Способ получения композиции на основе гиалуроновой кислоты

Способ получения композиции на основе гиалуроновой кислоты

Реферат

Область, к которой относится изобретение

[0001] Настоящее изобретение относится к способу получения композиции в форме геля, на основе полисахарида, такого как гиалуроновая кислота, к композиции как таковой, к набору, включающему шприц и композицию, а также к применению композиции в качестве дерматологического наполнителя.

Уровень техники

[0002] Известно использование гелей, таких как гидрогели на основе полисахаридов и воды, в качестве дерматологических наполнителей. Такие гели обычно получают способами, включающими химическое сшивание соответствующих полисахаридов в водной среде. Подходящими полисахаридами являются, например, полисахариды на основе гиалуроновой кислоты, поскольку она присутствует в идентичных или подобных композициях в каждом живом организме. Например, гиалуроновая кислота является главным компонентом кожи, где она участвует в восстановлении ткани. Следовательно, она дает минимум побочных эффектов и обеспечивает безопасное применение.

[0003] Патентный документ EP 1818344 относится к процессу для приготовления сшитого геля гиалуроновой кислоты, включающему взбалтывание и перемешивание смеси, содержащей 10 мас./об. % или больше гиалуроновой кислоты, сшивающий агент, а также воду, в кислой или щелочной среде.

[0004] Патентный документ EP 2054039 (WO 2008/018796) относится к вязкоупругой композиции гидрогеля, включающей в себя первые микрочастицы и вторые микрочастицы, способные взаимодействовать друг с другом посредством стереокомплексных взаимодействий, в которой упомянутые первые микрочастицы включают сшитый первый гидрофильный полимер, упомянутые первые микрочастицы включают в себя внешние прививки первых олигомеров или cо-олигомеров, включающих в себя первую хиральную область, включающую в себя первые хиральные мономеры, и в которой упомянутые вторые микрочастицы включают в себя сшитый второй гидрофильный полимер, упомянутая вторые микрочастицы включают в себя внешние прививки вторых олигомеров или cо-олигомеров, включающих в себя вторую хиральную область, включающую в себя вторые хиральные мономеры, имеющие хиральность, которая является противоположной хиральности упомянутых первых хиральных мономеров, причем упомянутая первая хиральная область и упомянутая вторая хиральная область взаимодействуют друг с другом нековалентно. Гидрофильный полимер может быть гиалуроновой кислотой.

[0005] Патентный документ EP 2178923 (WO 2009/018076) относится к процессу для приготовления сшитой гиалуроновой кислоты, который включает в себя контактирование гиалуроновой кислоты со сшивающим агентом на основе полиэтиленгликоля.

[0006] Патентный документ WO 2011/119468 относится к гидрогелю для увеличения мягкой ткани, включающему в себя сшитый биологически совместимый полимер, имеющий сшитые функциональные группы нулевой длины и необязательно по меньшей мере один другой активный ингредиент, включенный в упомянутый сшитый биологически совместимый полимер.

[0007] Патентный документ EP 2152329 (WO 2008/068297) относится к имплантату, который может быть введен подкожно или в кожу в форме однофазного гидрогеля, включающего в себя гель, состоящий из сшитой гиалуроновой кислоты и одной из ее физиологически приемлемых солей.

[0008] Патентный документ EP 2170961 (WO 2009/021526) относится к дисперсии гиалуроновой кислоты для использования в эстетической медицине и ортопедии, в которой дисперсная фаза включает в себя частицы, состоящие из сшитой гиалуроновой кислоты, а непрерывная фаза по существу включает в себя линейную гиалуроновую кислоту.

[0009] Патентный документ EP 1699500 (WO 2005/067994) относится к композиции гиалуроновой кислоты, включающей в себя сшитые, нерастворимые в воде, гидратированные частицы геля гиалуроновой кислоты. Эта композиция может использоваться для наращивания ткани у субъекта, который нуждается в наращивании ткани к способу стабилизации сшитой гиалуроновой кислоты, включающему гидратирование нерастворимой в воде, дегидратированной сшитой гиалуроновой кислоты физиологически совместимым водным раствором, который включает в себя местное обезболивающее, в котором значение модуля G' накопления стабилизированной композиции составляет по меньшей мере приблизительно 110% от значения G' для нестабилизированной композиции, а также к стабилизированной композиции гиалуроновой кислоты.

[0010] Патентный документ WO 2010/015900 относится к наполнителям мягкой ткани, например, к кожным и подкожным наполнителям, на основе гиалуроновых кислот и их фармацевтически приемлемых солей, причем композиции на основе гиалуроновых кислот могут включать в себя терапевтически эффективное количество по меньшей мере одного анестезирующего средства, например, лидокаина. Композиции на основе гиалуроновых кислот, включающие в себя лидокаин, имеют улучшенную стабильность по сравнению с обычными композициями, включающими в себя лидокаин, например, в том случае, когда они подвергаются стерилизации или когда они хранятся в течение длительного времени. Также предлагаются способы и процессы получения таких композиций на основе гиалуроновой кислоты.

[0011] Патентный документ FR 2919999 относится к косметической композиции или фармацевтической композиции, которая включает в себя гиалуроновую кислоту и двухвалентный катион. Эта композиция может применяться для лечения морщин.

[0012] Патентный документ EP 2254584 (WO 2009/098127) относится к биологически совместимым впрыскиваемым продуктам, способным высвобождать цинк и/или по меньшей мере одну сахаридную соль в форме цинка, к композициям, содержащим упомянутые продукты, а также к их использованию, в частности, для заполнения или увеличения объема биологических тканей или для замены или подкрепления биологической жидкости.

[0013] Патентный документ EP 2155212 (WO 2008/139122) относится к ассоциации гиалуроновой кислоты и по меньшей мере одного ингибитора разложения гиалуроновой кислоты, которая предназначена, в частности, для использования в человеческой дерматологии и пластической хирургии.

[0014] Патентный документ EP 0839159 B1 раскрывает процесс для получения композиции сшитого биологически совместимого полисахаридного геля. Этот процесс включает в себя сшивку полисахарида в присутствии многофункциональных сшивающих агентов, причем формируется вязкоупругий гель.

[0015] Патентный документ EP 1711552 B1 описывает способ для производства биологически совместимого сшитого геля, включающий в себя стадии сшивания биологически совместимого полимера, разбавления сшитого полимера несшитым полимером, и завершения реакции сшивания.

[0016] Патентный документ EP 0466300 B1 относятся к способу получения биологически совместимой жидкой суспензии вязкоупругого геля, включающему в себя смешивание биологически совместимого геля, который включает в себя сшитую гиалуроновую кислоту, со вторым полимером, который может быть, например, гиалуроновой кислотой, для формирования двухфазной смеси, а также к гелю как таковому.

Задачи настоящего изобретения

[0017] Одна задача настоящего изобретения заключается в создании способа получения композиции в форме геля, на основе полисахарида, которая может использоваться в качестве дерматологического наполнителя, причем композиция должна иметь превосходную стабильность, то есть не изменять свои свойства, в частности свои вязкоупругие свойства, после применения, и которая может быть индивидуальным образом подстроена под дерматологические требования. Кроме того, гель должен иметь превосходную совместимость с тканью кожи.

Сущность изобретения

[0018] Эта задача решается с помощью способа получения композиции в форме геля, включающей сшитый первый полимер, необязательно второй полимер, который может быть сшитым или несшитым, и воду, причем первый и второй полимер выбирают из полисахарида; а также с помощью композиции, полученной в соответствии с упомянутым способом.

[0019] В частности, в соответствии с первым аспектом настоящее изобретение относится к способу получения композиции в форме геля, включающей сшитый первый полимер, необязательно второй полимер, который может быть сшитым или несшитым, и воду, причем первый и второй полимер выбирают из полисахарида, включающему по меньшей мере стадии (i)-(iv):

(i) сшивание смеси, включающей в себя первый полимер и воду;

(ii) после сшивания на стадии (i) завершение сшивания;

(iii) необязательно смешивание продукта, полученного на стадии (ii), со вторым полимером;

(iv) диализ продукта, полученного на стадии (ii) или на стадии (iii).

[0020] В одном варианте осуществления наличие второго полимера является обязательным. В этом варианте осуществления данный способ требует смешивания продукта, полученного на стадии (ii), со вторым полимером в соответствии со стадией (iii).

[0021] В одном варианте осуществления наличие второго полимера не является необходимым. В этом варианте осуществления данный способ не требует смешивания продукта, полученного на стадии (ii), со вторым полимером в соответствии со стадией (iii).

[0022] В одном варианте осуществления первый и второй полимер может быть одним и тем же.

[0023] В одном варианте осуществления первый и второй полимер могут отличаться друг от друга.

[0024] В одном варианте осуществления первый полимер является сшитым, а второй полимер является несшитым.

[0025] В одном варианте осуществления первый и второй полимер выбирают из гиалуроновой кислоты и ее соли.

[0026] В одном варианте осуществления первый и второй полимер выбирают из гиалуроновой кислоты или ее соли.

[0027] В одном варианте осуществления соль гиалуроновой кислоты является натриевой солью.

[0028] В одном варианте осуществления первый полимер, используемый на стадии (i), имеет значение молекулярной массы Mw от 1,5 МДальтон до менее чем 3,5 МДальтон, или от 2,0 МДальтон до менее чем 3,5 МДальтон, или от 2,5 МДальтон до менее чем 3,0 МДальтон.

[0029] В одном варианте осуществления второй полимер, используемый на стадии (iii), имеет значение молекулярной массы по меньшей мере 3,0 МДальтон или по меньшей мере 3,5 МДальтон.

[0030] В одном варианте осуществления масса второго полимера составляет меньше чем 5% от массы первого полимера, или меньше чем 4%, например, находится в диапазоне от 0,01 до 5%, или находится в диапазоне от 0,1 до 4%, или находится в диапазоне от 0,1 до 2,5%, или находится в диапазоне от 0,2 до 2,0%, или находится в диапазоне от 0,5 до 1,5%.

[0031] В одном варианте осуществления данный способ включает в себя после стадии (iv) дополнительную стадию (v):

(v) добавление анестезирующего или антиаритмического средства, такого как лидокаин, или лидокаин гидрохлорид, или лидокаин гидрохлорид моногидрат, или тетракаин, к продукту, полученному на стадии (iv).

[0032] В одном варианте осуществления данный способ включает в себя после стадии (iv) или после стадии (v), дополнительную стадию (vi):

(vi) заполнение шприца продуктом, полученным на стадии (iv) или стадии (v), и его стерилизация.

[0033] В одном варианте осуществления смесь, получаемая на стадии (i), дополнительно включает в себя щелочной фосфатный буфер.

[0034] В одном варианте осуществления упомянутый второй полимер обеспечивается на стадии (iii) в форме смеси с фосфатным буфером.

[0035] В одном варианте осуществления упомянутое анестезирующее или антиаритмическое средство, такое как лидокаин или тетракаин, обеспечиваемое на стадии (v), обеспечивается в форме смеси с фосфатным буфером.

[0036] В одном варианте осуществления температура реакции на стадии (i) составляет от 0°C до 40°C, например, от 15°C до 40°C; или от 25°C до 35°C, или от 25°C до 30°C; или от 30°C до 35°C.

[0037] В одном варианте осуществления температура реакции на стадии (ii) составляет от 0°C до 30°C, например, от 0°C до 10°C; или от 3°C до 7°C.

[0038] В одном варианте осуществления температура реакции на стадии (iii) составляет от 0°C до 30°C, например, от 0°C до 10°C; или от 3°C до 7°C.

[0039] В одном варианте осуществления температура реакции на стадии (iv) составляет от 0°C до 30°C, например, от 0°C до 10°C; или от 3°C до 7°C.

[0040] В одном варианте осуществления на стадии (i) в качестве сшивающего агента используется диглицидиловый эфир.

[0041] В одном варианте осуществления на стадии (i) в качестве сшивающего агента используется 1,4-бутандиолдиглицидиловый эфир (BDDE).

[0042] В одном варианте осуществления стадия (ii) включает в себя стадию (ii.1):

(ii.1) обработка продукта, полученного на стадии (i), кислотой.

[0043] В одном варианте осуществления стадия (ii) включает в себя стадии (ii.1) и (ii.2):

(ii.1) обработка продукта, полученного на стадии (i), кислотой;

(ii.2) экструдирование продукта, полученного на стадии (ii.1); или

экструдирование продукта, полученного на стадии (ii.1), через сито; или

экструдирование продукта, полученного на стадии (ii.1), через сито, имеющее размер отверстий сита в диапазоне от 500 мкм до 600 мкм.

[0044] В одном варианте осуществления, упомянутая стадия диализа в соответствии со стадией (iv) дополнительно включает стадии (iv.1)-(iv.3):

(iv.1) экструдирование продукта, полученного на стадии (iii), через первое сито и последующее экструдирование экструдированного через первое сито продукта через второе сито, в котором размер отверстий сита меньше, чем размер отверстий первого сита; или

экструдирование продукта, полученного на стадии (iii), через первое сито и последующее экструдирование экструдированного через первое сито продукта через второе сито, и последующее экструдирование экструдированного через второе сито продукта через третье сито, в котором размер отверстий второго сита меньше, чем размер отверстий первого сита, а размер отверстий третьего сита меньше, чем размер отверстий второго сита;

(iv.2) заполнение мембраны диализа продуктом, полученным на стадии (iv.1);

(iv.3) обработка заполненной мембраны, полученной на стадии (iv.2), раствором для диализа.

[0045] В одном варианте осуществления упомянутая стадия диализа в соответствии со стадией (iv) дополнительно включает стадии (iv.1)-(iv.3):

(iv.1) экструдирование продукта, полученного на стадии (iii), через первое сито, имеющее размер отверстий в диапазоне от 325 мкм до 425 мкм; и последующее экструдирование экструдированного через первое сито продукта через второе сито, имеющее размер отверстий в диапазоне от 175 мкм до 225 мкм; и последующее экструдирование экструдированного через второе сито продукта через третье сито, имеющее размер отверстий в диапазоне от 110 мкм до 170 мкм;

(iv.2) заполнение продуктом, полученным на стадии (iv.1), мембраны диализа, имеющей молекулярную массу в диапазоне от 12000 до 14000 Дальтон;

(iv.3) обработка заполненной мембраны, полученной на стадии (iv.2), раствором для диализа.

[0046] Любой из вышеупомянутых вариантов осуществления может быть скомбинирован по меньшей мере с одним дополнительным вариантом осуществления, выбранным из вышеупомянутых вариантов осуществления.

[0047] В соответствии со вторым аспектом настоящее изобретение относится к композиции в форме геля, включающей сшитый первый полимер, необязательно второй полимер, который может быть сшитым или несшитым, и воду, причем первый и второй полимер выбирают из полисахарида, получаемого с помощью способа в соответствии с первым аспектом, или в соответствии со способом первого аспекта и любого варианта осуществления или любой комбинации по меньшей мере двух вариантов осуществления, определенных в этом аспекте.

[0048] В соответствии с третьим аспектом настоящее изобретение относится к набору, включающему шприц и композицию в соответствии со вторым аспектом, или композицию, полученную согласно способу в соответствии с первым аспектом.

[0049] В соответствии с четвертым аспектом настоящее изобретение относится к применению композиции в соответствии со вторым аспектом, или к применению композиции, полученной в соответствии с первым аспектом для косметического применения.

[0050] В одном варианте осуществления композиция используется в качестве дерматологического наполнителя.

[0051] В соответствии с пятым аспектом настоящее изобретение относится к композиции в форме геля в соответствии со вторым аспектом, для применения в качестве лекарственного средства.

Подробное описание

[0052] В соответствии с первым аспектом настоящее изобретение относится к способу получения композиции, включающей сшитый первый полимер, необязательно второй полимер, который может быть сшитым или несшитым, и воду, причем первый и второй полимер выбирают из полисахарида, включающему по меньшей мере стадии (i)-(iv):

(i) сшивание смеси, включающей в себя первый полимер и воду;

(ii) после сшивания на стадии (i) завершение сшивания;

(iii) необязательное смешивание продукта, полученного на стадии (ii), со вторым полимером;

(iv) диализ продукта, полученного на стадии (ii) или на стадии (iii).

[0053] Используемый в данном раскрытии термин «композиция» охватывает продукт, включающий сшитый первый полимер, необязательно второй полимер, который может быть сшитым или несшитым, и воду.

[0054] В одном варианте осуществления композиция является гелем, таким как гидрогель. Используемый в настоящем документе термин «гель» охватывает продукт, который имеет как вязкие, так и эластичные свойства. Таким образом, этот термин охватывает вязкоупругий продукт. В популярной литературе гель иногда характеризуется как желеобразный материал. Вязкоупругие свойства геля могут быть определены путем определения модуля потерь и динамического модуля упругости геля.

[0055] Отношение между модулем потерь G'' и динамическим модулем упругости G' может быть выражено коэффициентом потерь tanδ=G''/G'. Чем выше коэффициент потерь, тем больше свойства продукта приближаются к ньютоновской жидкости. Вязкость продукта может быть выражена в терминах η*. Подходящие способы для определения tanδ и η* являются известными в данной области техники.

[0056] Композиция или композиция в форме геля в соответствии с настоящим изобретением, в обязательном порядке требует использования в способе по настоящему изобретению полисахарида в качестве первого полимера, и если используется второй полимер, также использования полисахарида в качестве второго полимера.

[0057] Используемый в настоящем документе термин «полисахарид» охватывает молекулу углевода, состоящую из или включающую в себя повторяющиеся блоки мономера, соединенные вместе гликозидными связями. В большинстве случаев полисахарид содержит более 10 моносахаридных блоков. Примерами полисахарида являются такие полисахариды, как крахмал, гликогены, целлюлоза, хитин или гиалуроновая кислота, или их смеси.

[0058] В предпочтительном варианте осуществления полисахарид является гиалуроновой кислотой. Гиалуроновая кислота может быть обеспечена в форме ее соли, такой как натриевая соль. Также возможно обеспечить смесь кислоты и ее соли, такой как натриевая соль.

[0059] Таким образом, используемый в настоящем документе термин «гиалуроновая кислота» является синонимом таким терминам, как «гиалуронан» или «гиалуронат». В последующем тексте название гиалуроновой кислоты может сокращаться как «HA».

[0060] Гиалуроновая кислота представляет собой несшитый полимер дисахаридов. Она может иметь в длину вплоть до 25000 блоков дисахарида. Молекулярная масса гиалуроновой кислоты может колебаться от 5000 до 20000000 Дальтон.

[0061] Гиалуроновая кислота имеет общепризнанное значение в данной области техники. Она является коммерчески доступной в виде различных сортов, имеющих различные молекулярные массы (Mw) и/или различные распределения молекулярной массы. Она является доступной в несшитой форме, которая используется в качестве исходного материала на стадии (i) способа в соответствии с настоящим изобретением.

Стадия (i)

[0062] Стадия (i) требует сшивания смеси, включающей в себя первый полимер и воду.

[0063] Используемый в настоящем документе термин «сшивание» охватывает связывание по меньшей мере двух различных полимерных цепей полисахарида посредством химической связи или химических связей. Как следствие, молекулярная масса первого полимера увеличивается, и таким образом увеличивается вязкость и/или эластичность.

[0064] В одном варианте осуществления сшивание выполняется посредством сшивающего химического соединения.

[0065] Подходящие сшивающие химические соединения для сшивания полисахаридов, таких как гиалуроновые кислоты, известны в данной области техники.

[0066] В одном варианте осуществления в способе в соответствии с настоящим изобретением может использоваться сшивающее химическое соединение на основе эпоксидной структуры.

[0067] В одном варианте осуществления для сшивания используется диглицидиловый эфир.

[0068] В одном варианте осуществления для сшивания используется 1,4-бутандиолдиглицидиловый эфир (BDDE). Это соединение является коммерчески доступным.

[0069] В одном варианте осуществления сшивающее химическое соединение используется в количестве от 5 до 15% (объем сшивающего химического соединения/масса гиалуроновой кислоты), например от 6 до 14% (об./мас.), или от 7 до 12% (об./мас.).

[0070] Предпочтительно температура в реакции сшивания в соответствии со стадией (i) является управляемой.

[0071] В одном варианте осуществления сшивание в соответствии со стадией (i) производится в диапазоне температур от 0°C до 40°C.

[0072] В другом варианте осуществления температура на стадии (i) регулируется таким образом, чтобы реакция протекала в диапазоне температур от 15°C до 40°C.

[0073] В одном варианте осуществления температура на стадии (i) составляет от 25°C до 35°C.

[0074] В одном варианте осуществления температура на стадии (i) регулируется таким образом, чтобы сшивание протекало в диапазоне температур от 25°C до 30°C.

[0075] В другом варианте осуществления температура на стадии (i) регулируется таким образом, чтобы сшивание протекало в диапазоне температур от 30°C до 35°C, или от температуры выше 30°C до 35°C.

[0076] Такие температуры или диапазоны температур могут гарантировать очень однородное сшивание и избежать неоднородных частиц в максимально возможной степени. Кроме того, в одном варианте осуществления управление температурой позволяет осуществлять нестандартную настройку вязкоупругих свойств композиции в соответствии с настоящим изобретением.

[0077] В одном варианте осуществления, если сшивание в соответствии со стадией (i) выполняется при более высокой температуре, например, в диапазоне температур от более 30°C до 35°C, вязкоупругие свойства получающейся композиции в форме геля, становятся более интенсивными по сравнению с композицией, в которой сшивание было выполнено при более низкой температуре, например, при температуре от 25°C до 30°C. Такие различия могут быть охарактеризованы путем определения динамического модуля упругости и модуля потерь композиции в соответствии со способами, известными в данной области техники. Соответственно, в одном варианте осуществления подходящий выбор температуры реакции на стадии (i) обеспечивает получение композиций, таких как гели, имеющих различные вязкоупругие свойства.

[0078] Используемый в настоящем документе термин «смесь» охватывает комбинацию двух или больше веществ, которые смешиваются, но не соединяются химически друг с другом. Таким образом, термин «смесь» относится к физической комбинации первого полимера, который является полисахаридом, и воды. Смесь может быть обеспечена в форме раствора, или суспензии, или коллоида.

[0079] Первый полимер, то есть первый полисахарид, то есть гиалуроновая кислота в большинстве случаев имеет молекулярную массу Mw в диапазоне от 1,0 до 4,0 МДальтон, или от 1,5 МДальтон до менее чем 3,5 МДальтон, или от 2,0 МДальтон до менее чем 3,5 МДальтон. Эти диапазоны молекулярной массы Mw относятся к диапазонам перед сшиванием, соответственно.

[0080] В одном варианте осуществления первый полисахарид имеет молекулярную массу Mw от 2,5 МДальтон до менее чем 3,0 МДальтон, опять же перед сшиванием.

[0081] Вода может быть обеспечена в форме трубопроводной воды, дистиллированной воды или деминерализованной воды.

[0082] В одном варианте осуществления смесь, используемая на стадии (i), дополнительно включает в себя буферный раствор.

[0083] В одном варианте осуществления буферный раствор является фосфатным буферным раствором.

[0084] В одном варианте осуществления упомянутый фосфатный буферный раствор изготавливается из хлористого натрия, двухосновного безводного фосфорнокислого натрия, одноосновного дигидрофосфата натрия и воды.

[0085] В одном варианте осуществления буфер является щелочным буфером.

[0086] В одном варианте осуществления значение pH буфера составляет от 6,8 до 7,6, или от 7,0 до 7,4, или от 7,1 до 7,3.

[0087] В одном варианте осуществления значение pH заключительной композиции, подготовленной в соответствии со способом по настоящему изобретению, поддерживается в диапазоне от 6,5 до 7,5, например от 6,7 до 7,2, или от 6,8 до 7,1 или от 6,8 до 6,9. Такое значение pH может поддерживать совместимость композиции с кожной тканью. Для регулировки упомянутого значения pH в одном варианте осуществления используется упомянутый буфер.

[0088] В одном варианте осуществления стадия (i) может быть выполнена путем смешивания первого полимера, воды, сшивающего химического соединения и необязательно буферного раствора, и перемешивания смеси в течение предопределенного времени при одновременном регулировании температуры так, чтобы она не превышала предопределенного заданного значения.

Стадия (ii)

[0089] Стадия (ii) требует после сшивания на стадии (i) завершение сшивания.

[0090] Завершение реакции сшивания в соответствии со стадией (ii) является обязательно необходимым, поскольку в противном случае могут быть получены композиция или гели, имеющие слишком высокие вязкость или вязкость и эластичность для использования в качестве дерматологического наполнителя, соответственно вязкость или вязкоупругие свойства композиции или геля не являются постоянными, поскольку гель содержит соединения, которые могут вызывать сшивание, например сшивающее химическое соединение, используемое на стадии (i).

[0091] По существу каждое соединение, способное реагировать со сшивающим химическим соединением и таким образом дезактивировать его, может использоваться для завершения реакции сшивания.

[0092] Так как в одном варианте осуществления на стадии (i) используются сшивающие химические соединения эпоксидного типа, завершение сшивания может быть произведено посредством добавления соединений, которые расщепляют эпоксидную функциональную группу, так что никакого дальнейшего сшивания с подходящими группами в полисахариде произойти не может.

[0093] В одном варианте осуществления расщепление эпоксида и таким образом завершение сшивания на стадии (i) может быть произведено кислотой. Для того, чтобы завершить сшивание, могут использоваться органические кислоты, а также минеральные кислоты.

[0094] В одном варианте осуществления используется минеральная кислота, такая как соляная кислота.

[0095] Соединение, используемое для завершения реакции сшивания, может быть применено в буферном растворе, например, в буферном растворе, используемом на стадии (i).

[0096] Такой раствор может быть определен как «раствор для закалки». Соответственно, завершение реакции сшивания в соответствии со стадией (ii) может быть произведено путем закалки сшитой смеси, полученной в соответствии со стадией (i).

[0097] В одном варианте осуществления завершение сшивания в соответствии со стадией (ii) производится в диапазоне температур от 0°C до 30°C.

[0098] В другом варианте осуществления температура на стадии (ii) регулируется таким образом, чтобы она не превышала температуру 20°C или 15°C.

[0099] В одном варианте осуществления температура на стадии (ii) составляет от 0°C до 10°C, или от 3°C до 7°C, например, 5°C.

[00100] Завершение реакции сшивания в соответствии со стадией (ii) может быть произведено путем добавления соединения, используемого для завершения, к смеси в соответствии со стадией (i), и например, перемешивания его в течение предопределенного времени.

[00101] Завершение реакции сшивания является критическим для способа в соответствии с настоящим изобретением, поскольку полученная таким образом композиция или гель имеет превосходную стабильность, то есть она не изменяет свои свойства, в частности, свою вязкость или свои вязкоупругие свойства, после применения, например, после использования в качестве дерматологического наполнителя в кожной ткани.

[00102] В одном варианте осуществления завершение может быть дополнительно поддержано путем экструдирования на стадии (ii) сшитого продукта, полученного на стадии (i), например, путем экструдирования продукта через сито. Не привязываясь к какой-либо конкретной теории, считается, что высокие усилия сдвига, прикладываемые во время экструдирования, обеспечивают полное смешивание в композиции или геле сшивающего химического соединения и соединения, используемого для завершения реакции сшивания. Как следствие, сшивающее химическое соединение полностью или почти полностью инактивируется, предотвращая таким образом дальнейшее сшивание и, следовательно, дальнейшее нежелательное увеличение молекулярной массы и вязкости и/или эластичности.

[00103] Термин «экструдирование через сито» охватывает такие термины, как «прохождение через сито», или «выдавливание через сито» или «направление через сито» или «фильтрация».

[00104] Таким образом, в одном варианте осуществления стадия (ii) включает в себя стадию (ii.1):

(ii.1) экструдирование сшитого продукта, полученного на стадии (i).

[00105] В другом варианте осуществления стадия (ii) включает в себя стадии (ii.1) и (ii.2):

(ii.1) обработка кислотой продукта, полученного на стадии (i);

(ii.2) экструдирование продукта, полученного на стадии (ii.1); или экструдирование продукта, полученного на стадии (ii.1), через сито.

[00106] В другом варианте осуществления стадия (ii) включает в себя стадии (ii.1) и (ii.2):

(ii.1) обработка кислотой продукта, полученного на стадии (i);

(ii.2) экструдирование продукта, полученного на стадии (ii.1); или

экструдирование продукта, полученного на стадии (ii.1), через сито; или

экструдирование продукта, полученного на стадии (ii.1), через сито, имеющее размер отверстий в диапазоне от 500 мкм до 600 мкм.

[00107] В одном варианте осуществления размер отверстий сита, используемого на стадии (ii.2), составляет приблизительно 560 мкм, например 558,8 мкм (0,022 дюйма).

Стадия (iii)

[00108] Дополнительная Стадия (iii) требует смешивания продукта, полученного на стадии (ii), со вторым полимером.

[00109] В одном варианте осуществления наличие второго полимера не является необходимым, и таким образом в последовательности реакций стадий (i)-(iv) стадия (iii) опускается.

[00110] В другом варианте осуществления наличие второго полимера является необходимым, и таким образом стадия (iii) обязательно выполняется в последовательности реакций стадий (i)-(iv).

[00111] Используемый в настоящем документе термин «смешивание» охватывает смешивание сшитого полимера, полученного на стадии (ii), со вторым полимером, используемым на стадии (iii), причем полученная смесь, включающая сшитый первый полимер и второй полимер, который также может быть сшитым, однако может также быть обеспечен и в несшитой форме, имеет различные физические свойства по отношению к первому и ко второму полимеру.

[00112] Второй полимер также является полисахаридом. Этот полимер может быть тем же самым полимером, что и первый полимер, или может отличаться от него.

[00113] Таким образом, в одном варианте осуществления второй полимер является той же самой гиалуроновой кислотой, что и первый полимер, используемый на стадии (i), или гиалуроновой кислотой, которая отличается от гиалуроновой кислоты, используемой на стадии (i).

[00114] В одном варианте осуществления первый полимер имеет ту же самую молекулярную массу, что и второй полимер. В другом варианте осуществления их молекулярные массы отличаются от друг друга. Термин «молекулярная масса» упомянутого второго полимера относится к соответствующей молекулярной массе упомянутого полимера перед смешиванием и опциональным сшиванием упомянутого второго полимера.

[00115] В одном варианте осуществления второй полимер имеет молекулярную массу по меньшей мере 3,0 МДальтон, или по меньшей мере 3,5 МДальтон, или по меньшей мере 4,0 МДальтон.

[00116] В одном варианте осуществления второй полимер имеет молекулярную массу по меньшей мере 3,0 МДальтон, причем верхний предел составляет 20 МДальтон, или 10 МДальтон, или 8 МДальтон, или 6 МДальтон, или 4 МДальтон, соответственно.

[00117] В одном варианте осуществления второй полимер имеет молекулярную массу по меньшей мере 3,5 МДальтон, причем верхний предел составляет 20 МДальтон, или 10 МДальтон, или 8 МДальтон, или 6 МДальтон, или 4 МДальтон, соответственно.

[00118] В одном варианте осуществления второй полимер имеет молекулярную массу по меньшей мере 4,0 МДальтон, причем верхний предел составляет 20 МДальтон, или 10 МДальтон, или 8 МДальтон, или 6 МДальтон, или 4 МДальтон, соответственно.

[00119] В одном варианте осуществления второй полимер обеспечивается в буфере, таком как буфер, который может использоваться на стадии (i) или на стадии (ii).

[00120] В одном варианте осуществления смешивание в соответствии со стадией (iii) производится в диапазоне температур от 0°C до 40°C или от 0°C до 30°C.

[00121] В другом варианте осуществления температура на стадии (iii) регулируется таким образом, чтобы ее значение не превышало 20°C или 15°C.

[00122] В одном варианте осуществления температура на стадии (iii) составляет от 0°C до 10°C, или от 3°C до 7°C; например 5°C.

[00123] В одном варианте осуществления смешивание в соответствии со стадией (iii) выполняется путем перемешивания со вторым полимером сшитого продукта, в котором сшивание было завершено в соответствии со стадией (ii).

[00124] В одном варианте осуществления масса второго полимера по массе первого полимера составляет меньше чем 5%, или меньше чем 4%, например, находится в диапазоне от 0,01 до 5%, или находится в диапазоне от 0,1 до 4%, или находится в диапазоне от 0,1 до 2,5%, или находится в диапазоне от 0,2 до 2,0%, или находится в диапазоне от 0,5 до 1,5%.

[00125] В одном варианте осуществления стадия (iii) позволяет индивидуальную подстройку свойств вязкости и эластичности, или вязкости или эластичности целевой композиции или геля, которые являются существенными для ее использования в качестве дерматологического наполнителя. Такие свойства могут быть достигнуты путем выбора подходящего диапазона температур на стадии (i) и/или массового соотношения между первым и вторым полимерами на стадии (iii) и/или количества сшивающего химического соединения, используемого на стадии (i) и необязательно используемого для второго полимера, при условии, что второй полимер используется на стадии (iii) и используется в сшитой форме.

[00126] Кроме того, использование второго полимера на стадии (iii) может улучшить текучесть композиции через сито, если стадия выполняется экструдирования через сито. Тогда в большинстве случаев более низкие силы экструдирования необходимы для того, чтобы экструдировать композицию через упомянутое сито или сита по сравнению с композицией, не содержащей упомянутого второго полимера. Кроме того, использование второго полимера в несшитой форме может выгодно улучшить текучесть композиции в соответствии с настоящим изобретением через иглу шприца, который используется для инъекции композиции для косметического применения. В свою очередь, меньшая сила может использоваться для того, чтобы выдавливать композицию через упомянутую иглу.

Стадия (iv)

[00127] Стадия (iv) требует диализа продукта, полученного на стадии (ii) или (iii).

[00128] В одном варианте осуществления эта стадия служит для удаления посторонних соединений или частиц из геля, полученного на стадии (iii). Посторонние соединения или частицы могли бы отрицательно воздействовать на физические свойства композиции в форме геля, и/или могли бы оказать негативное влияние на совместимость композиции или геля с кожной тканью. Таким образом, в одном варианте осуществления стадия (iv) служит для снижения или для предотвращения возможных воспалительных реакций, когда композиция в соответствии с настоящим изобретением вводится в кожную ткань.

[00129] В другом варианте осуществления эта стадия служит для регулировки набухания геля, полученного на стадии (ii) или стадии (iii).

[00130] Используемый в настоящем документе термин «набухание» или «способность к набуханию» охватывает водопоглощение геля.

[00131] В одном вари