Слитые полипептиды, содержащие домен wap, и способы их применения

Слитые полипептиды, содержащие домен wap, и способы их применения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Родственные заявки

[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на патент США № 61/502052, поданной 28 июня 2011 г.; предварительной заявки на патент США № 61/565625, поданной 1 декабря 2011 г., и предварительной заявки на патент США № 61/638168, поданной 25 апреля 2012 г., и предварительной заявки на патент США № 61/638516, поданной 26 апреля 2012 г. Содержание каждой из этих заявок полностью включено в настоящее описание путем ссылки.

Область, к которой относится изобретение

[0002] Настоящее изобретение относится к молекулам, в частности полипептидам, конкретнее, к слитым белкам, которые включают полипептид, содержащий домен сывороточного кислотного белка (WAP), или к аминокислотной последовательности, которая получена из содержащего домен WAP полипептида, и второй полипептид. Кроме того, изобретение относится к слитым белкам, которые включают содержащий домен WAP полипептид, или аминокислотную последовательность, которая получена из содержащего домен WAP полипептида, и второй полипептид, и третий полипептид. В частности, настоящее изобретение относится к слитым белкам, которые включают полипептиды, содержащие домен WAP, и второй полипептид, или слитые белки, которые включают полипептиды, содержащие домен WAP, второй полипептид, и третий полипептид, где второй и третий полипептиды слитых белков по изобретению могут представлять собой по меньшей мере один из следующих: полипептид Fc или аминокислоту, происходящую из полипептида Fc; полипептид альбумина или аминокислотную последовательность, которая происходит из полипептида альбумина; нацеливающие на цитокин полипептиды или аминокислотную последовательность, которая происходит из нацеливающего на цитокин полипептида; и серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, которая происходит из серпинового полипептида. Настоящее изобретение также относится к способам применения таких молекул по разнообразным терапевтическим и диагностическим показаниям, а также к способам получения таких молекул.

Предпосылки изобретения

[0003] Аберрантная активность сериновой протеазы или дисбаланс протеаз и их ингибиторов может привести к опосредованному протеазами разрушению ткани и к воспалительным реакциям. Соответственно существует потребность в терапевтических средствах и способах лечения, которые нацелены на аберрантную активность сериновой протеазы и/или дисбаланс протеаз и их ингибиторов.

Краткое описание сущности изобретения

[0004] Описанные здесь слитые белки включают по меньшей мере полипептид, содержащий домен сывороточного кислотного белка (WAP), или аминокислотную последовательность, которая происходит из содержащего домен WAP полипептида (Полипептид 1), и второй полипептид (Полипептид 2). Кроме того, слитые белки, описанные здесь, включают полипептид, содержащий домен сывороточного кислотного белка (WAP), или аминокислотную последовательность, которая происходит из содержащего домен WAP полипептида (Полипептид 1), второй полипептид (Полипептид 2), и третий полипептид (Полипептид 3). В частности, настоящее изобретение относится к слитым белкам, которые включают содержащий домен WAP полипептид, и второй полипептид или содержащий домен WAP полипептид, второй полипептид и третий полипептид, где второй и третий полипептиды могут включать по меньшей мере один из следующих: полипептида Fc или аминокислоты, происходящей из полипептида Fc; полипептида альбумина или аминокислотной последовательности, которая происходит из полипептида альбумина; нацеливающих на цитокин полипептидов или аминокислотных последовательностей, которые происходят из нацеливающих на цитокин полипептидов; и серпинового полипептида или аминокислотной последовательности, которая происходит из серпинового полипептида.

[0005] Взаимозаменяемо используемые в настоящем описании термины «слитый белок» и «слитый полипептид» относятся к полипептиду, содержащему домен WAP, или к аминокислотной последовательности, происходящей из содержащего домен WAP полипептида, функционально связанным по меньшей мере со вторым полипептидом, или аминокислотной последовательностью, происходящей из второго полипептида. Индивидуализированные элементы слитого белка могут быть связаны любым из разнообразных путей, включая, например, прямое прикрепление, использование промежуточного или спейсерного пептида, использование линкерной области, использование шарнира, или использование и линкера, и шарнира. В некоторых вариантах осуществления, линкерная область может укладываться в пределы шарнира, или, альтернативно, шарнир может укладываться в пределы линкерной области. Предпочтительно, линкерная область представляет собой пептидную последовательность. Например, линкерный пептид включает примерно от нуля до 40 аминокислот, например, от нуля до 35 аминокислот, от нуля до 30 аминокислот, от нуля до 25 аминокислот или от нуля до 20 аминокислот. Предпочтительно, шарнир представляет собой пептидную последовательность. Например, шарнирный пептид включает примерно от нуля до 75 аминокислот, например, от нуля до 70 аминокислот, от нуля до 65 аминокислот или от нуля до 62 аминокислот. В вариантах осуществления, где слитый белок включает и линкерную область, и шарнир, предпочтительно, каждая из линкерной области и шарнира представляет собой пептидную последовательность. В этих вариантах осуществления, шарнирный пептид и линкерный пептид вместе включают примерно от нуля до 90 аминокислот, например, от нуля до 85 аминокислот или от нуля до 82 аминокислот.

[0006] В некоторых вариантах осуществления, часть на основе домена WAP и часть на основе второго полипептида слитого белка могут быть связаны не ковалентно через промежуточный связывающий полипептид. В некоторых вариантах осуществления, часть на основе домена WAP и часть на основе второго полипептида слитого белка могут быть не ковалентно связаны.

[0007] В некоторых вариантах осуществления, слитые белки в соответствии с изобретением могут иметь одну из следующих формул, в направлении от N-конца к C-концу или в направлении от C-конца к N-концу:

Полипептид 1_(a) - шарнир_m - Полипептид 2_(b)

Полипептид 1_(a) - линкер_n - Полипептид 2_(b)

Полипептид 1_(a) - линкер_n - шарнир_m - Полипептид 2_(b)

Полипептид 1_(a) - шарнир_m - линкер_n - Полипептид 2_(b)

Полипептид 1_(a) - Полипептид 2_(b) - Полипептид 3_(C)

Полипептид 1_(a) - шарнир_m - Полипептид 2_(b) - шарнир_m - Полипептид 3_(C)

Полипептид 1_(a) - линкер_n - Полипептид 2_(b) - линкер_n - Полипептид 3_(C)

Полипептид 1_(a) - шарнир_m - линкер_n - Полипептид 2_(b) - шарнир_m - линкер_n - Полипептид 3_(c) Полипептид 1_(a) - линкер_n - шарнир_m - Полипептид 2_(b) - линкер_n - шарнир_m - Полипептид 3_(C)

где n обозначает целое число от нуля до 20, где m обозначает целое число от 1 до 62, и где a, b, и c обозначают целое число по меньшей мере единицу. Эти варианты осуществления включают указанные выше составы и любой их вариант или комбинацию. Например, порядок полипептидов в формулах также включает Полипептид 3_(C) - Полипептид 1_(a) - Полипептид 2_(b), Полипептид 2_(b) - Полипептид 3_(C) - Полипептид 1_(a) или любой их вариант или комбинацию.

[0008] В некоторых вариантах осуществления, Последовательность Полипептида 1 включает полипептид, содержащий домен сывороточного кислотного белка (WAP). Домен WAP представляет собой эволюционно сохранный мотив последовательности из 50 аминокислот, содержащий восемь цистеинов, обнаруживаемый в характерном 4-дисульфидном коровом расположении (также называемом «четырехдисульфидный мотив»). Мотив последовательности домена WAP представляет собой функциональный мотив, характеризуемый активностью ингибирования серин-протеазы в ряде белков. Полипептиды, содержащие домен WAP, подходящие для использования в слитых белках по настоящему изобретению включают, в качестве не ограничивающего примера, секреторный лейкоцитарный ингибитор протеаз (SLPI), Элафин и Эппин.

[0009] В некоторых вариантах осуществления, последовательность Полипептида 1 включает полипептидную последовательность секреторного лейкоцитарного ингибитора протеаз (SLPI) или аминокислотную последовательность, которая происходит из SLPI. В некоторых вариантах осуществления, последовательность Полипептида 1 включает часть в форме белка SLPI, такую как, например, домен WAP2 или его подчасть. В предпочтительном варианте осуществления, полипептидная последовательность SLPI или аминокислотная последовательность, которая происходит из SLPI, происходит из полипептидной последовательности человеческого SLPI.

[0010] В некоторых вариантах осуществления, слитый белок включает полноразмерную полипептидную последовательность человеческого SLPI, имеющую следующую аминокислотную последовательность:

[0011] В некоторых вариантах осуществления, слитый белок включает полипептидную последовательность человеческого SLPI, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 1.

[0012] В некоторых вариантах осуществления, слитый белок включает часть в форме полноразмерной полипептидной последовательности человеческого SLPI, где часть имеет следующую аминокислотную последовательность:

[0013] В некоторых вариантах осуществления, слитый белок включает полипептидную последовательность человеческого SLPI, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2.

[0014] В некоторых вариантах осуществления, слитый белок включает домен WAP2 полноразмерной полипептидной последовательности человеческого SLPI, где домен WAP2 имеет следующую аминокислотную последовательность:

[0015] В некоторых вариантах осуществления, слитый белок включает полипептидную последовательность человеческого SLPI, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 3.

[0016] В некоторых вариантах осуществления, полипептидная последовательность SLPI представляет собой или аминокислотная последовательность, происходящая из полипептида SLPI, происходит из одной или более полипептидных последовательностей человеческого SLPI, показанных в номерах доступа в Генном Банке CAA28187.1, NP_003055.1, EAW75869.1, P03973.2, AAH20708.1, CAB64235.1, CAA28188.1, AAD19661.1 и/или BAG35125.1.

[0017] В некоторых вариантах осуществления, слитый белок включает полноразмерную полипептидную последовательность человеческого Элафина, имеющую следующую аминокислотную последовательность:

[0018] В некоторых вариантах осуществления, слитый белок включает полипептидную последовательность человеческого Элафина, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 4.

[0019] В некоторых вариантах осуществления, слитый белок включает часть в форме полноразмерной полипептидной последовательности человеческого Элафина, где эта часть имеет следующую аминокислотную последовательность:

[0020] В некоторых вариантах осуществления, слитый белок включает полипептидную последовательность человеческого Элафина, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 5.

[0021] В некоторых вариантах осуществления, слитый белок включает домен WAP полноразмерной полипептидной последовательности человеческого Элафина, где домен WAP имеет следующую аминокислотную последовательность:

[0022] В некоторых вариантах осуществления, слитый белок включает полипептидную последовательность человеческого Элафина, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 6.

[0023] В некоторых вариантах осуществления, полипептидная последовательность Элафина представляет собой или аминокислотная последовательность, происходящая из полипептида Элафина, происходит из одной или более из полипептидных последовательностей человеческого элафина, показанных в номерах доступа в Генном Банке P19957.3, NP 002629.1, BAA02441.1, EAW75814.1, EAW75813.1, Q8IUB2.1 и/или NP_542181.1.

[0024] В некоторых вариантах осуществления, последовательность Полипептида 1 включает полипептидную последовательность эппина или аминокислотную последовательность, которая происходит из эппина. В некоторых вариантах осуществления, последовательность Полипептида 1 включает часть в форме белка эппина, такой как, например, домен WAP или его подчасть. В предпочтительном варианте осуществления, полипептидная последовательность эппина представляет собой или аминокислотная последовательность, которая происходит из эппина, происходит из полипептидной последовательности человеческого эппина.

[0025] В некоторых вариантах осуществления, полипептидная последовательность эппина представляет собой или аминокислотная последовательность, происходящая из полипептида эппина, происходит из одной или более полипептидных последовательностей человеческого эппина, показанных в номерах доступа в Генном Банке 095925.1, NP 065131.1, AAH44829.2, AAH53369.1, AAG00548.1, AAG00547.1 и/или AAG00546.1.

[0026] В некоторых вариантах осуществления, слитые белки содержат одну или несколько мутаций. Например, слитый белок содержит по меньшей мере одну мутацию метионинового (Met) остатка в не-Fc части слитого белка, например, в части SLPI слитого белка. При этих мутациях Met, остаток Met может быть замещен любой аминокислотой. Например, остаток Met может быть замещен аминокислотой с гидрофобной боковой цепью, такой как, например, лейцин (Leu, L) или валин (Val, V). Без желаемой связи с теорией, мутация (мутации) Met предотвращают окисление и последующую инактивацию ингибиторной активности слитых белков по изобретению. В некоторых вариантах осуществления, мутация Met находится в положении 98 полипептида SLPI, например, мутация Met представляет собой Met98Leu (M98L) в SEQ ID NO: 8.

[0027] В некоторых вариантах осуществления, слитые белки модифицированы для увеличения или иного ингибирования протеолитического расщепления мутацией сайтов протеолитического расщепления.

В некоторых вариантах осуществления, мутация сайта протеолитического расщепления происходит в остатке в части в форме SLPI слитого белка. Например, мутация сайта протеолитического расщепления происходит в остатке в аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 2, выбранном из Ser15, Ala16, Glu17, и их комбинаций.

[0028] В некоторых вариантах осуществления, второй полипептид (Полипептид 2) содержащего домен WAP слитого белка представляет собой полипептид Fc или происходит из полипептида Fc. Эти варианты осуществления совместно именуются в настоящем описании как «слитые белки WAP-Fc». Слитые белки WAP-Fc, описанные здесь, включают по меньшей мере содержащий домен WAP полипептид, или аминокислотную последовательность, которая происходит из содержащего домен WAP полипептида, и полипептид Fc или аминокислотную последовательность, которая происходит из полипептида Fc.

[0029] В некоторых вариантах осуществления, слитый белок WAP-Fc включает полипептид, содержащий один домен WAP. В других вариантах осуществления, слитые белки WAP-Fc включают полипептид, содержащий несколько доменов WAP, совместно именуемые здесь как «слитый белок WAP_(a’)-Fc», где (a’) обозначает целое число, составляющее по меньшей мере 2. В некоторых вариантах осуществления, полипептиды, содержащие домен WAP, в слитом белке WAP_(a’)-Fc, могут включать одинаковую аминокислотную последовательность. Например, полипептиды, содержащие домен WAP слитого белка WAP_(a’)-Fc, могут происходить из полипептида SLPI или Элафина, но ни из обоих (например, Элафин-Fc-Элафин, или SLPI-Fc-SLPI). В других вариантах осуществления, полипептиды, содержащие домен WAP в слитом белке WAP_(a’)-Fc, могут включать отличающиеся аминокислотные последовательности. Например, слитый белок включает аминокислотные последовательности, происходящие и из SLPI, и из Элафина (например, SLPI-Fc-Элафин, или Элафин-Fc-SLPI).

[0030] В некоторых вариантах осуществления содержащий домен WAP полипептид слитого белка WAP-Fc происходит из любой из аминокислотных последовательностей SEQ ID NOs 1-6. В некоторых вариантах осуществления, содержащий домен WAP полипептид, слитого белка WAP-Fc, имеет идентичность последовательности по меньшей мере 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% с любой из аминокислотных последовательностей, имеющих SEQ ID NO. 1, 2, 3, 4, 5 или 6.

[0031] В некоторых вариантах осуществления, содержащий домен WAP полипептид, слитого белка WAP-Fc, представляет собой или происходит из последовательностей, показанных в номерах доступа Генного Банка CAA28187.1, NP_003055.1, EAW75869.1, P03973.2, AAH20708.1, CAB64235.1, CAA28188.1, AAD19661.1, BAG35125.1, P19957.3, NP_002629.1, BAA02441.1, EAW75814.1, EAW75813.1, Q8IUB2.1 и/или ΝΡ_542181.1, 095925.1, ΝΡ_065131.1, АΑΗ44829.2, AAH53369.1, AAG00548.1, AAG00547.1 и/или AAG00546.1.

[0032] В некоторых вариантах осуществления, полипептид Fc слитого белка WAP-Fc представляет собой человеческий полипептид Fc, например, полипептидную последовательность Fc человеческого IgG или аминокислотную последовательность, которая происходит из полипептидной последовательности Fc человеческого IgG. В некоторых вариантах осуществления, полипептид Fc представляет собой полипептид Fc человеческого IgG1 или аминокислотную последовательность, которая происходит из полипептидной последовательности Fc человеческого IgG1. В некоторых вариантах осуществления, полипептид Fc представляет собой полипептид Fc человеческого IgG2 или аминокислотную последовательность, которая происходит из полипептидной последовательности Fc человеческого IgG2. В некоторых вариантах осуществления, полипептид Fc представляет собой полипептид Fc человеческого IgG3 или аминокислотную последовательность, которая происходит из полипептидной последовательности Fc человеческого IgG3. В некоторых вариантах осуществления, полипептид Fc представляет собой полипептид Fc человеческого IgG4 или аминокислотную последовательность, которая происходит из полипептидной последовательности Fc человеческого IgG4. В некоторых вариантах осуществления, полипептид Fc представляет собой полипептид Fc человеческого IgM или аминокислотную последовательность, которая происходит из полипептидной последовательности Fc человеческого IgM.

[0033] В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок по изобретению включает полипептид Fc, полипептид Fc слитого белка включает полипептидную последовательность Fc человеческого IgG1, имеющую следующую аминокислотную последовательность:

[0034] В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок по изобретению включает полипептид Fc, полипептид Fc слитого белка включает полипептидную последовательность Fc человеческого IgG1, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 7.

[0035] В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок по изобретению включает полипептид Fc, полипептид Fc слитого белка включает полипептидную последовательность Fc человеческого IgG2, имеющую следующую аминокислотную последовательность:

[0036] В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок по изобретению включает полипептид Fc, полипептид Fc слитого белка включает полипептидную последовательность Fc человеческого IgG2, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 8.

[0037] В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок по изобретению включает полипептид Fc, полипептид Fc слитого белка включает полипептидную последовательность Fc человеческого IgG3, имеющую следующую аминокислотную последовательность:

[0038] В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок по изобретению включает полипептид Fc, полипептид Fc слитого белка включает полипептидную последовательность Fc человеческого IgG3, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 9.

[0039] В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок по изобретению включает полипептид Fc, полипептид Fc слитого белка включает полипептидную последовательность Fc человеческого IgG4, имеющую следующую аминокислотную последовательность:

[0040] В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок по изобретению включает полипептид Fc, полипептид Fc слитого белка включает полипептидную последовательность Fc человеческого IgG4, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 10.

[0041] В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок по изобретению включает полипептид Fc, полипептид Fc слитого белка включает полипептидную последовательность Fc человеческого IgGM, имеющую следующую аминокислотную последовательность:

[0042] В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок по изобретению включает полипептид Fc, полипептид Fc слитого белка включает полипептидную последовательность Fc человеческого IgM, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 11.

[0043] В некоторых вариантах осуществления слитых белков по настоящему изобретению, второй полипептид (Полипептид 2) содержащего домен WAP слитого белка представляет собой нацеливающий на цитокин полипептид или происходит из нацеливающего на цитокин полипептида. Эти варианты осуществления совместно именуются здесь «слитые белки, состоящие из WAP-нацеливающего на цитокин полипептида». Слитые белки WAP-нацеливающий на цитокин полипептид, описанные здесь, включают по меньшей мере содержащий домен WAP полипептид или аминокислотную последовательность, которая происходит из содержащего домен WAP полипептида, и нацеливающий на цитокин полипептид или его производное. В некоторых вариантах осуществления, слитый белок WAP-нацеливающий на цитокин полипептид включает полипептид, содержащий один домен WAP. В других вариантах осуществления слитый белок WAP-нацеливающий на цитокин полипептид включает полипептид, содержащий несколько доменов WAP, и эти варианты осуществления совместно именуются здесь как «слитые белки WAP_(a’)-нацеливающий на цитокин полипептид», где (a’) обозначает целое число по меньшей мере 2. В некоторых вариантах осуществления, каждый содержащий домен WAP полипептид в слитом белке WAP_(a’) -нацеливающий на цитокин полипептид может включать одинаковую аминокислотную последовательность. В других вариантах осуществления, каждый содержащий домен WAP полипептид в слитом белке WAP_(a’)-нацеливающий на цитокин полипептид может включать различные аминокислотные последовательности.

[0044] В некоторых вариантах осуществления, содержащий домен WAP полипептид слитого белка из WAP-нацеливающего на цитокин полипептида происходит из любой из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO 1-6. В некоторых вариантах осуществления, содержащий домен WAP полипептид слитого белка из WAP-нацеливающего на цитокин полипептида имеет идентичность последовательности по меньшей мере 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% с любой из аминокислотных последовательностей, имеющих SEQ ID NO. 1, 2, 3, 4, 5 или 6.

[0045] В некоторых вариантах осуществления, содержащий домен WAP полипептид слитого белка из WAP-нацеливающего на цитокин полипептида представляет собой или происходит из последовательностей, показанных в номерах доступа Генного Банка CAA28187.1, NP_003055.1, EAW75869.1, P03973.2, AAH20708.1, CAB64235.1, CAA28188.1, AAD19661.1, BAG35125.1, P19957.3, NP_002629.1, BAA02441.1, EAW75814.1, EAW75813.1, Q8IUB2.1, и/или NP_542181.1, 095925.1, NP_065131.1, AAH44829.2, AAH53369.1, AAG00548.1, AAG00547.1 и/или AAG00546.1.

[0046] В некоторых вариантах осуществления, нацеливающий на цитокин полипептид слитого белка из WAP-нацеливающего на цитокин полипептида представляет собой цитокиновый рецептор или происходит из цитокинового рецептора. В предпочтительном варианте осуществления, нацеливающий на цитокин полипептид представляет собой или аминокислотная последовательность, которая происходит из цитокинового рецептора, происходит из последовательности человеческого цитокинового рецептора. В других вариантах осуществления, нацеливающий на цитокин полипептид представляет собой антитело или фрагмент антитела, например антитело к цитокину или фрагмент антитела к цитокину. Термин фрагмент антитела включает одиночную цепь, фрагмент Fab, фрагмент F(ab')₂, scFv, scAb, dAb, антитело к домену одиночной тяжелой цепи и антитело к домену одиночной легкой цепи. В предпочтительном варианте осуществления, нацеливающий на цитокин полипептид представляет собой или аминокислотную последовательность, которая происходит из антитела, или фрагмент антитела происходит из последовательности химерного, гуманизированного или полностью человеческого антитела. В других вариантах осуществления, нацеливающий на цитокин полипептид связывает цитокиновый рецептор и предотвращает связывание цитокина с рецептором.

[0047] Слитый белок WAP-нацеливающий на цитокин полипептид может включать часть слитого белка WAP-Fc. Например, антитело содержит полипептид Fc. Поэтому, в некоторых вариантах осуществления, где нацеливающий на цитокин полипептид представляет собой нацеленное на цитокин антитело, слитый белок WAP-нацеливающий на цитокин полипептид включает часть слитого белка WAP-Fc. Кроме того, большинство рецепторных слитых белков, которые могут иметь терапевтическое применение, представляют собой слитые белки Fc. Так, в некоторых вариантах осуществления, где слитый белок из WAP-нацеливающего на цитокин полипептида представляет собой слитый белок WAP-цитокиновый рецептор, то слитый белок WAP-нацеливающий на цитокин полипептид может включать полипептид Fc в дополнение к части в виде содержащего домен WAP полипептида и части в виде цитокинового рецептора.

[0048] В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок WAP-нацеливающий на цитокин полипептид включает последовательность полипептида Fc, то последовательность полипептида Fc происходит из одной из аминокислотных последовательностей, имеющих SEQ ID NO. 7, 8, 9, 10 или 11. В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок WAP-нацеливающий на цитокин полипептид включает последовательность полипептида Fc, то последовательность полипептида Fc имеет идентичность последовательности по меньшей мере 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% с аминокислотной последовательностью любой из последовательностей, имеющих SEQ ID NO. 7, 8, 9, 10 или 11.

[0049] В некоторых вариантах осуществления, содержащий домен WAP полипептид, и нацеливающий на цитокин полипептид функционально связаны через линкерную область, например, глицин-сериновый линкер или линкер на глицин-сериновой основе. В некоторых вариантах осуществления, содержащий домен WAP полипептид, и нацеливающий на цитокин полипептид функционально связаны через шарнир. В некоторых вариантах осуществления, содержащий домен WAP полипептид, и нацеливающий на цитокин полипептид функционально связаны через линкерную область и шарнир. В других вариантах осуществления, серпиновый полипептид и нацеливающий на цитокин полипептид скреплены непосредственно.

[0050] В некоторых вариантах осуществления слитых белков по настоящему изобретению, второй полипептид (Полипептид 2) содержащего домен WAP слитого белка представляет собой серпиновый полипептид или происходит из серпинового полипептида. Эти варианты осуществления совместно именуются здесь как «слитые белки WAP-серпин». Слитые белки WAP-серпин, описанные здесь, включают по меньшей мере содержащий домен WAP полипептид, или аминокислотную последовательность, которая происходит из содержащего домен WAP полипептида, и серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, которая происходит из серпинового полипептида.

[0051] В некоторых вариантах осуществления, содержащий домен WAP полипептид слитого белка WAP-серпин происходит из любой из аминокислотных последовательностей SEQ ID NOs 1-6. В некоторых вариантах осуществления, содержащий домен WAP полипептид слитого белка WAP-серпин имеет идентичность последовательности по меньшей мере 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% с любой из аминокислотных последовательностей, имеющих SEQ ID NO. 1, 2, 3, 4, 5 или 6.

[0052] В некоторых вариантах осуществления, содержащая домен WAP полипептидная последовательность слитого белка WAP-серпин представляет собой или происходит из последовательностей, показанных в номерах доступа Генного Банка CAA28187.1, NP_003055.1, EAW75869.1, P03973.2, AAH20708.1, CAB64235.1, CAA28188.1, AAD19661.1, BAG35125.1., P19957.3, NP_002629.1, BAA02441.1, EAW75814.1, EAW75813.1, Q8IUB2.1 и/или NP_542181.1, 095925.1, NP065131.1, AAH44829.2, AAH53369.1, AAG00548.1, AAG00547.1 и/или AAG00546.1.

[0053] Слитые белки WAP-серпин, описанные здесь, включают содержащий домен WAP полипептид и серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, которая происходит из серпинового полипептида. Серпины представляют собой группу белков с одинаковыми структурами, которые сначала идентифицировали как набор белков, способных ингибировать протеазы. Серпиновые белки, подходящие для использования в слитых белках по настоящему изобретению, включают в качестве не ограничивающего примера, альфа-1 антитрипсин (AAT), связанный с антитрипсином белок (СЕРПИНA2), альфа-1 антихимотрипсин (СЕРПИНA3), каллистатин (СЕРПИНA4), ингибитор эластазы моноцитов и нейтрофилов (СЕРПИНB1), PI-6 (СЕРПИНB6), антитромбин (СЕРПИНC1), ингибитор активатора плазминогена 1 (СЕРПИНE1), альфа-2 антиплзмин (СЕРПИНF2), ингибитор комплемента 1 (СЕРПИНG1) и нейросерпин (СЕРПИНI1).

[0054] В некоторых вариантах осуществления, последовательность серпинового полипептида содержит полипептидную последовательность альфа-1 антитрипсина (AAT) или аминокислотную последовательность, которая происходит из AAT. В некоторых вариантах осуществления, последовательность серпинового полипептида содержит часть белка AAT. В некоторых вариантах осуществления, последовательность серпинового полипептида содержит по меньшей мере часть в виде петли реактивного участка белка AAT. В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок по изобретению включает серпиновый полипептид, серпиновый полипептид слитого белка включает часть в виде петли реактивного участка белка AAT или включает по меньшей мере аминокислотную последовательность GTEAAGAMFLEAIPMSIPPEVKFNK (SEQ ID NO: 12). В предпочтительном варианте осуществления, полипептидная последовательность AAT представляет собой или аминокислотная последовательность, которая происходит из AAT, происходит из полипептидной последовательности человеческого AAT. В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок по изобретению включает серпиновый полипептид, серпиновый полипептид слитого белка включает модифицированный вариант части в виде петли реактивного участка белка AAT или включает по меньшей мере аминокислотную последовательность GTEAAGAEFLEAIPLSIPPEVKFNK (SEQ ID NO: 38).

[0055] В некоторых вариантах осуществления слитых белков WAP-серпин, серпиновый полипептид включает полноразмерную полипептидную последовательность человеческого AAT, имеющую следующую аминокислотную последовательность:

[0056] В некоторых вариантах осуществления слитых белков WAP-серпин, серпиновый полипептид включает полипептидную последовательность человеческого AAT, которая по меньшей мере на 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% идентична аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 13.

[0057] В некоторых вариантах осуществления слитых белков WAP-серпин, серпиновый полипептид включает полипептидную последовательность AAT или аминокислотную последовательность, происходящую из полипептида AAT или происходящую из одной или нескольких полипептидных последовательностей человеческого AAT, показанных в номерах доступа Генного Банка AAB59495.1, CAJ15161.1, P01009.3, AAB59375.1, AAA51546.1, CAA25838.1, NP_001002235.1, CAA34982.1, NP_001002236.1, NP_000286.3, NP_001121179.1, NP_001121178.1, ΝΡ_001121177.1, NP_001121176.16, NP_001121175.1, NP_001121174.1, NP_001121172.

[0058] В некоторых вариантах осуществления, слитый белок WAP-серпиновый домен может также включать полипептид Fc или аминокислотную последовательность, которая происходит из полипептида Fc. Эти варианты осуществления совместно именуются здесь как «слитые белки WAP-Fc-серпин». В этих вариантах осуществления, данную терминологию не следует трактовать как конкретный порядок расположения частей. Например, порядок расположения частей слитого белка может представлять собой WAP-Fc-серпин, серпин-WAP-Fc или любой их вариант или комбинацию. Слитые белки WAP-Fc-серпин, описанные здесь, включают по меньшей мере содержащий домен WAP полипептид или аминокислотную последовательность, которая происходит из содержащего домен WAP полипептида, серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, которая происходит из серпинового полипептида, и полипептид Fc или аминокислотную последовательность, которая происходит из полипептида Fc.

[0059] В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок WAP-серпиновый полипептид включает последовательность полипептида Fc, то последовательность полипептида Fc происходит из любой из аминокислотных последовательностей, имеющих SEQ ID NO. 7, 8, 9, 10, или 11. В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок WAP-серпин включает последовательность полипептида Fc, то последовательность полипептида Fc имеет идентичность последовательности по меньшей мере 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% с аминокислотной последовательностью любой из последовательностей, имеющих SEQ ID NO. 7, 8, 9, 10 или 11.

[0060] В некоторых вариантах осуществления, слитый белок WAP-серпиновый домен может также включать полипептид альбумина или аминокислотную последовательность, которая происходит из полипептида альбумина. Эти варианты осуществления совместно именуются здесь как «слитые белки WAP-альбумин-серпин». В этих вариантах осуществления, данную терминологию не следует трактовать как конкретный порядок расположения частей. Например, порядок расположения частей слитого белка может представлять собой WAP-альбумин-серпин, серпин-альбумин-WAP или любой их вариант или комбинацию. Слитые белки WAP-альбумин-серпин, описанные здесь, включают по меньшей мере содержащий домен WAP полипептид или аминокислотную последовательность, которая происходит из содержащего домен WAP полипептида, серпиновый полипептид или аминокислотную последовательность, которая происходит из серпина, и полипептид альбумина или аминокислотную последовательность, которая происходит из полипептида альбумина.

[0061] В некоторых вариантах осуществления, где слитый белок WAP-серпиновый домен включает полипептид альбумина, полипептидную последовательность альбумина, то последовательность происходит из любой из аминокислотных последовательностей SEQ ID NO. 14-15, описанных здесь. В других вариантах осуществления, где слитый белок серпин-домен WAP включает полипептидную последовательность альбумина, то полипептидная последовательность альбумина имеет идентичность последовательности по меньшей мере 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% или 99% с любой из аминокислотных последовательностей, имеющих SEQ ID NO. 14 или 15.

[0062] В некоторых вариантах осуществления слитого белка по настоящему изобретению, второй полипептид (Полипептид 2) содержащего домен WAP слитого белка представляет собой полипептид альбумина или происходит из полипептида альбумина. Эти варианты осуществления совместно именуются здесь как «слитые белки WAP-альбумин». Слитые белки WAP-альбумин, описанные здесь, включают по меньшей мере содержащий домен WAP полипептид или аминокислотную последовательность, которая происходит из содержащего д