицина (Gly), изолейцина (Ile), лейцина (Leu), метионина (Met), фенилаланина (Phe), серина (Ser), триптофана (Typ) и валина (Val);

X¹⁶ может быть выбран из группы, состоящей из аланина (Ala), глицина (Gly), изолейцина (Ile), лейцина (Leu), метионина (Met), фенилаланина (Phe), серина (Ser), триптофана (Typ) и валина (Val); и

X¹⁷ представляет собой цистеин (Cys), и он способен образовывать дисульфидный мостик с остатком цистеина в X¹¹, X¹² или X¹³; и

с тем дополнительным ограничением, что только два остатка X¹ (то есть, X¹⁷ и только один из X¹¹, X¹² и X¹³) являются остатками цистеина.

[0029] Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, X¹¹ выбран из группы, состоящей из Ala, Cys, и Gly. Согласно некоторым вариантам указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, X¹² выбран из группы, состоящей из Cys и Ser, с оговоркой, что только один из X¹¹ и X¹² может быть Cys. Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, X¹³ выбран из группы, состоящей из Arg, Asn, Asp и Val. Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, X¹⁴ выбран из группы, состоящей из Leu, Phe и Thr. Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, X¹⁵ выбран из группы, состоящей из Ala, Gly и Ser. Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, X¹⁵ выбран из группы, состоящей из Ala, Ile, Leu, Ser и Val.

[0030] Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, Х¹¹-Х¹²-Х¹³-Х¹⁴-Х¹⁵-Х¹⁶-Х¹⁷ выбран из группы, состоящей из

[0031] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения один или более остатков присоединены на N-конце к X¹¹, в результате чего образуется полипептид с ответвлением из остатков аминокислот на N-конце после X¹. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения данное ответвление влияет на стабильность указанного антагониста после введения.

[0032] Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, центральная структура содержит фрагмент кальцитонина человека или лососевых рыб. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный фрагмент кальцитонина человека или лососевых рыб содержит от 18 до 21 аминокислот. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный фрагмент кальцитонина человека или лососевых рыб содержит от 18 до 20 аминокислот. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, Y¹ содержит от 19 до 20 аминокислот. Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, Y¹ представляет собой последовательность -Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn- (SEQ ID №:34) или -Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn- (SEQ ID №:35). Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, Y¹ на 95% идентичен последовательности -Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn- (SEQ ID №:34) или -Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn- (SEQ ID №:35).

[0033] Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, центральная структура содержит фрагмент кальцитонина любого из целого ряда видов. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения Y¹ может быть на 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% или 95% идентичен последовательности Y¹ в последовательности SEQ ID №:34 (Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-). Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, Y¹ может представлять собой последовательность Согласно некоторым вариантам реализации изобретения Y¹ может быть на 60% или более процентов идентичен любой последовательности Y¹ из только что упомянутой последовательности.

[0034] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения предложены полипептиды Y¹, которые по меньшей мере приблизительно на 60%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 61%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 62%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 63%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 64%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 65%, качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 66%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 67%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 68%, качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 69%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 70%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 71%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 72%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 73%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 74%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 75%, качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 76%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 77%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 78%, качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 79%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 80%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 81%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 82%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 83%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 84%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 85%, качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 86%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 87%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 88%, качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 89%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 90%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 91%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 92%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 93%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 94%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 95%, качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 96%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 97%, в качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 98%, качестве альтернативы по меньшей мере приблизительно на 99% идентичны последовательности фрагмента полипептида Y¹ из упомянутой выше последовательности.

[0035] Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, Z¹ содержит последовательность Z¹¹-Z¹²-Z¹³-Z¹⁴-Z¹⁵-Z¹⁶ (SEQ ID №:45), где

Z¹¹ выбран из группы, состоящей из Ala, Gly, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Trp и Val;

Z¹² выбран из группы, состоящей из Ala, Gly, lie, Leu, Met, Phe, Pro, Trp, и Val;

Z¹³ выбран из группы, состоящей из серина (Ser), и тирозина (Tyr);

Z¹⁴ выбран из группы, состоящей из Arg, Asn, Asp, Glu, Gln, His, Lys, Ser, Thr и Tyr;

Z¹⁵ выбран из группы, состоящей из Ala, Gly, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Trp и Val; и

Z¹⁶ выбран из группы, состоящей из Ala, Gly, Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Trp, и Val. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения Z¹¹ является Val. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения Z¹² является Gly. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения Z¹³ является Ser. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения Z¹⁴ является Lys. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения Z¹⁵ является Ala. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения Z¹⁶ является Phe. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения Z¹¹-Z¹²-Z¹³-Z¹⁴-Z¹⁵-Z¹⁶ является последовательностью -Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe, такой, что С-конец указанного полипептида является карбоксильной группой (SEQ ID №:46) или последовательностью -Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH₂, такой, что С-конец указанного полипептида является карбоксамидной группой (SEQ ID №:47).

[0036] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения C-концевой остаток Z¹ является фенилаланином, тирозином, пролином или гидроксипролином. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения C-концевой остаток Z¹ является фенилаланином.

[0037] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения Z¹ содержит по меньшей мере один остаток Phe.

[0038] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения С-конец Z¹ модифицирован таким образом, что он связан амидированной карбоксильной группой (-C(=O)NH₂).

[0039] Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, X¹ выбран из группы, состоящей из Y¹ может быть последовательностью -Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn- (SEQ ID №:34) или -Val-Leu-Gly-Lys-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Lys-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn- (SEQ ID №:35); и Z¹ может представлять собой последовательность -Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe, содержащей карбоксильный конец (SEQ ID №:46) или -Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH₂ (SEQ ID №:47).

[0040] Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, указанный антагонист содержит от 28 до 35 остатков аминокислот, от 31 до 37 остатков аминокислот, от 31 до 33 остатков аминокислот или 32 остатка аминокислот.

[0041] Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, указанный антагонист содержит мотив -Ala-Cys-Asp-Thr-Ala-X¹⁶-Cys- (SEQ ID №:49), в котором X¹⁶ представляет собой остаток любой аминокислоты, кроме Thr.

[0042] Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, указанный антагонист содержит первый пептидный фрагмент, содержащий семь или менее остатков аминокислот, причем указанный первый пептидный фрагмент содержит последовательность из модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида. Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, указанный антагонист содержит второй пептидный фрагмент, содержащий семь или менее остатков аминокислот, причем указанные первый и второй пептидные фрагменты не являются смежными, и каждый из них независимо содержит последовательность, которая может быть модифицирована из кальцитонин ген-родственного пептида. Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, указанный антагонист содержит третий пептидный фрагмент, содержащий 20 или менее остатков аминокислот, причем указанный третий пептидный фрагмент содержит последовательность из кальцитонина лососевых рыб. Согласно некоторым вариантам реализации указанного антагониста модифицированного кальцитонин ген-родственного пептида, имеющего структуру в соответствии с формулой I, второй и третий пептидные фрагменты являются смежными.

[0043] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный антагонист имеет структуру, выбираемую из перечня структур, включающего или является их фармацевтически приемлемой солью. Подходящий антагонист может представлять собой отдельное соединение из приведенного выше списка.

[0044] Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный антагонист имеет структуру NH₂-Ala-Cys-Asp-Thr-Ala-Ala-Cys-Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH₂ (SEQ ID №:1) или является ее фармацевтически приемлемой солью. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный антагонист имеет структуру NH₂-Ala-Cys-Asp-Thr-Ala-Ser-Cys-Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH₂ (SEQ ID №:2) или является ее фармацевтически приемлемой солью. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный антагонист имеет структуру NH₂-Ala-Cys-Asp-Thr-Ala-Val-Cys-Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH₂ (SEQ ID №:3) или является ее фармацевтически приемлемой солью. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный антагонист имеет структуру NH₂-Ala-Cys-Asn-Thr-Ala-Ala-Cys-Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH₂ (SEQ ID №:4) или является ее фармацевтически приемлемой солью. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный антагонист имеет структуру NH₂-Ala-Cys-Val-Leu-Gly-Ala-Cys-Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH₂ (SEQ ID №:5) или является ее фармацевтически приемлемой солью. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный антагонист имеет структуру NH₂-Ala-Cys-Arg-Phe-Gly-Ala-Cys-Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH₂ (SEQ ID №:6) или является ее фармацевтически приемлемой солью. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный антагонист имеет структуру NH₂-Ala-Cys-Asn-Leu-Ser-Ala-Cys-Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH₂ (SEQ ID №:7) или является ее фармацевтически приемлемой солью. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный антагонист имеет структуру NH₂-Cys-Ser-Asn-Thr-Ala-Ala-Cys-Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH₂ (SEQ ID №:8) или является ее фармацевтически приемлемой солью. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный антагонист имеет структуру NH₂-Ala-Cys-Asp-Thr-Ala-Leu-Cys-Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH₂ (SEQ ID №:9) или является ее фармацевтически приемлемой солью. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный антагонист имеет структуру NH₂-Ala-Cys-Asp-Thr-Ala-Ile-Cys-Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH₂ (SEQ ID №:10) или является ее фармацевтически приемлемой солью. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный антагонист имеет структуру NH₂-Ala-Cys-Asn-Leu-Ser-Val-Cys-Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH₂ (SEQ ID №:11) или является ее фармацевтически приемлемой солью. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный антагонист имеет структуру NH₂-Cys-Ser-Asn-Thr-Ala-Val-Cys-Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Lys-Ala-Phe-NH₂ (SEQ ID №:12) или является ее фармацевтически приемлемой солью. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный антагонист имеет структуру или NH₂-Ala-Cys-Asn-Leu-Ser-Ala-Cys-Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH₂ (SEQ ID №:13) или является ее фармацевтически приемлемой солью. Согласно некоторым вариантам реализации изобретения указанный антагонист имеет структуру Ala-Cys-Val-Leu-Gly-Ala-Cys-Val-Leu-Gly-Arg-Leu-Ser-Gln-Glu-Leu-His-Arg-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Val-Asp-