Жидкие стабильные вирусные вакцины

Жидкие стабильные вирусные вакцины

Реферат

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

По этой заявке испрашивается приоритет в соответствии с 35 U.S.C. § 119(e) временной заявки США с серийным номером 61/691507, поданной 21 августа 2012; и временной заявки США с серийным номером 61/777164, поданной 12 марта 2013, содержание которых полностью включено в описание в виде ссылки.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ ИЗОБРЕТЕНИЕ

Настоящее изобретение относится к жидким стабильным вакцинам, которые содержат живой ослабленный вирус. Изобретение также относится к получению таких вакцин и к способам вакцинации животных-субъектов.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Существует значительное число вирусов, которые могут инфицировать собак и/или кошек. В то время как симптомы, вызванные соответствующими вирусными инфекциями, могут включать, например, легкие простудные симптомы, другие вирусные инфекции могут быстро приводить к гибели, как в случае инфекций, вызванных вирусом чумы собак (CDV) [см., например, US 2010/0196420]. Действительно, CDV вызывает мультисистемную инфекцию, которая может вовлекать зрительную, дыхательную, пищеварительную, кожную и нервную системы. Смертность от парвовируса собак (CPV) также является относительно высокой [см., например, US 2009/0010955]. CPV является, главным образом, кишечным патогеном, который инфицирует собак, особенно молодых собак, и характеризуется острой диареей, лихорадкой и лейкопенией у собак и щенков старше 4-5 недель. Даже более молодые щенки могут страдать миокардиальным заболеванием. Вирус чумы собак и парвовирус собак представляют собой два наиболее важных вируса с точки зрения защиты щенков/взрослых собак.

Другие вирусы собак включают: вирус парагриппа собак (CPI), который является высоко контагиозным вирусом, который вызывает респираторные расстройства, участвующие в процессе заболеваний верхних дыхательных путей и инфекционного трахеобронхита; аденовирус собак 1 типа (CAV1), который вызывает инфекционный гепатит; и вирус гриппа собак (CIV), который является высококонтагиозным и может вызывать тяжелый тип респираторного заболевания. Сообщалось, что CIV способен вызывать 100% инфекцию с 80% летальности и до 5-8% летальности при тяжелых инфекциях [Crawford et al, Science 310(5747):482-485 (2005); U.S. 7959929 B2].

Также существует ряд кошачьих вирусов, которые поражают кошек, включая кошачий калицивирус (FCV), вирус лейкоза кошачьих (FeLV), вирус лейкемии кошек (FPLV), коронавирус кошек (FCoV) и вирус ринотрахеита кошек (FVR).

В настоящее время общепризнанно, что лучшим способом профилактики заболевания, вызываемого вирусными инфекциями собак или кошек, является их вакцинация против вирусов. Действительно, вакцины против вируса чумы собак значительно снизили распространенность соответствующего заболевания. Аналогично инфекционный гепатит собак был чрезвычайно ограничен с помощью вакцин против аденовируса-2 собак (CAV2). Использование живого аттенуированного CAV2 в вакцинах вместо близкородственного CAV1 устраняет проблемы, связанные с интерстициальным нефритом и помутнением роговицы, наблюдаемыми у собак, которых прививали живым аттенуированным CAV1 [Taguchi et al., Can Vet J. 52(9):983-986 (2011)].

Кроме того, поливалентные живые ослабленные вирусные вакцины можно безопасно вводить, что ограничивает число необходимых инъекций вакцины. Соответственно, существует несколько коммерчески доступных поливалентных живых ослабленных вирусных вакцин, которые защищают от собачьей чумы, инфекционного гепатита собак, парвовируса собак и вируса парагриппа собак. Кроме того, новые поливалентные вакцины дополнительно защищают от вируса гриппа собак.

До настоящего времени аттенуированные вирусы собак и кошек были нестабильны при хранении в жидких растворах. Поэтому большинство живых аттенуированных вирусных вакцин собак или кошек лиофилизируют, т.е. подвергают сублимационной сушке перед их длительным хранением. Живой аттенуированный вирус собак или кошек обычно смешивают в виде суспензии в воде с защитным веществом, замораживают и затем дегидратируют с помощью сублимации и повторно высушивают во время процесса лиофилизации. Низкие температуры замораживания и высушивания сублимацией в сочетании с использованными низкими значениями отношения поверхности к объему могут потребовать продолжительных периодов высушивания и тем самым значительно увеличить время производства и затраты.

Кроме того, существуют внутренние противоречия в крупномасштабных промышленных процессах высушивания вследствие: невозможности регулирования стеллажной температуры во всей загрузке продукта, различных значений скорости замораживания в разных частях сушильной камеры, краевых эффектов и эффектов лучистой энергии. Повышение температуры сушки для уменьшения времени сушки часто не является решением, поскольку температура сушки должна оставаться существенно ниже температуры стеклования матрицы защитного белка. Кроме того, продолжительное несоответствующее время сушки и/или высокие температуры сушки часто приводят к повреждению структуры живых ослабленных вирусов наряду со значительным уменьшением их биологической активности.

Поэтому, чтобы учесть собственные потери эффективности, лиофилизованные вакцины собак и/или кошек, которые содержат живые ослабленные вирусы, хранят с повышенными титрами. Однако такие повышенные титры могут привести к существенным нежелательным явлениям в случае, если процесс лиофилизации приведет фактически к меньшему снижению активности, чем ожидалось. Таким образом, необходимо особое внимание для создания вакцины, которая не только содержит вирусный титр, который безопасно ниже количества, которое вызывает нежелательные явления, но которая также сохраняет достаточную эффективность с учетом уменьшения вирусного титра в результате лиофилизации и последующего хранения. Таким образом, существует потребность в новых живых аттенуированных вакцинах для собак и/или кошек, которые могут гарантированно сохранять вирусные титры на безопасном и эффективном уровне.

Цитирование любой ссылки в описании не следует истолковывать как признание того, что такая ссылка предлагается как "предшествующий уровень техники" для заявки, рассматриваемой в данный момент.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

Для преодоления недостатков существующих вакцин настоящее изобретение относится к новым жидким стабильным живым аттенуированным вирусным вакцинам, а также их соответствующим иммуногенным композициям. В некоторых вариантах осуществления живой ослабленный вирус представляет собой живой аттенуированный вирус собак. В других вариантах осуществления живой ослабленный вирус представляет собой живой аттенуированный вирус кошек. Настоящее изобретение также относится к способам введения таких вакцин животному. Настоящее изобретение дополнительно относится к способам профилактики заболевания у животного путем введения вакцины по настоящему изобретению. В конкретных вариантах осуществления животное является собакой. В других вариантах осуществления животное является кошкой.

Таким образом, настоящее изобретение относится к жидким стабильным вакцинам, которые содержат живой ослабленный вирус. В некоторых вариантах осуществления живой ослабленный вирус представляет собой рекомбинантный вирус. В частных вариантах осуществления этого типа рекомбинантный вирус используют как рекомбинантный вектор, который кодирует гетерогенный белок. В более предпочтительных вариантах осуществления этого типа гетерогенный белок является вирусным или бактериальным антигеном.

В частных вариантах осуществления вакцина содержит сахарное вспомогательное вещество и аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления этого типа вакцина содержит от 10 до 30% сахарного вспомогательного вещества. В частных вариантах осуществления вакцина содержит от 12 до 27% сахарного вспомогательного вещества. В некоторых вариантах осуществления вакцина содержит от 15 до 25% сахарного вспомогательного вещества. В родственных вариантах осуществления вакцина содержит от 15 до 20% сахарного вспомогательного вещества. В других вариантах осуществления вакцина содержит от 20 до 25% сахарного вспомогательного вещества. В более предпочтительных вариантах осуществления вакцина содержит от 16 до 18% сахарного вспомогательного вещества. В еще более предпочтительных вариантах осуществления вакцина содержит 17% сахарного вспомогательного вещества.

В частных вариантах осуществления жидких стабильных вирусных вакцин по настоящему изобретению сахарное вспомогательное вещество представляет собой сахарозу. В других вариантах осуществления сахарное вспомогательное вещество представляет собой сорбит. В других вариантах осуществления сахарное вспомогательное вещество представляет собой маннит. В других вариантах осуществления сахарное вспомогательное вещество представляет собой трегалозу. В других вариантах осуществления сахарное вспомогательное вещество представляет собой декстрозу. В частных вариантах осуществления сахарное вспомогательное вещество по существу представляет собой комбинацию двух или более сахарных вспомогательных веществ. В частном варианте осуществления этого типа сахарное вспомогательное вещество представляет собой комбинацию сахарозы и сорбита. В более предпочтительном варианте осуществления этого типа сахарное вспомогательное вещество представляет собой комбинацию 15% сахарозы и 10% сорбита.

Жидкие стабильные вакцины по настоящему изобретению имеют диапазон значений pH от 6,0 до 8,0. В некоторых вариантах осуществления диапазон значений pH составляет от 6,5 до 7,8. В конкретных вариантах осуществления диапазон значений pH составляет от 6,8 до 7,5. В более предпочтительных вариантах осуществления диапазон значений pH составляет от 7,0 до 7,4. В еще более предпочтительном варианте осуществления pH составляет 7,2.

Жидкие стабильные вакцины по настоящему изобретению могут содержать буфер. В конкретном варианте осуществления этого типа буфер содержит от 2,5 до 50 мМ Трис. В родственном варианте осуществления буфер содержит от 5 до 25 мМ Трис. В конкретных вариантах осуществления буфер содержит от 10 до 20 мМ Трис. В других вариантах осуществления буфер может содержать от 2,5 до 50 мМ гистидина. В частных вариантах осуществления буфер содержит от 2,5 до 50 мМ Трис и от 2,5 до 50 мМ гистидина. В более предпочтительных вариантах осуществления буфер содержит от 5 до 25 мМ Трис и от 5 до 25 мМ гистидина. В еще более предпочтительных вариантах осуществления буфер содержит от 10 до 20 мМ Трис и от 10 до 20 мМ гистидина. В других вариантах осуществления буфер содержит от 2,5 до 50 мМ фосфата. В родственном варианте осуществления буфер содержит от 5 до 25 мМ фосфата. В частных вариантах осуществления буфер содержит от 10 до 20 мМ фосфата.

Жидкие стабильные вакцины по настоящему изобретению содержат аминокислоту. В некоторых вариантах осуществления аминокислота представляет собой аргинин. В других вариантах осуществления аминокислота представляет собой метионин. В других вариантах осуществления аминокислота представляет собой глицин. В других вариантах осуществления аминокислота является глутаминовой кислотой. В родственных вариантах осуществления жидкие стабильные вакцины содержат как аргинин, так и метионин. В других вариантах осуществления жидкие стабильные вакцины содержат как аргинин, так и глицин. В других вариантах осуществления жидкие стабильные вакцины содержат как глицин, так и метионин. В родственных вариантах осуществления жидкие стабильные вакцины содержат как глутаминовую кислоту, так и метионин. В других вариантах осуществления жидкие стабильные вакцины содержат как глутаминовую кислоту, так и глицин. В других вариантах осуществления жидкие стабильные вакцины содержат как глутаминовую кислоту, так и аргинин. В родственных вариантах осуществления жидкие стабильные вакцины содержат аргинин, глутаминовую кислоту и метионин. В других вариантах осуществления жидкие стабильные вакцины содержат аргинин, глутаминовую кислоту и глицин. В других вариантах осуществления жидкие стабильные вакцины содержат аргинин, глутаминовую кислоту и метионин. В других вариантах осуществления жидкие стабильные вакцины содержат аргинин, глицин и метионин. В других вариантах осуществления жидкие стабильные вакцины содержат аргинин, глицин и метионин. В конкретных вариантах осуществления жидкие стабильные вакцины содержат аргинин, глицин, метионин и глутаминовую кислоту.

В частных вариантах осуществления конечная концентрация аргинина или глутаминовой кислоты или глицина в жидкой стабильной вакцине составляет от 0,15 до 0,6 M. В родственных вариантах осуществления конечная концентрация аргинина или глутаминовой кислоты или глицина в жидкой стабильной вакцине составляет от 0,2 до 0,5 M. В более предпочтительных вариантах осуществления конечная концентрация аргинина или глутаминовой кислоты или глицина в жидкой стабильной вакцине составляет от 0,25 до 0,35 M. В еще более предпочтительных вариантах осуществления конечная концентрация аргинина или глутаминовой кислоты или глицина в жидкой стабильной вакцине составляет 0,3 M.

В частных вариантах осуществления конечная общая концентрация аргинина, и/или глутаминовой кислоты, и/или глицина в жидкой стабильной вакцине составляет от 0,15 до 0,6 M. В родственных вариантах осуществления конечная общая концентрация аргинина, и/или глутаминовой кислоты, и/или глицина в жидкой стабильной вакцине составляет от 0,2 до 0,5 M. В более предпочтительных вариантах осуществления конечная общая концентрация аргинина, и/или глутаминовой кислоты, и/или глицина в жидкой стабильной вакцине составляет от 0,25 до 0,35 M. В еще более предпочтительных вариантах осуществления конечная общая концентрация аргинина, и/или глутаминовой кислоты, и/или глицина в жидкой стабильной вакцине составляет 0,3 M.

В частных вариантах осуществления конечная концентрация метионина в жидкой стабильной вакцине составляет от 0,025 до 0,3 M. В родственных вариантах осуществления конечная концентрация метионина в жидкой стабильной вакцине составляет от 0,04 до 0,15 M. В более предпочтительных вариантах осуществления конечная концентрация метионина в жидкой стабильной вакцине составляет от 0,06 до 0,09 M. В еще более предпочтительных вариантах осуществления конечная концентрация метионина в жидкой стабильной вакцине составляет 0,07 M.

Жидкие стабильные вакцины по настоящему изобретению также могут содержать белковый стабилизатор. Белковый стабилизатор может представлять собой интактный белок и/или белковый гидролизат. В частных вариантах осуществления белковый стабилизатор представляет собой желатин. В более предпочтительных вариантах осуществления белковый стабилизатор, содержащийся в жидкой стабильной вакцине по настоящему изобретению, представляет собой от 0,4 до 1,6% желатина. В альтернативных вариантах осуществления белковый стабилизатор представляет собой гидролизат цельного казеина. В частных вариантах осуществления этого типа белковый стабилизатор, содержащийся в жидкой стабильной вакцине по настоящему изобретению, представляет собой 0,5-2,0% гидролизата цельного казеина. В некоторых вариантах осуществления гидролизат цельного казеина представляет собой протеолитический гидролизат цельного казеина.

Кроме того, жидкие стабильные вакцины по настоящему изобретению также могут дополнительно содержать спирт. В частных вариантах осуществления этого типа спирт представляет собой этанол. В более предпочтительных вариантах осуществления жидкая стабильная вакцина содержит от 0,25 до 1,0% этанола. В родственных вариантах осуществления жидкие стабильные вакцины по настоящему изобретению также могут содержать сульфат декстрана. В конкретных вариантах осуществления жидкая стабильная вакцина содержит от 1 до 20 мМ сульфата декстрана. В более предпочтительных вариантах осуществления жидкая стабильная вакцина содержит от 2,5 до 10 мМ сульфата декстрана. В еще более предпочтительных вариантах осуществления жидкая стабильная вакцина содержит 5 мМ сульфата декстрана.

Кроме того, жидкие стабильные вакцины по настоящему изобретению могут также дополнительно содержать хелатирующее вещество. Такие хелатирующие вещества могут включать, но без ограничения: этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТА), l,2-бис(o-аминофенокси)этан-N,N,N',N'-тетрауксусную кислоту (BAPTA), этиленгликольтетрауксусную кислоту (EGTA), димеркаптосукциновую кислоту (DMSA), диэтилентриаминпентауксусную кислоту (DTPA) и 2,3-димеркапто-1-пропансульфоновую кислоту (DMPS). Концентрация таких хелатирующих веществ в жидких вакцинах по настоящему изобретению может изменяться приблизительно от 50 мкМ до 10 мМ.

В некоторых вариантах осуществления хелатирующее вещество представляет собой ЭДТА. В частных вариантах осуществления жидкая стабильная вакцина содержит от 50 мкМ до 10 мМ ЭДТА. В некоторых вариантах осуществления этого типа жидкая стабильная вакцина содержит от 50 до 200 мкМ ЭДТА. В других вариантах осуществления жидкая стабильная вакцина содержит от 250 мкМ до 7,5 мМ ЭДТА. В других вариантах осуществления жидкая стабильная вакцина содержит от 0,5 мМ до 5,0 мМ ЭДТА. В других вариантах осуществления жидкая стабильная вакцина содержит от 1,0 мМ до 3,0 мМ ЭДТА. В более предпочтительных вариантах осуществления жидкая стабильная вакцина содержит приблизительно 2 мМ ЭДТА.

Жидкие стабильные вакцины по настоящему изобретению могут дополнительно содержать адъювант. В частных вариантах осуществления этого типа адъювант представляет собой фосфат алюминия. В других подобных вариантах осуществления адъювант представляет собой гидроксид алюминия. В других вариантах осуществления адъювант представляет собой адъювант на основе низкомолекулярного сополимера, который может образовывать поперечные связи в растворе и превращаться в высокомолекулярный гель. В других вариантах осуществления адъювант состоит из частиц геля акрилата натрия в воде. В других вариантах осуществления адъювант представляет собой комбинацию двух или более таких адъювантов.

В некоторых вариантах осуществления жидкие стабильные вакцины по настоящему изобретению могут дополнительно содержать поглотитель свободных радикалов и/или антиоксидант. В родственных вариантах осуществления жидкие стабильные вакцины по настоящему изобретению хранят в герметичных контейнерах, которые содержат инертный газ, такой как аргон, азот или гелий, над жидкостью (например, были заполнены инертным газом).

Жидкие стабильные вакцины по настоящему изобретению могут содержать живой аттенуированный вирус собак. В некоторых вариантах осуществления живой аттенуированный вирус собак представляет собой вирус чумы собак. В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус собак представляет собой аденовирус собак 2 типа. В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус собак представляет собой парвовирус собак (CPV). В одном предпочтительном варианте осуществления этого типа парвовирус собак представляет собой парвовирус собак 2 (CPV-2). В другом предпочтительном варианте осуществления этого типа парвовирус собак представляет собой парвовирус собак 2a (CPV-2a). В другом предпочтительном варианте осуществления этого типа парвовирус собак представляет собой парвовирус собак 2b (CPV-2b). В другом предпочтительном варианте осуществления этого типа парвовирус собак представляет собой парвовирус собак 2c (CPV-2c). В частном варианте осуществления этого типа CPV-2c имеет учетный номер в ATCC PTA-13492. В другом варианте осуществления парвовирус собак представляет собой рекомбинантный парвовирус собак, который сконструирован таким образом, что он содержит гетерогенный геном CPV-2c/CPV-2, т.е. участок, кодирующий капсидные белки, получен из изолята CPV-2c, и участок, кодирующий неструктурные белки, получен из изолята CPV-2. В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус собак представляет собой вирус парагриппа собак. В частных вариантах осуществления вирус парагриппа собак представляет собой рекомбинантный вектор. В более предпочтительных вариантах осуществления рекомбинантный вирус парагриппа собак кодирует и экспрессирует гетерогенный белок. В некоторых вариантах осуществления этого типа гетерогенный белок представляет собой антиген, не являющийся антигеном собаки. В более предпочтительных вариантах осуществления антиген представляет собой антиген вируса птиц или бактериальный антиген. В некоторых вариантах осуществления рекомбинантный вирус парагриппа собак представляет собой рекомбинантный вирус парагриппа 5.

В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус собак представляет собой коронавирус собак. В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус собак представляет собой пневмовирус собак. В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус собак представляет собой вирус инфекционного гепатита собак. В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус собак представляет собой вирус герпеса собак. В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус собак представляет собой вирус бешенства. В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус собак представляет собой мелкий вирус собак. В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус собак представляет собой вирус гриппа собак. В альтернативных вариантах осуществления живой ослабленный вирус представляет собой вирус псевдобешенства.

Жидкие стабильные вакцины по настоящему изобретению могут содержать живой аттенуированный вирус кошек. В некоторых вариантах осуществления живой аттенуированный вирус кошек представляет собой вирус герпеса кошек (FHV). В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус кошек представляет собой калицивирус кошек (FCV). В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус кошек представляет собой пневмовирус кошек (FPN). В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус кошек представляет собой парвовирус кошек (FPV). В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус кошек представляет собой вирус лейкоза кошек (FeLV). В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус кошек представляет собой вирус инфекционного перитонита кошек (FIPV). В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус кошек представляет собой вирус иммунодефицита кошек (FIV). В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус кошек представляет собой вирус болезни Борна (BDV). В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус кошек представляет собой вирус гриппа кошек. В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус кошек представляет собой вирус панлейкопении кошек (FPLV). В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус кошек представляет собой коронавирус кошек (FCoV). В других вариантах осуществления живой аттенуированный вирус кошек представляет собой вирус ринотрахеита кошек (FVR).

Кроме того, настоящее изобретение относится к жидким стабильным вакцинам, которые являются поливалентными вакцинами. В частных вариантах осуществления поливалентные вакцины по настоящему изобретению содержат только живые ослабленные вирусные вакцины. Такие поливалентные вакцины могут содержать любую комбинацию живых ослабленных вирусов. В частных вариантах осуществления этого типа поливалентная вакцина содержит живой аттенуированный вирус чумы собак и живой аттенуированный парвовирус собак. В родственных вариантах осуществления поливалентная вакцина содержит живой аттенуированный вирус чумы собак и живой аттенуированный аденовирус собак 2 типа. В других вариантах осуществления поливалентная вакцина содержит живой аттенуированный вирус чумы собак и живой аттенуированный вирус парагриппа собак. В других вариантах осуществления поливалентная вакцина содержит живой аттенуированный вирус чумы собак, живой аттенуированный парвовирус собак и живой аттенуированный вирус парагриппа собак. В других вариантах осуществления поливалентная вакцина содержит живой аттенуированный вирус чумы собак, живой аттенуированный парвовирус собак и живой аттенуированный аденовирус собак 2 типа.

В других вариантах осуществления поливалентная вакцина содержит живой аттенуированный вирус чумы собак, живой аттенуированный вирус парагриппа собак и живой аттенуированный аденовирус собак 2 типа. В других вариантах осуществления поливалентная вакцина содержит живой аттенуированный вирус чумы собак, живой аттенуированный парвовирус собак, живой аттенуированный вирус парагриппа собак и живой аттенуированный аденовирус собак 2 типа. В частных вариантах осуществления поливалентная вакцина содержит живой аттенуированный вирус чумы собак, живой аттенуированный парвовирус собак, живой аттенуированный вирус парагриппа собак, живой аттенуированный аденовирус собак 2 типа и живой аттенуированный коронавирус собак. В родственных вариантах осуществления поливалентная вакцина содержит живой аттенуированный вирус чумы собак, живой аттенуированный парвовирус собак, живой аттенуированный вирус парагриппа собак, живой аттенуированный аденовирус собак 2 типа и живой аттенуированный коронавирус кошек. В частных вариантах осуществления этого типа поливалентная вакцина содержит живой аттенуированный вирус чумы собак, живой аттенуированный аденовирус собак 2 типа, живой аттенуированный парвовирус собак, живой аттенуированный вирус парагриппа собак и живой аттенуированный вирус гриппа собак.

В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к жидким стабильным вакцинам, которые представляют собой поливалентную вакцину, которая содержит живой аттенуированный аденовирус собак 2 типа и живой аттенуированный вирус парагриппа собак. В других вариантах осуществления поливалентная вакцина содержит живой аттенуированный аденовирус собак 2 типа и живой аттенуированный парвовирус собак. В других вариантах осуществления поливалентная вакцина содержит живой аттенуированный парвовирус собак и живой аттенуированный вирус парагриппа собак. В других вариантах осуществления поливалентная вакцина содержит живой аттенуированный аденовирус собак 2 типа, живой аттенуированный парвовирус собак и живой аттенуированный вирус парагриппа собак. В частных вариантах осуществления этого типа поливалентная вакцина содержит живой аттенуированный аденовирус собак 2 типа, живой аттенуированный парвовирус собак, живой аттенуированный вирус парагриппа собак и живой аттенуированный вирус гриппа собак.

Альтернативно жидкие стабильные вакцины по настоящему изобретению могут дополнительно содержать убитый вирус, и/или убитую бактерию (например, бактерин), и/или субфракцию бактерина. Соответственно любая из жидких стабильных вакцин по настоящему изобретению, которая содержит одну или более живых ослабленных вирусных вакцин, может дополнительно содержать убитый вирус, и/или убитую бактерию, и/или субфракцию бактерина. В конкретных вариантах осуществления убитый вирус представляет собой вирус гриппа собак. В других вариантах осуществления убитый вирус представляет собой пневмовирус собак. В других вариантах осуществления убитый вирус представляет собой коронавирус собак. В других вариантах осуществления жидкая стабильная вакцина по настоящему изобретению может содержать два или более из указанных убитых вирусов собак.

В некоторых вариантах осуществления убитая бактерия представляет собой Bordetella bronchiseptica. В других вариантах осуществления убитая бактерия относится к виду Mycoplasma. В других вариантах осуществления убитая бактерия представляет собой Ehrlichia canis. В других вариантах осуществления убитая бактерия относится к виду Anaplasma. В других вариантах осуществления убитая бактерия представляет собой Leptospira. В одном таком варианте осуществления Leptospira является Leptospira canicola. В другом варианте осуществления Leptospira является Leptospira grippotyphosa. В другом варианте осуществления Leptospira является Leptospira hardjo. В другом варианте осуществления Leptospira является Leptospira icterohaemorrhagiae. В другом варианте осуществления Leptospira является Leptospira Pomona. В другом варианте осуществления Leptospira является Leptospira interrogans. В другом варианте осуществления Leptospira является Leptospira autmnalis. В другом варианте осуществления Leptospira является Leptospira Bratislava. В других вариантах осуществления жидкая стабильная вакцина по настоящему изобретению может содержать две или более указанных убитых бактерий. В конкретном варианте осуществления жидкая стабильная вакцина содержит Leptospira canicola, Leptospira grippotyphosa, Leptospira Pomona и Leptospira icterohaemorrhagia.

Настоящее изобретение дополнительно относится к способам, способствующим защите кошки или собаки от клинического заболевания, которое обусловлено вирусной инфекцией кошек или собак, включающим введение вакцины по настоящему изобретению животному. В некоторых вариантах осуществления введение осуществляют через слизистые оболочки. В других вариантах осуществления введение осуществляют парентерально. В других вариантах осуществления введение осуществляют внутрикожно. В других вариантах осуществления введение осуществляют чрескожно. В более предпочтительных вариантах осуществления вакцину по настоящему изобретению вводят животному подкожно. В других предпочтительных вариантах осуществления вакцину по настоящему изобретению вводят животному внутримышечно. Настоящее изобретение также относится к применению первичных и/или бустерных вакцин.

В конкретных вариантах осуществления животное-субъект представляет собой собаку, и способ включает введение собаке жидкой стабильной вакцины по настоящему изобретению, которая содержит живой ослабленный вирус. В частных вариантах осуществления жидкая стабильная вакцина содержит живой аттенуированный вирус чумы собак, живой аттенуированный аденовирус собак 2 типа, живой аттенуированный парвовирус собак и живой аттенуированный вирус парагриппа собак. В некоторых вариантах осуществления этого типа жидкая стабильная вакцина содержит живой аттенуированный вирус чумы собак, живой аттенуированный аденовирус собак 2 типа, живой аттенуированный парвовирус собак, живой аттенуированный вирус парагриппа собак и живой аттенуированный вирус гриппа собак. В других вариантах осуществления этого типа жидкая стабильная вакцина содержит живой аттенуированный вирус чумы собак, живой аттенуированный аденовирус собак 2 типа, живой аттенуированный парвовирус собак, живой аттенуированный вирус парагриппа собак и убитый аттенуированный вирус гриппа собак.

Также изобретение относится к способам получения любой и всех жидких стабильных вакцин по настоящему изобретению. В некоторых вариантах осуществления способ включает объединение терапевтически эффективного количества живого ослабленного вируса с 10-30% сахарного вспомогательного вещества, аминокислотой и с буферным раствором, имеющим значение pH от 6,0 до pH 8,0, для получения жидкой стабильной вакцины. Аминокислота может представлять собой аргинин, глицин, глутаминовую кислоту, метионин или комбинации аргинина, глицина, глутаминовой кислоты и/или метионина. В конкретных вариантах осуществления аргинин, и/или глицин, и/или глутаминовая кислота имеют конечную концентрацию от 0,15 до 0,6 M в жидкой стабильной вакцине. В некоторых вариантах осуществления метионин имеет конечную концентрацию от 0,025 до 0,3 M в жидкой стабильной вакцине. В частных вариантах осуществления терапевтически эффективное количество живого ослабленного вируса представляет собой терапевтически эффективное количество живого аттенуированного вируса собак. В частных вариантах осуществления этого типа терапевтически эффективное количество живого аттенуированного вируса собак включает терапевтически эффективные количества живого аттенуированного вируса чумы собак, живого аттенуированного аденовируса собак 2 типа, живого аттенуированного парвовируса собак и живого аттенуированного вируса парагриппа собак. Указанные и другие аспекты настоящего изобретения будут более понятны с помощью ссылки на приведенное ниже подробное описание.

ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

В отличие от убитых вирусных вакцин жидкие стабильные живые вирусные вакцины по настоящему изобретению являются аттенуированными. До настоящего времени особое внимание необходимо было обращать при разработке такой аттенуированной живой вирусной вакцины на поддержание титра аттенуированных вирусов на уровне, который является безопасно ниже уровня, который может привести к серьезному нежелательному явлению. В действительности большинство живых аттенуированных вирусных вакцин кошек или собак являются лиофизированными, и лиофилизация может привести к существенному снижению эффективности аттенуированных живых вирусных вакцин как в результате самого процесса лиофилизации, так и с течением времени при длительном хранении.

Настоящее изобретение позволяет преодолеть указанную проблему путем предоставления жидких стабильных вакцин, которые остаются эффективными даже при хранении, без необходимости увеличения начального титра живого аттенуированного вирусного антигена выше достоверно безопасного уровня. В виде дополнительного преимущества настоящее изобретение обеспечивает средство для снижения стоимости производства предоставленных вакцин с помощью существенного уменьшения количества живых ослабленных вирусов, необходимых для создания такой безопасной и эффективной вакцины. Кроме того, живые ослабленные вирусные вакцины по настоящему изобретению более удобны в использовании, чем их лиофилизированные аналоги. Соответственно, настоящее изобретение предоставляет безопасные и эффективные живые ослабленные вирусные вакцины, которые можно хранить в виде жидкостей при температурах холодильного хранения и которые остаются стабильными в течение 12-18 месяцев или даже больше.

Кроме того, удивительно, что жидкие стабильные живые вирусные вакцины по настоящему изобретению могут включать в себя вирусы собак и/или кошек любого типа. Таким образом, жидкие стабильные живые вирусные вакцины по настоящему изобретению могут содержать как оболочечные, так и безоболочечные вирусы. Кроме того, жидкие стабильные живые вирусные вакцины по настоящему изобретению могут содержать живые ослабленные вирусы, имеющие одноцепочечные РНК-геномы, одноцепочечные ДНК-геномы или двухцепочечные ДНК-геномы.

Кроме того, жидкие стабильные живые вирусные вакцины по настоящему изобретению также могут содержать рекомбинантные векторы кошек или собак, которые присутствуют или отдельно, и/или с другими такими рекомбинантными векторами, и/или с живыми аттенуированными вирусами кошек или собак, и/или в комбинации с убитыми бактериями, и/или убитыми вирусами кошек или собак. Такие рекомбинантные векторы кошек или собак могут дополнительно кодировать один или несколько гетерологичных вирусных или бактериальных антигенов. Конкретным примером такого рекомбинантного вектора является рекомбинантный вирус парагриппа собак 5, которой недавно был описан Li et al. (J. of Virology 87(10) 5985-5993 (2013); включено в описание посредством ссылки во всей полноте).

Рекомбинантные векторы для жидких стабильных живых вирусных вакцин по настоящему изобретению, такие как рекомбинантный вирус парагриппа 5, могут кодировать гетерологичный антиген вируса собак, и/или вируса кошек, и/или вируса человека, и/или вируса обезьян, и/или вируса крупного рогатого скота, и/или вируса овец, и/или вируса свиней, и/или вируса птиц (например, вирус цыплят). В конкретных вариантах осуществления жидкие стабильные живые вирусные вакцины по настоящему изобретению содержат рекомбинантный вирус парагриппа 5, который кодирует один или несколько антигенов одного или нескольких вирусов цыплят.

Удивительно, но в присутствии хелатирующего агента (например, 2 мМ ЭДТА) и/или адъюванта (например, фосфата алюминия) жидкие стабильные живые вирусные вакцины по настоящему изобретению остаются стабильными даже в том случае, когда в состав включают убитые бактерии (см. пример 2 ниже). Соответственно, жидкие стабильные живые вирусные вакцины по настоящему изобретению могут дополнительно содержать один или несколько убитых вирусов и