Биспецифические асимметричные гетеродимеры, содержащие анти-cd3 конструкции

Биспецифические асимметричные гетеродимеры, содержащие анти-cd3 конструкции

Иллюстрации

Показать все

Реферат

ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ

[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет на основании заявки на патент США №61/671640, поданной 13 июля 2012 г.; и заявки на патент США №61/845948, поданной 13 июля 2013 г., которые полностью включены в настоящий документ посредством ссылок.

ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ

[0002] Настоящее изобретение относится к области рационального дизайна мультиспецифических скаффолдов, содержащих CD3-связывающий домен, для разработки индивидуальной биотерапии.

УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ

[0003] В области терапевтических белков антитела, обладающие способностью к мультивалентному связыванию мишеней, представляют собой прекрасные скаффолды/каркасы для дизайна перспективных лекарственных средств. В результате дальнейшего улучшения указанных свойств конструируемые биспецифические антитела и другие гибридные мультиспецифические терапевтические средства проявляют специфичность в отношении двух или нескольких мишеней и дают возможность создавать лекарственные средства с новыми механизмами действия. Разработка таких мультивалентных мультиспецифических терапевтических белков, обладающих благоприятными фармакокинетикой и функциональной активностью, представляла собой сложную задачу.

[0004] Иммунная система как у человека, так и у животных, включает два основных класса лимфоцитов: происходящие из тимуса клетки (Т-клетки), и происходящие из костного мозга клетки (В-клетки). Т-клетки проявляют иммунологическую специфичность и непосредственно вовлечены в клеточно-опосредованный иммунный ответ (такой как отторжение трансплантата). Т-клетки действуют против или в ответ на различные чужеродные структуры (антигены). Во многих случаях указанные чужеродные антигены экспрессируются на клетках-хозяевах в результате инфекции. Однако чужеродные антигены могут также происходить из клеток-хозяев, измененных в результате неоплазии или инфекции.

[0005] Активация Т-клеток представляет собой сложное явление, зависящее от участия различных молекул клеточной поверхности, экспрессируемых на Т-клетках реактивной популяции. Например, антигенспецифический Т-клеточный рецептор (TcR) состоит из связанного дисульфидными связями гетеродимера, содержащего две клонально распределенные интегральные мембранные гликопротеиновые цепи, альфа и бета (α и β), или γ и дельта (γ и δ), нековалентно связанные с комплексом низкомолекулярных инвариантных белков, обычно называемых CD3.

СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ

[0006] В настоящем изобретении предложены мультиспецифические гетеромультимеры, содержащие CD3-связывающий домен. Согласно одному варианту реализации предложен биспецифический асимметричный гетеродимер, содержащий анти-CD3 конструкции.

[0007] В настоящем изобретении предложены выделенные мультиспецифические гетеромультимерные конструкции, содержащие: первую полипептидную конструкцию, содержащую первый полипептид тяжелой цепи и CD3-связывающую полипептидную конструкцию, которая связывается с комплексом CD3 по меньшей мере на одной экспрессирующей CD3 клетке; вторую полипептидную конструкцию, содержащую второй полипептид тяжелой цепи, отличный от указанного первого полипептида тяжелой цепи, и антигенсвязывающую полипептидную конструкцию, которая связывается с целевым антигеном по меньшей мере на одной В-клетке; при этом по меньшей мере одна из указанных CD3-связывающих полипептидных конструкций и указанных антигенсвязывающих полипептидных конструкций содержит одноцепочечную Fv-область; при этом указанная мультиспецифическая гетеромультимерная конструкция одновременно задействует указанную по меньшей мере одну В-клетку и указанную по меньшей мере одну CD3-экспрессирующую клетку таким образом, что CD3-экспрессирующая клетка активируется, тем самым индуцируя киллинг указанной В-клетки; и указанные первый и второй полипептиды тяжелой цепи образуют гетеродимерную Fc-область, содержащую вариант области СН3 иммуноглобулина, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную модификацию, способствующую образованию указанной гетеродимерной области Fc со стабильностью, по меньшей мере сравнимой со стабильностью нативной гомодимерной Fc, и с такой чистотой, что при коэкспрессии указанной мультиспецифической гетеромультимерной конструкции стабильной клеткой млекопитающего с получением экспрессионного продукта указанный экспрессионный продукт содержит по меньшей мере приблизительно 70% указанного мультиспецифического гетеромультимера и менее 10% мономеров или гомодимеров указанных первой или второй полипептидных конструкций. Согласно определенным вариантам реализации указанную стабильную клетку млекопитающего трансфицируют по меньшей мере первой последовательностью ДНК, кодирующей указанную первую полипептидную конструкцию, и по меньшей мере второй последовательностью ДНК, кодирующей указанную вторую полипептидную конструкцию в заданном заранее соотношении 1:1. Согласно определенным вариантам реализации в состав первой или второй полипептидной конструкции не входит по меньшей мере что-либо одно из легкой цепи иммуноглобулина и первой константной области (СН1) иммуноглобулина.

[0008] Согласно определенным вариантам реализации предложены выделенные гетеромультимерные конструкции согласно описанию в настоящем документе, отличающиеся тем, что указанная гетеродимерная Fc-область содержит вариант СН2-домена или шарнир, содержащий аминокислотные модификации, который предотвращает функционально эффективное связывание со всеми рецепторами Fcγ. Согласно некоторым вариантам реализации предложен выделенный мультиспецифический гетеромультимер согласно описанию в настоящем документе, при этом указанный вариант СН2-домена или шарнир, содержащий аминокислотныаминокислотную модификацию, также предотвращает функционально эффективное связывание с белками комплемента (комплекс C1q). Согласно одному варианту реализации предложен выделенный мультиспецифический гетеромультимер согласно описанию в настоящем документе, отличающийся тем, что указанная гетеродимерная Fc-область содержит вариант СН2-домена или шарнир, содержащий аминокислотные модификации, усиливающие связывание с рецептором FcγRIIb.

[0009] Согласно одному варианту реализации предложена выделенная мультиспецифическая гетеромультимерная конструкция, содержащая: первую полипептидную конструкцию, содержащую первый полипептид тяжелой цепи и CD3-связывающую полипептидную конструкцию, которая связывается с комплексом CD3 по меньшей мере на одной экспрессирующей CD3 клетке; вторую полипептидную конструкцию, содержащую второй полипептид тяжелой цепи, отличный от указанного первого полипептида тяжелой цепи, и антигенсвязывающую полипептидную конструкцию, которая связывается с целевым антигеном по меньшей мере на одной В-клетке; при этом: по меньшей мере одна из указанных CD3-связывающих полипептидных конструкций и указанных антигенсвязывающих полипептидных конструкций необязательно содержит одноцепочечную Fv-область; указанные первый и второй полипептиды тяжелой цепи образуют гетеродимерную Fc-область, содержащую вариант области СН3 иммуноглобулина, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную модификацию, способствующую образованию указанной гетеродимерной области Fc, отличающийся тем, что: указанная гетеродимерная Fc имеет стабильность, по меньшей мере сравнимую со стабильностью нативной гомодимерной Fc, и указанная образующаяся гетеродимерная Fc имеет такую чистоту, что при коэкспрессии указанной мультиспецифической гетеромультимерной конструкции клеткой млекопитающего с получением экспрессионного продукта указанный экспрессионный продукт содержит больше 70% указанного мультиспецифического гетеромультимера и менее 10% мономеров или гомодимеров указанных первой или второй полипептидных конструкций; и указанная мультиспецифическая гетеромультимерная конструкция связывает указанную по меньшей мере одну В-клетку с валентностью больше 1, и указанный мультиспецифический гетеромультимер одновременно задействует указанную по меньшей мере одну В-клетку и указанную по меньшей мере одну CD3-экспрессирующую клетку таким образом, что CD3-экспрессирующая клетка активируется, тем самым индуцируя киллинг указанной В-клетки. Согласно определенным вариантам реализации указанная мультиспецифическая гетеромультимерная конструкция связывает указанную по меньшей мере одну В-клетку с валентностью, равной двум.

[0010] В настоящем изобретении предложена выделенная мультиспецифическая гетеромультимерная конструкция, содержащая: первую полипептидную конструкцию, содержащую первый полипептид тяжелой цепи и CD3-связывающую полипептидную конструкцию, которая связывается с комплексом CD3 по меньшей мере на одной экспрессирующей CD3 клетке; вторую полипептидную конструкцию, содержащую второй полипептид тяжелой цепи, отличный от указанного первого полипептида тяжелой цепи, и конструкцию, представляющую собой стерический модулятор, демонстрирующую пренебрежимое связывание с рецептором; отличающаяся тем, что: указанная мультиспецифическая гетеромультимерная конструкция одновременно задействует по меньшей мере одну В-клетку и указанную по меньшей мере одну CD3-экспрессирующую клетку таким образом, что CD3-экспрессирующая клетка активируется, тем самым индуцируя киллинг указанной В-клетки; и указанные первый и второй полипептиды тяжелой цепи образуют гетеродимерную Fc-область, содержащую вариант области СН3 иммуноглобулина, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную модификацию, способствующую образованию указанной гетеродимерной Fc, отличающийся тем, что: указанная гетеродимерная Fc имеет стабильность, по меньшей мере сравнимую со стабильностью нативной гомодимерной Fc, и указанная образующаяся гетеродимерная Fc имеет такую чистоту, что при коэкспрессии указанной мультиспецифической гетеромультимерной конструкции стабильной клеткой млекопитающего с получением экспрессионного продукта указанный экспрессионный продукт содержит по меньшей мере приблизительно 75% указанного мультиспецифического гетеромультимера и менее 10% мономеров или гомодимеров указанных первой или второй полипептидных конструкций.

[0011] Предложена выделенная мультиспецифическая гетеромультимерная конструкция, содержащая: первую полипептидную конструкцию, содержащую первый полипептид тяжелой цепи и CD3-связывающую полипептидную конструкцию, которая связывается с комплексом CD3 по меньшей мере на одной экспрессирующей CD3 клетке; вторую полипептидную конструкцию, содержащую второй полипептид тяжелой цепи, отличную от указанного первого полипептида тяжелой цепи, и отличающуюся тем, что указанная вторая полипептидная конструкция не содержит антигенсвязывающую полипептидную конструкцию; при этом указанная мультиспецифическая гетеромультимерная конструкция одновременно задействует по меньшей мере одну В-клетку и указанную по меньшей мере одну CD3-экспрессирующую клетку таким образом, что CD3-экспрессирующая клетка активируется, тем самым индуцируя киллинг указанной В-клетки; и указанные первый и второй полипептиды тяжелой цепи образуют гетеродимерную Fc-область, содержащую вариант области СН3 иммуноглобулина, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную модификацию, способствующую образованию указанной гетеродимерной Fc, при этом указанная гетеродимерная Fc имеет стабильность, по меньшей мере сравнимую со стабильностью нативной гомодимерной Fc, и указанная образующаяся гетеродимерная Fc имеет такую чистоту, что при коэкспрессии указанной мультиспецифической гетеромультимерной конструкции стабильной клеткой млекопитающего с получением экспрессионного продукта указанный экспрессионный продукт содержит по меньшей мере приблизительно 75% указанного мультиспецифического гетеромультимера и менее 10% мономеров или гомодимеров указанных первой или второй полипептидных конструкций.

[0012] Согласно определенным вариантам реализации предложен выделенный мультиспецифический гетеромультимер согласно описанию в настоящем документе, отличающийся тем, что указанная гетеродимерная Fc-область содержит вариант СН2-домена, содержащий модификации аминокислот, способствующие селективному связыванию рецептора Fcγ. Согласно некоторым вариантам реализации указанный вариант СН2-домена селективно связывает рецептор FcγIIb лучше, чем СН2-домен дикого типа. Согласно определенным вариантам реализации указанный вариант СН2-домена селективно связывает по меньшей мере один из рецепторов FcγIIIa и FcγIIa лучше, чем СН2-домен дикого типа.

[0013] Согласно определенным вариантам реализации предложена выделенная мультиспецифическая гетеромультимерная конструкция согласно описанию в настоящем документе, отличающаяся тем, что температура плавления (Tm) указанного варианта СН3-домена составляет приблизительно 73°С или более. Согласно некоторым вариантам реализации гетеродимерная Fc-область образуется с чистотой, составляющей больше приблизительно 90%. Согласно определенным вариантам реализации гетеродимерная Fc-область образуется с чистотой, составляющей приблизительно 95% или более, и Tm составляет по меньшей мере приблизительно 75°С. Согласно некоторым дополнительным вариантам реализации гетеродимерная Fc-область образуется с чистотой, составляющей по меньшей мере приблизительно 90%, и Tm составляет приблизительно 75°С. Согласно одному варианту реализации вариант последовательности СН3 первого полипептида тяжелой цепи содержит аминокислотные модификации L351Y, F405A и Y407V, а вариант последовательности СН3 второго полипептидного переносчика содержит аминокислотные модификации T366L, К392М и T394W. Согласно другому варианту реализации вариант последовательности СН3 первого полипептида тяжелой цепи содержит аминокислотные модификации L351Y, F405A и Y407V, а вариант последовательности СН3 второго полипептида тяжелой цепи содержит аминокислотные модификации T366L, K392L и T394W. Согласно дополнительному варианту реализации вариант последовательности СН3 первого полипептида тяжелой цепи содержит аминокислотные модификации T350V, L351Y, F405A и Y407V, а вариант последовательности СН3 второго полипептида тяжелой цепи содержит аминокислотные модификации T350V, T366L, К392М и T394W. Согласно некоторым вариантам реализации вариант последовательности СН3 первого полипептида тяжелой цепи содержит аминокислотные модификации T350V, L351Y, F405A и Y407V, а вариант последовательности СН3 второго полипептида тяжелой цепи содержит аминокислотные модификации T350V, T366L, K392L и T394W. Согласно еще одному варианту реализации вариант последовательности СН3 первого полипептида тяжелой цепи содержит аминокислотные модификации T366L, N390R, K392R и T394W, а вариант последовательности СН3 второго полипептида тяжелой цепи содержит аминокислотные модификации L351Y, S400E, F405A и Y407V. Согласно некоторым вариантам реализации вариант последовательности СН3 первого полипептида тяжелой цепи содержит аминокислотные модификации T350V, T366L, N390R, K392R и T394W, а вариант последовательности СН3 второго полипептида тяжелой цепи содержит аминокислотные модификации T350V, L351Y, S400E, F405A и Y407V.

[0014] Согласно определенным вариантам реализации предложен выделенный мультиспецифический гетеромультимер согласно описанию в настоящем документе, отличающийся тем, что указанный гетеродимер Fc гликозилирован. Согласно некоторым вариантам реализации предложен выделенный мультиспецифический гетеромультимер согласно описанию в настоящем документе, отличающийся тем, что указанный гетеродимер Fc афукозилирован. Согласно другому варианту реализации предложен выделенный мультиспецифический гетеромультимер согласно описанию в настоящем документе, отличающийся тем, что указанный гетеродимер Fc агликозилирован.

[0015] Согласно некоторым вариантам реализации предложен описанный в настоящем документе выделенный мультиспецифический гетеромультимер, отличающийся тем, что антигенсвязывающая полипептидная конструкция, которая связывается с целевым антигеном по меньшей мере на одной В-клетке, содержит по меньшей мере один связывающий целевой антиген домен, полученный из антитела, фибронектина, аффитела, антикалина, белка типа «цистеиновый узел», искусственного белка с анкириновым повтором (DARPin), авимера, домена Куница или их варианта или производного. Согласно одному варианту реализации предложен выделенный мультиспецифический гетеромультимер согласно описанию в настоящем документе, отличающийся тем, что указанное антитело представляет собой антитело, содержащее только тяжелые цепи, не содержащее легких цепей. Согласно дополнительным вариантам реализации выделяют мультиспецифический гетеромультимер согласно описанию в настоящем документе, отличающийся тем, что указанная антигенсвязывающая полипептидная конструкция содержит по меньшей мере один CD19-связывающий домен. Согласно определенным вариантам реализации предложен выделенный мультиспецифический гетеромультимер согласно описанию в настоящем документе, отличающийся тем, что указанная антигенсвязывающая полипептидная конструкция содержит по меньшей мере один CD20-связывающий домен.

[0016] В настоящем изобретении предложена выделенная мультиспецифическая гетеромультимерная конструкция, содержащая: первую полипептидную конструкцию, содержащую первый полипептидный переносчик, соединенный по меньшей мере с одной CD3-связывающей полипептидной конструкцией, которая связывается с комплексом CD3 по меньшей мере на одной экспрессирующей CD3 клетке; вторую полипептидную конструкцию, содержащую второй полипептидный переносчик, отличный от указанного первого полипептидного переносчика, соединенный по меньшей мере с одной антигенсвязывающей полипептидной конструкцией, которая связывается с целевым антигеном по меньшей мере на одной В-клетке; при этом первый и второй полипептидные переносчики получают из белка путем сегментирования указанного белка, каждый полипептид-переносчик содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную сегменту указанного белка, и при этом полипептидные переносчики самособираются с образованием квазинативной структуры указанного мономерного белка.

[0017] Согласно определенным вариантам реализации указанные полипептидные переносчики не получены из антитела. Согласно определенному варианту реализации каждый полипептидный переносчик представляет собой производное альбумина. Согласно некоторым вариантам реализации указанный альбумин представляет собой альбумин сыворотки человека. Согласно некоторым вариантам реализации по меньшей мере один полипептидный переносчик представляет собой производное аллоальбумина. Согласно определенным вариантам реализации все полипептидные переносчики получены из разных аллоальбуминов.

[0018] В настоящем изобретении предложены выделенные мультиспецифические гетеромультимерные конструкции, содержащие: первую полипептидную конструкцию, содержащую первый полипептидный переносчик, соединенный по меньшей мере с одной CD3-связывающей полипептидной конструкцией, которая связывается с комплексом CD3 по меньшей мере на одной экспрессирующей CD3 клетке; вторую полипептидную конструкцию, содержащую второй полипептидный переносчик, отличный от указанного первого полипептидного переносчика, соединенный по меньшей мере с одной антигенсвязывающей полипептидной конструкцией, которая связывается с целевым антигеном по меньшей мере на одной В-клетке; при этом первый и второй полипептидные переносчики получают путем сегментирования альбумина, и каждый полипептид-переносчик содержит аминокислотную последовательность, по меньшей мере на 90% идентичную сегменту альбумина, таким образом, что указанные полипептидные переносчики самособираются с образованием квазинативного альбумина, и при этом первый транспортный полипептид не содержит какого-либо связывающего домена, присутствующего в указанном втором транспортном полипептиде.

[0019] Согласно определенным вариантам реализации предложен описанный в настоящем документе гетеромультимер, отличающийся тем, что указанная мультиспецифическая гетеромультимерная конструкция одновременно задействует указанную по меньшей мере одну В-клетку и указанную по меньшей мере одну CD3-экспрессирующую клетку таким образом, что активируется CD3-экспрессирующая клетка, индуцируя за счет этого киллинг указанной В-клетки. Согласно некоторым вариантам реализации указанная антигенсвязывающая полипептидная конструкция, которая связывается с целевым антигеном по меньшей мере на одной В-клетке, содержит по меньшей мере один связывающий целевой антиген домен, полученный из антитела, фибронектина, аффитела, антикалина, белка типа «цистеиновый узел», искусственного белка с анкириновым повтором (DARPin), авимера, домена Куница или их варианта или производного. Согласно определенным вариантам реализации указанная антигенсвязывающая полипептидная конструкция содержит по меньшей мере один CD19-связывающий домен.

[0020] Согласно определенным вариантам реализации предложен мультиспецифический гетеромультимер согласно описанию в настоящем документе, отличающийся тем, что указанная антигенсвязывающая полипептидная конструкция содержит по меньшей мере один CD20-связывающий домен.

[0021] Согласно определенным вариантам реализации предложен мультиспецифический гетеромультимер согласно описанию в настоящем документе, отличающийся тем, что указанная по меньшей мере одна CD3-связывающая полипептидная конструкция содержит по меньшей мере один CD3-связывающий домен, полученный из CD3-специфического антитела, нанотела, фибронектина, аффитела, антикалина, белка типа «цистеиновый узел», искусственного белка с анкириновым повтором (DARPin), авимера, домена Куница или их варианта или производного. Согласно некоторым вариантам реализации указанный по меньшей мере один CD3-связывающий домен содержит по меньшей мере одну аминокислотныаминокислотную модификацию, снижающую иммуногенность по сравнению с соответствующим CD3-связывающим доменом, не содержащим указанной модификации. Согласно некоторым вариантам реализации предложен выделенный мультиспецифический гетеромультимер согласно описанию в настоящем документе, отличающийся тем, что указанный по меньшей мере один CD3-связывающий домен содержит по меньшей мере одну аминокислотныаминокислотную модификацию, увеличивающую его стабильность согласно оценке на основе Tm, по сравнению с соответствующим CD3-связывающим доменом, не содержащим указанной модификации. Согласно некоторым вариантам реализации указанная по меньшей мере одна CD3-связывающая полипептидная конструкция содержит по меньшей мере один CD3-связывающий домен, полученный из CD3-специфического антитела, который представляет собой антитело, содержащее только тяжелые цепи, не содержащее легких цепей. Согласно определенным вариантам реализации указанная по меньшей мере одна CD3-связывающая полипептидная конструкция содержит по меньшей мере один CD3-связывающий домен, полученный из скаффолднового домена белка, не являющегося антителом.

[0022] Согласно одному варианту реализации предложена выделенная гетеромультимерная конструкция согласно описанию в настоящем документе, отличающаяся тем, что по меньшей мере одна из указанных первой и второй полипептидных конструкций дополнительно содержит одноцепочечный Fv-полипептид. Согласно определенным вариантам реализации предложена выделенная гетеромультимерная конструкция согласно описанию в настоящем документе, отличающаяся тем, что по меньшей мере одна из указанных первой и второй полипептидных конструкций дополнительно содержит одноцепочечный Fab-полипептид.

[0023] Согласно некоторым вариантам реализации предложена выделенная гетеромультимерная конструкция согласно описанию в настоящем документе, отличающаяся тем, что CD3-экспрессирующая клетка представляет собой Т-клетку. Согласно определенным вариантам реализации предложен описанный в настоящем документе выделенный гетеромультимер, отличающийся тем, что указанный гетеромультимер связывается с Т-клеткой с достаточной аффинностью и декорирует Т-клетку в достаточной мере для индуцирования киллинговой активности Т-клетки в отношении В-клеток при связывании Т-клетки и В-клетки.

[0024] Предложена выделенная гетеромультимерная конструкция согласно описанию в настоящем документе, отличающаяся тем, что CD3-экспрессирующая клетка представляет собой клетку человека. Согласно определенным вариантам реализации указанная CD3-экспрессирующая клетка представляет собой клетку не являющегося человеком млекопитающего. Согласно некоторым вариантам реализации указанная клетка млекопитающего представляет собой клетку примата. Согласно определенным вариантам реализации указанный примат представляет собой обезьяну. Согласно некоторым вариантам реализации указанная по меньшей мере одна CD3-связывающая полипептидная конструкция связывается с CD3-конструкциями нескольких видов. Согласно определенным вариантам реализации указанный CD3-связывающий полипептид связывается с CD3-конструкциями нескольких видов, которые включают по меньшей мере один или несколько видов из человека, крысы, мыши и обезьяны.

[0025] Предложена выделенная гетеромультимерная конструкция согласно описанию в настоящем документе, отличающаяся тем, что указанная по меньшей мере одна В-клетка связана с заболеванием. Согласно определенным вариантам реализации указанное заболевание представляет собой раковое заболевание, выбранное из карциномы, саркомы, лейкоза, лимфомы и глиомы. Согласно некоторым вариантам реализации указанное раковое заболевание представляет собой по меньшей мере что-либо одно из плоскоклеточной карциномы, аденокарциномы, карциномы переходных клеток, остеосаркомы и саркомы мягких тканей. Согласно одному варианту реализации указанная по меньшей мере одна В-клетка представляет собой аутоиммунную реактивную клетку, которая представляет собой лимфоидную или миелоидную клетку.

[0026] Предложена выделенная гетеромультимерная конструкция согласно описанию в настоящем документе, отличающаяся тем, что указанный гетеромультимер дополнительно содержит по меньшей мере один связывающий домен, который связывает по меньшей мере что-либо одно из: ЕрСАМ, рЭФР (EGFR), IGFR (рИФР), HER-2 neu, HER-3, HER-4, ПСМА, РЭА, MUC-1 (муцина), MUC2, MUC3, MUC4, MUC5, MUC7, CCR4, CCR5, CD19, CD20, CD33, CD30, ганглиозида GD3, 9-О-Ацетил-CD3, GM2, поли (СА), GD2, карбоангидразы IX (MN/CA IX), CD44v6, белка «sonic hedgehog» (Shh), Wue-1, плазмоцитарного антигена (мембраносвязанного), протеогликана хондроитинсульфата меланомы (MCSP), CCR8, предшественника ФНО-альфа, STEAP, мезотелина, антигена А33, АСПК), Ly-6; десмоглеина 4, неоэпитопа Е-кадгерина, ацетилхолинового рецептора фетального типа, CD25, маркера CAI9-9, маркера СА-125 и рецептора ингибирующего вещества Мюллера(М18) II типа, sTn (сиалилированного Tn-антигена; TAG-72), FAP (антиген активации фибробластов), эндосиалина, LG, SAS, ЕРНА4 (эфриновый рецептор человека A4) CD63, содержащих CD3 BsAb (биспецифические антитела) иммуноцитокинов ФНО, ИФНγ, ИЛ-2 и TRAIL.

[0027] Предложена выделенная гетеромультимерная конструкция согласно описанию в настоящем документе, отличающаяся тем, что гетеромультимер необязательно содержит по меньшей мере один линкер. Согласно некоторым вариантам реализации указанный по меньшей мере один линкер представляет собой полипептид, содержащий от приблизительно 1 до приблизительно 100 аминокислот.

[0028] Предложен набор экспрессионных векторов для экспрессии мультиспецифического гетеромультимера согласно описанию в настоящем документе, содержащий по меньшей мере первую последовательность ДНК, кодирующую указанную первую полипептидную конструкцию, и по меньшей мере вторую последовательность ДНК, кодирующую указанную вторую полипептидную конструкцию.

[0029] Предложен способ получения экспрессионного продукта, содержащего мультиспецифический гетеромультимер согласно описанию в настоящем документе, в стабильных клетках млекопитающего, при этом указанный способ включает: трансфицирование по меньшей мере одной клетки млекопитающего: по меньшей мере первой последовательностью ДНК, кодирующей указанную первую полипептидную конструкцию, и по меньшей мере второй последовательностью ДНК, кодирующей указанную вторую полипептидную конструкцию, таким образом, что указанной по меньшей мере одной первой последовательностью ДНК, указанной по меньшей мере одной второй последовательностью ДНК трансфицируют указанную по меньшей мере одну клетку млекопитающего в заранее заданном соотношении с получением стабильных клеток млекопитающих; культивирование указанных стабильных клеток млекопитающих с получением указанного продукта экспрессии, содержащего указанный мультиспецифический гетеромультимер. Согласно некоторым вариантам реализации предложен способ получения экспрессионного продукта, содержащего мультиспецифическую гетеромультимерную конструкцию согласно описанию в настоящем документе, отличающийся тем, что указанное заранее заданное отношение по меньшей мере одной первой последовательности ДНК к по меньшей мере одной второй последовательности ДНК составляет приблизительно 1:1. Согласно некоторым вариантам реализации указанную клетку млекопитающего выбирают из группы, состоящей из клеток VERO, HeLa, НЕК, NS0, клеток яичника китайского хомячка (СНО), W138, ВНК, COS-7, Сасо-2 и MDCK, и их подклассов и вариантов.

[0030] Предложена фармацевтическая композиция, содержащая мультиспецифический гетеромультимер согласно описанию в настоящем документе, и подходящее вспомогательное вещество. Также предложен способ получения указанной фармацевтической композиции, включающий: культивирование клетки-хозяина в условиях, допускающих экспрессию гетеромультимера согласно приведенному в настоящем документе определению; выделение полученного гетеромультимера из культуры; и получение указанной фармацевтической композиции.

[0031] Предложен способ предотвращения, лечения или облегчения по меньшей мере чего-либо одного из: пролиферативного заболевания, минимального остаточного рака, опухолевого заболевания, воспалительного заболевания, иммунологического расстройства, аутоиммунного заболевания, инфекционного заболевания, вирусного заболевания, аллергических реакций, паразитарных реакций, реакций «трансплантат против хозяина» или реакций «хозяин против трансплантата» или злокачественных клеточных новообразований, при этом указанный способ включает введение субъекту, нуждающемуся в таком предотвращении, лечении или облегчении, фармацевтической композиции согласно описанию в настоящем документе. Предложен способ лечения ракового заболевания у нуждающегося в этом млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему композиции, содержащей эффективное количество фармацевтической композиции согласно описанию в настоящем документе, необязательно в комбинации с другими фармацевтически активными молекулами. Согласно определенным вариантам реализации указанное раковое заболевание представляет собой солидную опухоль. Согласно некоторым другим вариантам реализации указанная солидная опухоль представляет собой что-либо одно или более из саркомы, карциномы и лимфомы. Согласно некоторым другим вариантам реализации указанное раковое заболевание представляет собой гематологическое раковое заболевание. Согласно дополнительному варианту реализации указанное раковое заболевание представляет собой что-либо одно или более из В-клеточной лимфомы, неходжкинской лимфомы и лейкоза.

[0032] Предложен способ лечения раковых клеток, включающий обеспечение указанной композицией, содержащей гетеромультимер, описанный в настоящем документе. Согласно определенным вариантам реализации указанный гетеромультимер предложен в сочетании с другим терапевтическим агентом.

[0033] Предложен способ лечения ракового заболевания, не поддающегося лечению по меньшей мере чем-либо одним из CD19-литического антитела, CD20-литического антитела и блинатумомаба, у нуждающегося в этом млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему композиции, содержащей эффективное количество фармацевтической композиции согласно описанию в настоящем документе.

[0034] Предложен способ лечения раковой клетки, регрессирующей после лечения блинатумомабом, включающий обеспечение указанной раковой клетки композицией, содержащей эффективное количество фармацевтической композиции согласно описанию в настоящем документе.

[0035] Предложен способ лечения индивидуума, страдающего заболеванием, характеризующимся экспрессией В-клеток, отличающийся тем, что указанный способ включает обеспечение указанного индивидуума эффективным количеством композиции, содержащей эффективное количество фармацевтической композиции согласно описанию в настоящем документе. Согласно определенным вариантам реализации указанное заболевание не поддается лечению по меньшей мере чем-либо одним из антитела против CD19 и антитела против CD20.

[0036] Предложен способ лечения аутоиммунного состояния у нуждающегося в этом млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему композиции, содержащей эффективное количество фармацевтической композиции согласно настоящему описанию. Согласно определенным вариантам реализации указанное аутоиммунное состояние представляет собой что-либо одно или более из рассеянного склероза, ревматоидного артрита, эритематозной волчанки, псориатического артрита, псориаза, васкулита, увеита, болезни Крона и диабета первого типа.

[0037] Предложен способ лечения воспалительного состояния у нуждающегося в этом млекопитающего, включающий введение указанному млекопитающему композиции, содержащей эффективное количество фармацевтической композиции, содержащей гетеромультимер согласно настоящему описанию.

[0038] Предложен набор, содержащий гетеромультимер согласно приведенному в настоящем документе определению, и инструкции по его применению.

[0039] В настоящем изобретении предложена гетеромультимерная конструкция, содержащая: первый мономер, содержащий первый полипептидный переносчик, соединенный с первым транспортным полипептидом, который содержит по меньшей мере один HER2-связывающий домен; второй мономер, содержащий второй полипептидный переносчик, отличный от указанного первого полипептидного переносчика, соединенный с вторым транспортным полипептидом, который содержит по меньшей мере один HER3-связывающий домен; при этом первый транспортный полипептид не содержит какого-либо связывающего домена, присутствующего в указанном втором транспортном полипептиде; при этом первый и второй полипептидный переносчик образуют гетеродимерную Fc-область, содержащую вариант области СН3 иммуноглобулина, содержащий по меньшей мере одну аминокислотную модификацию, способствующую образованию указанного гетеродимера со стабильностью, сравнимой с нативным гомодимерным Fe.

[0040] В настоящем изобретении предложена гетеромультимерная конструкция, содержащая: первый мономер, содержащий первый полипептидный переносчик, соединенный с первым транспортным полипептидом, который содержит по меньшей мере один HER2-связывающий домен; второй мономер, содержащий второй полипептидный переносчик, отличный от указанного первого полипептидного переносчика, соединенный со вторым транспортным полипептидом полипептид, который содержит по меньшей мере один НЕК3-связывающий домен; при этом первый и второй полипептидные переносчики получают путем сегментирования альбумина таким образом, что указанные полипептидные переносчики самособираются с образованием квазинативного альбумина.

[0041] В настоящем изобретении предложена фармацевтическая композиция, содержащая выделенный мультиспецифический гетеромультимер согласно приведенному в настоящем документе определению и подходящее вспомогательное вещество. Также предложен способ получения такой фармацевтической композиции, включающий: культивирование клетки-хозяина в условиях, допускающих экспрессию гетеромультимера согласно приведенному в настоящем документе определению; выделение полученного гетеромультимера из культуры; и получение указанной фармацевтической композиции.

[0042]

[0043] В настоящем изобретении предложены клетки-х