PatentDB.ru — поиск по патентным документам

Интерлейкин-13-связывающие белки

Патент 2650767

Авторы

Правообладатели

Классы МПК

Интерлейкин-13-связывающие белки

Изобретение относится к биохимии. Описано рекомбинантное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент. Указанное антитело связывает IL-13, содержит два вариабельных домена, где один вариабельный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:80, а другой вариабельный домен содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO:81. Кроме того, указанное антитело содержит константную область тяжелой цепи IgG1 человека, содержащую шарнирную область, содержащую замену лейцина на аланин в положении 234 (нумерация EU) и замену лейцина на аланин в положении 235 (нумерация EU), также содержит константную область легкой каппа цепи человека. Указанное антитело блокирует связывание IL-13 с IL-13Rα1 и IL-13Rα2 и способно связываться с вариантом IL-13 человека, в котором остаток аргинина в положении 130 в SEQ ID NO: 1 заменен на остаток глутамина. Также описана нуклеиновая кислота, кодирующая рекомбинантное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент, векторы репликации и экспрессии, содержащие такую нуклеиновую кислоту. Описаны клетки-хозяева, содержащие указанные векторы. Представлен способ получения антитела или его антигенсвязывающего фрагмента, способного связывать IL-13, включающий культивирование клетки-хозяина. Также описана фармацевтическая композиция для лечения расстройства, связанного с IL-13, которая включает эффективное количество рекомбинантного антитела. Представлен способ лечения субъекта от расстройства, при котором активность IL-13 является вредной, включающий стадию введения субъекту антитела или его антигенсвязывающего фрагмента. Изобретения применимы для детекции hIL-13 и для ингибирования активности hIL-13, например, у индивида-человека, страдающего нарушением, в котором активность hIL-13 негативно влияет на здоровье. 10 н. и 22 з.п. ф-лы, 23 табл., 2 пр.

Реферат

описание

Перекрестная ссылка на родственные заявки

По настоящей заявке испрашивается приоритет предварительной заявки США № 60/843249, поданной 8 сентября 2006 года.

Область изобретения

Настоящая заявка относится к IL-13-связывающим белкам и, в частности, к их применению для профилактики и/или лечения различных заболеваний, включая астму, аллергию, COPD (ХОБЛ), фиброз и рак.

Ссылка на соглашение о совместном исследовании

Содержание настоящей заявки находится под защитой соглашения о совместном исследовании, заключенном между Protein Design Labs, Inc. и Abbott Laboratories 14 декабря 2005 года, и относится к рекомбинантно сконструированным антителам против IL-13.

Уровень техники

IL-13 человека является гликопротеином с размером 17 кДа, клонированным из активированных Т-клеток (Zurawski and de Vries 1994 Immunol Today 15 19-26) и продуцируемым активированными Т-клетками линии Th2, хотя IL-13 также продуцируют Т-клетки Th0 и Th1 CD4+, Т-клетки CD8+ и некоторые не-T-клеточные популяции, такие как мастоциты (Zurawski and de Vries 1994 Immunol Today 15 19-26). Функция IL-13 включает переключение изотипа иммуноглобулина на IgЕ в В-клетках человека (Punnonen, Aversa et al. 1993 Proc Natl Acad Sci USA 90 3730-4) и супрессию продукции воспалительных цитокинов как у человека, так и у мыши (de Waal Malefyt, Figdor et al. 1993 J Immunol 151 6370-81; Doherty, Kastelein et al. 1993 J Immunol 151 7151-60). IL-13 связывается с рецепторами на поверхности клеток, IL-13Rα1 и IL-13Rα2. IL-13Rα1 взаимодействует с IL-13 с низкой аффинностью (KD~10 нМ), с последующим рекрутингом IL-4Ra с образованием сигнального гетеродимерного рецепторного комплекса с высокой аффинностью (KD~0,4 нМ) (Aman, Tayebi et al. 1996 J Biol Chem 271 29265-70; Hilton, Zhang et al. 1996 Proc Natl Acad Sci USA 93 497-501). Этот комплекс IL-4R/IL-13α1 экспрессируется на многих типах клеток, таких как В-клетки, моноциты/макрофаги, дендритные клетки, эозинофилы, базофилы, фибробласты, эндотелиальные клетки, эпителиальные клетки дыхательных путей и гладкомышечные клетки дыхательных путей (Graber, Gretener et al. 1998 Eur J Immunol 28 4286-98; Murata, Husain et al. 1998 Int Immunol 10 1103-10; Akaiwa, Yu et al. 2001 Cytokine 13 75-84). Лигирование рецепторного комплекса IL-13α1/IL-4R приводит к активации различных путей передачи сигнала, включая пути передачи сигнала и активатора транскрипции (STAT6) и пути субстрата рецептора-2 инсулина (IRS-2) (Wang, Michieli et al. 1995 Blood 864218-27; Takeda, Kamanaka et al. 1996 J Immunol 157 3220-2). Сама по себе цепь IL-13α2 имеет высокую аффинность (KD~0,25-0,4 нМ) в отношении IL-13 и функционирует как «рецептор-ловушка», отрицательно регулирующий связывание IL-13 (Donaldson, Whitters et al. 1998 J Immunol 161 2317-24), и как рецептор передачи сигнала, который индуцирует синтез TGF-β и фиброз через АР-1-путь в макрофагах и, возможно, других типах клеток (Fichtner-Feigl, Strober et al. 2006 Nat Med 12 99-106).

Несколько исследований, проведенных на преклинических моделях астмы животных, показывают, что IL-13 играет важную роль в астме. Эти данные включают устойчивость к астме у мышей с нокаутом IL-13, а также ингибирование фенотипа астмы антагонистами IL-13 (растворимыми рецепторами IL-13, анти-IL-13-mAb и т.д.) в различных мышиных моделях (Sela 1999 Harefuah 137 317-9; Wills-Karp and Chiaramonte 2003 Curr Opin Pulm Med 9 21-7; Wills-Karp 2004 Immunol Rev 202 175-90). Многочисленные исследования продемонстрировали, что фармакологическое введение рекомбинантного IL-13 в легкие мышей, а также морских свинок индуцирует гиперсекрецию слизи дыхательных путей, эозинофилию и AHR (Grunig, Warnock et al. 1998 Science 282 2261-3; Wills-Karp, Luyimbazi et al. 1998 Science 282 2258-61; Kibe, Inoue et al. 2003 Am J Respir Crit Care Med 167 50-6; Vargaftig and Singer 2003 Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 284 L260-9; Vargaftig and Singer 2003 Am J Respir Cell Mol Biol 28 410-9). Эти эффекты IL-13 воспроизводятся в системах трансгенных мышей с конститутивной или индуцируемой экспрессией IL-13 (Zhu, Homer et al. 1999 J Clin Invest 103 779-88; Zhu, Lee et al. 2001 Am J Respir Crit Care Med 164 S67-70; Lanone, Zheng et al. 2002 J Clin Invest 110 463-74). Постоянная трансгенная сверхэкспрессия IL-13 индуцирует субэпителиальный фиброз и эмфизему. Мыши, дефектные по IL-13 (и IL-4) и молекулы передачи сигнала STAT6, неспособны развивать индуцируемое аллергенами AHR и сверхпродукцию слизи (Kuperman, Huang et al. 2002 Nat Med 8 885-9). Исследования с использованием растворимого слитого белка рецептора IL-13 (sIL-13Rα2Fc) продемонстрировали центральную роль этого цитокина в экспериментальном заболевании дыхательных путей, индуцированном аллергеном овальбумином (OVA) (Grunig, Warnock et al. 1998 Science 282 2261-3; Wills-Karp, Luyimbazi et al. 1998 Science 282 2258-61; Taube, Duez et al. 2002 J Immunol 169 6482-9). Эффективность лечения с использованием анти-IL-13 также была продемонстрирована в модели хронической астмы мышей. Кроме проявления признаков гиперсекреции слизи и AHR, эта модель хронической астмы демонстрирует несколько отличительных признаков заболевания человека, которые отсутствуют в моделях острой формы заболевания. К ним относятся эозинофилия ткани легкого, локализованной в межэпителиальных пространствах, а также фиброз гладких мышц, как измерено по увеличению отложения коллагена. Эту модель хронической астмы индуцируют повторяемыми аэрозольными введениями OVA в чувствительных к OVA мышей 1 раз в неделю в течение 4 недель в целом. Анти-IL-13-антитело, вводимое в течение последних 2 недель введений OVA (со дня 36 с регистрациями эффективности, оцениваемыми в день 53 исследования), значимо ингибировало AHR, легочное воспаление, гиперплазию бокаловидных клеток, гиперсекрецию слизи и фиброз дыхательных путей (Yang, Li et al. 2005 J Pharmacol Exp Ther). Кроме того, было также продемонстрировано, что терапевтическое действие антагониста IL-13 ингибирует AHR в модели астмы приматов [Abstract, American Thoracic Society 2005].

Предполагается, что IL-13 участвует в патогенезе астмы человека, так как в легких астматических пациентов были обнаружены повышенные уровни мРНК и белка IL-13, которые коррелируют с тяжестью этого заболевания (Huang, Xiao et al. 1995 J Immunol 155 2688-94). Кроме того, были идентифицированы генетические полиморфизмы IL-13 человека, которые приводят к повышенным уровням IL-13, которые связаны с астмой и атопией (Heinzmann, Mao et al. 2000 Hum Mol Genet 9 549-59; Hoerauf, Kruse et al. 2002 Microbes Infect 4 37-42; Vercelli 2002 Curr Opin Allergy Clin Immunol 2 389-93; Heinzmann, Jerkic et al. 2003 J Allergy Clin Immunol 112 735-9; Chen, Ericksen et al. 2004 J Allergy Clin Immunol 114 553-60; Vladich, Brazille et al. 2005 J Clin Invest), и повышенные уровни IL-13 были детектированы в легких пациентов с астмой (Huang, Xiao et al. 1995 J Immunol 155 2688-94; Arima, Umeshita-Suyama et al. 2002 J Allergy Clin Immunol 109 980-7; Berry, Parker et al. 2004 J Allergy Clin Immunol 114 1106-9). Генетическое сцепление между IL-13 и астмой было также продемонстрировано, так как индивидуумы с полиморфизмом в гене IL-13, который вызывает более высокие уровни IL-13 плазмы, имеют увеличенный риск атопии и астмы (Wills-Karp 2000 Respir Res 1 19-23).

Вследствие этой роли IL-13 человека при различных нарушениях человека, были созданы терапевтические подходы для ингибирования активности IL-13 или противодействия активности IL-13. В частности, проводились поиски антител, которые связываются с IL-13 и нейтрализуют IL-13, в качестве средства ингибирования активности IL-13. Однако в данной области существует потребность в улучшенных антителах, способных связывать IL-13. Предпочтительно, такие антитела связывают IL-13 человека. Предпочтительно, эти антитела способны нейтрализовать IL-13 человека. Настоящее изобретение относится к новому семейству связывающих белков, CDR-трансплантированных антител, гуманизированных антител, и их фрагментов, способных связывать IL-13 человека, связывающихся с высокой аффинностью и связывающих и нейтрализующих IL-13 человека.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к IL-13-связывающим белкам. Связывающие белки по изобретению включают, но не ограничиваются ими, антитела, антигенсвязывающие части и другие антигенсвязывающие белки, способные связывать IL-13 человека. Кроме того, изобретение относится к способам получения и применения IL-13-связывающих белков.

В одном из аспектов настоящее изобретение относится к связывающему белку, способному связывать IL-13. В предпочтительном варианте осуществления связывающий белок связывает IL-13 человека. Предпочтительно, связывающий белок способен модулировать биологическую функцию IL-13. Более предпочтительно, связывающий белок способен нейтрализовать IL-13.

В одном из аспектов изобретения связывающий белок способен связывать IL-13 и предотвращать связывание IL-13 с IL-13α1-рецептором. В другом аспекте изобретения связывающий белок способен связывать IL-13 и предотвращать связывание IL-13 с IL-13α2-рецептором. В предпочтительном варианте осуществления связывающий белок способен связывать IL-13 и предотвращать связывание IL-13 как с IL-13α1-рецептором, так и с IL-13α2-рецептором.

Один вариант изобретения относится к выделенному антителу или его антигенсвязывающему фрагменту, в котором указанное антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывает IL-13 человека и ингибирует связывание указанного IL-13 с IL-13α2-рецептором в анализе связывания рецептора на основе клеточной поверхности с IC50, выбранной из группы, состоящей из приблизительно 1,5×10-8-1×10-8 M, 1×10-8-1×10-9 M, 10-9-10-10 M и 10-10-10-11 M или в анализе связывания рецептора на основе ELISA с IC50, выбранной из группы, состоящей из приблизительно 1,8×10-8-1×10-8 M, 1×10-8-1×10-9 M, 10-9-10-10 M и 10-10-10-11 M. Предпочтительно, это антитело связывает IL-13 человека и ингибирует связывание указанного IL-13 с IL-13α2-рецептором в анализе связывания рецептора на клеточной поверхности с IC50 2,7×10-9 М и в анализе связывания рецептора на основе ELISA IC50 1,1×10-9 M. Предпочтительно, антитело или его антигенсвязывающий фрагмент связывает IL-13 человека и ингибирует связывание указанного IL-13 с его IL-13α2-рецептором в анализе связывания рецептора на основе клеточной поверхности или в анализе связывания рецептора на основе ELISA приблизительно на 70-100% при концентрации 100 нМ. Предпочтительно, этим антителом является антитело 13C5.5. Более предпочтительно, это антитело не является антителом BAK502G9, mAb13.2 или MJ2-7.

В другом аспекте изобретение относится к выделенному антителу, или его антигенсвязывающему фрагменту, где указанное антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент, связывает IL-13 человека и ингибирует AHR приблизительно на 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100% на модели астмы человека, индуцированной IL-13. Предпочтительно, антитело ингибирует AHR более чем на 86%, в модели астмы человека, индуцированной IL-13. В другом варианте осуществления выделенное антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент, связывает IL-13 человека и ингибирует AHR приблизительно на 50%, 60%, 70%, 80%, 90% или 100% и ингибирует продукцию слизи приблизительно на 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 90% или 100% в модели астмы человека, индуцированной IL-13. Предпочтительно, антителом является антитело 13C5.5. Более предпочтительно, антитело не является антителом BAK502G9, mAb13.2 или MJ2-7.

В одном из вариантов осуществления связывающий белок по изобретению имеет константу скорости ассоциации (kon) в отношении IL-13 по меньшей мере приблизительно 102 M-1c-1; по меньшей мере приблизительно 103 M-1c-1; по меньшей мере приблизительно 104 M-1c-1; по меньшей мере приблизительно 105 M-1c-1; или по меньшей мере приблизительно 106 M-1c-1, при измерении с помощью резонанса поверхностных плазмонов. Предпочтительно, связывающий белок по изобретению имеет константу скорости ассоциации (kоn) в отношении IL-13, равной 102-103 M-1c-1; 103-104 M-1с-1; 104-105 M-1c-1 или 105-106 M-1c-1, при измерении с помощью резонанса поверхностных плазмонов.

В другом варианте осуществления связывающий белок по изобретению имеет константу скорости диссоциации (koff) в отношении IL-13 максимально приблизительно 10-3 с-1; максимально приблизительно 10-4 с-1; максимально приблизительно 10-5 с-1 или максимально приблизительно 10-6 с-1, при измерении с помощью резонанса поверхностных плазмонов. Предпочтительно, связывающий белок по изобретению имеет константу скорости диссоциации (koff) в отношении IL-13 10-3-10-4 с-1; 10-4-10-5 с-1 или 10-5-10-6 с-1, при измерении с помощью резонанса поверхностных плазмонов.

В другом варианте осуществления связывающий белок по изобретению имеет константу диссоциации (KD) в отношении IL-13 максимально приблизительно 10-7 M; максимально приблизительно 10-8 M; максимально приблизительно 10-9 M; максимально приблизительно 10-10 M; максимально приблизительно 10-11 M; максимально приблизительно 10-12 M или максимально приблизительно 10-13 M. Предпочтительно, связывающий белок по изобретению имеет константу диссоциации (KD) в отношении IL-13 10-7-10-8 M; 10-8-10-9 M; 10-9-10-10 M; 10-10-10-11 M; 10-11-10-12 M или 10-12-10-13 M.

Предпочтительно, антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент, связывает IL-13 с характеристиками связывания, выбранными из группы, состоящей из: a) константы скорости ассоциации (kon), равной приблизительно 105-106 M-1с-1 или приблизительно 106-107 M-1с-1, или b) константы скорости диссоциации (koff), равной приблизительно 10-4-10-5 с-1 или приблизительно 10-5-10-6 с-1, при измерении с помощью резонанса поверхностных плазмонов, или c) константы диссоциации (KD), равной приблизительно 1,5×10-10-1×10-10 M или приблизительно 10-10-10-11 M. Предпочтительно, антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент, имеет константу скорости ассоциации (kon) в отношении IL-13, выбранную из группы, состоящей из: 6,68×105 M-1с-1, 7,86×105 M-1с-1, 8,35×105 M-1с-1, 8,69×105 M-1с-1, 9,15×105 M-1с-1, 1,26×106 M-1с-1, 1,7×106 M-1с-1 и 2,51×106 M-1с-1. Предпочтительно, антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент, имеет константу скорости диссоциации (koff) в отношении IL-13, выбранную из группы, состоящей из: 1,23×10-4 с-1; 1,76×10-4 с-1; 4,74×10-4 с-1; 1,91×10-5 с-1; 2,14×10-5 с-1; 3,82×10-5 с-1; 8,81×10-5 с-1; и 9,65×10-5с-1, при измерении по резонансу поверхностных плазмонов. Предпочтительно, антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент, имеет константу диссоциации (KD) в отношении IL-13, выбранную из группы, состоящей из: 1,05×10-10 M; 7,10×10-10 M; 1×10-11 M; 2,20×10-11 M; 2,72×10-11 M; 4,17×10-11 M; 5,68×10-11 M; 7,01×10-11 M; 7,10×10-11 M и 9,79×10-11 M.

Один из аспектов настоящего изобретения относится к связывающим белкам, способным связывать специфический эпитоп на IL-13. Предпочтительно, специфический эпитоп содержит область С-концевой спирали D IL-13 человека. Более предпочтительно, этот специфический эпитоп содержит аминокислотную последовательность VRDTK IEVAQ FVKDL LL HLK KLFRE GR, соответствующую аминокислотам 104-130 последовательности SEQ ID NO:1. В другом аспекте антитело, или его антигенсвязывающая часть, связывает эпитоп, содержащий область С-концевой спирали D и область N-концевой спирали А IL-13 человека. Предпочтительно, антитело, или его антигенсвязывающая часть, связывает IL-13 человека, чтобы IL-13 с указанным антителом, или его антигенсвязывающим фрагментом, связанным с эпитопом, определяемым топографическими областями Ser26-Thr27-Ala28-Leu29-Arg30-Glu31-Leu32-Ile33-Glu34-Glu35-Leu36-Val37-Asn38 и Lys123-Lys124-Leu125-Phe126-Arg127-Glu-128-Gly129-Arg130 последовательности SEQ ID NO:1, был ингибирован для связывания с IL-13-рецептором. Предпочтительно, это антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент, связывает IL-13 человека, чтобы IL-13 с указанным антителом, или его антигенсвязывающим фрагментом, связанным с эпитопом, определяемым топографическими областями Arg30-Glu31-Leu32-Ile33-Glu34-Glu35-Leu36-Val37-Asn38 и Lys123-Lys124-Leu125-Phe126-Arg127 последовательности SEQ ID NO:1, был ингибирован для связывания с IL-13-рецептором. Предпочтительно, антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент, связывает IL-13 человека, чтобы IL-13 с указанным антителом, или его антигенсвязывающим фрагментом, связанным с эпитопом, определяемым топографическими областями Ser26-Thr27-Ala28-Leu29-Arg30-Glu31-Leu32-Ile33-Glu34-Glu35-Leu36-Val37-Asn38 и Lys123-Lys124-Leu125-Phe126-Arg127-Glu-128-Gly129-Arg130 последовательности SEQ ID NО:1, был ингибирован для связывания с IL-13α2-рецептором. Более предпочтительно, антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент, связывает IL-13 человека, чтобы IL-13 с указанным антителом, или его антигенсвязывающим фрагментом, связанным с эпитопом, определяемым топографическими областями Ser26-Thr27-Ala28-Leu29-Arg30-Glu31-Leu32-Ile33-Glu34-Glu35-Leu36-Val37-Asn38 и Lys123-Lys124-Leu125-Phe126-Arg127-Glu-128-Gly129-Arg130 последовательности SEQ ID NО:1, был ингибирован для связывания с IL-13α2-рецептором, при условии, что указанное антитело не является антителом BAK502G9 или MJ2-7. Наиболее предпочтительно, этим антителом является антитело 13C5.5.

В одном из аспектов выделенное антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент, связывает IL-13 и предотвращает связывание IL-13 с IL-13α2-рецептором с характеристиками связывания, выбранными из группы, состоящей из связывания с эпитопом на IL-13, включающим спирали А и D; константы скорости ассоциации (kon) приблизительно 105-106 M-1с-1 или приблизительно 106-107 M-1с-1; константы скорости диссоциации (koff) приблизительно 10-4-10-5 с-1 или приблизительно 10-5-10-6 с-1, при измерении с помощью резонанса поверхностных плазмонов; и константы диссоциации (KD) приблизительно 1,5×10-10-1×10-10 M или приблизительно 10-10-10-11 M. В другом аспекте выделенное антитело, или его антигенсвязывающий фрагмент, связывает IL-13 и предотвращает связывание IL-13 с IL-13α2-рецептором с характеристиками связывания, выбранными из группы, состоящей из связывания с эпитопом на IL-13, включающим спирали А и D; константы скорости ассоциации (kon) приблизительно 105-106 M-1с-1 или приблизительно 106-107 M-1с-1; константы скорости диссоциации (koff) приблизительно 10-4-10-5 с-1 или приблизительно 10-5-10-6 с-1, при измерении с помощью резонанса поверхностных плазмонов; и константы диссоциации (KD) приблизительно 1,5×10-10-1×10-10 M или приблизительно 10-10-10-11 M.

В одном из аспектов изобретение относится к связывающему белку, способному связывать IL-13, причем указанный антигенсвязывающий домен содержит по меньшей мере один CDR, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

CDR-H1. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (SEQ ID NO:64), где:

X1 обозначает T, D, G или S;

X2 обозначает S;

X3 обозначает D;

X4 обозначает M, S, Y, L или H;

X5 обозначает G, W, Y, A, S или N;

X6 обозначает V, I или M; и

X7 обозначает D, H, S, Y, N или G;

CDR-H2. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17 (SEQ ID NO:65), где:

X1 обозначает M, E, H, R, S, G или L;

X2 обозначает I или не присутствует;

X3 обозначает H, Y, A, D, S или W;

X4 обозначает P, S, W или G;

X5 обозначает S, G, E или D;

X6 обозначает D, G, S, E или N;

X7 обозначает S, Y или G;

X8 обозначает E, N, Y, V или R;

X9 обозначает T, I или K;

X10 обозначает R, Y, I, D или A;

X11 обозначает L, Y, D или F;

X12 обозначает N, P, S или D;

X13 обозначает Q, E, D, P или S;

X14 обозначает K, M, S, T, A или V;

X15 обозначает F, L, V или M;

X16 обозначает K, R или Q; и

X17 обозначает D, G или S;

CDR-H3. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-Х10-X11-X12-X13-X14 (SEQ ID NO:66), где:

X1 обозначает W, T, G, Υ, D или I;

X2 обозначает R, A, S, G или V;

X3 обозначает T, F, Y или S;

X4 обозначает S, T или Y;

X5 обозначает Y, F или G;

X6 обозначает F или Y;

X7 обозначает S, Y, I или F;

X8 обозначает D, L, Y или P;

X9 обозначает Y;

X10 обозначает G;

X11 обозначает Y, A, P или E;

X12 обозначает F, M, S, L или I;

X13 обозначает D, V, N или K; и

X14 обозначает Y или F;

CDR-L1. X1-X2-X3-X4-Х5-Х6-Х7-X8-X9-Х10-X11-X12-X13-X14-Х15-Х16-Х17 (SEQ ID NO:67), где:

X1 обозначает K или R;

X2 обозначает S или A;

X3 обозначает S или T;

X4 обозначает Q, K или I;

X5 обозначает N, S, T, G или E;

X6 обозначает L, T или S;

X7 обозначает L, Q или V;

X8 обозначает Y, N, H, D или T;

X9 обозначает S, I или T;

X10 обозначает S, D, N, H или Y;

X11 обозначает N или G;

X12 обозначает Q;

X13 обозначает K, F, N, E или S;

X14 обозначает N, T или S;

X15 обозначает Y или F;

X16 обозначает L, A или M; и

X17 обозначает A, D, E, H или N;

CDR-L2. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7 (SEQ ID NO:68), где:

X1 обозначает L, S, K, T, W или Y;

X2 обозначает V, T или A;

X3 обозначает S или N;

X4 обозначает N, K, T, M или R;

X5 обозначает R, K или L;

X6 обозначает F, D, E, H, P или A; и

X7 обозначает S, R или P; и

CDR-L3. X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9 (SEQ ID NO:69), где:

X1 обозначает F, W, Q или A;

X2 обозначает Q или L;

X3 обозначает H, G, Y, W или N;

X4 обозначает N, S, T, L или Y;

X5 обозначает Y, T, S, E или H;

X6 обозначает L, V, F, Y, N, G, P или D;

X7 обозначает P или H;

X8 обозначает L, F, Y, W или R; и

X9 обозначает T или V.

Предпочтительно, антигенсвязывающий домен содержит по меньшей мере один CDR, содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из группы, состоящей из:

остатки 31-35 SEQ ID NO:32;

остатки 50-66 SEQ ID NO:32;

остатки 99-105 SEQ ID NO:32;

остатки 24-39 SEQ ID NO:33;

остатки 55-61 SEQ ID NO:33;

остатки 94-102 SEQ ID NO:33;

остатки 31-35 SEQ ID NO:34;

остатки 50-66 SEQ ID NO:34;

остатки 99-105 SEQ ID NO:34;

остатки 24-39 SEQ ID NO:35;

остатки 55-61 SEQ ID NO:35;

остатки 94-102 SEQ ID NO:35;

остатки 31-35 SEQ ID NO:36;

остатки 50-66 SEQ ID NO:36;

остатки 99-109 SEQ ID NO:36;

остатки 24-39 SEQ ID NO:37;

остатки 55-61 SEQ ID NO:37;

остатки 94-102 SEQ ID NO:37;

остатки 31-35 SEQ ID NO:38;

остатки 50-66 SEQ ID NO:38;

остатки 99-109 SEQ ID NO:38;

остатки 31-35 SEQ ID NO:39;

остатки 50-66 SEQ ID NO:39;

остатки 99-112 SEQ ID NO:39;

остатки 24-39 SEQ ID NO:40;

остатки 55-61 SEQ ID NО:40;

остатки 94-102 SEQ ID NO:40;

остатки 31-35 SEQ ID NО:41;

остатки 50-66 SEQ ID NО:41;

остатки 99-112 SEQ ID NO:41;

остатки 31-35 SEQ ID NO:42;

остатки 50-66 SEQ ID NO:42;

остатки 99-100 SEQ ID NO:42;

остатки 24-39 SEQ ID NO:43;

остатки 55-61 SEQ ID NO:43;

остатки 94-102 SEQ ID NO:43;

остатки 31-35 SEQ ID NO:44;

остатки 50-65 SEQ ID NO:44;

остатки 98-106 SEQ ID NO:44;

остатки 24-40 SEQ ID NO:45;

остатки 56-62 SEQ ID NO:45;

остатки 95-103 SEQ ID NO:45;

остатки 32-38 SEQ ID NO:46;

остатки 52-67 SEQ ID NO:46;

остатки 100-112 SEQ ID NO:46;

остатки 24-34 SEQ ID NO:47;

остатки 50-56 SEQ ID NO:47;

остатки 89-97 SEQ ID NO:47;

остатки 31-37 SEQ ID NO:48;

остатки 52-67 SEQ ID NO:48;

остатки 100-112 SEQ ID NO:48;

остатки 24-34 SEQ ID NO:49;

остатки 50-56 SEQ ID NO:49;

остатки 89-97 SEQ ID NO:49;

остатки 31-37 SEQ ID NO:50;

остатки 52-67 SEQ ID NO:50;

остатки 100-112 SEQ ID NO:50;

остатки 24-34 SEQ ID NO:51;

остатки 60-66 SEQ ID NO:51;

остатки 89-97 SEQ ID NO:51;

остатки 31-35 SEQ ID NO:52;

остатки 50-66 SEQ ID NO:52;

остатки 99-107 SEQ ID NO:52;

остатки 23-36 SEQ ID NO:53;

остатки 52-58 SEQ ID NO:53;

остатки 91-99 SEQ ID NO:53;

остатки 31-35 SEQ ID NO:54;

остатки 50-65 SEQ ID NO:54;

остатки 98-107 SEQ ID NO:54;

остатки 24-38 SEQ ID NO:55;

остатки 54-60 SEQ ID NO:55;

остатки 93-101 SEQ ID NO:55;

остатки 31-35 SEQ ID NO:56;

остатки 50-65 SEQ ID NO:56;

остатки 98-107 SEQ ID NO:56;

остатки 24-38 SEQ ID NO:57;

остатки 54-60 SEQ ID NO:57;

остатки 93-101 SEQ ID NO:57;

остатки 31-35 SEQ ID NO:58;

остатки 50-65 SEQ ID NO:58;

остатки 98-107 SEQ ID NO:58;

остатки 24-38 SEQ ID NO:59;

остатки 54-60 SEQ ID NO:59;

остатки 93-101 SEQ ID NO:59;

остатки 31-35 SEQ ID NO:60;

остатки 50-65 SEQ ID NO:60;

остатки 98-107 SEQ ID NO:60;

остатки 24-38 SEQ ID NO:61;

остатки 54-60 SEQ ID NO:61;

остатки 93-101 SEQ ID NO:61;

остатки 31-35 SEQ ID NO:62;

остатки 50-65 SEQ ID NO:62;

остатки 98-107 SEQ ID NO:62;

остатки 24-38 SEQ ID NO:63;

остатки 54-60 SEQ ID NO:63; и

остатки 93-101 SEQ ID NO:63.

В предпочтительном варианте осуществления этот связывающий белок содержит по меньшей мере 3 CDR, выбранных из набора CDR вариабельного домена, состоящего из:

Набор CDR VH 25C8
VH25C8 CDR-H1 Остатки 31-35 SEQ ID NO:32
VH25C8 CDR-H2 Остатки 50-66 SEQ ID NO:32
VH25C8 CDR-H3 Остатки 99-105 SEQ ID NO:32
Набор CDR VL 25C8
VL 25C8 CDR-L1 Остатки 24-39 SEQ ID NO:33
VL 25C8 CDR-L2 Остатки 55-61 SEQ ID NO:33
VL 25C8 CDR-L3 Остатки 94-102 SEQ ID NO:33
Набор CDR VH 9C11
VH 9C11 CDR-H1 Остатки 31-35 SEQ ID NO:34
VH 9C11 CDR-H2 Остатки 50-56 SEQ ID NO:34
VH 9C11 CDR-H3 Остатки 99-105 SEQ ID NO:34
Набор CDR VL 9C11
VL 9C11 CDR-L1 Остатки 24-39 SEQ ID NO:35
VL 9C11 CDR-L2 Остатки 55-61 SEQ ID NO:35
VL 9C11 CDR-L3 Остатки 94-102 SEQ ID NO:35
Набор CDR VH 21D9
VH 21D9 CDR-H1 Остатки 31-35 SEQ ID NO:36
VH 21D9 CDR-H2 Остатки 50-66 SEQ ID NO:36
VH 21D9 CDR-H3 Остатки 99-109 SEQ ID NO:36
Набор CDR VL 21D9
VL 21D9 CDR-L1 Остатки 24-39 SEQ ID NO:37
VL 21D9 CDR-L2 Остатки 55-61 SEQ ID NO:37
VL 21D9 CDR-L3 Остатки 94-102 SEQ ID NO:37
Набор CDR VH 22D10
VH 22D10 CDR-H1 Остатки 31-35 SEQ ID NO:38
VH 22D10 CDR-H2 Остатки 50-66 SEQ ID NO:38
VH 22D10 CDR-H3 Остатки 99-109 SEQ ID NO:38
Набор CDR VL 22D10
VL 22D10 CDR-L1 Остатки 24-39 SEQ ID NO:37
VL 22D10 CDR-L2 Остатки 55-61 SEQ ID NO:37
VL 22D10 CDR-L3 Остатки 94-102 SEQ ID NO:37
Набор CDR VH 5F1
VH 5F1 CDR-H1 Остатки 31-35 SEQ ID NO:39
VH 5F1 CDR-H2 Остатки 50-66 SEQ ID NO:39
VH 5F1 CDR-H3 Остатки 99-112 SEQ ID NO:39
Набор CDR VL 5F1
VL SF1 CDR-L1 Остатки 24-39 SEQ ID NO:40
VL SF1 CDR-L2 Остатки 55-61 SEQ ID NO:40
VL SF1 CDR-L3 Остатки 94-102 SEQ ID NO:40
Набор CDR VH 5G1
VH 5G1 CDR-H1 Остатки 31-35 SEQ ID NO:41
VH 5G1 CDR-H2 Остатки 50-66 SEQ ID NO:41
VH 5G1 CDR-H3 Остатки 99-112 SEQ ID NO:41
Набор CDR VL 5G1
VL 5G1 CDR-L1 Остатки 24-39 SEQ ID NO:40
VL 5G1 CDR-L2 Остатки 55-61 SEQ ID NO:40
VL 5G1 CDR-L3 Остатки 94-102 SEQ ID NO:40
Набор CDR VH 3H7
VH 3H7 CDR-H1 Остатки 31-35 SEQ ID NO:42
VH 3H7 CDR-H2 Остатки 50-66 SEQ ID NO:42
VH 3H7 CDR-H3 Остатки 99-100 SEQ ID NO:42
Набор CDR VL 3H7
VL 3H7 CDR-L1 Остатки 24-39 SEQ ID NO:43
VL 3H7 CDR-L2 Остатки 55-61 SEQ ID NO:43
VL 3H7 CDR-L3 Остатки 94-102 SEQ ID NO:43
Набор CDR VH 14B2
VH 14B2 CDR-H1 Остатки 31-35 SEQ ID NO:44
VH 14B2 CDR-H2 Остатки 50-65 SEQ ID NO:44
VH 14B2 CDR-H3 Остатки 98-106 SEQ ID NO:44
Набор CDR VL 14B2
VL 14B2 CDR-L1 Остатки 24-40 SEQ ID NO:45
VL 14B2 CDR-L2 Остатки 56-62 SEQ ID NO:45
VL 14B2 CDR-L3 Остатки 95-103 SEQ ID NO:45
Набор CDR VH 13C5
VH 13C5 CDR-H1 Остатки 32-38 SEQ ID NO:46
VH 13C5 CDR-H2 Остатки 52-67 SEQ ID NO:46
VH 13C5 CDR-H3 Остатки 100-112 SEQ ID NO:46
Набор CDR VL 13C5
VL 13C5 CDR-L1 Остатки 24-34 SEQ ID NO:47
VL 13C5 CDR-L2 Остатки 50-56 SEQ ID NO:47
VL 13C5 CDR-L3 Остатки 89-97 SEQ ID NO:47
Набор CDR VH 29G5
VH 29G5 CDR-H1 Остатки 31-37 SEQ ID NO:48
VH 29G5 CDR-H2 Остатки 52-67 SEQ ID NO:48
VH 29G5 CDR-H3 Остатки 100-112 SEQ ID NO:48
Набор CDR VL 29G5
VL 29G5 CDR-L1 Остатки 24-34 SEQ ID NO:49
VL 29G5 CDR-L2 Остатки 50-56 SEQ ID NO:49
VL 29G5 CDR-L3 Остатки 89-97 SEQ ID NO:49
Набор CDR VH 33C3
VH 33C3 CDR-H1 Остатки 31-37 SEQ ID NO:50
VH 33C3 CDR-H2 Остатки 52-67 SEQ ID NO:50
VH 33C3 CDR-H3 Остатки 100-112 SEQ ID NO:50
Набор CDR VL 33C3
VL 33C3 CDR-L1 Остатки 24-34 SEQ ID NO:51
VL 33C3 CDR-L2 Остатки 60-66 SEQ ID NO:51
VL 33C3 CDR-L3 Остатки 89-97 SEQ ID NO:51
Набор CDR VH 4A8
VH 4A8 CDR-H1 Остатки 31-35 SEQ ID NO:52
VH 4A8 CDR-H2 Остатки 50-66 SEQ ID NO:52
VH 4A8 CDR-H3 Остатки 99-107 SEQ ID NO:52
Набор CDR VL 4A8
VL 4A8 CDR-L1 Остатки 23-36 SEQ ID NO:53
VL 4A8 CDR-L2 Остатки 52-58 SEQ ID NO:53
VL 4A8 CDR-L3 Остатки 91-99 SEQ ID NO:53
Набор CDR VH 1B6
VH 1B6 CDR-H1 Остатки 31-35 SEQ ID NO:54
VH 1B6 CDR-H2 Остатки 50-65 SEQ ID NO:54
VH 1B6 CDR-H3 Остатки 98-107 SEQ ID NO:54
Набор CDR VL 1B6
VL 1B6 CDR-L1 Остатки 24-38 SEQ ID NO:55
VL 1B6 CDR-L2 Остатки 54-60 SEQ ID NO:55
VL 1B6 CDR-L3 Остатки 93-101 SEQ ID NO:55
Набор CDR VH 3E5
VH 3E5 CDR-H1 Остатки 31-35 SEQ ID NO:56
VH 3E5 CDR-H2 Остатки 50-65 SEQ ID NO:56
VH 3E5 CDR-H3 Остатки 98-107 SEQ ID NO