Левоизовалерилспирамицин iii, препараты, способ приготовления и употребления

Левоизовалерилспирамицин iii, препараты, способ приготовления и употребления

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Техническая область

Изобретение относится к новым макролидным антибиотикам в генной инженерии, и особенно левовращающему изовалерилспирамицину III, его кристаллам, фармацевтическим препаратам, способам приготовления и применению в противоинфекционных средствах.

Техническая среда

Макролидные антибиотики занимают важное место в клинике, обладают хорошей активностью в отношении грамположительных бактерий и микоплазмы, также действуют на грамотрицательные бактерии, обладают благоприятной антибактериальной активностью и проницаемостью тканей в отношении распространяющихся токсоплазмов, легионелл и других трудно контролируемых возбудителей, при пероральном употреблении быстро поглощаются с редкими неблагоприятными действиями, в принципе не оказывают отрицательное воздействие на функцию печени и почки, обладают также потенциальной иммунологической регуляцией, в девяностых годах прошлого года считались соперником β-лактамных препаратов при лечении инфекционных заболеваний дыхательных путей взрослых.

Хиральность (Chirality) - основное свойство трехмерных предметов, является одним из основных свойств природы. В качестве важной основы жизненной деятельности, почти все биологические макромолекулы, как протеин, полисахарид, нуклеиновая кислота, ферменты и т.д., хиральные, и эти макромолекулы, как правило, исполняют важную физиологическую функцию внутри тела. Под хиральными лекарствами (chiral drug) понимаются пары оптических антиподов, являющихся зеркальными отражениями друг друга и полученных после ввода хирального центра в молекулярную структуру лекарства. Эти оптические антиподы обладают принципиально аналогичными физико-химическими свойствами, отличаются только оптической активностью, откуда и выделились R (правовращающие) или S (левовращающие), рацемические. За последние 20 лет углубленные изучения в фармацепии доказали различную стереоспецифичность (stereoselectivity) антиподов лекарственных веществ, они имеют различный аффинитет с рецепторами, в результате чего сильно отличаются фармакологические свойства. Антиподы хиральных лекарств, имеющие повышенную активность, называют оптимальными антиподами (Eutomer); а антиподы, имеющие низкую активность или не имеющие активности, называют неактивными антиподами (Distomer). В большинстве случаев, неактивные антиподы не дают эффективности, но они еще частично нейтрализуют эффективность оптимальных антиподов, иногда даже вызывают серьезные токсичные и побочные реакции, что доказало сложность в разнице эффективности лекарственных средств и значительное отличие терапевтического индексантипод одного антипода от его рацемата, как всем известно, что терапевтическая эффективность синтомицина DL-(+-) составляет только половину хлорамфеникола D(-); а активность L-изомера пропранолола (propranolol) в 100 раз больше чем D-изомер; (-) метадон представляет собой сильное болеутоляющее средство, а (+) не действующее. Сильно отличается и токсичность, например, оба антипода талидомида (thalidomide) обладают аналогичным успокаивающим действием в отношении мышей, но только S(-) изомер и его метаболит обладают зародышевой токсичностью и тератогенезом; кетамин - широкораспространенные наркотические и болеутоляющие средства, но они дают галлюцинацию и другие побочные действия. Изучения показали, что S(+) дает эффект в 3-4 раза больше R(-), а токсичные и побочные действия явно связаны с последним. Значительное различие в терапевтической эффективности хиральных лекарств стимулировало развитию работ по разработке, разделению и анализу хиральных лекарств. Применение техники «Хиральность» позволило удалять из лекарственных средств составы, не дающие эффекта или имеющие токсичные и побочные действия, производить чистые хиральные лекарственные вещества, имеющие структуру с одним направлением, что позволило повышать чистоту состава препарата, быстро проявлять терапевтическую эффективность и сокращать курс лечения. В связи с этим, разработка хиральных лекарств стала одним из новых направлений в разработке новых лекарственных средств мира. Правительства и крупные фармацевтические фирмы начали вносить большие средства в разработку хиральных лекарственных препаратов, хирального сырья и хиральных интермедиатов, чтобы завоевать фармацевтический рынок мира хиральных лекарственных веществ. Более того, с непрерывным улучшением хиральной технологии и быстрым распространением жидкостной хроматографии была продвинута работа по разделению, анализу и определению антиподов хиральных лекарств. Хиральные моноэнантиомерные средства получили широкое применение. Карримицин (Carrimycin) - дериват спирамицина нового поколения, разработанный с помощью генной инженерии, носил первоначальное название «Biotechspiramycin», также биотехмицин, Biotechmycin [пат. ZL 97104440.6]. Согласно «Принципу выбора названий лекарственных препаратов Китая» в результате технической проверки и изучения Государственной фармакопейной комиссией Китая было принято решение переименовать Biotechspiramycin в Карримицин (Carrimycin), название на английском языке «Carrimycin». С точки зрения химической структуры основным составом Карримицин (Carrimycin) является 4ʺ-изовалерилспирамицин, включающий 4ʺ-изовалерилспирамицины I, II, III, кроме этого, Карримицин (Carrimycin) содержит и примерно 6 видов спирамицином с ацилированной 4-оксигруппой, поэтому он носит общее химическое название «4ʺ-ацилированный спирамицин».

Химическая структура основного состава Карримицин (Carrimycin) показана на (1):

где Р в изовалерилспирамицине I выбирают из Ч;

Р в изовалерилспирамицине II выбирают из СОСН₃;

R в изовалерилспирамицине III выбирают из СОСН₂СН₃.

Карримицин (Carrimycin) представляет собой шестнадцатичленные макролидные антибиотики, механизм действия заключается в сочетании с тельцем Паладе бактерий для ингибирования синтеза белков.

Результаты фармакокинетических исследований показали, что в Карримицине (Carrimycin) самыми активными составами являются изовалерилспирамицины I, II, III. После поступления в организм карримицин (Carrimycin) быстро метаболирует с образованием спирамицина, расчет суммы AUC_0-t материнских средств изовалерилспирамицинов I, II, III и активных метаболитов - спирамицинов I, II, III показал, что при пероральном применении абсолютная биодоступность составляет в среднем 91,6%. По источникам абсолютная биодоступность спирамицина при пероральном применении для человека составляет в пределах 30-40% (Frydman AM et al JAntimicrob Chemother. 1988, 22 (suppl B):93-103). Чем доказано, что структура изовалерилспирамицина в значительной степени улучшила биологическую доступность активного вещества - спирамицина. Разовый прием Карримицина (Carrimycin) медленно дает эффект, Т_1/2 в пределах 23-27 ч.

Результаты теста in vitro показали, что Карримицин (Carrimycin) хорошо воздействует на грамположительные бактерии, особенно некоторые лекарственно-устойчивые микробы (к примеру, золотистый стафилококк, стойкий к β-лактаму, золотистый стафилококк, стойкий к эритромицину и т.д.), не имеет заметной перекрестной устойчивости к подобным лекарственным средствам. Тем временем, обладает хорошей антибактериальной активностью в отношении микоплазмы и хламидии, части грамотрицательных бактерий, обладает благоприятной антибактериальной активностью и проницаемостью тканей в отношении токсоплазм, легионеллы, а также потенциальной иммунологической регуляцией. Антибактериальная активность внутри организма превосходит активность вне организма (ZL 200310122420.9). Клинические исследования показали, что прием таблеток Карримицин (Carrimycin) в течение 5-7 дней по 200 - 400 мг в день, дает положительные эффекты в лечении острого бактериального фарингита и острого гнойного тонзиллита, вызванного streptococcus pyogenes; бактериального хронического синусита и острого бронхита, вызванного сенситивными бактериями; не сильной пневмонии, вызванной пневмококком, гемофильной палочкой и микоплазмой пневмония; негонококкового уретрита, вызванного микоплазмой, хламидией; инфекции кожи и мягких тканей, периодонтита, тимпанита и других инфекционных болезней, вызванных сенситивными бактериями. Общий коэффициент полезного действия составляет 92,68%.

Клинические исследования показали, что Карримицин (Carrimycin) является безопасным и эффективным для перорального применения антибиотиком. Тем не менее, Карримицин (Carrimycin) является многокомпонентным лекарственным средством, полученным в результате ферментации, его дальнейшее отделение и очистка оказывается очень трудно. В настоящее время создание высокоэффективной жидкостной хроматографии позволяет отделить образцы Карримицин (Carrimycin) от ацилированных спирамицинов, например, степень отделения изовалерилспирамицин II от изобутирил-спирамицина III, степень отделения изобутирил-спирамицин II от пропионил-спирамицина III, степень отделения пропионил-спирамицина III от его предыдущих малых компонентов, степень отделения пропионил-спирамицина II от ацетилспирамицина III более 1,5, установленной Китайской фармакопеей; а степень отделения ацетилспирамицин III от его предыдущих малых компонентов составляет 1,2.

В результате многочисленных исследований, регулирования и оптимизации условий культивирования и ферментации изобретателем был получен левовращающий Карримицин (Carrimycin), который обладает более благоприятной противоинфекционной активностью.

В настоящее время применяется высокоэффективная жидкостная хроматография для определения 9 видов ацилированных спирамицинов Карримицина (Carrimycin), в т.ч. общее содержание изовалерилспирамицинов (I+II+III) не менее 60%, общее содержание ацилированных спирамицинов не менее 80%. В отношении многокомпонентного антибиотика, полученного в результате ферментации, трудно достигать критерия контроля качества средств для инъекций среди химикатов, но в отношении тяжелых больных или больных, которым не подходит пероральное применение лекарства, инъекция дает результаты быстро, ввиду этого, разработка однокомпонентного препарата изовалерилспирамицина имеет очень глубокий смысл. В результате дальнейших исследований левовращающего Карримицина (Carrimycin) был получен однокомпонентный левовращающий изовалерилспирамицин I чистотой до 98 мас.%.

Общее описание изобретения

Первый объект изобретения относится к левовращающему изовалерилспирамицину III.

Второй объект изобретения относится к препаратам, содержащим левовращающий изовалерилспирамицин III.

Третьим объектом изобретения является способ приготовления левовращающего изовалерилспирамицина III.

Четвертым объектом изобретения также является употребление левовращающего изовалерилспирамицина III.

Пятым объектом изобретения также являются кристаллы левовращающего изовалерилспирамицина III, а также препараты, содержащие указанные виды кристалла.

Изобретение относится к левовращающему изовалерилспирамицину III, химическая структура указанного левовращающего изовалерилспирамицина III приведена в (I),

Удельная постоянная вращения составляет [α]D=(-)-(49)–(-51)° (С=0,02 г/мл, CHCl₃, 25°С, λ=589, 3 нм); точка плавления составляет 116-118°С.

Изобретение относится к препаратам левовращающего изовалерилспирамицина III, отличающимся тем, что указанные препараты содержат изовалерилспирамицин III, фармацевтическую соль изовалерилспирамицина III, фармацевтически приемлемые для изовалерилспирамицина III и вспомогательные материалы, или фармацевтически приемлемые для фармацевтической соли изовалерилспирамицина III вспомогательные материалы. Чистота указанного изовалерилспирамицина III более 90 мас.%, предпочтительная чистота более 95 мас.%, более предпочтительная чистота более 98 мас.%.

Первый предпочтительный вариант изобретения: препараты изобретения могут быть жидкими, твердыми, полутвердыми или газообразными; указанный жидкий препарат выбирают среди раствора для инъекции, трансфузионной среды, раствора, микстуры, сахарного сиропа, настойки, золи, ароматизированной воды, глицеринового раствора, коллоидального раствора, слизи, взвеси или эмульсии; указанный твердый препарат выбирают среди порошка для инъекций, лиофилизированного порошка, таблеток, желатиновых капсул, порошка, пилюль или пленок; указанный полутвердый препарат выбирают среди мази, пластыри, свечи; суппозитория, экстракта, желатинирующего вещества; указанный газообразный препарат выбирают среди аэрозоли или распыляемого раствора, предпочтительны раствор для инъекций, порошок для инъекций и лиофилизированный порошок для инъекций.

Второй предпочтительный вариант изобретения: единичные дозы изовалерилспирамицина III, содержимого в препаратах изобретения, составляют 10-1500 мг, предпочтительно 50-1000 мг, более предпочтительно 100-500 мг.

Третий предпочтительный вариант изобретения: в препаратах массовый процент левовращающего изовалерилспирамицина III составляет 10-95%, предпочтительно 50-95%, более предпочтительно 75-95%.

Изобретение также относится к препаратам, содержащим левовращающий изовалерилспирамицин III.

Указанные препараты включают раствор для инъекций, порошок для инъекций или лиофилизированный порошок для инъекций, приготовленный из изовалерилспирамицина III и, по крайней мере, одного среди лимоннокислоты, адипиновой кислоты, малеиновой кислоты.

В т.ч. мольное отношение левовращающего изовалерилспирамицина III к лимоннокислое составляет 1:0,8-1,2, мольное отношение левовращающего изовалерилспирамицина III к адипиновой кислоте составляет 1:0,8-1,2, мольное отношение левовращающего изовалерилспирамицина III к малеиновой кислоте составляет 1:0,8-1,2.

Изобретение также относится к способу приготовления левовращающего изовалерилспирамицина III, включающему приготовление левовращающего Карримицина (Carrimycin), очистку левовращающего изовалерилспирамицина III.

В т.ч. процесс приготовления левовращающего Карримицина (Carrimycin) включает культивирование клонированного штамма WSP-195 бактерий, продуцирующих спирамицин, с содержанием гена 4ʺ-изовалерил-трансферазы, биологическое сбраживание и экстрагирование сбраживаемой жидкости; сбраживание при уровне рН 6,0-9,0, предпочтительно 6,0-8,0, более предпочтительно 6,0-7,5, зависимость уровня рН от времени показывала три непрерывных этапа, первый этап удовлетворяет уравнению y₁=k₁x₁+6,0, где 0,0227≤k₁≤0,1364, 0<x₁≤22; второй этап удовлетворяет уравнению y₂=k₂x₂+b₂, где - 0,0735≤k₂<0, 6,5<b₂≤10,62, 22≤х₂≤56, третий этап удовлетворяет уравнению y₃=k₃x₃+b₃, где 0<k₃≤0,0078, 6,06≤b₃<6,5, 56≤х₃≤120. Регулировали и оптимизировали условия культивирования и сбраживания, особенно регулировали уровень рН в процессе сбраживания с помощью средства для регулирования уровня рН, чтобы зависимость уровня рН от времени в процессе сбраживания показывала три непрерывных этапа, каждый из этапов удовлетворяет определенному уравнению, таким образом, получали левовращающий Карримицин (Carrimycin) с оптической активностью. Получали левовращающий изовалерилспирамицин III.

Предпочтительно, что условия биологического сбраживания: клонированный штамм WSJ-195 бактерий, продуцирующих спирамицин, с содержанием гена 4ʺ-изовалерил-трансферазы, культивировали в течение 8-15 сут при рН 6,5-7,5 и 28~38°С на наклонной питательной среде, содержащей муку из бобового жмыха 2%, глюкозу 1%, крахмал 3%, СаСО₃ 0,5%, NaCl 0,4% и агара 2%, засевали на питательную среду семени, содержащую муку из бобового жмыха 1,5%, крахмал 3,0%, NaCl 0,4%, СаСО₃ 0,5%, рыбный пептон 0,3% и KH₂PO₄ 0,05%, культивировали в течение 40-80 ч при рН 6,5-7,5 и 25~30°С, далее засевали прививочную дозу 0,1-20% на питательную ферментационную среду, содержащую глюкозу 0,5%, крахмал 6,0%, сухие дрожжи 0,5%, рыбную муку 2,0%, NH₄NO₃ 0,6%, NaCl 1,0%, СаСО₃ 0,5%, KH₂PO₄ 0,05%, MgSO₄ 0,1%, бобовое масло 0,5% и противовспениватель 0,02%, культивировали в течение 72-120 ч при рН6,5-7,5 и 26~30°С, таким образом, получали сбраживаемую жидкость.

В качестве указанного средства для регулирования уровня рН выбирают, по крайней мере, один среди соляной кислоты, уксусной кислоты, нашатырного спирта, каустической соды, гидроокиси калия.

Предпочтительно, что экстрагирование биологически сбраживаемой жидкости по следующим шагам: обрабатывали полученную сбраживаемую жидкость сернокислым алюминием для получения фильтрата, регулировали уровень рН фильтрата до 8,5-9,0, экстрагировали бутилацетатом, промывали бутилацетатный экстракт обессоленной водой и 1% NaH₂PO₄ соответственно, экстрагировали водой рН 2,0-2,5 для получения водофазного экстракта, регулировали уровень рН до 4,5-5,5, удаляли остаточный бутилацетат возгонкой для получения водного экстракта, фильтровали, регулировали уровень рН фильтрата до 8,5-9,0, осаждали, орошали очищенной водой для получения влажного вещества, далее осушали и получали левовращающий Карримицин (Carrimycin).

В т.ч. для регулирования уровня рН применяли, по крайней мере, одну среди соляной кислоты, уксусной кислоты, лимоннокислоты, каустической соды, гидроокиси калия, натрия гидрокарбоната, углекислого натрия.

В т.ч. подробный процесс очистки изовалерилспирамицина III включает: очистку образцов левовращающего Карримицина (Carrimycin) хроматографическим разделением, градиентную элюцию хроматографической колонной ODS с помощью ацетонитрила и буферного раствора уксуснокислого аммония, выделение целевого пика состава левовращающего изовалерилспирамицина III.

Предпочтительно, что в процессе очистки левовращающего изовалерилспирамицина I III, принимали припрепаративную высокоэффективную жидкостную хроматографию, ультрафиолетовый контроль, регистрировали ультрафиолетовую спектрограмму. Собирали образцы согласно времени выдержки левовращающего изовалерилспирамицина III - 48,009 мин.

Более предпочтительно, что в процессе очистки левовращающего изовалерилспирамицина III, очищали собранный левовращающий изовалерилспирамицин III от ацетонитрила вращающим испарением, потом экстрагировали этилацетатом, удаляли этилацетат из экстракта испарением, получали пастообразные образцы; перерастворяли полученные образцы петролейным эфиром, удаляли петролейный эфир испарением, получали белые порошковые частицы левовращающего изовалерилспирамицина III.

В т.ч. указанной подвижной фазой является смешанный растворитель ацетонитрила А и водного раствора уксуснокислого аммония рН=8,5, 150 мМ.

Конкретные условия очистки левовращающего изовалерилспирамицина III: применяли линейный градиент: 0-60 мин, А: 25%-65%; 61-90 мин, А: 65%-90%;

Скорость потока: 260 мл/мин;

Объем вводимого образца: 10 мл;

Концентрация вводимого образца: 0.5 г/мл;

Контрольная длина волны: 231 нм;

Способ сбора: ультрафиолетовый пуск.

Изобретение также относится к кристаллам левовращающего изовалерилспирамицина III, порошковая рентгеновская дифракция, измеренная Cu-Ka-лучами, показывала характеристический пик при 2θ, равном, 8,0°, 10,0°, 11,2°, 11,7°, 16,4°, 19,1°, 19,6°, 20,0°, 21,4°, 22,9°, 23,6° и 29,4°. Диаграмма порошковой рентгеновской дифракции показана на Рис. 5.

Способ приготовления указанных кристаллов левовращающего изовалерилспирамицина III заключается в том, что сначала растворяют твердые частицы левовращающего изовалерилспирамицина III в смеси растворителей безводного метанола, абсолютного этилового спирта и безводного ацетона, потом наливают очищенную воду с одновременным перемешиванием, после налива очищенной воды температура снижается до 5-15°С, при этом продолжают перемешивание до получения кристаллов левовращающего изовалерилспирамицина III.

В т.ч. первое предпочтительное техническое решение по приготовлению кристаллов левовращающего изовалерилспирамицина III заключается в том, что объем вводимой очищенной воды в 2-9 раз больше суммы объема безводного метанола, абсолютного этилового спирта и безводного ацетона, предпочтительно 2,5-7,5 раза; скорость ввода очищенной воды 4-10 мл/мин, предпочтительно 6-8 мл/ мин.

Второе предпочтительное техническое решение по приготовлению кристаллов левовращающего изовалерилспирамицина III заключается в том, что в примененной смеси растворителей отношение объема безводного метанола к объему абсолютного этилового спирта и к объему безводного ацетона составляет 1:0,1-10:0,5-1, предпочтительно 1:2-8:0,8-1.

Третье предпочтительное техническое решение по приготовлению указанных кристаллов левовращающего изовалерилспирамицина III заключается в том, что скорость перемешивания вводимой очищенной воды 30-60 об/мин, предпочтительно 45-60 об/мин; после ввода очищенной воды скорость перемешивания 10-30 об/мин, предпочтительно 10-20 об/мин.

Четвертое предпочтительное техническое решение по приготовлению указанных кристаллов левовращающего изовалерилспирамицина III заключается в том, что скорость охлаждения после ввода очищенной воды 1-3°С/ч, предпочтительно 1-1.5°С/ч.

В элементарных ячейках различных форм молекулы имеют различную пространственную конфигурацию, конфирмацию и расположение, их растворимость тоже сильно отличается, препараты имеют различную скорость растворения внутри тела, что оказывало непосредственное воздействие на поглощение, распределение, экскрецию и метаболизм препаратов в теле, в результате чего различная биологическая доступность приведет к получению различных клинических эффектов. В изобретении проводили соответственное сравнение терапевтической эффективности приготовленных кристаллов левовращающего изовалерилспирамицина III с эффективностью левовращающего изовалерилспирамицина III, и было обнаружено, что терапевтическая эффективность приготовленных по изобретению кристаллов левовращающего изовалерилспирамицина IIII, превосходит эффективность левовращающего изовалерилспирамицина III.

Изобретение относится также к препаратам кристаллов левовращающего изовалерилспирамицина III, указанные препараты включают кристаллы изовалерилспирамицина III, фармацевтическую соль кристаллов левовращающего изовалерилспирамицина III, фармацевтически приемлемые для кристаллов изовалерилспирамицина III вспомогательные материалы, или фармацевтически приемлемые для фармацевтической соли кристаллов изовалерилспирамицина III вспомогательные материалы, чистота указанных кристаллов изовалерилспирамицина III более 99 мас.%.

Изобретение относится также к употреблению изоамил-спирамицина III или его кристаллов, и его препаратов в приготовлении лечебных и/или профилактических средств против инфекционных заболеваний. Указанные инфекционные заболевания вызваны заражением грамположительными бактериями, золотистым Стафилококком, пневмококком, микоплазмой пневмония, хламидией пневмониз, уреаплазмой уреалитикум, трахоматозными хламидиями, streptococcus pyogenes, микрококком катаральным, нейссерией гонорея, гемофильной палочкой, легионеллой или анаэробными бактериями.

Изобретение относится также к употреблению изоамил-спирамицина III или его кристаллов, и его препаратов в приготовлении антибактериальных средств, указанные бактерии: пневмококк, стрептококк группы A, streptococcus pyogenes, энтерококк, золотистый стафилококк, эпидермальный стафилококк, микрококк катаральный, нейссерия гонорея, гемофильная палочка, колибацилла или кишечная палочка, энтеротоксигенные кишечные палочки, патогенная кишечная палочка, enteroinvasive escherichia coli, синегнойная палочка, клебсиелла пневмонии, протеус вульгарис, тифозная палочка, акинетобактерии, лимоннокислота, цитробактер, serratia marcescens, шигелла зонне, шигелла Флекснера, бацилла, tritirachium album; легионеллы, как легионеллезная пневмония, legionella gormanii, legionella bozemanii, legionella dumoffii, legionella jordanis, legionella micdadei; анаэробные бактерии, как бактероиды фрагилис, bacteroides thetaiotaomicron, бактероиды вульгатус, Bacteroides distasonis, bacteroides ruminicola, prevotella asaccharolyticus, prevotella oralis, палочка Плаута, fusobacterium russii, бифидобактерии, лактобацилла, пептострептококки, пропионибактерии акне, клостридии перфрингенс, дрожжеподобный гриб.

Ниже приведено подробное описание изобретения.

Изобретение относится к левовращающему изовалерилспирамицину III, который получали путем регулирования и оптимизирования условий культивирования и сбраживания, а также строгого контролирования уровня рН раствора.

Левовращающий изовалерилспирамицин III обладает повышенной антибактериальной активностью, стали новыми ассортиментами антибиотических средств для инъекций, что предоставило новую возможность для решения технической задачи по антибиотикоустойчивости в настоящее время.

В т.ч. метод определения удельной постоянной вращения левовращающего изовалерилспирамицина III: точно взвешивают указанный препарат, добавляют трихлорметан, растворяют и разбавляют до концентрации 20 мг/1 мл, определяют постоянную вращения калиброванным поляриметром с разрешением до 0,0001° с помощью D-линии спектра натрия (589,3 нм), длина 1 дм, температура 25°С.

Метод определения точки плавления левовращающего изовалерилспирамицина III: взвешивают сухой левовращающий изовалерилспирамицин III в умеренном количестве, кладут в капилляр для определения точки плавления, повторяют определение три раза и принимают среднюю величину.

Изобретение также относится к препаратам, содержащим левовращающий изовалерилспирамицин III. Составом препаратов являются левовращающий изовалерилспирамицин III и фармацевтически приемлемые носили и/или вспомогательные материалы, в т.ч. частота изовалерилспирамицина III более 90 мас.%, предпочтительно более 95 мас.%, более предпочтительно более 98 мас.%.

Препараты, содержащие левовращающий изовалерилспирамицин III или их кристаллы: предпочтительны раствор для инъекций, порошок для инъекций и лиофилизированный порошок для инъекций. Приготавливают раствор для инъекций или порошок для инъекций из препаратов, содержащих однокомпонентный левовращающий изовалерилспирамицин III, чтобы левовращающий изовалерилспирамицин III был быстро поглощен в организме человека и достигалась антиинфекционная функция.

Препараты изобретения, содержащие левовращающий изовалерилспирамицин III, включают следующую единичную дозу: левовращающий изовалерилспирамицин III 10-1500 мг, предпочтительно 50-1000 мг, более предпочтительно 100-500 мг.

Препараты изобретения, содержащие кристаллы левовращающего изовалерилспирамицина III, включают следующую единичную дозу: кристаллы левовращающего изовалерилспирамицина III 10-1500 мг, предпочтительно 50-1000 мг, более предпочтительно 100-500 мг.

В препаратах изобретения, содержащих левовращающий изовалерилспирамицин III, массовый процент левовращающего изовалерилспирамицина III составляет 10-90%, предпочтительно 50-90%, более предпочтительно 75-90%.

В препаратах изобретения, содержащих кристаллы левовращающего изовалерилспирамицина III, массовый процент кристаллов левовращающего изовалерилспирамицина III составляет 10-90%, предпочтительно 50-90%, более предпочтительно 75-90%.

Препараты изобретения для приема внутрь могут содержать частоприменяемые воспринимающие средства, как святитель, заполняющие вещества, разбавитель, таблетки, мягчительные средства, дезинтегрант, краситель, приправы и смачиватель, при необходимости покрывают таблетки покровным слоем. В т.ч. применимые заполняющие вещества включают фибрин, маннитол, лактозу и другие подобные заполняющие вещества. Применимый дезинтегрант включает крахмал, поливиниловый пирролидин и дериваты крахмала, например гликолят натрий крахмал. Применимые мягчительные средства включают, например стеарат магния. Применимый смачиватель, приемлемый для лекарственных средств, включает додецил сульфата кантрия.

Твердые препараты для введения внутрь через рот приготавливают смешиванием, наполнением, таблетированием и другими распространенными методами.

Формы жидких препаратов для перорального приема, например водянистая или жирная взвесь, раствор, эмульсия, сахарный сироп или эликсир, или сухой продукт, который можно приготовить вместе с водой или другими подходящими носителями до его применения. Такие жидкие препараты могут содержать обычные добавки, например суспендирующие вещества, как сорбит, сахарный сироп, метилцеллюлоза, желатина, оксиэтилцеллюлоза, карбоксиметилцеллюлоза, гель стеаринового алюминия или пищевой гидрированный жир, эмульсоры, например лецитин, дегидратационный сорбит-олеин или гуммиарабик, неводные носители (могут содержать пищевое масло), например миндальное масло, фракционированное кокосовое масло, как масляный эфир глицерида, пропиленгликоль или этиловый алкоголь; антисептики, например липид-n-гидроксибензойной кислоты или n-гидроксифенилмравьинопропиловый эфир или сорбиновая кислота, при необходимости могут содержать обычные ароматизирующее вещества или краситель.

Препараты для инъекций могут содержать любые обычные фармацевтические носители и/или воспринимающие средства, стабилизирующие вещества, антиоксиданты, комплексообразователь, а также фармацевтические антисептики, буферы или местно-анестезирующие средства и т.д. Применяют обычные методы приготовления.

Фармацевтически приемлемые носители, применяемые в препаратах изобретения, выбирают среди: маннитола, сорбита, пиросернистокислого натрия, бисульфита натрия, тиосульфата натрия, цистеина гидрохлорида, тиогликовой кислоты, метионина, витамина С, этилендиаминтетраацетата натрия, этилендиаминтетраацетата кальция-натрия, карбоната, ацетатаф, фосфата или его водного раствора, соляной кислоты, уксусной кислоты, серной кислоты, фосфорной кислоты, аминокислоты, хлористого натрия, хлористого калия одновалентных щелочных металлов, лактата натрия, ксилитола, мальтозы, глюкозы, фруктозы, декстрана, глицина, крахмала, сахарозы, лактозы, лактобиозы, маннитола, деривата кремния, фибрина и его деривата, соли альгиновой кислоты, желатина, поливинилового пирролидона, глицерина, полисорбата 80, агара, углекислого кальция, гидрокарбоната кальция, поверхностно-активного агента, полиэтиленгликоля, циклодекстрина, β-циклодекстрина, фосфатидных материалов, каолина, талькового порошка, стеаринового кальция, стеаринового магния, стеарата магния и т.д..

Способ применения и дозы препаратов определяют в зависимости от реального состояния пациента, можно внутреннее употребление или введение инъекцией 1-3 раза в день по 1-20 доз.

Эффективность изобретения:

(1) Левовращающий изовалерилспирамицин I, левовращающий изовалерилспирамицин II, левовращающий изовалерилспирамицин III обладают благоприятными антибактериальными свойствами. Согласно современной мармакологии в связи с различной стереоспецифичностью антипода лекарственных веществ, они имеют различный аффинитет с рецепторами, в результате чего сильно отличаются фармакологические свойства, ввиду этого, левовращающий изовалерилспирамицин I, левовращающий изовалерилспирамицин II, левовращающий изовалерилспирамицин III обладают очень большой фармакологической активностью.

(2) В элементарных ячейках различных форм молекулы имеют различную пространственную конфигурацию, конформацию и расположение, их растворимость тоже сильно отличаются, препараты имеют различную скорость растворения внутри тела, что оказывало непосредственное воздействие на поглощение, распределение, экскрецию и метаболизм препаратов в теле, в результате чего различная биологическая доступность приведет к получению различных клинических эффектов. Проводили сравнение терапевтической эффективности приготовленных по изобретению кристаллов левовращающих изовалерилспирамицинов I, II или III с эффективностью левовращающих изовалерилспирамицинов I, II или III, и было обнаружено, что терапевтическая эффективность приготовленных по изобретению кристаллов левовращающих изовалерилспирамицинов I, II или III превосходит эффективность левовращающих изовалерилспирамицинов I, II или III.

(3) Однокомпонентные реагенты для инъекций, содержащие левовращающий изовалерилспирамицин I, II или III, однокомпонентные реагенты для инъекций, содержащие кристаллы левовращающего изовалерилспирамицина I, II или III, предоставляли тяжелым больным и больным, которым не подходит введение лекарств через рот, возможность применения быстродействующих и приемлемых лекарственных форм.

(4) Однокомпонентные препараты, содержащие левовращающий изовалерилспирамицин I, II или III, однокомпонентные препараты, содержащие кристаллы левовращающего изовалерилспирамицина I, II или III, отличаются стабильной технологией производством и возможностью контроля качества, рассчитаны на масштабное промышленное производство.

Список рисунков

Рис. 1: Хроматограмма собранных ультрафиолетовым пуском левовращающих изовалерилспирамицинов I, II и III по Примеру 1;

Рис. 2: Зависимость уровня рН от времени в процессе браживания по примеру 1 изобретения;

Рис. 3: Зависимость уровня рН от времени в процессе браживания по примеру 2 изобретения;

Рис. 4: Зависимость уровня рН от времени в процессе браживания по примеру 3 изобретения;

Рис. 5: Диаграмма порошковой рентгеновской дифракции левовращающего изовалерилспирамицина III изобретения;

Настоящее изобретение поясняется с помощью нижеследующих примеров, которые нужно рассматривать как пояснительные, а не ограничивающие объем охраны изобретения.

Подробные примеры

Пример 1. Разделение и приготовление левовращающих изовалерилспирамицинов I, II и III.

(1) Биологическое сбраживание: клонированный штамм WSJ-195 бактерий, продуцирующих спирамицин, с содержанием гена 4"-изовалерил-трансферазы, культивировали в течение 8-15 сут, при рН 6,5-7,5 и 28~38°С на наклонной питательной среде, содержащей муку из бобового жмыха 2%, глюкозу 1%, крахмал 3%, СаСО₃ 0,5%, NaCl 0,4% и агара 2%, засевали на питательную среду семени, содержащую муку из бобового жмыха 1,5%, крахмал 3,0%, NaCl 0,4%, СаСО₃ 0,5%, рыбный пептон 0,3% и KH₂PO₄ 0,05%, культивировали в течение 40-80 ч при рН 6,5-7,5 и 25~30°С, далее засевали прививочную дозу 0,1-20% на питательную ферментационную среду, содержащую глюкозу 0,5%, крахмал 6,0%, сухие дрожжи 0,5%, рыбную муку 2,0%, NH₄NO₃ 0,6%, NaCl 1,0%, СаСО₃ 0,5%, KH₂PO₄ 0,05%, MgSO₄ 0,1%, бобовое масло 0,5% и противовспениватель 0,02%, культивировали в течение 72-120 ч при рН 6,5-7,5 и 26~30°С, таким образом, получали сбраживаемую жидкость;

В т.ч. строго контролировали уровень рН раствора путем регулирования и оптимизирования условий культирования и сбраживания, проводили сбраживание при уровне рН 6,0-9,0, время сбраживания составляет 120 ч, и зависимость уровня рН от времени показывала три непрерывных этапа, первый этап удовлетворяет уравнению y₁=0,1364x₁+6,0, где 0<x₁≤22; второй этап удовлетворяет уравнению y₂=-0,0735х₂+10,64, где 22≤х₂≤56; третий этап удовлетворяет уравнению y₃=0,0078х₃+6,06, где 56≤х₃≤120, зависимость уровня рН от времени приведена на Рис. 2, таким образом, получали сбраживаемую жидкость.

(2) Экстрагирование биологически сбраживаемой жидкости: обрабатывали сбраживаемую жидкость, полученную по п. (1), сернокислым алюминием для получения фильтрата, регулировали уровень рН фильтрата до 8,5, экстрагировали бутилацетатом, промывали бутилацетатный экстракт обессоленной водой и 1% NaH₂PO₄ соответственно, экстрагировали водой рН 2,0 для получения водофазного экстракта, регулировали уровень рН до 4,5, удаляли остаточный бутилацетат возгонкой для получения водного экстракта, фильтровали, регулировали уровень рН фильтрата до 8,5, осаждали, орошали очищенной воды для получения влажного вещества, далее осушали и получали левовращающий Карримицин (Carrimycin).

(3) Очистка левовращающих изовалерилспирамицинов I, II, III: очищали образцы, полученные после предварительного выделения, препаративной высокоэффективной жидкостной хроматографией, приготавливали хроматографическую колонну из ODS, проводили градиентную элюцию с помощью ацетонитрила и буферного раствора уксуснокислого аммония, ультрафиолетовый контроль, регистрировали ультрафиолетовую спектрограмму выделения, собирали целевой пик состава левовращающего изовалерилспирамицина I, целевой пик состава левовращающего изовалерилспирамицина II, целевой пик состава левовращающего изовалерилспирамицина III.

Хроматографическая колонна: приготовление хроматографической колонны из ODS;

Подвижная фаза: ацетонитрил (А), 100 мМ водный раствор уксусно