Способ усиления антителозависимой клеточной цитотоксичности

Способ усиления антителозависимой клеточной цитотоксичности

Иллюстрации

Показать все

Реферат

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА СВЯЗАННУЮ ЗАЯВКУ

[0001] По данной заявке испрашивается приоритет по U.S.S.N. 61/326406, поданной 21 апреля 2010 года, содержание которой включено в данный документ путем ссылки в полном объеме.

ОБЛАСТЬ РАСКРЫТИЯ

[0002] Варианты осуществления по настоящему раскрытию относятся к способам усиления цитотоксичности терапевтических моноклональных антител для лечения рака и других клеточных заболеваний.

ПРЕДПОСЫЛКИ РАСКРЫТИЯ

[0003] Клиническая эффективность моноклональных антител (MAb) продемонстрирована при различных злокачественных новообразованиях. Сейчас моноклональные антитела общеупотребительны в качестве терапевтических средств для лечения и/или предотвращения рака, аутоиммунных заболеваний, тромбоза, воспаления и инфекции. Однако имеют место некоторые случаи низкой активности антител, способствующей недостаточным терапевтическим эффектам, оказываемым на рак, аутоиммунные заболевания, воспаление и инфекцию. Такое недостаточное действие лекарственных средств может вести к увеличенным дозировкам и расходам, необходимым для лечения. В этих условиях усиление терапевтической активности моноклональных антител является важной целью.

[0004] Терапевтические моноклональные антитела предпочтительно способны к антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC), в частности, когда их используют в лечении рака или других клеточных заболеваний. То есть, терапевтические MAb предпочтительно проявляют цитотоксические эффекты против своих клеток-мишеней, таких как клетки-мишени рака или лимфоциты. Такие антитела связываются с антигенами на поверхности клеток-мишеней, через их Fc домен, с Fc рецепторами на поверхности эффекторных клеток, таких как естественные киллерные клетки и макрофаги, тем самым вызывая повреждение клеток-мишеней. Этот механизм представляет собой антителозависимую клеточную цитотоксичность (ADCC). Альтернативно, антитела повреждают клетки посредством активации комплемента через Fc домен. Это называют комплемент-зависимой цитотоксичностью (CDC). Такие активности антител, проявляемые через Fc домены, называют эффекторными активностями.

[0005] Имели место различные попытки усилить эффекторную функцию антител с целью усиления их терапевтической активности. Некоторые типы эффекторных клеток, такие как моноциты, нейтрофилы и естественные киллерные (NK) клетки, имеют поверхностные рецепторы, которые связывают Fc часть иммуноглобулинов. Эффекторные клетки для индукции ADCC против клетки-мишени включают лейкоциты, макрофаги, моноциты, активированные нейтрофилы и, возможно, активированные естественные киллерные (NK) клетки и эозинофилы человека. Предпочтительные эффекторные клетки экспрессируют FcγRI и включают, например, моноциты и активированные нейтрофилы. Обнаружено, что экспрессия FcγRI подлежит повышающей регуляции посредством интерферона гамма (IFN-γ). Эта усиленная экспрессия увеличивает цитотоксическую активность моноцитов и нейтрофилов против клеток-мишеней.

[0006] Fc рецептор представляет собой белок, найденный на поверхности определенных клеток, включая естественные киллерные клетки, макрофаги, нейтрофилы и тучные клетки, которые участвуют в защитных функциях иммунной системы. Fc рецепторы связываются с антителами, которые прикреплены к инфицированным клеткам, инвазивным патогенам или клеткам рака. Их активность стимулирует фагоцитарные или цитотоксические клетки для уничтожения микробов, инфицированных клеток или клеток рака посредством опосредованного антителами фагоцитоза или ADCC. Некоторые вирусы, такие как флавивирусы, используют Fc рецепторы, которые помогают им инфицировать клетки посредством механизма, известного как антителозависимое усиление инфекции. Fc рецепторы участвуют в процессе ADCC. Например, во время ADCC FcγRIII рецепторы на поверхности естественных киллерных (NK) клеток стимулируют естественные киллерные клетки для высвобождения цитотоксических молекул из их гранул для того, чтобы убивать клетки-мишени, покрытые антителами.

[0007] Существует несколько различных типов Fc рецепторов, которые классифицируют, основываясь на типе антитела, которое они распознают. Одна группа Fc рецепторов IgG, FcγR, принадлежат к суперсемейству иммуноглобулинов и представляют собой наиболее важные Fc рецепторы для индукции фагоцитоза опсонизированных (покрытых) микробов. Они экспрессированы на лейкоцитах и состоят из 3 отдельных классов: FcγRI, FcγRII (FcγRIIa и FcγRIIb), FcγRIII (FcγRIIIa и FcγRIIIb). Рецепторы также различают по их аффинности к IgG. FcγRI проявляет высокую аффинность к IgG, тогда как FcγRII и FcγRIII проявляют более слабую аффинность. FcγRIIa и FcγRIIIa представляют собой активирующие FcγR, которые экспрессированы на моноцитах/макрофагах и моноцитах/макрофагах/естественных киллерных клетках, соответственно, и могут запускать цитотоксичность мишеней человека.

[0008] Идентифицированы два функциональных полиморфизма генов FcγR, FcγR3a-V158F и FcγR2a-H131R, которые оказывают влияние на связывание с IgG, изменение функции ADCC и воздействие на клинический ответ опухолей. Полиморфизм FcγR2a-H131R расположен во внеклеточном лиганд-связывающем домене. Он содержит или гистидиновый (H) или аргининовый (R) аллель в аминокислотном положении 131. Генотип FcγR2a-131H/H обладает более высокой аффинностью к IgG2 человека в анализе in vitro. Полиморфизм FcγR3a-V158F кодирует или валин (V) или фенилаланин (F) в аминокислотном положении 158. Исследования in vitro показали, что аллель V в FcγR3a обладает более высокой аффинностью связывания с IgG1 человека, чем аллель F, что указывает на то, что иммунные эффекторные клетки, несущие аллель V в FcγR3a, опосредуют ADCC более эффективно (Zhang et al. J. of Clinical Oncology, 25: 3712-3718, 2007).

[0009] Существует дополнительная необходимость в улучшении терапевтической эффективности моноклональных антител. Существует необходимость усилить эффекторную функцию антител, например, усиливающую функцию ADCC и/или CDC антител.

[0010] На всем протяжении этого описания, включая указанное выше описание связанной области, любые и все общедоступные документы, описанные в настоящем документе, включая любые и все патенты США, конкретно включены посредством ссылки в настоящий документ в полном объеме. Указанное выше описание связанной области не предназначено в качестве какого-либо признания того, что любые документы, описанные в ней, включая рассматриваемые патентные заявки США, составляют известный уровень техники для вариантов осуществления согласно раскрытию изобретения. Кроме того, в настоящем документе описание любых преимуществ, связанных с описанными продуктами, способами и/или аппаратом, не предназначено для того, чтобы ограничивать раскрытые варианты осуществления. В действительности, варианты осуществления раскрытия изобретения могут включать определенные признаки описанных продуктов, способов и/или устройства и при этом не обладать их описанными недостатками.

КРАТКОЕ ИЗЛОЖЕНИЕ РАСКРЫТИЯ

[0011] Настоящее изобретение относится к способам усиления ADCC активности терапевтических антител при лечении клеточных заболеваний, таких как рак и опосредованные иммунными клетками заболевания или нарушения. В целом, ADCC активность терапевтических антител можно усиливать посредством совместного введения терапевтического антитела с усиливающей ADCC молекулой, с формулой I:

[0012], где

[0013] Y представляет собой кольцо арила, замещенное C(=O)R8, и где указанное кольцо арила необязательно дополнительно замещено одним или более заместителями, независимо выбранными из F, Cl, CF3, CF3O-, HCF2O-, C1-C6 алкила, C1-C6 гетероалкила и ArO-;

[0014] R1, R3 и R4 независимо выбраны из H, C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, C1-C6 гетероалкила, C3-C6 циклоалкила, C3-C6 циклоалкенила, гетероциклоалкила с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы, арила и 5-7 членного гетероарила, где указанный алкил, алкенил, алкинил, гетероалкил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, OR6, NR6R7, C(=O)R6, C(=O)OR6, OC(=O)R6, C(=O)NR6R7, (C1-C6 алкил)амино, CH3OCH2O-, R6OC(=O)CH=CH-, NR6SO2R7, SR6 и SO2R6;

[0015] или R3 и R4 вместе с атомом, к которому они прикреплены, образуют насыщенное или частично ненасыщенное C3-C6 карбоциклическое кольцо, где указанное карбоциклическое кольцо необязательно замещено одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, OR6, NR6R7, C(=O)R6, C(=O)OR6, OC(=O)R6, C(=O)NR6R7, (C1-C6 алкил)амино, CH3OCH2O-, R6OC(=O)CH=CH-, NR6SO2R7, SR6 и SO2R6;

[0016] R2 и R8 независимо выбраны из H, OR6, NR6R7, C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, C1-C6 гетероалкила, C3-C6 циклоалкила, C3-C6 циклоалкенила, гетероциклоалкила с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы, арила и 5-7 членного гетероарила, где указанный алкил, алкенил, алкинил, гетероалкил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, OR6, NR6R7, C(=O)R6, C(=O)OR6, OC(=O)R6, C(=O)NR6R7, (C1-C6 алкил)амино, CH3OCH2O-, R6OC(=O)CH=CH-, NR6SO2R7, SR6 и SO2R6;

[0017] R5a, R5b и R5c независимо выбраны из H, F, Cl, Br, I, OMe, CH3, CH2F, CHF2 и CF3 и

[0018] R6 и R7 независимо выбраны из H, C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, C1-C6 гетероалкила, C3-C6 циклоалкила, C3-C6 циклоалкенила, гетероциклоалкила с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы, арила и 5-7 членного гетероарила, где указанный алкил, алкенил, алкинил, гетероалкил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, O-алкила, NH2, -C(=O)алкила, C(=O)H, C(=O)OH, C(=O)Oалкила, OC(=O)H, OC(=O)алкила, (C1-C6 алкил)амино, (C1-C6 алкил)2амино CH3OCH2O-, и алкил-OC(=O)CH=CH-,

[0019] или R6 и R7 вместе с атомом, к которому они прикреплены, формируют насыщенное или частично ненасыщенное гетероциклическое кольцо с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы, где указанное гетероциклическое кольцо необязательно замещено одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, OR6, NH2, -C(=O)алкил, C(=O)H, C(=O)OH, C(=O)Oалкил, OC(=O)H, OC(=O)алкил, (C1-C6 алкил)амино, (C1-C6 алкил)2амино CH3OCH2O-, и алкил-OC(=O)CH=CH-.

[0020] Изобретение также относится к метаболиту, сольвату, таутомеру или фармацевтически приемлемой соли соединения согласно формуле I.

[0021] Например, R2 представляет собой OR6.

[0022] Например, R6 представляет собой C1-C6 алкил, такой как этил.

[0023] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R2 представляет собой NR6R7.

[0024] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R2 представляет собой NR6R7 и R6 и R7 независимо выбраны из H, C1-C6 алкила и C1-C6 гетероалкила, такого как, например, R6 и R7 представляют собой H, этил, пропил или CH2CH2OCH3.

[0025] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где Y представляет собой фенил.

[0026] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R8 выбран из OR6, NR6R7 и гетероциклоалкила с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы.

[0027] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R8 представляет собой гетероциклоалкил с 5 или 6 кольцевыми атомами, где один атом выбран из азота, кислорода и серы. Например, R8 представляет собой пирролидин.

[0028] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R6 и R7 независимо выбраны из H и C1-C6 алкила.

[0029] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где Y представляет собой

[0030] В некоторых соединениях по изобретению каждый из R1, R3, R4, R5a, R5b и R5c представляет собой водород.

[0031] Например, изобретение относится к соединению, выбранному из

[0032] (1E,4E)-этил-2-амино-8-(4-пирролидин-1-карбонил)фенил)-3H-бензо[b]азепин-4-карбоксилата;

[0033] (1E,4E)-этил-2-амино-8-(4-(метоксикарбонил)фенил)-3H-бензо[b]азепин-4-карбоксилата;

[0034] (1E,4E)-этил-2-амино-8-(4-(метилкарбамоил)фенил)-3H-бензо[b]азепин-4-карбоксилата;

[0035] (1E,4E)-2-амино-N,N-дипропил-8-(4-(пирролидин-1-карбонил)фенил)-3H-бензо[b]азепин-4-карбоксамида

[0036] и их фармацевтически приемлемых солей.

[0037] В предпочтительном варианте осуществления усиливающая ADCC молекула по настоящему изобретению представляет собой {2-амино-8-[4-(пирролидинилкарбонил)фенил]-(3H-бензо[f]азепин-4-ил)}-N,N-дипропилкарбоксамид, со следующей химической структурой:

[0038] Усиливающая ADCC молекула усиливает или улучшает эффекторную активность антитела. Таким образом, независимо от антигенсвязывающей активности, способы по настоящему изобретению могут увеличивать терапевтический эффект антитела посредством усиления эффекторной активности, проявляемой антителом. Усиливающая ADCC молекула может улучать ADCC посредством активации естественных киллерных клеток или клеток CD56+ или непосредственно или опосредованно. Дополнительно, наличие более высокой доли активированных естественных киллерных клеток может помочь преодолеть слабую ADCC, наблюдаемую в подгруппе пациентов, которые имеют Fc рецепторы с низкой аффинностью.

[0039] Терапевтические MAb, способные к ADCC, являются предпочтительными. Они включают ритуксимаб против CD20 (Ритуксан®), трастузумаб против Her2 (Герцептин®), цетуксимаб против EGFR (Эрбитукс®) и панитумумаб против EGFR (Вектибикс®).

[0040] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы увеличения ADCC у субъекта, получающего лечение терапевтическими моноклональными антителами. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC. Альтернативно, способ по настоящему изобретению включает введение субъекту терапевтически эффективного количества терапевтического антитела, усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC, и одного или более химиотерапевтических средств.

[0041] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы усиления уничтожения NK-чувствительных клеток-мишеней. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения уничтожения NK-чувствительных клеток-мишеней.

[0042] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы усиления эффекторной активности естественных киллерных клеток или клеток CD56+. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения эффекторной активности естественных киллерных клеток или клеток CD56+.

[0043] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы усиления ADCC в клетках пациентов. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC. Субъекты, которые в ином случае могут не быть хорошими терапевтическими кандидатами для терапии MAb, поскольку они экспрессируют только низкие уровни опухолевых антигенов, против которых направлено моноклональное антитело, или поскольку они имеют однонуклеотидные полиморфизмы в их Fc рецепторах, которые снижают их аффинность к моноклональному антителу.

[0044] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы усиления терапевтической эффективности моноклональных антител. Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы увеличения эффективности терапевтического моноклонального антитела. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение субъекту терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC. Альтернативно, способ по настоящему изобретению включает введение субъекту терапевтически эффективного количества терапевтического антитела, усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC, и одного или более химиотерапевтических средств.

[0045] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы увеличения клинической эффективности терапевтического моноклонального антитела против ErbB2, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против ErbB2 в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. Альтернативно, способ по настоящему изобретению включает введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтического моноклонального антитела против ErbB2 в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению и одним или более химиотерапевтическими средствами. В предпочтительных вариантах осуществления моноклональным антителом против ErbB2 является трастузумаб.

[0046] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы лечения рака молочной железы, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против ErbB2 в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. Альтернативно, способ по настоящему изобретению включает введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтического моноклонального антитела против ErbB2 в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению и одним или более химиотерапевтическими средствами. В предпочтительных вариантах осуществления моноклональным антителом против ErbB2 является трастузумаб.

[0047] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы увеличения клинической эффективности терапевтического моноклонального антитела против CD20, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против CD20 в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. В предпочтительных вариантах осуществления моноклональным антителом против CD20 является ритуксимаб.

[0048] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы лечения B-клеточного нарушения, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против CD20 в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. В предпочтительных вариантах осуществления моноклональным антителом против CD20 является ритуксимаб. В некоторых вариантах осуществления B-клеточным нарушением является лимфома, лейкоз или ревматоидный артрит.

[0049] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы увеличения клинической эффективности терапевтического моноклонального антитела против EGFR, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против EGFR в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. Способы по настоящему изобретению также включают введение нуждающемуся в этом субъекту терапевтического моноклонального антитела против EGFR в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению и одним или более химиотерапевтическими средствами. В предпочтительных вариантах осуществления моноклональным антителом против EGFR является панитумумаб, цетуксимаб, нецитумумаб или залутумумаб.

[0050] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы лечения EGFR-экспрессирующей метастатической колоректальной карциномы, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против EGFR в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы лечения EGFR-экспрессирующего рака головы и шеи, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против EGFR в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. Настоящее изобретение также относится к способам лечения EGFR-экспрессирующей метастатической колоректальной карциномы, включающим введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против EGFR в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению и одним или более химиотерапевтическими средствами. Согласно некоторым вариантам осуществления, также предоставлены способы лечения EGFR-экспрессирующего рака головы и шеи, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела против EGFR в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению и одним или более химиотерапевтическими средствами. В предпочтительных вариантах осуществления моноклональным антителом против EGFR является панитумумаб, цетуксимаб, нецитумумаб или залутумумаб.

[0051] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы лечения мутантного колоректального рака KRAS, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтического моноклонального антитела в комбинации с усиливающей ADCC молекулой по настоящему изобретению. В предпочтительных вариантах осуществления терапевтическим моноклональным антителом является панитумумаб или цетуксимаб.

[0052] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы лечения рака, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC. Настоящее изобретение также относится к способам лечения рака, включающим введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества терапевтического антитела, усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC, и одного или более химиотерапевтических средств.

[0053] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы лечения B-клеточного злокачественного новообразования или B-клеточного нарушения, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC.

[0054] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы лечения аутоиммунного нарушения, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC. В некоторых вариантах осуществления аутоиммунное нарушение представляет собой ревматоидный артрит.

[0055] Согласно некоторым вариантам осуществления, предоставлены способы избегания рецидива опухоли у субъекта, включающие введение субъекту, нуждающемуся в этом, терапевтически эффективного количества терапевтического антитела и усиливающей ADCC молекулы в количестве, достаточном для увеличения ADCC.

[0056] В некоторых вариантах осуществления терапевтические антитела имеют часть Fc IgG1 или IgG3 мыши, человека или нечеловеческого примата. В некоторых вариантах осуществления терапевтическое антитело представляет собой химерное человеческое или гуманизированное антитело или его фрагмент.

[0057] В настоящем изобретении предоставлены способы выбора подходящего терапевтического режима для субъекта, нуждающегося в этом, которые включают определение SNP в FcgR3a в аминокислотном положении 158, где гомозиготный валин в аминокислотном положении 158 FcgR3a указывает, что субъекту предсказан более выраженный ответ на терапевтический режим, чем субъекту без гомозиготного валина в аминокислотном положении 158 в FcgR3a.

[0058] В этом изобретении также предоставлены способы выбора подходящего терапевтического режима для субъекта, нуждающегося в этом, которые включают определение SNP в FcgR2a в аминокислотном положении 131, где гомозиготный гистидин в аминокислотном положении 131 в FcgR2a указывает, что субъекту предсказан более выраженный ответ на терапевтический режим, чем субъекту без гомозиготного гистидина в аминокислотном положении 131 в FcgR2a.

[0059] Настоящее изобретение относится к фармацевтической упаковке или набору, содержащему один или более контейнеров, заполненных жидкой или лиофилизированной усиливающей ADCC молекулой, необязательно терапевтическим антителом и/или одним или более химиотерапевтическими средствами.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

[0060] На фиг. 1 представлен линейный график, показывающий лизис клеток-мишеней K562. Меченые Calcein AM клетки-мишени K562 инкубировали с эффекторными клетками PBMC, которые предварительно стимулировали с использованием усилителя ADCC. Процент специфического лизиса клеток-мишеней оценивали в диапазоне отношений эффектор:клетка-мишень.

[0061] На фиг. 2 показано, что усилитель ADCC усиливает ADCC при использовании ритуксана. Меченые Calcein AM клетки HS-Sultan, покрытые ритуксаном, инкубировали с эффекторными клетками PBMC, которые предварительно стимулировали усилителем ADCC. Процент специфического лизиса клеток-мишеней оценивали в диапазоне отношений эффектор:клетка-мишень.

[0062] На фиг. 3 показано, что усилитель ADCC усиливает ADCC при использовании герцептина как в клеточной линии SKBR3, которая экспрессирует высокие уровни опухолевого антигена Her2neu, так и в клеточной линии MDA-MB-231, которая экспрессирует более низкие уровни опухолевого антигена. Меченные Calcein AM клетки SKBR3 (часть A) или клетки MDA-MB-231 (часть C), покрытые герцептином, инкубировали с эффекторными клетками PBMC, которые предварительно стимулировали усилителем ADCC. Процент специфического лизиса клеток-мишеней оценивали в диапазоне отношений эффектор:клетка-мишень. Экспрессию Her2neu количественно определяли посредством проточной цитометрии с использованием PE-конъюгированного герцептина (зеленая линия) или контролей (№1 и №2) в клеточных линиях рака молочной железы SKBR3 (часть B) и MDA-MB-231 (часть D).

[0063] На фиг. 4 показано, что усилитель ADCC усиливает опосредованную ритуксаном ADCC в клетках от пациентов с Fc рецепторами с высокой аффинностью и Fc рецепторами с низкой аффинностью. Процент специфического лизиса показан для покрытых ритуксаном клеток HS-Sultan, инкубированных с эффекторными клетками PBMC с отношением E:T 50:1. PBMC от пациента с высокоаффинным генотипом FcgR2a131 H/H и FcgR3a V/V (закрашенные прямоугольники) или пациента с более низкоаффинным генотипом FcgR2a131 A/A и FcgR3a V/F (незакрашенные прямоугольники) оценивали по ADCC после стимуляции буферным контролем (базовая линия) или стимуляции усилителем ADCC 500 нМ.

[0064] На фиг. 5 показано, что пациенты с FcgR3a FF или FcgR3a FV обладают значительно более низкой опосредованной ритуксимабом ADCC активностью, чем индивидуумы с фенотипом FcgR3a VV.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0065] Изобретение основано на открытии того, что усиливающая ADCC молекула увеличивает антителозависимую клеточную цитотоксическую (ADCC) активность антител. Соответственно, изобретение относится к способам лечения клеточных заболеваний, таких как рак и опосредованные иммунными клетками заболевания или нарушения посредством введения терапевтического моноклонального антитела и усиливающей ADCC молекулы, соединения со следующей формулой I:

[0066] где

[0067] Y представляет собой кольцо арила, замещенное C(=O)R8, и где указанное кольцо арила необязательно дополнительно замещено одним или более заместителями, независимо выбранными из F, Cl, CF3, CF3O-, HCF2O-, C1-C6 алкила, C1-C6 гетероалкила и ArO-;

[0068] R1, R3 и R4 независимо выбраны из H, C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, C1-C6 гетероалкила, C3-C6 циклоалкила, C3-C6 циклоалкенила, гетероциклоалкила с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы, арила и 5-7 членного гетероарила, где указанный алкил, алкенил, алкинил, гетероалкил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, OR6, NR6R7, C(=O)R6, C(=O)OR6, OC(=O)R6, C(=O)NR6R7, (C1-C6 алкил)амино, CH3OCH2O-, R6OC(=O)CH=CH-, NR6SO2R7, SR6 и SO2R6;

[0069] или R3 и R4 вместе с атомом, к которому они прикреплены, формируют насыщенное или частично ненасыщенное C3-C6 карбоциклическое кольцо, где указанное карбоциклическое кольцо необязательно замещено одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, OR6, NR6R7, C(=O)R6, C(=O)OR6, OC(=O)R6, C(=O)NR6R7, (C1-C6 алкил)амино, CH3OCH2O-, R6OC(=O)CH=CH-, NR6SO2R7, SR6 и SO2R6;

[0070] R2 и R8 независимо выбраны из H, OR6, NR6R7, C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, C1-C6 гетероалкила, C3-C6 циклоалкила, C3-C6 циклоалкенила, гетероциклоалкила с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы, арила и 5-7 членного гетероарила, где указанный алкил, алкенил, алкинил, гетероалкил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, OR6, NR6R7, C(=O)R6, C(=O)OR6, OC(=O)R6, C(=O)NR6R7, (C1-C6 алкил)амино, CH3OCH2O-, R6OC(=O)CH=CH-, NR6SO2R7, SR6 и SO2R6;

[0071] R5a, R5b и R5c независимо выбраны из H, F, Cl, Br, I, OMe, CH3, CH2F, CHF2 и CF3 и

[0072] R6 и R7 независимо выбраны из H, C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, C1-C6 гетероалкила, C3-C6 циклоалкила, C3-C6 циклоалкенила, гетероциклоалкила с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы, арила и 5-7 членного гетероарила, где указанный алкил, алкенил, алкинил, гетероалкил, циклоалкил, циклоалкенил, гетероциклоалкил, арил и гетероарил необязательно замещены одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, O-алкила, NH2, -C(=O)алкила, C(=O)H, C(=O)OH, C(=O)Oалкила, OC(=O)H, OC(=O)алкила, (C1-C6 алкил)амино, (C1-C6 алкил)2амино CH3OCH2O- и алкил-OC(=O)CH=CH-,

[0073] или R6 и R7 вместе с атомом, к которому они прикреплены, формируют насыщенное или частично ненасыщенное гетероциклическое кольцо с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы, где указанное гетероциклическое кольцо необязательно замещено одним или более заместителями, независимо выбранными из C1-C6 алкила, C2-C6 алкенила, C2-C6 алкинила, F, Cl, Br, I, CN, OR6, NH2, -C(=O)алкила, C(=O)H, C(=O)OH, C(=O)Oалкила, OC(=O)H, OC(=O)алкила, (C1-C6 алкил)амино, (C1-C6 алкил)2амино CH3OCH2O- и алкил-OC(=O)CH=CH-.

[0074] Изобретение также относится к метаболиту, сольвату, таутомеру или фармацевтически приемлемой соли соединения согласно формуле I.

[0075] Например, R2 представляет собой OR6.

[0076] Например, R6 представляет собой C1-C6 алкил, такой как этил.

[0077] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R2 представляет собой NR6R7.

[0078] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R2 представляет собой NR6R7 и R6 и R7 независимо выбраны из H, C1-C6 алкила и C1-C6 гетероалкила, такого как, например, R6 и R7 представляют собой H, этил, пропил или CH2CH2OCH3.

[0079] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где Y представляет собой фенил.

[0080] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R8 выбран из OR6, NR6R7 и гетероциклоалкил с от 3 до 8 кольцевых атомов, где один атом выбран из азота, кислорода и серы

[0081] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R8 представляет собой гетероциклоалкил с 5 или 6 кольцевыми атомами, где один атом выбран из азота, кислорода и серы. Например, R8 представляет собой пирролидин.

[0082] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где R6 и R7 независимо выбраны из H и C1-C6 алкила.

[0083] Например, изобретение относится к соединению формулы I, где Y представляет собой

[0084] В некоторых соединениях по изобретению, каждый из R1, R3, R4, R5a, R5b и R5c представляет собой водород.

[0085] Например, изобретение относится к соединению, выбранному из

[0086] (1E,4E)-этил-2-амино-8-(4-пирролидин-1-карбонил)фенил)-3H-бензо[b]азепин-4-карбоксилата;

[0087] (1E,4E)-этил-2-амино-8-(4-(метоксикарбонил)фенил)-3H-бензо[b]азепин-4-карбоксилата;

[0088] (1E,4E)-этил2-амино-8-(4-(метилкарбамоил)фенил)-3H-бензо[b]азепин-4-карбоксилата;

[0089] (1E,4E)-2-амино-N,N-дипропил-8-(4-(пирролидин-1-карбонил)фенил)-3H-бензо[b]азепин-4-карбоксамида

[0090] и их фармацевтически приемлемых солей. Другие подходящие усилители ADCC описаны в WO2007/024612, содержание которой включено, таким образом, в качестве ссылки в полном объеме.

[0091] В предпочтительном варианте осуществления усиливающая ADCC молекула по настоящему изобретению представляет собой {2-амино-8-[4-(пирролидинилкарбонил)фенил]-(3H-бензо[f]азепин-4-ил)}-N,N-дипропилкарбоксамид со следующей химической структурой:

[0092] Усиливающая ADCC молекула усиливает или улучшает эффекторную активность антитела. Таким образом, независимо от антигенсвязывающей активности, способы по настоящему изобретению могут увеличивать терапевтический эффект антитела посредством усиления эффекторной активности, проявляемой антителом. Таким образом, способы по изобретению, как правило, можно использовать для лечения или облегчения симптома какого-либо нарушения, в котором желательна усиленная эффекторная активность антитела, у нуждающегося в этом субъекта. Усиливающая ADCC молекула может улучать ADCC посредством активации естественных киллерных клеток или клеток CD56+ или непосредственно или опосредованно. Дополнительно, наличие более высокой доли активированных естественных киллерных клеток может помочь преодолеть слабую ADCC, наблюдаемую в подгруппе пациентов, которые имеют Fc рецепторы с низкой аффинностью.

[0093] Субъект, нуждающийся в этом, включает субъекты с раком, которые идентифицированы в качестве имеющих мутацию KRAS или полиморфизм FcγR или предварительно идентифицированы в качестве не отвечающих на лечение терапевтическими антителами или обладают нарушенной функцией ADCC.

[0094] В другом варианте осуществления усиливающую ADCC молекулу по изобретению вводят в комбинации с одним или более терапевтическими антителами. В некоторых вариантах осуществления антитела имеют терапевтическое и/или профилактическое использование in vivo против рака и других клеточных заболеваний.

[0095] В определенных вариантах осуществления усиливающую ADCC молекулу вводят перед, одновременно с, или после введения одного или более терапевтических антител. В одном из вариантов осуществления усиливающую ADCC молекулу формулируют с одним или более терапевтическими антителами. В другом варианте осуществления одно или более терапевтических антител вводят в раздельной фармацевтической композиции. В соответствии с этим вариантом осуществления, одно или более терапевтических антител можно вводить субъекту посредством того же или отличающихся путей введения, как те, что используют для введения усиливающей ADCC молекулы.

[0096] В другом аспекте изобретение относится к способу уничтожения клетки рака, который включает введение определенного количества усиливающей ADCC молекулы по настоящему изобретению в комбинации с терапевтическим моноклональным антителом для того, чтобы уничтожить клетку рака. Типы терапевтических моноклональных антител включают, но без ограничения, ритуксимаб, цетуксимаб, панитумумаб и трастузумаб.

Терапевтические антитела

[0097] В рамках контекста данного изобретения термин «терапевтическое антитело или антитела» обозначает более конкретно любое антитело, которое выполняет функцию истощения клеток-мишеней у пациента. Конкретные примеры таких клеток-мишеней включают опухолевые клетки, инфицированные вирусами клетки, аллогенные клетки, патологические иммунокомпетентные клетки (например, B лимфоциты, T-лимфоциты, антигенпредставляющие клетки, и т.д.), присущие раку, аллергиям, аутоиммунным заболеваниям, аллогенным реакциям. Наиболее предпочтительными клетками-мишенями в рамках контекста данного изобретения являются опухолевые клетки и инфицированные вирусами клетки. Терапевтические антитела могут, например, опресредовать цитотоксический эффект или лизис клеток, в частности, посредством антителозависимой клеточной цитотоксичности (ADCC).

[0098] Для ADCC необходимы рецепторы лейкоцитов для Fc части IgG (FcγR), функция которых состоит в том, чтобы соединять IgG-сенсибилизированные антигены с FcγR-несущими цитотоксическими клетками и запускать машину клеточной активации. Несмотря на то, что этот механизм действ