Способы бета-глюкановой иммунотерапии

Способы бета-глюкановой иммунотерапии

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Перекрестная ссылка на родственные заявки

По настоящей заявке испрашивается приоритет предварительной заявки на патент США 61/640834, поданной 01 мая 2012 года, и предварительной заявки на патент США 61/640397, поданной 30 апреля 2012 года, каждая из которых включена в настоящую заявку в качестве ссылки.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение в одном из аспектов относится к способу идентификации связывания β-глюкана с иммунными клетками индивида. В основном, способ включает получение образца крови индивида, где образец крови содержит иммунные клетки, добавление β-глюкана по меньшей мере в часть образца крови и инкубацию смеси в условиях, позволяющих β-глюкану связываться с иммунными клетками, и обнаружение β-глюкана, связавшегося с иммунными клетками.

В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может быть получен из дрожжей. В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может включать β-1,3/1,6 глюкан, такой как β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопираноза.

В некоторых вариантах осуществления изобретения обнаружение β-глюкана, связавшегося с иммунными клетками, может включать приведение образца в контакт с моноклональным антителом, которое специфично связывается с β-глюканом. В некоторых вариантах осуществления изобретения моноклональное антитело содержит BfD I, BfD II, BfD III или BfD IV.

В некоторых вариантах осуществления изобретения способ может дополнительно включать получение второго образца крови индивида, где образец крови содержит иммунные клетки, добавление β-глюкана по меньшей мере в часть второго образца крови и инкубацию смеси в условиях, позволяющих β-глюкану связываться с иммунными клетками, и обнаружение β-глюкана, связавшегося с иммунными клетками.

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу улучшения β-глюкановой иммунотерапии у индивида. В основном, способ включает идентификацию индивида, имеющего низкий уровень связывания, и совместное введение индивиду β-глюкана и препарата антител, способного преобразовывать низкий уровень связывания у индивида в высокий уровень связывания. В некоторых вариантах осуществления изобретения идентификация индивида, имеющего низкий уровень связывания, может включать получение образца крови индивида, где образец крови содержит титр антител против β-глюкана, измерение титра антитела против β-глюкана по меньшей мере в части образца крови и идентификацию индивида, как имеющего низкий уровень связывания, если титр антител против β-глюкана имеет значение меньше заранее определенного уровня. В других вариантах осуществления изобретения идентификация индивида, имеющего низкий уровень связывания, может включать получение образца крови индивида, где образец крови содержит иммунные клетки, добавление β-глюкана по меньшей мере в часть образца крови и инкубацию смеси в условиях, позволяющих β-глюкану связываться с иммунными клетками, обнаружение β-глюкана, связавшегося с иммунными клетками, и идентификацию индивида, как имеющего низкий уровень связывания, если β-глюкан связывается не более чем с 10% иммунных клеток.

В некоторых вариантах осуществления изобретения препарат антител может включать сыворотку крови индивида, имеющего высокий уровень связывания. В некоторых вариантах осуществления изобретения препарат антител может включать моноклональное антитело, которое специфично связывается с β-глюканом, такое как BfD I, BfD II, BfD III или BfD IV. В некоторых вариантах осуществления изобретения препарат антител может включать внутривенный иммуноглобулин. В некоторых вариантах осуществления изобретения препарат антител может включать часть молекулы β-глюкана, конъюгированную с антителом или фрагментом антитела, таким как Fc-фрагмент.

В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан и препарат антител вводят совместно одновременно. В других вариантах осуществления изобретения β-глюкан и препарат антител вводят совместно в разные моменты времени. В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан и препарат антител вводят совместно в различные области.

В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может быть получен из дрожжей. В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может включать β-1,3/1,6 глюкан, такой как β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопираноза.

Изложенная выше сущность настоящего изобретения не предназначена для описания каждого раскрытого варианта осуществления или каждого варианта применения настоящего изобретения. Последующее описание более подробно раскрывает настоящее изобретение на примере иллюстративных вариантов осуществления изобретения. В некоторых местах описания заявки приведены списки примеров, эти примеры могут быть использованы в различных комбинациях. В каждом случае приведенный список служит только в качестве типичной группы и не должен рассматриваться как исчерпывающий список.

Краткое описание чертежей

Фиг.1. Данные проточной цитометрии, показывающие различное связывание β-глюкана (PGG) с полиморфоядерными лейкоцитами в цельной крови здорового человека.

Фиг.2. Данные, показывающие различное связывание β-глюкана с нейтрофилами в цельной крови здорового человека.

Фиг.3. Данные, показывающие различное связывание β-глюкана с моноцитами в цельной крови здорового человека.

Фиг.4. Данные сравнения титров антител против β-глюкана у индивидов с низким уровнем связывания и высоким уровнем связывания.

Фиг.5. Сравнение среднего числа дней терапии пациентов в контрольной и исследуемой группах двухгруппового, открытого, рандомизированного, многоцентрового клинического исследования.

Фиг.6. Данные, показывающие, что сыворотка крови индивида с высоким уровнем связывания способна повысить связывание β-глюкана с ПМЛ, полученными от индивида с низким уровнем связывания.

Фиг.7. Данные, показывающие, что антитела против β-глюкана способны повысить связывание β-глюкана с ПМЛ, полученными от индивида с низким уровнем связывания.

Фиг.8. Данные, показывающие, что внутривенный иммуноглобулин способен повысить связывание β-глюкана с ПМЛ, полученными от индивида с низким уровнем связывания.

Фиг.9. Данные, показывающие связывание конъюгатов PGG-антитело с ПМЛ.

Фиг.10. Данные, показывающие связывание конъюгатов PGG-ВВИГ с ПМЛ.

Подробное описание иллюстративных вариантов осуществления изобретения

В настоящем изобретении описаны способы, относящиеся к применению растворимого β-глюкана в качестве компонента иммунотерапии. Описанные способы основаны на данных изучения различного связывания β-глюкана иммунными клетками в различных популяциях здоровых людей. Неожиданно было обнаружено, что индивиды с высоким уровнем связывания β-глюкана имеют более высокие титры антител против β-глюкана, по сравнению с индивидами с низким уровнем связывания. Таким образом, настоящее изобретение относится к способам скрининга индивидов для выявления индивидов с высоким уровнем связывания и индивидов с низким уровнем связывания. Настоящее изобретение также относится к способам, которые в основном включают преобразование низкого уровня связывания у индивида в высокий уровень связывания, и таким образом увеличения числа лиц, для которых иммунотерапия, основанная на использовании β-глюкана, может оказаться эффективной. Настоящее изобретение также относится к схемам лечения, которые включают периодический мониторинг индивида на предмет того, является ли он в данный момент индивидом с высоким уровнем связывания или индивидом с низким уровнем связывания, и при необходимости корректировку получаемой индивидом терапии для стимулирования достижения или поддержания статуса индивида с высоким уровнем связывания.

β-Глюканы представляют собой полимеры глюкозы, полученные из различных микробиологических и растительных источников, включая, например, дрожжи, бактерии, микроскопические водоросли, водоросли, грибы, овес и ячмень. Из них β-глюканы дрожжей высоко ценятся за свои иммуномодулирующие свойства. Дрожжевые β-глюканы могут находиться в различных формах, таких как, например, дрожжи в неизменном виде, зимозан, очищенные частицы целого глюкана, солюбилизированный полисахарид зимозан или высокоочищенные растворимые β-глюканы различной молекулярной массы. Структурно дрожжевые β-глюканы состоят из глюкозных мономеров, организованных как основная цепь из молекул глюкопиранозы, связанных β-(1,3) связью, с периодическими β-(1,3) глюкопиранозными ответвлениями, связанными с основной цепью при помощи β-(1,6) гликозидных связей. Различные формы дрожжевых β-глюканов могут по-разному функционировать. На механизм, при помощи которого дрожжевые β-глюканы осуществляют свое иммуномодулирующее действие, могут оказывать влияние структурные различия между различными формами β-глюканов, такие как, например, их твердочастичная или растворимая природа, третичная структура, длина основной цепи, длина боковой цепи и частота боковых цепей. Иммуностимулирующие функции дрожжевых β-глюканов также зависят от участвующих во взаимодействии рецепторов в различных типах клеток у различных видов, которые опять же могут зависеть от структурных свойств β-глюканов.

Как правило, β-глюкановая иммунотерапия может включать введение индивиду любой подходящей формы β-глюкана или любой комбинации двух или более форм β-глюкана. Подходящие β-глюканы и получение подходящих β-глюканов из их природных источников описаны, например, в публикации заявки на патент США US2008/0103112 A1. В некоторых случаях β-глюкан может быть получен из дрожжей, таких как, например, Saccharomyces cerevisiae. В некоторых случаях β-глюкан может представлять собой или быть получен из β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопиранозы, также именуемой в настоящем описании как PGG (IMPRIME PGG, Biothera, Eagan, MN), высокоочищенной и хорошо известной формы растворимого β-глюкана, полученного из дрожжей. Кроме того, иммунотерапия на основе β-глюкана может включать применение, например, модифицированного и/или дериватизированного β-глюкана, такого как те β-глюканы, которые описаны в Международной патентной заявке PCT/US12/36795. В других случаях β-глюкановая иммунотерапия может включать введение, например, твердочастичного-растворимого β-глюкана или твердочастичного-растворимого препарата β-глюкана, каждый из которых описан, например, в патенте США 7981447.

Как отмечалось выше, дрожжевые β-глюканы высоко ценятся за свои иммуномодулирующие свойства. В частности, было показано, что PGG β-глюкан обладает преклинической активностью против различных типов злокачественных новообразований, когда вводится в комбинации со связанными с опухолью моноклональными антителами (mAb). Примеры типов злокачественных новообразований и связанных с ними связанных с опухолью mAb включают, например, Т-клеточную лимфому (анти-MUC1, анти-GD2), карциному легкого (анти-MUC1), аденокарциному молочной железы (анти-MMTV), карциному яичника (бевацизумаб), немелкоклеточную карциному легкого (бевацизумаб, цетуксимаб), колоректальный рак (цетуксимаб), хроническую лимфоцитарную лейкемию и неходжкинскую лимфому (ритуксимаб) и карциному поджелудочной железы (цетуксимаб, анти-MUC1). β-Глюканы могут индуцировать нейтрофилы, которые затем рекрутируются в опухоли, меченные связанным с опухолью моноклональным антителом. Рекрутированные нейтрофилы активируются путем двойного связывания рецептора комплемента 3-го типа (CR3) с iC3b/C3b - на поверхности меченных mAb опухолевых клеток - и с введенным β-глюканом, для уничтожения опухолевых клеток.

Однако авторы настоящего изобретения обнаружили, что существуют различные популяции индивидов: одна популяция обладает относительно высокой способностью связывания β-глюкана с первоначальными иммунными клетками в цельной крови; другая популяция обладает относительно низкой способностью связывания β-глюкана с первоначальными иммунными клетками в цельной крови. Это наблюдение оказалось полностью неожиданным с точки зрения данных, полученных на моделях иммунитета мышей и в ходе исследований с использованием изолированных иммунных клеток человека. Многие индивиды изначально обладают некоторым уровнем связывания β-глюкана с иммунными клетками, низким уровнем подверженности воздействию β-глюканов (например, фиг.1, «De novo»). При введении экзогенного β-глюкана, у индивидов, имеющих низкий уровень связывания, имеет место умеренное увеличение процента иммунных клеток, связывающих β-глюкан, в то время как у индивидов, имеющих высокий уровень связывания, имеет место значительное увеличение процента первоначальных иммунных клеток, связывающих β-глюкан (фиг.1, «+Экзогенный PGG»). На фиг.1 и фиг.2 приведены данные, отражающие связывание β-глюкана с полиморфоядерными лейкоцитами (ПМЛ), и на фиг.3 (моноциты) показано, что различное связывание также имеет место в случае других популяций первоначальных иммунных клеток. Кроме того, у индивидов, имеющих высокий уровень связывания, также имеет место тенденция к синтезу большего количества хемоаттрактантных цитокинов и хемокинов, таких как, например, IL-8, MCP, MIP-1 и т.д.

Используемый в настоящем описании термин «статус индивида, имеющего высокий уровень связывания» относится к индивиду, который обладает заранее определенным процентным содержанием популяции конкретных иммунных клеток, которая связывается с экзогенно введенным β-глюканом. Популяция иммунных клеток, используемая для определения того, обладает ли индивид высоким уровнем связывания или низким уровнем связывания, может представлять собой, например, полиморфоядерные лейкоциты (ПМЛ) или моноциты. Индивид может считаться обладающим высоким уровнем связывания, если по меньшей мере 10% ПМЛ или моноцитов в образце крови этого индивида связываются с экзогенно введенным β-глюканом. Таким образом, индивид может быть индивидом, имеющим высокий уровень связывания, если по меньшей мере 10%, по меньшей мере 12%, по меньшей мере 15% или, по меньшей мере 40% ПМЛ или моноцитов в образце крови индивида связываются с экзогенно введенным β-глюканом (см., например, фиг.2 и фиг.3). В некоторых случаях экзогенно введенный β-глюкан может включать PGG, находящийся в конченой концентрации от 10 мкг/мл до 100 мкг/мл. Термин «статус индивида, имеющего низкий уровень связывания» относится к индивиду, который не обладает статусом индивида, имеющего высокий уровень связывания.

Кроме того, индивиды, имеющие высокий уровень связывания, могут иметь более высокие титры антител против β-глюкана, по сравнению с индивидами с низким уровнем связывания (фиг.4). Как правило, титр антител против β-глюкана для индивида, имеющего высокий уровень связывания, может иметь значение по меньшей мере 25000, такое как, например, по меньшей мере 30000, по меньшей мере 35000, по меньшей мере 40000, по меньшей мере 45000, по меньшей мере 50000, по меньшей мер 55000 или по меньшей мере 60000 (см., например, фиг.4). Термин «титр антител против β-глюкана», как правило, относится к IgG. Однако в некоторых случаях присутствие IgM может компенсировать пониженный титр IgG, для присвоения статуса «индивид, имеющий высокий уровень связывания». Как более подробно описано ниже, статуса индивида, имеющего высокий уровень связывания, может оказывать влияние на ответ индивида на β-глюкановую терапию. У индивида, имеющего низкий уровень связывания, можно искусственно вызвать ответ на β-глюкановую терапию, похожий на ответ индивида, имеющего высокий уровень связывания, путем введения определенного антитела против β-глюкана, как части β-глюкановой терапии.

Таким образом, в одном из аспектов настоящее изобретение относится к скринингу индивида для выявления того, является ли индивид в данный момент времени индивидом с высоким уровнем связывания или индивидом с низким уровнем связывания. Способ в основном включает получение образца крови индивида, добавление β-глюкана по меньшей мере в часть этого образца, инкубацию этой смеси в условиях, позволяющих β-глюкану связываться с иммунными клетками, и обнаружение β-глюкана, связавшегося с иммунными клетками.

Образец крови включает часть крови достаточную для того, чтобы она включала иммунные клетки. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения, образец крови может представлять собой цельную кровь. В других вариантах осуществления изобретения образец крови может быть по меньшей мере частично обработан с целью удаления одного или нескольких компонентов цельной крови, которые не являются необходимыми для скрининг-анализа, такие как, например, эритроциты. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения, образец крови может включать продукт крови, такой как, например, любая фракция крови, которая включает по меньшей мере часть лейкоцитарной пленки.

В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может быть получен из дрожжей, таких как, например, Saccharomyces cerevisiae. В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может включать β-1,3/1,6 глюкан, такой как, например, β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопираноза.

В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан, связавшийся с иммунными клетками, может быть обнаружен путем приведение образца в контакт с моноклональным антителом, которое специфично связывается с этим β-глюканом. Используемый в настоящем описании термин «специфично» и его варианты означает имеющий отличающуюся или не широкую (т.е. неспецифичную) аффинность в любой степени к конкретной мишени. Примеры моноклональных антител, которые специфично связываются с β-глюканом, включают, например, моноклональные антитела, идентифицированные как BfD I, BfD II, BfD III и/или BfD IV (Biothera, Eagan, MN), каждое из которых описано в патенте США 6294321.

Чтобы облегчить обнаружение антитела против β-глюкана, которое связывается со связанным с иммунной клеткой β-глюканом, антитело против β-глюкана может содержать детектируемую метку. В альтернативном варианте связанное антитело против β-глюкана может быть обнаружено с использованием меченного вторичного антитела. В обоих случаях подходящие метки включают, например, флуоресцентную метку, ферментную метку, колориметрическую метку или радиоактивную метку.

Способ также может включать иммобилизацию связанных с β-глюканом иммунных клеток на субстрате. В некоторых случаях иммунные клетки могут быть иммобилизованы до того, как они будут приведены в контакт с β-глюканом, например, путем приведения по меньшей мере части образца крови в контакт с субстратом до приведения образца крови в контакт с β-глюканом. В других вариантах осуществления изобретения иммунные клетки могут быть иммобилизованы после того, как они будут приведены в контакт с β-глюканом. В обоих случаях иммунные клетки могут быть иммобилизованы с использованием любых подходящих материалов, таких как, например, иммобилизованное антитело, которое специфично связывается с целевой популяцией иммунных клеток.

В некоторых вариантах осуществления изобретения способ может включать стадию отмывки для удаления не связавшихся компонентов анализа. Например, некоторые варианты осуществления изобретения могут включать стадию отмывки несвязавшегося β-глюкана и/или несвязавшихся компонентов образца крови от связанных с β-глюканом иммунных клеток. В качестве другого примера, некоторые варианты осуществления изобретения могут включать стадию отмывки несвязавшихся иммунных клеток от субстрата, если он присутствует. В качестве еще одного примера, некоторые варианты осуществления изобретения могут включать стадию отмывки несвязавшихся β-глюкан-специфичных антител от β-глюкана, связанного с иммунными клетками.

В некоторых вариантах осуществления изобретения способ может включать повторный продолжительный скрининг индивида для мониторинга того, является ли индивид индивидом с высоким уровнем связывания или индивидом с низким уровнем связывания с течением времени. Некоторые онкологические пациенты, получающие β-глюкановую иммунотерапию, демонстрируют снижение титра антител против β-глюкана с течением времени при повторном введении β-глюкана. Эти пациенты также демонстрируют продолжительное снижение количества связанных с β-глюканом иммунных клеток (например, периферических ПМЛ). Это явление может быть по меньшей мере частично, обусловлено рекрутированием связанных с β-глюканом иммунных клеток из кровяного русла в микроокружение опухоли. В другом случае, это может быть, по меньшей мере, частично, обусловлено изменением плазматических факторов, влияющих на связывание β-глюкана с циркулирующими иммунными клетками (например, снижение с течением времени количества антител против β-глюкана).

В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу преобразование низкого уровня связывания у индивида в высокий уровень связывания. В двухгрупповом, открытом, рандомизированном, многоцентровом клиническом исследовании 795 индивидов с рецидивным/прогрессирующим колоректальным раком после по меньшей мере двух ранее полученных химиотерапевтических курсов лечения разделили на контрольную группу и исследуемую группу. Индивиды в контрольной группе получали лечение цетуксимабом. Индивиды в исследуемой группе получали лечение цетуксимабом+4 мг/кг PGG β-глюкана. На фиг.5 показано, что индивиды, получавшие β-глюкан, как часть своей иммунотерапии, находились на лечении в течение более длительного среднего периода времени по сравнению с индивидами, получавшими только цетуксимаб, эффект был наиболее выражен у индивидов, имеющих высокий уровень связывания. В этом контексте продолжительность лечения является показателем успешности терапии, так как более длительное время лечения свидетельствует о положительном терапевтическом результате, в то время как более короткое время лечения свидетельствует о неблагоприятном исходе. Таким образом, существуют клинические последствия статуса индивида, имеющего высокий уровень связывания, по сравнению со статусом индивида, имеющего низкий уровень связывания.

Эти клинические последствия проявления статуса индивида, имеющего высокий уровень связывания, по сравнению со статусом индивида, имеющего низкий уровень связывания, означают, что возможность преобразовывать низкий уровень связывания у индивида в высокий уровень связывания может иметь клинические последствия для этого индивида. На фиг.6 показано, что сыворотка крови индивида с высоким уровнем связывания способна повысить связывание β-глюкана с иммунными клетками (например, ПМЛ) индивида с низким уровнем связывания. Увеличение количества моноклональных антител против β-глюкана также способно повысить связывание β-глюкана с иммунными клетками (например, ПМЛ) в сыворотке крови, полученной от индивида с низким уровнем связывания (фиг.7). Кроме того, внутривенный иммуноглобулин (ВВИГ), продукт крови, содержащий объединенный поливалентный IgG от многих доноров (как правило, многих сотен и даже тысяч доноров, и, таким образом, естественным образом содержащий антитела против β-глюкана), также способен повысить связывание β-глюкана с иммунными клетками (например, ПМЛ) в сыворотке крови, полученной от индивида с низким уровнем связывания (фиг.8). Следовательно, является возможным преобразование низкого уровня связывания у индивида в высокий уровень связывания, путем введения индивиду, в качестве компонента иммунотерапии, комбинации β-глюкана и препарата, содержащего антитела против β-глюкана. Важно, что преобразование низкого уровня связывания у индивида в высокий уровень связывания может улучшить клинический исход иммунотерапии.

Таким образом, способ включает совместное введение β-глюкана и препарата антител, способного преобразовывать низкий уровень связывания у индивида в высокий уровень связывания. Используемый в настоящем описании термин «совместное введение» относится к двум или более компонентам комбинации, вводимым так, что терапевтическое или профилактическое действие этой комбинации может быть сильнее, чем терапевтическое или профилактическое действие каждого компонента, вводимого отдельно. Два компонента могут быть совместно введены одновременно или последовательно. Одновременно вводимые компоненты могут находиться в одной или нескольких фармацевтических композициях. Последовательное совместное введение двух или более компонентов включает случаи, в которых компоненты вводятся так, чтобы оба компонента оказались одновременно биодоступными после того, как они оба были введены. Независимо от того, является ли совместное введение компонентов одновременным или последовательным, компоненты могут быть совместно введены в одну область или в различные области.

Аналогичное преобразование низкого уровня связывания у индивида в высокий уровень связывания может быть осуществлено путем введения индивиду композиции, которая содержит часть молекулы β-глюкана, конъюгированную с любым антителом или частью антитела. На фиг.9 приведены данные, иллюстрирующие, что относительно низкое связывание PGG с ПМЛ в цельной крови (Imp Ref, второе изображение) изменяется на высокое связывание путем конъюгации PGG или с BTH1704 (анти-MUC1, патент США 6204366, Biothera, Inc, Eagan, MN, третье изображение) или с ERBITUX (Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN, четвертое изображение) противоопухолевыми антителами. На фиг.10 также показано, что относительно низкое связывание PGG с ПМЛ в цельной крови (Imp Ref, второе изображение) изменяется на высокое связывание путем конъюгации PGG с внутривенным иммуноглобулином (ВВИГ, Biolegend, San Diego, CA).

Таким образом, в другом аспекте способ включает введение индивиду композиции, которая содержит часть молекулы β-глюкана, конъюгированную с антителом, терапевтическим антителом, противоопухолевым антителом или фрагментом антитела, таким как Fc-фрагмент антитела. Модифицированные и/или дериватизированные PGG, включая PGG конъюгаты части молекулы PGG и антитела, описаны в Международной патентной заявке PCT/US12/36795, которые также могут быть использованы в конъюгатах с фрагментами антител. Часть молекулы PGG может представлять собой или быть получена из β-1,3/1,6 глюкана. В этом контексте термин «получена из» означает, что конъюгат обязательно может быть получен путем создания ковалентной связи, которая замещает один или несколько атомов PGG β-глюкана. Используемый в настоящем описании термин «полученный из β-1,3/1,6 глюкана» относится к части PGG β-глюкана, которая остается частью конъюгата после замещения одного или нескольких атомов PGG с образованием ковалентной связи конъюгата.

Используемый в настоящем описании термин «способный преобразовывать низкий уровень связывания у индивида в высокий уровень связывания» относится к свойству изменять статус связывания индивида с низкого уровня связывания (например, ниже заранее определенного порогового значения) на высокий уровень связывания (например, выше заранее определенного порогового значения). Статус индивида как индивида, имеющего низкий уровень связывания, или индивида, имеющего высокий уровень связывания, может быть определен по степени связывания β-глюкана с иммунными клетками по меньшей мере в части образца крови, полученного от индивида. В альтернативном варианте, статус связывания индивида может быть определен по значению титра антител против β-глюкана, измеренному по меньшей мере в части образца крови, полученного от индивида.

В некоторых вариантах осуществления изобретения препарат антител может содержать сыворотку крови индивида, имеющего высокий уровень связывания.

В других вариантах осуществления изобретения препарат антител может содержать внутривенный иммуноглобулин. В еще других вариантах осуществления изобретения препарат антител может содержать моноклональное антитело, которое специфично связывается с β-глюканом. Примеры моноклональных антител, которые специфично связываются с β-глюканом, включают, например, BfD I, BfD II, BfD III или BfD IV.

β-Глюкан, препарат антител и/или комбинация обоих компонентов могут находиться в составе композиции вместе с носителем. Используемый в настоящем описании термин «носитель» включает любой растворитель, диспергирующую среду, наполнитель, оболочку, разбавитель, антибактериальное средство и/или противогрибковое средство, изотоническое средство, средство, замедляющее всасывание, буфер, раствор-носитель, суспензию, коллоидную систему и тому подобное. Использование таких сред и/или средств для фармацевтически активных веществ хорошо известно из уровня техники. За исключением случаев, когда любые стандартные среды или средства являются несовместимыми с β-глюканом или антителом, их использование в терапевтических композициях предполагается. Дополнительные активные ингредиенты также могут быть включены в состав этих композиций.

«Фармацевтически приемлемым» считается материал, который не является нежелательным с биологической или иной точки зрения, т.е. материал может вводиться индивиду вместе с β-глюканом и/или антителом, не вызывая нежелательных биологических эффектов, или без вредного взаимодействия с любым из других компонентов фармацевтической композиции, в которой он содержится.

β-Глюкан, препарат антител и/или комбинация обоих компонентов могут находиться в составе фармацевтической композиции. В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан и препарат антител могут находиться в составе одного препарата. В других вариантах осуществления изобретения β-глюкан и препарат антител могут находиться в составе разных препаратов. Фармацевтическая композиция может быть изготовлена в различных и/или многих формах, приспособленных к одному или нескольким предпочтительным способам введения. Таким образом, фармацевтическая композиция может быть введена одним или несколькими известными способами, включая, например, пероральное, парентеральное (например, внутрикожное, чрескожное, подкожное, внутримышечное, внутривенное, внутрибрюшинное и т.д.) или местное (например, интраназальное, внутрилегочное, интрамаммарное, интравагинальное, внутриматочное, внутрикожное, чрескожное, ректальное и т.д.) введение. Фармацевтическая композиция или ее часть может быть введена на поверхность слизистой оболочки, например, путем введения, например, на слизистую оболочку носа или дыхательных путей (например, в виде спрея или аэрозоля). Фармацевтическая композиция или ее часть также может быть введена путем длительного или замедленного высвобождения.

В целях удобства препарат может быть изготовлен в виде лекарственной формы с отдельными единицами дозы, и может быть получен способами, хорошо известными в области фармацевтики. Способы получения композиции с фармацевтически приемлемым носителем включают стадию приведения β-глюкана и/или препарата антител в контакт с носителем, который содержит один или более вспомогательных ингредиентов. В основном, препарат может быть получен путем равномерного и/или непосредственного приведения активного химического соединения в контакт с жидким носителем, тонко измельченным твердым носителем или им обоими, и затем, при необходимости, формования продукта в необходимые препараты.

β-Глюкан, препарат антител и/или комбинация обоих компонентов могут находиться в любой подходящей форме, включая без ограничений раствор, суспензию, эмульсию, спрей, аэрозоль или любую форму смеси. Композиция может вводиться в рецептуру препарата с любым фармацевтически приемлемым вспомогательным веществом, носителем или наполнителем. Например, препарат может быть получен в виде стандартной лекарственной формы для местного применения, такой как, например, крем, мазь, аэрозольный препарат, неаэрозольный спрей, гель, лосьон и тому подобное. Препарат также может включать одну или несколько добавок, в том числе такие как, например, адъювант, средство, усиливающее проникновение через кожу, краситель, ароматизатор, вкусовая добавка, увлажнитель, загуститель и тому подобное.

В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может быть получен из дрожжей, таких как, например, Saccharomyces cerevisiae. В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан может включать β-1,3/1,6 глюкан, такой как, например, β(1,6)-[поли-(1,3)-D-глюкопиранозил]-поли-β(1,3)-D-глюкопираноза.

В некоторых вариантах осуществления изобретения способ может включать введение индивиду β-глюкана в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу, например, от примерно 100 нг/кг до примерно 50 мг/кг, хотя в некоторых вариантах осуществления изобретения способы могут выполняться путем введения β-глюкана в дозе, находящейся за пределами этого диапазона. В некоторых вариантах осуществления изобретения способ включает введение индивиду β-глюкана в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу от примерно 10 мкг/кг до примерно 10 мг/кг, такую как, например, доза примерно 1 мг/кг, примерно 2 мг/кг, примерно 3 мг/кг, примерно 4 мг/кг, примерно 5 мг/кг, примерно 6 мг/кг, примерно 7 мг/кг, примерно 8 мг/кг, примерно 9 мг/кг или примерно 10 мг/кг. В одном конкретном варианте осуществления изобретения способ включает введение β-глюкана в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу примерно 4 мг/кг.

В альтернативном варианте доза может быть рассчитана с использованием значения фактической массы тела, измеренного непосредственно перед началом курса лечения. Для дозировок, рассчитанных таким образом, площадь поверхности тела (м²) вычисляют непосредственно перед началом курса лечения по методу Дюбуа: м² = (масса в кг^0,425×рост в см^0,725)×0,007184. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения способ может включать введение β-глюкана в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу, например, от примерно 0,01 мг/м² до примерно 10 мг/м².

В некоторых вариантах осуществления изобретения способ может включать введение индивиду антитела, которое специфично связывается с β-глюканом, в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу, например, от примерно 100 нг/кг до примерно 50 мг/кг, хотя в некоторых вариантах осуществления изобретения способы могут выполняться путем введения антитела в дозе, находящейся за пределами этого диапазона. В некоторых вариантах осуществления изобретения способ включает введение индивиду антитела в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу от примерно 10 мкг/кг до примерно 5 мг/кг, например, дозу от примерно 100 мкг/кг до примерно 1 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления изобретения антитело, которое специфично связывается с β-глюканом, может быть введено в виде внутривенного иммуноглобулина (ВВИГ), продукта крови, содержащего объединенный поливалентный IgG от многих доноров (как правило, многих сотен и даже тысяч доноров, и, таким образом, естественным образом содержащий антитела против β-глюкана). В таких вариантах осуществления изобретения ВВИГ может быть введен в дозе от примерно 0,1 г/кг до примерно 2,0 г/кг, такой как, например, 0,1 г/кг, 0,2 г/кг, 0,3 г/кг, 0,4 г/кг, 0,5 г/кг, 0,6 г/кг, 0,7 г/кг, 0,8 г/кг, 0,9 г/кг, 1,0 г/кг, 1,1 г/кг, 1,2 г/кг, 1,3 г/кг, 1,4 г/кг, 1,5 г/кг, 1,6 г/кг, 1,7 г/кг, 1,8 г/кг, 1,9 г/кг или 2,0 г/кг. В определенных вариантах осуществления изобретения ВВИГ может быть введен в дозе от примерно 0,4 г/кг до примерно 1,0 г/кг.

В альтернативном варианте доза может быть рассчитана с использованием значения фактической массы тела, измеренного непосредственно перед началом курса лечения. Для дозировок, рассчитанных таким образом, площадь поверхности тела (м²) вычисляют непосредственно перед началом курса лечения по методу Дюбуа: м² = (масса в кг^0,425×рост в см^0,725)×0,007184. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления изобретения способ может включать введение антитела в количестве, достаточном для того, чтобы обеспечить дозу, например, от примерно 0,01 мг/м² до примерно 10 мг/м².

В некоторых вариантах осуществления изобретения β-глюкан и препарат антител могут совместно вводиться, например, от одной дозы до нескольких доз в неделю, хотя в некоторых вариантах осуществления изобретения способ может быть выполнен путем совместного введения β-глюкана и антитела с частотой, находящейся за пределами этого диапазона. В определенных вариантах осуществления изобретения β-глюкан и антитело могут вводиться с частотой от примерно одного раза в год до одного раза в неделю.

В