Антитела для лечения ассоциированных с clostridium difficile инфекции и заболеваний

Антитела для лечения ассоциированных с clostridium difficile инфекции и заболеваний

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Родственные заявки

Настоящая заявка заявляет приоритет согласно 35 Кодекса законов США §119 по предварительным заявкам на патент США №№61/324503, поданной 15 апреля 2010 года, и 61/381669, поданной 10 сентября 2010 года, полное содержание каждой из которых включено в настоящий документ с помощью ссылки.

Область техники

Настоящее изобретение, в целом, относится к композициям и методам лечения, которые могут быть применены для лечения инфекции Clostridium difficile (С.difficile), а также ассоциированных с С.difficile болезненных состояний и патологий, например, ассоциированная с С.diff. диарея (CDAD), которая может возникать в результате инфицирования бактериями С.difficile. Настоящее изобретение также относится к антителам или их антигенсвязывающим фрагментам, которые специфично связываются с эпитопами на токсине А и/или токсине В С.difficile, композициям, содержащим такие антитела, а также способам применения антител или композиций.

Уровень техники

С.difficile (или С.diff) представляет собой грамположительную образующую споры анаэробную бактерию, которая представляет ведущую причину госпитальной (приобретенной в больнице) диареи, связанной с применением антибиотиков, и псевдомембранозного колита. Инфекция С.difficile оценивается совокупно более чем 750000 случаев в год в США и является причиной большего количества смертей, чем все остальные кишечные инфекции вместе взятые (1). Во многих больницах С.difficile представляет больший риск для пациентов, чем устойчивая к метициллину Staphylococcus aureus (MRSA) или же любая другая бактерия (2). Ежегодные затраты на организацию профилактики и лечения ассоциированного с Clostridium difficile заболевания (CDAD) оцениваются как превышающие 3,2 миллиарда долларов в США (3). Недавние вспышки заболевания штаммами С.difficile с повышенной вирулентностью или устойчивостью к антибиотикам привели к безуспешности лечения, более частым рецидивам и повышенным коэффициентам смертности (4).

Как правило, CDAD вызывается нарушением микрофлоры толстой кишки вследствие применения антибиотиков, таких как клиндамицин, цефалоспорины и фторхинолоны (3,8). Это нарушение микроокружения толстой кишки вместе с воздействием спор С.difficile ведет к колонизации. Примерно у одной трети всех пациентов, которые подверглись колонизации, развивается CDAD (9), что может привести к тяжелой диарее, перфорации толстой кишки, колэктомии и смерти (10). CDAD возникает в результате приобретения и пролиферации С difficile в кишечнике, где бактерия С.difficile продуцирует токсин А и токсин В, два важных фактора вирулентности CDAD. Токсины А и В С.difficile показывают значительную гомологию последовательности и структурную гомологию. Оба имеют С-концевой рецепторсвязывающий домен, содержащий многократно повторяющиеся последовательности, центральный гидрофобный домен и N-концевой глюкозилтрансферазный домен. Рецепторсвязывающий домен опосредует связывание токсинов с клетками кишечного эпителия через рецепторы распознавания хозяина, которые остаются недостаточно хорошо определенными для людей. После интернализации через эндосомальный путь центральный гидрофобный домен внедряется в мембрану эндосомы. Кислотный рН эндосомы запускает образование пор и перемещение аминоконцевых доменов токсинов в цитозоль. Гликозилирование целевых цитозольных Rho ОТРаз ведет к разрушению цитоскелета и клеточной смерти. Токсины А и В демонстрируют отличающиеся профили патологии с возможным синергизмом при вызываемом заболевании.

Недавние вспышки заболевания гипервирулентными штаммами С.difficile привели к повышенным уровням тяжелого заболевания, более частым рецидивам и повышенной смертности. Один гипервирулентный штамм, BI/NAP 1/027 токсинотип III, был в прошлом редко встречающимся, но сейчас он является эпидемическим. Гипервирулентные штаммы, такие как BI/NAP 1/027, продуцируют в несколько раз больше токсина А и токсина В, чем не являющиеся гипервирулентными штаммы С.difficile, делая эти штаммы более труднопреодолимыми для лечения после инфицирования. Так как резистентность гипервирулентных штаммов к широко применяемым противомикробным средствам и антибиотикам является растущей проблемой, которая делает эти штаммы более сложными для лечения и сдерживания, дополнительные подходы к лечению и более сильные терапевтические средства необходимы для борьбы с гипервирулентностью и рецидивами ассоциированных с гипервирулентными изолятами С.difficile заболеваний.

Современные способы лечения антибиотиками инфекции С.difficile включают применение ванкомицина и/или метронидазола; однако эти антибиотики ограничены неполными уровнями ответа и повышением частот повторного инфицирования и рецидивов. Сообщали о значительно более высоких частотах неудач для терапии метронидазолом с 2000 года (23-25). Высокие частоты рецидивов после лечения антибиотиками могут возникнуть в результате продолжительного нарушения нормальной микрофлоры толстой кишки, обеспечивающем возможность С.difficile получить преимущество при небольшой конкуренции (26-28). Риск рецидива повышен у пациентов, у которых уже был один рецидив, возрастая от около 20% после первого эпизода до более 60% после двух или более рецидивов (29, 30). Этот повышенный риск рецидива был связан с неспособностью обеспечить соответствующий гуморальный иммунный ответ антителами к токсину (31). Действительно, пациенты с самыми высокими титрами сывороточного IgG к токсину в конце антибактериальной терапии имели пониженный риск рецидива (32). В отдельном исследовании уровни антитела к токсину В в сыворотке коррелировали с защитой от рецидивирующего CDAD (33).

Распространенность инфекции С.difficile стабильно возрастала, особенно у пожилых людей, которые часто являются ослабленными. Приблизительно треть пациентов с инфекцией С.difficile имеют рецидивы их инфекции, обычно в пределах двух месяцев от первоначальной болезни. Повторные инфекции имеют тенденцию быть более тяжелыми, чем первоначальное заболевание; они чаще являются смертельными. Взрослые более старшего возраста и люди с ослабленными иммунными системами являются особо восприимчивыми к рецидивирующим инфекциям. При отсутствии незамедлительного и правильно проводимого лечения осложнения инфекции С.difficile включает обезвоживание, почечную недостаточность, перфорацию кишечника, токсический мегаколон, что может привести к разрыву толстой кишки и смерти.

Хотя в США инфекция С.difficile является наиболее часто встречающейся приобретенной госпитализированными пациентами инфекцией, она также может быть приобретена вне больниц в обществе. Оценивается, что ежегодно в США в обществе выявляют 20000 инфекций С.difficile. В международном масштабе заболеваемость является крайне изменчивой и зависит от множества факторов, включая частоту, с которой эндоскопию применяют для установления диагноза, схемы применения противомикробного средства и эпидемиологические особенности.

Таким образом, очевидно, что заболевание, вызываемое инфекцией С.difficile, ставит жизни людей всех возрастов под угрозу, как в условиях больницы, так и в обществе. В современном мире всегда присутствует риск инфицирования С difficile для тех, кто сталкивается с госпитализацией, или для тех, кто находится на длительном стационарном лечении. Поскольку существует возможность заражения инфекцией С.difficile вне больничной среды, вероятность заражения инфекцией детей младшего возраста и младенцев велика. Дополнительно существует возможность, что схемы приема антибиотиков, применяемые в настоящее для лечения С.difficile, могут иметь эффективность менее оптимальной. Пациенты, которые страдают ассоциированным с С.difficile заболеванием, нуждаются в серьезном стационарном лечении и продолжительном пребывании в больнице. Затраты, связанные с высоким уровнем поддерживающего лечения в условиях стационара и лечением, которое необходимо для пациентов с ассоциированным с С.difficile заболеванием, велики и предполагают дорогостоящие ресурсы, как, например, большие количества персонала врачей и медсестер, лабораторные исследования и мониторинг, сопутствующая лекарственная терапия и дополнительные меры поддержки.

Следовательно, существует необходимость более эффективных лекарственных препаратов, лекарственных средств и лечебные средства, которые нацелены на угрожающие жизни заболевания, вызываемые С.difficile, и, в частности, на сильнодействующие токсины, продуцируемые С.difficile, для пользы в профилактике и лечении. Существует неудовлетворенная медицинская потребность в успешных и устойчивых средствах лечения ассоциированного с С.difficile заболевания, которые обеспечивают более низкую вероятность развития резистентности и более высокую вероятность успешного ответа пациента и устранения заболевания, приводящего к ликвидации заболевания.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение обеспечивает, по меньшей мере частично, новые реактивы на основе антител и композиции, содержащие антитела к токсину А и/или токсину В С.difficile. Настоящие реактивы и композиции могут быть полезны для лечения все более возрастающих количеств субъектов, пораженных ассоциированной с С.difficile инфекцией и заболеванием, для обеспечения улучшенного качества жизни, для устранения CDAD и инфекции С.difficile и для содействия выживанию инфицированных индивидуумов.

В одном аспекте обеспечено выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывает токсин А С.difficile и который перекрестно конкурирует за связывание с токсином А С difficile с моноклональным антителом, продуцируемым гибридомной клеточной линией, депонированной под №доступа АТСС РТА-9692, РТА-9694 или РТА-9888. В варианте осуществления гибридомная клеточная линия депонирована под №доступа АТСС РТА-9692. В варианте осуществления гибридомная клеточная линия депонирована под №доступа АТСС РТА-9694. В варианте осуществления гибридомная клеточная линия депонирована под №доступа АТСС РТА-9888. В варианте осуществления моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент находится в химерной или гуманизированной форме.

В другом аспекте обеспечено выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывается с эпитопом токсина А С.difficile, определяемым моноклональным антителом, продуцируемым гибридомной клеточной линией, депонированной под №доступа АТСС РТА-9692, РТА-9694 или РТА-9888. В варианте осуществления гибридомная клеточная линия депонирована под №доступа АТСС РТА-9692. В варианте осуществления гибридомная клеточная линия депонирована под №доступа АТСС РТА-9694. В варианте осуществления гибридомная клеточная линия депонирована под №доступа АТСС РТА-9888. В варианте осуществления моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент находится в химерной или гуманизированной форме.

В другом аспекте обеспечено выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывается с токсином В С.difficile и который перекрестно конкурирует за связывание с токсином В С.difficile с моноклональным антителом, продуцируемым гибридомной клеточной линией, депонированной под № доступа АТСС РТА-9693 или РТА-9692. В варианте осуществления гибридомная клеточная линия депонирована под №доступа АТСС РТА-9693. В варианте осуществления гибридомная клеточная линия депонирована под №доступа АТСС РТА-9692. В варианте осуществления моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент находится в химерной или гуманизированной форме.

В другом аспекте обеспечено выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывается с эпитопом токсина В С.difficile, определяемым моноклональным антителом, продуцируемым гибридомной клеточной линией, депонированной под №доступа АТСС РТА-9693 или РТА-9692. В варианте осуществления гибридомная клеточная линия депонирована под №доступа АТСС РТА-9693. В варианте осуществления гибридомная клеточная линия депонирована под №доступа АТСС РТА-9692. В варианте осуществления моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент находится в химерной или гуманизированной форме. В варианте осуществления выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент нейтрализует токсичность in vivo токсина В С.difficile. В варианте осуществления антитело или его антигенсвязывающий фрагмент нейтрализует токсичность in vivo токсина В С.difficile в количестве от 0,1 до 1000 мкг.

В другом аспекте обеспечено моноклональное антитело РА-39 (№доступа АТСС 9692) или его антигенсвязывающий фрагмент.В другом аспекте обеспечено моноклональное антитело РА-50 (№доступа АТСС РТА-9694) или его антигенсвязывающий фрагмент.В другом аспекте обеспечено моноклональное антитело РА-38 (№доступа АТСС РТА-9888) или его антигенсвязывающий фрагмент.В другом аспекте обеспечено моноклональное антитело РА-41 (№доступа АТСС РТА-9693) или его антигенсвязывающий фрагмент.В варианте осуществления моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент находится в химерной или гуманизированной форме.

В еще одном аспекте обеспечен вектор экспрессии, содержащий по меньшей мере одну молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую антитела или их антигенсвязывающие фрагменты, как описано выше и в настоящем документе. В еще одном аспекте обеспечен вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь или ее часть антител или их антигенсвязывающих фрагментов, как описано выше или в настоящем документе. В еще одном аспекте обеспечен вектор экспрессии, содержащий молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую легкую цепь или ее часть антител или их антигенсвязывающих фрагментов, как описано выше или в настоящем документе. В еще одном аспекте обеспечен вектор экспрессии, содержащий по меньшей мере одну молекулу нуклеиновой кислоты, кодирующую тяжелую цепь или ее часть и легкую цепь или ее часть антител или их антигенсвязывающих фрагментов, как описано выше или в настоящем документе.

В другом аспекте обеспечены клетки-хозяева, трансформированные или трансфицированные любым из векторов экспрессии, описанных выше и в настоящем документе. В другом аспекте обеспечена плазмида, которая кодирует любое из антител или их антигенсвязывающие фрагменты, как описано выше и в настоящем документе.

В другом аспекте обеспечено выделенное антитело к токсину А С.difficile или антигенсвязывающий фрагмент, как описано выше и в настоящем документе, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент нейтрализует токсичность in vivo токсина А С.difficile. В варианте осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент нейтрализует токсичность in vivo токсина А С.difficile в количестве от 0,1 мкг до 1000 мкг или от 1 мкг/кг до 100000 мкг/кг. В другом варианте осуществления выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент нейтрализует токсичность in vivo токсина А С.difficile в количестве, выбранном из от 0,5 мкг до 1000 мкг, или от 5 мкг до 250 мкг, или от 10 мг/кг до 50 мг/кг. В варианте осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело РА-39 (№ доступа АТСС 9692) или его антигенсвязывающий фрагмент. В варианте осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело РА-50 (№ доступа АТСС РТА-9694) или его антигенсвязывающий фрагмент. В варианте осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело РА-38 (№ доступа АТСС РТА-9888) или его антигенсвязывающий фрагмент. В варианте осуществления моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент находится в химерной или гуманизированной форме.

В другом аспекте обеспечено выделенное антитело к токсину В С.difficile или антигенсвязывающий фрагмент, как описано выше и в настоящем документе, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент нейтрализует токсичность in vivo токсина В С.difficile. В этом варианте осуществления выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент нейтрализует токсичность in vivo токсина В С.difficile в количестве, выбранном из от 0,5 мкг до 1000 мкг, 0,5 мкг, 5 мкг, 40 мкг, 50 мкг, 100 мкг, 200 мкг, 1000 мкг или от 10 мг/кг до 50 мг/кг. В варианте осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело РА-39 (№ доступа АТСС 9692) или его антигенсвязывающий фрагмент. В варианте осуществления антитело представляет собой моноклональное антитело РА-41 (№ доступа АТСС РТА-9693) или его антигенсвязывающий фрагмент. В варианте осуществления моноклональное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент находится в химерной или гуманизированной форме.

В другом аспекте обеспечено выделенное антитело к токсину А С.difficile или антигенсвязывающий фрагмент, как описано выше и в настоящем документе, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент при введении субъекту, инфицированному С.difficile, в комбинации с выделенным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, который специфично связывает и/или нейтрализует токсин В С.difficile, лечит CDAD и/или повышает выживаемость субъекта. В варианте осуществления антитела к токсину А и токсину В или их фрагменты вводят одновременно. В варианте осуществления антитела к токсину А и токсину В или их фрагменты вводят в разные моменты времени. В варианте осуществления антитела к токсину А и токсину В или их фрагменты вводят последовательно. В варианте осуществления выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывает токсин А С.difficile представляет собой антитело, продуцируемое гибридомной клеточной линией, депонированной под № доступа АТСС РТА-9692, РТА-9694 или РТА-9888, его антигенсвязывающий фрагмент, его гуманизированную форму или моноклональное антитело, которое перекрестно реагирует с ним при связывании токсина А. В варианте осуществления выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывает токсин В С.difficile представляет собой антитело, продуцируемое гибридомной клеточной линией, депонированной под №доступа АТСС РТА-9693 или РТА-9692, его антигенсвязывающий фрагмент, его гуманизированную форму или моноклональное антитело, которое перекрестно реагирует с ним при связывании токсина В.

В другом аспекте обеспечено выделенное антитело к токсину В С.difficile или антигенсвязывающий фрагмент, как описано выше и в настоящем документе, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент при введении субъекту, инфицированному С.difficile, в комбинации с выделенным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, который специфично связывает и/или нейтрализует токсин А С.difficile, лечит CDAD и/или повышает выживаемость субъекта. В варианте осуществления антитела к токсину А и токсину В или их фрагменты вводят одновременно. В варианте осуществления антитела к токсину А и токсину В или их фрагменты вводят в разные моменты времени. В варианте осуществления антитела к токсину А и токсину В или их фрагменты вводят последовательно. В варианте осуществления выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывает токсин А С.difficile представляет собой антитело, продуцируемое гибридомной клеточной линией, депонированной под № доступа АТСС РТА-9692, РТА-9694 или РТА-9888, его антигенсвязывающий фрагмент, его гуманизированную форму или моноклональное антитело, которое перекрестие реагирует с ним при связывании токсина А. В варианте осуществления выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывает токсин В С.difficile представляет собой антитело, продуцируемое гибридомной клеточной линией, депонированной под №доступа АТСС РТА-9693 или РТА-9692, его антигенсвязывающий фрагмент, его гуманизированную форму или моноклональное антитело, которое перекрестно реагирует с ним при связывании токсина В.

В другом аспекте обеспечено выделенное антитело к токсину А С.difficile или антигенсвязывающий фрагмент, как описано выше и в настоящем документе, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент при введении субъекту, инфицированному С.difficile, в комбинации с выделенным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, который специфично связывает токсин В С.difficile, лечит CDAD и/или повышает выживаемость субъекта. В варианте осуществления антитело к токсину А или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в количестве от 1 мкг до 1000 мкг, или от 1 мкг до 250 мкг, или от 5 мкг до 100 мкг, и дозу антитела к токсину В или его антигенсвязывающего фрагмента вводят в количестве от 0,1 мкг до 1000 мкг, или от 1 мкг до 250 мкг, или от 5 мкг до 100 мкг. В варианте осуществления выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывает токсин А С.difficile, представляет собой антитело, продуцируемое гибридомной клеточной линией, депонированной под №доступа АТСС РТА-9692, РТА-9694 или РТА-9888, его антигенсвязывающий фрагмент, его гуманизированную форму или моноклональное антитело, которое перекрестно реагирует с ним при связывании токсина А. В варианте осуществления выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывает токсин В С.difficile представляет собой антитело, продуцируемое гибридомной клеточной линией, депонированной под №доступа АТСС РТА-9693 или РТА-9692, его антигенсвязывающий фрагмент, его гуманизированную форму или моноклональное антитело, которое перекрестно реагирует с ним при связывании токсина В.

В другом аспекте обеспечено выделенное антитело к токсину А С.difficile или антигенсвязывающий фрагмент, как описано выше и в настоящем документе, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент при введении субъекту, инфицированному С.difficile, в комбинации с выделенным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, который специфично связывает токсин В С.difficile, лечит CDAD и/или повышает выживаемость субъекта. В варианте осуществления антитело к токсину А или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в количестве 50 мг/кг, антитело к токсину В или его антигенсвязывающий фрагмент вводят в количестве 50 мг/кг. В варианте осуществления выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывает токсин А С.difficile, представляет собой антитело, продуцируемое гибридомной клеточной линией, депонированной под № доступа АТСС РТА-9692, РТА-9694 или РТА-9888, его антигенсвязывающий фрагмент, его гуманизированную форму или моноклональное антитело, которое перекрестно реагирует с ним при связывании токсина А. В варианте осуществления выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывает токсин В С.difficile, представляет собой антитело, продуцируемое гибридомной клеточной линией, депонированной под №доступа АТСС РТА-9693 или РТА-9692, его антигенсвязывающий фрагмент, его гуманизированную форму или моноклональное антитело, которое перекрестно реагирует с ним при связывании токсина В.

В другом аспекте обеспечено выделенное антитело к токсину А С.difficile или антигенсвязывающий фрагмент, как описано выше и в настоящем документе, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент при введении субъекту, инфицированному С.difficile, в комбинации с выделенным антителом или его антигенсвязывающим фрагментом, который специфично связывает токсин В С.difficile, обеспечивает показатель эффективности лечения или выживаемости 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100%. В варианте осуществления антитело или антигенсвязывающий фрагмент вводят q2d×4 в дозе 40-50 мг/кг. В варианте осуществления выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывает токсин А С.difficile, представляет собой антитело, продуцируемое гибридомной клеточной линией, депонированной под № доступа АТСС РТА-9692, РТА-9694 или РТА-9888, его антигенсвязывающий фрагмент, его гуманизированную форму или моноклональное антитело, которое перекрестно конкурирует за связывание токсина А с одним или несколькими моноклональными антителами, депонированными под №доступа АТСС РТА-9692, РТА-9694 или РТА-9888. В варианте осуществления выделенное антитело или антигенсвязывающий фрагмент, который специфично связывает токсин В С.difficile, представляет собой антитело, продуцируемое гибридомной клеточной линией, депонированной под №доступа АТСС РТА-9693 или РТА-9692, его антигенсвязывающий фрагмент, его гуманизированную форму или моноклональное антитело, которое перекрестно конкурирует за связывание токсина В с одним или несколькими моноклональными антителами, депонированными под №доступа АТСС РТА-9692 или РТА-9693.

В другом аспекте обеспечено выделенное антитело к токсину А С.difficile, или антитело к токсину В С.difficile, или их антигенсвязывающий фрагмент, как описано в настоящем документе, где антитело или антигенсвязывающий фрагмент находится в форме или происходит от одного или нескольких из моноклонального антитела, гуманизированного антитела, антитела человека или химерного антитела.

В другом аспекте обеспечено выделенное антитело к токсину А С.difficile, или антитело к токсину В С.difficile, или их антигенсвязывающего фрагмента, как описано в настоящем документе, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент находится в форме или происходит от биспецифичного и бифункционального антитела.

В другом аспекте обеспечено биспецифичное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, который содержит (i) моноклональное антитело, продуцируемое гибридомной клеточной линией, депонированной под № доступа АТСС РТА-9692, РТА-9694 или РТА-9888, его антигенсвязывающий фрагмент, гуманизированный варианта антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, вариабельный домен тяжелой цепи антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и/или вариабельный домен легкой цепи антитела или антигенсвязывающего фрагмента; и (ii) моноклональное антитело, продуцируемое гибридомной клеточной линией, депонированной под № доступа АТСС РТА-9693 или РТА-9692, его антигенсвязывающий фрагмент, гуманизированный вариант антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, вариабельный домен тяжелой цепи антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и/или вариабельный домен легкой цепи антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.

В другом аспекте обеспечено биспецифичное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, где антитело содержит (1) моноклональное антитело, продуцируемое гибридомной клеточной линией, депонированной под №доступа АТСС РТА-9692, его антигенсвязывающий фрагмент, гуманизированный вариант антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, вариабельный домен тяжелой цепи антитела или его антигенсвязывающего фрагмента и/или вариабельный домен легкой цепи антитела или антигенсвязывающего фрагмента; и (ii) выделенное моноклональное антитело, продуцируемое гибридомной клеточной линией, депонированной под № доступа АТСС РТА-9693 или РТА-9692, его антигенсвязывающий фрагмент, гуманизированный вариант антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, вариабельный домен тяжелой цепи антитела или антигенсвязывающего фрагмента и/или вариабельный домен легкой цепи антитела или его антигенсвязывающего фрагмента.

В различных вариантах осуществления обеспечено антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, как описано выше и в настоящем документе, где антигенсвязывающий фрагмент выбран из Fab-фрагмента, Р(ab’)₂-фрагмента и Fv-фрагмента. В другом аспекте обеспечено выделенное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, как описано выше и в настоящем документе, где антитело или его антигенсвязывающий фрагмент представляет собой или содержит одноцепочечное антитело.

В другом аспекте обеспечена композиция, содержащая одно или несколько антител или их антигенсвязывающих фрагментов согласно настоящему изобретению, как описано выше и в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель, среду или разбавитель. В варианте осуществления композиция содержит по меньшей мере одно антитело к токсину А согласно настоящему изобретению, например, mAb РТА-9692, mAb PTA-9694, mAb PTA-9888, его антигенсвязывающий фрагмент или его гуманизированную форму, и по меньшей мере одно антитело к токсину В согласно настоящему изобретению, например, mAb РТА-9692, mAb РТА-9693, его антигенсвязывающий фрагмент или его гуманизированную форму. В варианте осуществления композиция содержит одно антитело к токсину А согласно настоящему изобретению, например mAb PTA-9888, его антигенсвязывающий фрагмент или его гуманизированную форму и одно антитело к токсину В согласно настоящему изобретению, например mAb 9693, его антигенсвязывающий фрагмент или его гуманизированную форму. В варианте осуществления композиция содержит одно антитело к токсину А согласно настоящему изобретению, например mAb PTA-9694, его антигенсвязывающий фрагмент или его гуманизированную форму и одно антитело к токсину В согласно настоящему изобретению, например mAb 9693, его антигенсвязывающий фрагмент или его гуманизированную форму. В варианте осуществления каждое mAb присутствует в композиции в одинаковом количестве. В варианте осуществления каждое mAb присутствует в композиции в соотношении 1:1 по весу относительно друг друга. В варианте осуществления каждое mAb присутствует в композиции в различных количествах. В варианте осуществления каждое mAb присутствует в композиции в соотношениях, отличных от 1:1, по весу относительно друг друга, причем соотношения являются такими, как обеспечено в настоящем документе. В варианте осуществления композиция дополнительно содержит дополнительное терапевтическое средство. В варианте осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой антибиотик, противобактериальное, бактерицидное, бактериостатическое средство или их комбинацию. В варианте осуществления дополнительное терапевтическое средство представляет собой метронидазол, ванкомицин, фидаксомицин или их комбинацию.

В другом аспекте обеспечена композиция, содержащая вектор экспрессии согласно настоящему изобретению, как описано выше и в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель, среду или разбавитель. В другом аспекте обеспечена композиция, содержащая клетки-хозяева, несущие вектор экспрессии согласно настоящему изобретению, как описано выше и в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель, среду или разбавитель. В другом аспекте обеспечена композиция, содержащая плазмиду согласно настоящему изобретению, как описано выше и в настоящем документе, и фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель, среду или разбавитель.

В другом аспекте обеспечен связывающий белок, содержащий по меньшей мере две полипептидные цепи, содержащие связывающие участки для связывания токсина А и токсина В С.difficile, где по меньшей мере одна полипептидная цепь содержит первый вариабельный домен тяжелой цепи, второй вариабельный домен тяжелой цепи и константный домен тяжелой цепи или его часть; и по меньшей мере одна полипептидная цепь содержит первый вариабельный домен легкой цепи, второй вариабельный домен легкой цепи и константный домен легкой цепи или его часть, где вариабельные домены, содержащие полипептидные цепи, образуют функциональные связывающие участки для токсина А и токсина В С.difficile. В варианте осуществления первый вариабельный домен тяжелой цепи и первый вариабельный домен легкой цепи связывающего белка образуют функциональный связывающий участок для токсина А С.difficile, и второй вариабельный домен тяжелой цепи и второй вариабельный домен легкой цепи связывающего белка образуют функциональный связывающий участок для токсина В С.difficile. В варианте осуществления первый вариабельный домен тяжелой цепи и первый вариабельный домен легкой цепи связывающего белка образуют функциональный связывающий участок для токсина В бактерии С.difficile, и второй вариабельный домен тяжелой цепи и второй вариабельный домен легкой цепи связывающего белка образуют функциональный связывающий участок для токсина А С difficile. В варианте осуществления связывающий белок содержит Fc-область. В варианте осуществления связывающий белок нейтрализует токсичность токсина А и токсина В С.difficile. В различных вариантах осуществления связывающий белок имеет константу скорости ассоциации (Kon) с токсином А или токсином В, выбранную из по меньшей мере 10²M^-1c^-1; по меньшей мере 10³M^-1c^-1; по меньшей мере 10⁴M^-1с^-1; по меньшей мере 10⁵M^-1c^-1; по меньшей мере 10⁶M^-1с^-1; или по меньшей мере 10⁷М^-1с^-1, как измерено при помощи поверхностного плазменного резонанса. В различных вариантах осуществления связывающий белок имеет константу скорости диссоциации (Koff) с токсином А или токсином В, выбранную из не более 10^-3c^-1; не более 10^-4c^-1; не более 10^-5с^-1; или не более 10^-6c^-1, как измерено при помощи поверхностного плазменного резонанса. В различных вариантах осуществления связующий белок имеет константу диссоциации (K_D) с токсином А или токсином В, выбранную из не более 10^-7М; не более 10^-8М; не более 10^-9М; не более 10^-10М; не более 10^-11М; не более 10^-12М; или не более 10^-13М.

В другом аспекте обеспечена композиция, содержащая связывающий белок, как описано выше и в настоящем документе, фармацевтически приемлемый носитель, наполнитель, среду или разбавитель. В варианте осуществления композиция дополнительно содержит дополнительное терапевтическое средство. В варианте осуществления дополнительное терапевтическое средство композиции представляет собой антибиотик, противобактериальное, бактерицидное, бактериостатическое средство или их комбинацию. В варианте осуществления дополнительное терапевтическое средство композиции представляет собой метронидазол, ванкомицин, фидаксомицин, нитазоксанид, рифаксимин, рамопланин или их комбинацию.

В другом аспекте обеспечены гибридомные клеточные линии, депонированные под №доступа АТСС РТА-9692, РТА-9693, РТА-9494 или РТА-9888.

В другом аспекте обеспечен способ лечения субъекта с инфекцией С.difficile или ассоциированным с С.difficile заболеванием, включающий введение субъекту по меньшей мере одной композиции, как описано в настоящем документе. В варианте осуществления композиции включают одно или несколько антител согласно настоящему изобретению, предпочтительно в гуманизированной форме. В варианте осуществления композиции содержат по меньшей мере одно антитело к токсину А, приведенное в настоящем документе, в гуманизированной форме или его антигенсвязывающий фрагмент и по меньшей мере одно антитело к токсину В согласно настоящему изобретению в гуманизированной форме или его антигенсвязывающий фрагмент.В различных вариантах осуществления один или несколько терапевтических реактивов, лекарственных средств, соединений или ингредиентов могут быть включены в композиции. В варианте осуществления композиции дополнительно включают фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, среду или наполнитель. В варианте осуществления композиции вводят в количестве, эффективном для лечения инфекции С.difficile или ассоциированного с С.difficile заболевания, например ассоциированной с С.difficile диареи (CDAD). В варианте осуществления две композиции вводят субъекту в количестве, эффективном для лечения инфекции С.difficile или ассоциированного с С.difficile заболевания. В варианте осуществления две композиции вводят одновременно. В другом варианте осуществления две композиции вводят в разные моменты времени.

В другом аспекте обеспечен способ подавления или нейтрализации токсичности токсина А и токсина В С.difficile в отношении клетки, который включает воздействие на клетку эффективной подавляющей или нейтрализующей токсин А С.difficile дозой моноклонального антитела к токсину А согласно настоящему изобретению или его антигенсвязывающего фрагмента и эффективной подавляющей или нейтрализующей токсин В С.difficile дозой моноклонального антитела к токсину В согласно настоящему изобретению или его антигенсвязывающего фрагмента. В варианте осуществления антитело к токсину А и антитело к токсину В находятся в гуманизированной форме. В варианте осуществления антитело к токсину А и антитело к токсину В находятся в химерной форме. В варианте осуществления антитела или их антигенсвязывающие фрагменты вводят одновременно. В варианте осуществления антитела или их антигенсвязывающие фрагменты вводят в разные моменты времени. В варианте осуществления способа клетка присутствует у субъекта, и антитела или их антигенсвязывающие фрагменты вводят субъекту в количестве, эффективном для подавления или нейтрализации токсина А и токсина В С.difficile.

В другом аспекте обеспечен способ подавления и нейтрализации токсичности токсина С.difficile в отношении