Способы определения характеристики изотипического состава иммунных комплексов и их применение при терапии и диагностике

Способы определения характеристики изотипического состава иммунных комплексов и их применение при терапии и диагностике

Иллюстрации

Показать все

Реферат

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

Настоящее изобретение относится к области медицины и иммунологии. В частности, изобретение позволяет проводить анализ характеристик, в частности характеристик изотипического состава, иммунных комплексов при диагностике и лечении различных заболеваний.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

Иммунные комплексы, или комплексы антиген-антитело - макромолекулярные структуры, образующиеся в результате специфического взаимодействия антигенов с бивалентными или мультивалентными антителами в биологических жидкостях организма. Данные комплексы, представляющие собой крупные молекулярные образования, состоящие из множества молекул антигена и антител, формируются как при эквивалентных соотношениях антигена или антитела, так при умеренном избытке антигена. Образование и удаление иммунных комплексов происходит в ходе развития гуморального иммунного ответа, что является одной из важных защитных реакций организма.

Содержание иммунных комплексов повышается в сыворотке крови и других биологических жидкостях при различных системных нарушениях, в том числе и при таких заболеваниях, как ревматологические и аутоиммунные заболевания, аллергические заболевания, вирусные, бактериальные и паразитарные инфекции, новообразования и аллергические реакции.

В области техники известны способы обнаружения иммунных комплексов, возникающих в плазме крови и других биологических жидкостях.

Существующие способы анализа иммунных комплексов дают возможность определять лишь общее содержание указанных комплексов и не позволяют анализировать распределение иммунных комплексов по составу изотипов иммуноглобулинов, которые в них входят.

Наиболее близким к заявляемому способу является способ, раскрытый в патенте SU 1833818, включающий применение квазиупругого (динамического) светорассеяния для детекции продукта реакции связывания антигена со специфичными антителами. Описанный способ реализуют следующим образом. Специфичные к антигену антитела ковалентно связывают с частицами альдоенолдекстрана строго определенного молекулярного веса 500000 Да. Способом динамического светорассеяния (лазерной корреляционной спектроскопии - ЛКС) определяют коэффициент диффузии частиц альдоенолдекстрана с иммобилизованными на них антителами, который зависит от гидродинамического радиуса R_h указанных частиц. Поскольку размер частиц альдоенолдекстрана во много раз больше размера антител, иммобилизованных на нем, можно считать R_h альдоенолдекстрана с иммобилизованными на нем антителами равным R_h самого альдоенолдекстрана. Кроме того, поскольку вклад частиц определенного размера в суммарное рассеяние образца пропорционален 6 степени размера частиц и антитела, иммобилизованные на частицах декстрана, добавляют в исследуемый раствор в избытке, вкладами всех остальных фракций исследуемого раствора, в том числе и антигена можно пренебречь. Таким образом, использование частиц декстрана позволяет рассматривать биологическую жидкость, представляющую собой полидисперсную систему, как монодисперсную систему. В случае монодисперсной системы увеличивается точность обнаружения различий коэффициента диффузии образованного комплекса иммобилизованных антител с антигеном от коэффициента диффузии одного из субстратов - иммобилизованных на частицах альдоенолдекстрана антител. О присутствии антигена судят по увеличению размера частиц в реакционной смеси в результате связывания антигена с иммобилизованными на частицах альдоенолдекстрана антителами.

Иммобилизация антител на частицах альдоенолдекстрана позволяет отслеживать изменения коэффициента диффузии в полученной монодисперсной системе и детектировать взаимодействия антител с антигеном по появлению в образце агрегатов частиц декстрана, связанных с антигеном. Такой подход обеспечивает высокую чувствительность способа обнаружения наличия антигена в биологической жидкости, в частности, минимальная детектируемая концентрация антигена составляет приблизительно 4 пг/мл, что в 100-1000 раз меньше, чем концентрация, детектируемая способами иммуноферментного анализа или радиоаллергосорбентного теста.

Таким образом, указанный способ позволяет обнаруживать наличие в биологической жидкости определенного антигена, но не дает возможность получить информацию о присутствии в биологической жидкости иммунных комплексов, отслеживать изменение их количества при воздействии внешних факторов, а также не позволяет определять изотипы иммуноглобулинов, образующих эти комплексы.

Задачей настоящего изобретения является повышение диагностической и прогностической информативности способа выявления значимых для медицинских целей антигенов в биологических жидкостях путем получения сведений не только об образовании иммунных комплексов с присутствующими в исследуемых биологических жидкостях антителами, но и о наборе изотипов антител, связывающих указанные антигены.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Настоящее краткое описание предлагает краткое описание настоящего изобретения, предназначенное для того, чтобы в сжатой форме обозначить предмет и сущность изобретения. Краткое описание представляют с пониманием того, что его не следует применять для толкования или ограничения объема или смыслового содержания формулы изобретения.

Настоящее изобретение основано, в частности, на применении динамического светорассеяния и агентов, специфично взаимодействующих с иммуноглобулинами, например с иммуноглобулинами определенных изотипов. Характеристики иммунных комплексов (ИК) в биологической жидкости определяют с помощью динамического светорассеяния (ДСР) без их выделения из указанного образца. Такой подход позволяет получать новую информацию о функционировании системы гуморального иммунного ответа и создать новые, более информативные, способы диагностики заболеваний, связанных с аномалиями функционирования иммунной системы. Настоящее изобретение обеспечивает увеличение точности измерений и улучшение качества и надежности диагностики различных заболеваний и состояний.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения характеристики и состав ИК в образце биологической жидкости определяют путем регистрации изменения размеров иммунных комплексов в результате агрегации указанных комплексов при специфичном связывании с агентом, который специфично взаимодействует с иммуноглобулинами.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения характеристики и состав ИК в образце биологической жидкости определяют путем регистрации возникновения иммунных комплексов в результате взаимодействия иммуноглобулинов в указанном образце с агентом, который специфично взаимодействует с указанными иммуноглобулинами.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения характеристики и состав ИК в образце биологической жидкости определяют путем регистрации увеличения размеров иммунных комплексов в результате взаимодействия иммуноглобулинов в указанном образце с агентом, который специфично взаимодействует с указанными иммуноглобулинами.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения характеристики и состав ИК в образце биологической жидкости определяют после удаления части ИК из образца с применением агента, специфично взаимодействующего с иммуноглобулинами, например с иммуноглобулинами определенных изотипов.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения характеристики и состав ИК в образце биологической жидкости определяют путем регистрации изменения размеров иммунных комплексов в результате агрегации указанных комплексов при взаимодействии с моноклональными антителами к различным изотипам антител, входящих в состав иммунных комплексов.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения, характеристики и состав ИК в образце биологической жидкости определяют путем регистрации изменения размеров иммунных комплексов путем сравнения результатов анализа указанного образца до и после приведения указанного образца в контакт с указанным агентом, который специфично взаимодействует с иммуноглобулинами.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения характеристики и состав ИК в образце биологической жидкости определяют путем регистрации изменения размеров иммунных комплексов путем сравнения результатов анализа указанного образца до и после приведения указанного образца в контакт с указанным агентом, который специфично взаимодействует с иммуноглобулинами, например с иммуноглобулинами различных изотипов.

В одном из вариантов реализации настоящего изобретения приведение указанного образца в контакт с указанным агентом, который специфично взаимодействует с иммуноглобулинами, приводит к удалению указанных иммуноглобулинов из образца.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения характеристики и состав ИК в образце биологической жидкости определяют путем регистрации изменения размеров иммунных комплексов путем сравнения результатов анализа указанного образца до и после приведения указанного образца в контакт с указанным агентом, который специфично взаимодействует с иммуноглобулинами, что приводит к удалению указанных иммуноглобулинов из образца.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения характеристики и состав ИК в образце биологической жидкости определяют путем регистрации изменения вклада в светорассеяние иммунных комплексов путем сравнения результатов анализа указанного образца до и после приведения указанного образца в контакт с указанным агентом, который специфично взаимодействует с иммуноглобулинами.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения характеристики и состав ИК в образце биологической жидкости определяют путем регистрации изменения вклада в светорассеяние иммунных комплексов путем сравнения результатов анализа указанного образца до и после приведения указанного образца в контакт с указанным агентом, который специфично взаимодействует с иммуноглобулинами, например с иммуноглобулинами различных изотипов.

Согласно одному варианту реализации настоящего изобретения характеристики и состав ИК в образце биологической жидкости определяют путем регистрации изменения вклада в светорассеяние иммунных комплексов путем сравнения результатов анализа указанного образца до и после приведения указанного образца в контакт с указанным агентом, который специфично взаимодействует с иммуноглобулинами, что приводит к удалению указанных иммуноглобулинов из образца.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения предложен способ определения характеристики изотипического состава иммунных комплексов в образце биологической жидкости, полученном от субъекта, включающий:

(а) Обеспечение исходного образца биологической жидкости от субъекта;

(б) Получение для указанного образца спектра ДСР, который содержит пики, соответствующие частицам разного размера, которые присутствуют в указанном образце;

(в) Приведение указанного образца в контакт с по меньшей мере одним веществом, которое специфически связывается иммуноглобулинами одного или нескольких изотипов, содержащихся в образце;

(г) Удаление из указанного образца комплексов, содержащих указанное вещество с получением обработанного образца;

(д) Получение спектра ДСР обработанного образца, полученного на стадии (г), который содержит пики, соответствующие частицам разного размера, которые присутствуют в указанном обработанном образце;

(е) Сопоставление спектра ДСР, полученного на стадии (б), со спектром, полученным на стадии (д), на основании отличий спектра указанного обработанного образца и спектра, полученного для исходного образца, определяют характеристики изотипического состава иммунных комплексов, присутствующих в указанном образце биологической жидкости.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения предложен способ диагностики заболевания или состояния у субъекта, включающий определение характеристики изотипического состава иммунных комплексов в образце биологической жидкости субъекта, причем иммунные комплексы с указанной характеристикой изотипического состава присутствуют в биологической жидкости субъекта при указанном заболевании или состоянии, при этом указанную характеристику изотипического состава в образце биологической жидкости определяют с помощью способа по любому из соответствующих вариантов реализации настоящего изобретения.

В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения под характеристикой изотипического состава иммунных комплексов, с использованием которой осуществляют диагностику некоторого состояния или заболевания субъекта и которая является характерной для указанного заболевания или состояния, понимают, например, определенную комбинацию изотипов иммуноглобулинов, входящих в состав иммунных комплексов, или, например, отклонения от соотношения изотипов иммуноглобулинов, входящих в состав иммунных комплексов, наблюдаемого при норме, или, например, изменения относительных количеств иммунных комплексов, содержащих определенную комбинацию изотипов иммуноглобулинов.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения предложен способ диагностики заболевания или состояния у субъекта, включающий определение присутствия иммунных комплексов, содержащих определенную комбинацию изотипов иммуноглобулинов, в образце биологической жидкости, полученном от указанного субъекта, причем иммунные комплексы с указанной комбинацией изотипов присутствуют в биологической жидкости субъекта при указанном заболевании или состоянии (характерны для указанного заболевания или состояния), при этом присутствие указанных иммунных комплексов, содержащих комбинацию определенных изотипов иммуноглобулинов в образце биологической жидкости, определяют с помощью способа определения характеристик изотипического состава иммунных комплексов в образце биологической жидкости, полученном от субъекта, включающего:

(а) Обеспечение исходного образца биологической жидкости от субъекта;

(б) Получение для указанного образца спектра ДСР, который содержит пики, соответствующие частицам разного размера, которые присутствуют в указанном образце;

(в) Приведение указанного образца в контакт с по меньшей мере одним веществом, которое специфически связывается с иммуноглобулинами одного или нескольких изотипов, содержащихся в образце;

(г) Удаление из указанного образца комплексов, содержащих указанное вещество с получением обработанного образца;

(д) Получение спектра ДСР обработанного образца, полученного на стадии (г), который содержит пики, соответствующие частицам разного размера, которые присутствуют в указанном обработанном образце;

(е) Сопоставление спектра ДСР, полученного на стадии (б), со спектром, полученным на стадии (д), на основании отличий спектра указанного обработанного образца и спектра, полученного для исходного образца, определяют характеристики изотипического состава иммунных комплексов, присутствующих в указанном образце биологической жидкости.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения предложен способ диагностики заболевания или состояния у субъекта, включающий определение характеристики изотипического состава иммунных комплексов в образце биологической жидкости субъекта, причем иммунные комплексы с указанной характеристикой изотипического состава присутствуют в биологической жидкости субъекта при указанном заболевании или состоянии, при этом указанную характеристику изотипического состава в образце биологической жидкости определяют с помощью способа по любому из соответствующих вариантов реализации настоящего изобретения.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения указанная характеристика изотипического состава представляет собой присутствие в указанном образце биологической жидкости иммунных комплексов, содержащих определенный изотип иммуноглобулинов или определенную комбинацию изотипов иммуноглобулинов.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения указанная характеристика изотипического состава, определяемая с помощью способа согласно настоящему изобретению, представляет собой размер иммунного комплекса, содержащего иммуноглобулины одного или нескольких изотипов согласно, который присутствует в указанном исходном образце.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения указанная характеристика изотипического состава, определяемая с помощью способа согласно настоящему изобретению, представляет собой вклад в светорассеяние иммунного комплекса, который присутствует в указанном исходном образце.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения указанная характеристика изотипического состава, определяемая с помощью способа согласно настоящему изобретению, представляет собой присутствие иммуноглобулина определенного изотипа в иммунных комплексах в указанном исходном образце.

Согласно некоторым вариантам реализации настоящего изобретения указанная характеристика изотипического состава, определяемая с помощью способа согласно настоящему изобретению, представляет собой присутствие иммуноглобулина определенного изотипа в иммунных комплексах в указанном исходном образце в определенном соотношении по сравнению с другими изотипами антител, входящими в состав указанного иммунного комплекса.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения предложен способ оценки эффективности лечения заболевания или состояния у субъекта, включающий определение присутствия иммунных комплексов, содержащих определенную комбинацию изотипов иммуноглобулинов, в образце биологической жидкости, полученном от указанного субъекта, причем иммунные комплексы с указанной комбинацией изотипов присутствуют в биологической жидкости субъекта при указанном заболевании (характерны для указанного заболевания), при этом присутствие иммунных комплексов, содержащих комбинацию определенных изотипов иммуноглобулинов в образце биологической жидкости, определяют с помощью способа определения характеристик изотипического состава иммунных комплексов в образце биологической жидкости, полученном от субъекта, включающего:

(а) Обеспечение исходного образца биологической жидкости от субъекта;

(б) Получение для указанного образца спектра ДСР, который содержит пики, соответствующие частицам разного размера, которые присутствуют в указанном образце;

(в) Приведение указанного образца в контакт с по меньшей мере одним веществом, которое специфически связывается иммуноглобулинами одного или нескольких изотипов, содержащихся в образце;

(г) Удаление из указанного образца комплексов, содержащих указанное вещество с получением обработанного образца;

(д) Получение спектра ДСР обработанного образца, полученного на стадии (г), который содержит пики, соответствующие частицам разного размера, которые присутствуют в указанном обработанном образце;

(е) Сопоставление спектра ДСР, полученного на стадии (б), со спектром, полученным на стадии (д), на основании отличий спектра указанного обработанного образца и спектра, полученного для исходного образца, определяют характеристики изотипического состава иммунных комплексов, присутствующих в указанном образце биологической жидкости.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения предложен способ оценки риска развития патологического состояния у субъекта, включающий определение присутствия иммунных комплексов, содержащих определенную комбинацию изотипов иммуноглобулинов, в образце биологической жидкости, полученном от указанного субъекта, причем иммунные комплексы с указанной комбинацией изотипов присутствуют в биологической жидкости субъекта при указанном патологическом состоянии (характерны для указанного патологического состояния), при этом присутствие иммунных комплексов, содержащих комбинацию определенных изотипов иммуноглобулинов в образце биологической жидкости, определяют с помощью способа определения характеристик изотипического состава иммунных комплексов в образце биологической жидкости, полученном от субъекта, включающего:

(а) Обеспечение исходного образца биологической жидкости от субъекта;

(б) Получение спектра ДСР указанного образца, который содержит пики, соответствующие частицам разного размера, которые присутствуют в указанном образце;

(в) Приведение указанного образца в контакт с по меньшей мере одним веществом, которое специфически связывается иммуноглобулинами одного или нескольких изотипов, содержащихся в образце;

(г) Удаление из указанного образца комплексов, содержащих указанное вещество с получением обработанного образца;

(д) Получение спектра ДСР обработанного образца, полученного на стадии (г), который содержит пики, соответствующие частицам разного размера, которые присутствуют в указанном обработанном образце;

(е) Сопоставление спектра ДСР, полученного на стадии (б), со спектром, полученным на стадии (д), на основании отличий спектра указанного обработанного образца и спектра, полученного для исходного образца, определяют характеристики изотипического состава иммунных комплексов, присутствующих в указанном образце биологической жидкости.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения обеспечение исходного образца биологической жидкости включает отбор некоторого объема указанной биологической жидкости у субъекта.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения обеспечение исходного образца биологической жидкости включает удаление из указанного образца по меньшей мере части ИК, присутствующих в указанной биологической жидкости у субъекта с применением любого подходящего способа.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения обеспечение исходного образца биологической жидкости включает удаление из указанного образца по меньшей мере части ИК, присутствующих в указанной биологической жидкости у субъекта, с помощью фильтрации и/или центрифугирования.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения указанный субъект представляет собой млекопитающее.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения млекопитающее представляет собой человека.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения указанное вещество, которое специфически связывает иммуноглобулин, выбрано из: антитела против иммуноглобулина конкретного изотипа, бактериального белка, специфически связывающего иммуноглобулин, антигенного материала.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения указанные иммунные комплексы образовались в образце биологической жидкости спонтанным образом, т.е. присутствовали в образце биологической жидкости до его отбора у указанного субъекта.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения указанные иммунные комплексы образовались в образце биологической жидкости в результате добавления антигенного материала.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения определяют размер иммунного комплекса, который присутствует в указанном исходном образце.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения определяют вклад в светорассеяние иммунного комплекса, который присутствует в указанном исходном образце.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения, определяют присутствие иммуноглобулина определенного изотипа в указанном исходном образце.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения определяют присутствие иммуноглобулина определенного изотипа в составе иммунного комплекса в указанном образце.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения определяют комбинацию иммуноглобулинов определенного изотипа в составе иммунного комплекса в указанном образце.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения для получения спектра ДСР указанного образца применяют гетеродинную схему детекции динамического светорассеяния.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения обработанный образец получают посредством удаления комплекса вещества, которое специфично взаимодействует с иммуноглобулином на стадии с помощью одного или более из: иммуно-аффинной хроматографии, фильтрации, центрифугирования, например ультрацентрифугирования.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения вещество, которое специфично взаимодействует с иммуноглобулином, представляет собой антитело животного, принадлежащего к виду, отличному от того, от которого получен исходный образец биологической жидкости.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения исходный образец биологической жидкости представляет собой любую биологическую жидкость, содержащую иммуноглобулины. Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения исходный образец биологической жидкости представляет собой любую биологическую жидкость, содержащую ИК.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения исходный образец биологической жидкости представляет собой любую биологическую жидкость, например цельную кровь, плазму крови, сыворотку крови, лимфу, слюну, сперму, спинномозговую жидкость, молоко, молозиво, мокроту, амниотическую жидкость, мочу, гной, слизь, выпот, асцитическую жидкость или плевральную жидкость.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения при обработке исходного образца добавляют несколько веществ, каждое из которых специфично к иммуноглобулину определенного изотипа.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения при сопоставлении спектров ДСР исходного и обработанного образцов обнаруживают, что в обработанном образце присутствует пик, соответствующий частицам большего размера, чем размеры частиц, присутствующих в исходном образце.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения при сопоставлении спектров ДСР исходного и обработанного образцов обнаруживают, что в обработанном образце отсутствует пик, соответствующий частицам определенного размера, присутствующим в исходном образце.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения у субъекта, от которого получен образец биологической жидкости, диагностируют присутствие или определяют степень тяжести заболевания или состояния.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения указанное заболевание или состояние представляет собой одно или более из: ревматологического заболевания, аутоиммунного заболевания, реакции гиперчувствительности, аллергического заболевания, аллергической реакции, иммунной реакции на экзогеннные материалы, используемые в трансплантологии и стоматологии, реакции отторжения трансплантата, вирусной инфекции, бактериальной инфекции, паразитарной инфекции, инфекционного заболевания, новообразования, злокачественного новообразования, опухоли, рака.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения указанное заболевание или состояние выбрано из: реакции гиперчувствительности, аллергического заболевания, аутоиммунного заболевания, иммунной реакции на экзогенный материал, например иммунной реакции на экзогенный материал, используемые в трансплантологии и стоматологии, инфекционного заболевания, воспаления, рака.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения указанное заболевание или состояние представляет собой туберкулез.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения указанное заболевание или состояние представляет аллергию.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения указанное заболевание или состояние связано со злокачественным перерождением клеток иммунной системы, например представляет собой лимфому.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения указанное заболевание или состояние связано с присутствием в образце биологической жидкости указанного субъекта иммунных комплексов, содержащих определенную комбинацию изотипов иммуноглобулинов.

Также в соответствии с настоящим изобретением предложен набор для осуществления способа, описанного в настоящей заявке, включающий по меньшей мере одно вещество, которое специфически связывает иммуноглобулин определенного изотипа; инструкцию по осуществлению способа и, возможно, один или несколько реагентов для осуществления способа согласно настоящему изобретению.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения предложен набор для осуществления способа, описанного в настоящей заявке, включающий по меньшей мере одно вещество, которое специфически связывает иммуноглобулин определенного изотипа; инструкцию.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения указанное по меньшей мере одно вещество в наборе представляет собой антитело, специфичное к иммуноглобулину определенного изотипа.

Согласно одному из вариантов реализации настоящего изобретения указанное по меньшей мере одно антитело представляет собой моноклональное антитело.

Другие аспекты настоящего изобретения будут ясны из нижеследующего подробного описания.

КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ

Фигура 1. Гистограммы субфракционного состава частиц в аликвотах исходной плазмы (А), аликвоты после обработки белком А (Б), после добавления антигена (В), после добавления антигена и антисыворотки к IgE (Г).

Фигура 2. Гистограммы субфракционного состава частиц: обнаружение свободноциркулирующих иммунных комплексов (А) и индуцированных стандартным аллергеном смеси пыльцы деревьев иммунных комплексов (В) и определение изотипического состава (G1 - М и G1 Е) иммунных комплексов в плазме крови пациентки с аллергическим риноконъюнктивитом.

Фигура 3. Гистограммы субфракционного состава частиц в аликвотах исходной плазмы (А) и аликвоты после обработки белком А (Б) у пациентки с сезонным аллергическим риноконъюнктивитом.

Фигура 4. Гистограммы субфракционного состава частиц в аликвотах исходной плазмы (А), аликвоты после фильтрования через мембрану с диаметром пор 100 нм (Б) и аликвоты после добавления антигена домашней пыли (В) пациента с аллергическим риноконъюнктивитом.

Фигура 5. Гистограммы субфракционного состава частиц в аликвотах фильтрованной плазмы (А), ГСС той же плазмы с циклоцитрулином (Б), ГСС плазмы с циклоцитрулином и антителами к IgG3 (В), ГСС плазмы с циклоцитрулином и смесью антител a IgG1 и IgG3 (Г) и ГСС плазмы с циклоцитрулином и смесью антител a IgG3 и IgE (Д) пациента с ревматоидным артритом.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В одном аспекте настоящее изобретения относится к способу определения характеристики изотипического состава иммунных комплексов в образце биологической жидкости, полученном от субъекта, включающему:

(а) Обеспечение исходного образца биологической жидкости от субъекта;

(б) Получение для указанного образца спектра ДСР, который содержит пики, соответствующие частицам разного размера, которые присутствуют в указанном образце;

(в) Приведение указанного образца в контакт с по меньшей мере одним веществом, которое специфически связывается иммуноглобулинами одного или нескольких изотипов, содержащихся в образце;

(г) Удаление из указанного образца комплексов, содержащих указанное вещество с получением обработанного образца;

(д) Получение спектра ДСР обработанного образца, полученного на стадии (г), который содержит пики, соответствующие частицам разного размера, которые присутствуют в указанном обработанном образце;

(е) Сопоставление спектра ДСР, полученного на стадии (б), со спектром, полученным на стадии (д), на основании отличий спектра указанного обработанного образца и спектра, полученного для исходного образца, определяют характеристики изотипического состава иммунных комплексов, присутствующих в указанном образце биологической жидкости.

В одном аспекте настоящее изобретение также относится к способу диагностики заболевания у субъекта, включающем определение присутствия иммунных комплексов, содержащих определенную комбинацию изотипов иммуноглобулинов, в образце биологической жидкости, полученном от указанного субъекта, причем иммунные комплексы с указанной комбинацией изотипов присутствуют в биологической жидкости субъекта при указанном заболевании (характерны для указанного заболевания), при этом присутствие иммунных комплексов, содержащих комбинацию определенных изотипов иммуноглобулинов в образце биологической жидкости определяют с помощью способа определения характеристик изотипического состава иммунных комплексов в образце биологической жидкости, полученном от субъекта, включающем:

(а) Обеспечение исходного образца биологической жидкости от субъекта;

(б) Получение для указанного образца спектра ДСР, который содержит пики, соответствующие частицам разного размера, которые присутствуют в указанном образце;

(в) Приведение указанного образца в контакт с по меньшей мере одним веществом, которое специфически связывается иммуноглобулинами одного или нескольких изотипов, содержащихся в образце;

(г) Удаление из указанного образца комплексов, содержащих указанное вещество с получением обработанного образца;

(д) Получение спектра ДСР обработанного образца, полученного на стадии (г), который содержит пики, соответствующие частицам разного размера, которые присутствуют в указанном обработанном образце;

(е) Сопоставление спектра ДСР, полученного на стадии (б), со спектром, полученным на стадии (д),), на основании отличий спектра указанного обработанного образца и спектра, полученного для исходного образца, посредством чего определяют характеристики изотипического состава иммунных комплексов, присутствующих в указанном образце биологической жидкости.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к применению способа динамического светорассеяния для определения характеристик изотипического состава иммунных комплексов.

В одном аспекте настоящее изобретение относится к применению способа динамического светорассеяния для определения характеристик изотипического состава иммунных комплексов, при этом указанный способ включает:

(а) Обеспечение исходного образца биологической жидкости от субъекта;

(б) Получение для указанного образца спектра ДСР, который содержит пики, соответствующие частицам разного размера, которые присутствуют в указанном образце;

(в) Приведение указанного образца в контакт с по меньшей мере одним веществом, которое специфически связывается с иммуноглобулинами одного или нескольких изотипов, содержащихся в образце;

(г) Удаление из указанного образца комплексов, содержащих указанное вещество с получением обработанного образца;

(д) Получение спектра ДСР обработанного образца, полученного на стадии (г), который содержит пики, соответствующие частицам разного размера, которые присутствуют в указанном обработанном образце;

(е) Сопоставление спектра ДСР, полученного на стадии (б), со спектром, полученным на стадии (д), на основании отличий спектра указанного обработанного образца и спектра, полученного для исходного образца, определяют характеристики изотипического состава иммунных комплексов, присутствующих в указанном образце биологической жидкости.

В одном из вариантов реализации настоящее изобретение относится к способу определения характеристики изотипического состава иммунных комплексов в образце биологической жидкости, полученном от субъекта, включающему:

(а) Обеспечение исходного образца биологической жидкости от субъекта;

(б) Получение для указанного образца спектра ДСР, который содержит пики, соответствующие частицам разного размера, которые присутс