Композиция для предупреждения или лечения заболеваний почек, содержащая ингибитор dpp-iv

Композиция для предупреждения или лечения заболеваний почек, содержащая ингибитор dpp-iv

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники

Настоящее раскрытие относится к композиции для предупреждения или лечения заболеваний почек.

Уровень техники

Почка является важным органом, поддерживающим гомеостаз тела. Она контролирует объем жидкости в организме, концентрацию ионов и pH крови; секретирует отходы, такие как, среди прочего, метаболические отходы, токсины и лекарственные средства; и осуществляет контроль кровяного давления, метаболическую и эндокринную функцию. Кроме того, она способствует абсорбции кальция в тонком кишечнике путем активации витамина D, и участвует в синтезе различных гормонов.

Заболевание почек означает статус, при котором общая функция почки понижена или наблюдаются аномалии вследствие невозможности для почки выполнять обычным образом секреторную, контролирующую, метаболическую и эндокринную функции. Гипофункция, вызванная повреждением почки, приводит, среди прочего, к увеличению почки и связанных структур, атрофии почки, изменению объема жидкости организма, дисбаллансу электролитов, метаболическому ацидозу, нарушению газового обмена, ухудшению противоинфекционной функции и аккумуляции уремического токсина.

Заболевания почек подразделяются на острую почечную недостаточность и хроническую почечную недостаточность в зависимости от ее прогрессии; или на гломерулонефрит вследствие депонирования сосудистого комплекса, диабетическую нефропатию, сопровождаемую диабетом или гипертензивным заболеванием почек, сопровождаемым артериальной гипертензией, токсическую нефропатию вследствием введения лекарственных средств, таких как антибиотики или противораковые лекарственные средства, и бактериальную инфекцию, среди прочего, в зависимости от причины заболевания.

Независимо от типов причины заболеваний почек, когда скорость клубочковой фильтрации понижается ниже 50% вследствие хронической прогрессии почечного нарушения, в большинстве случаев скорость клубочковой фильтрации постоянно уменьшается, почечная недостаточность терминальной стадии развивается в конечном счете и может привести к смерти в тяжелом случае вследствие таких осложнений, как, среди прочего, гематологические патологии, неврологические осложнения, желудочно-кишечные осложнения, инфекция или остеодистрофия.

Заболевания почек увеличиваются каждый год во всем мире и часто обнаруживаются, когда заболевание развивается до почечной недостаточности терминальной стадии, в силу отсутствия симптомов или наличия симптомов, которые трудно распознать. Согласно анализу бенефициариев страховой медицинской помощи, о котором сообщалось USRDS (United States Renal Data System), коэффициент заболеваемости почечной недостаточностью терминальной стадии вырос с 2,7% в 2000 году до 8,5% в 2009. В случае Южной Кореи сообщалось, что пациенты, страдающие почечной недостаточностью терминальной стадии, в целом составляли 37,1% в 2010, что означало рост среднегодового показателя на 8,2% по сравнению с 2006. Эти феномены тесно связаны с увеличением диабетической нефропатии вследствие увеличения числа пациентов, страдающих ожирением и диабетом.

DPP-IV (Дипептидил пептидаза IV) является белком, который также известен как комплексообразующий белок аденозин деаминазы 2, или CD26, и он кодируется генами DPP-IV. Сообщалось, что DPP-IV участвует в иммунном ответе, и он известен как играющий важную роли в метаболизме углеводов путем участия в расщеплении GLP-1 (Глюкагоноподобный пептид-1), который промотирует секрецию инсулина и ингибирует секрецию глюкагона. Сообщалось, что DPP-IV обильно распределен в клетках проксимальных почечных канальцев, гломерулярной базальной мембране и подоцитах. Ингибитор DPP-IV имеет функции уменьшения уровня глюкозы крови путем ингибирования расщепления GLP-1 для поддержания его активности, и ингибитор DPP-IV в настоящее время используется в качестве антидиабетического агента, потому что он не имеет никаких побочных эффектов, вызывающих гипогликемию.

Сущность изобретения

Техническая задача

Настоящее раскрытие относится к эффективной композиции для профилактики или лечения заболеваний почек.

Решение задачи

Авторы настоящего изобретения обнаружили, что DA1229, ингибитор DPP-IV, демонстрирует эффект предотвращения или лечения заболеваний почек, и завершили настоящее раскрытие.

Настоящее раскрытие относится к фармацевтической композиции для профилактики или лечения заболеваний почек, включающей: соединение, представленное химической формулой 1, ниже; его оптический изомер; его фармацевтически приемлемые соли; или его гидрат или сольват в качестве активного ингредиента.

[Химическая формула 1]

(В которой, X обозначает OR1, и R1 обозначает C1-C5 низшую алкильную группу, соответственно.)

R1 в химической формуле 1 может быть трет-бутилом. Соединение упоминается как (R)-4-{(R)-3-амино-4-(2,4,5-трифторфенил)бутаноил}-3-(трет-бутоксиметил)пиперазин-2-он или DA1229, и его структура показана ниже в химической формуле 2.

[Химическая формула 2]

Традиционно ингибитор DPP-IV считается антидиабетическим агентом, контролирующим глюкозу крови, но авторы настоящего изобретения подтверждили посредством экспериментов, что ингибитор DPP-IV имел прямой защитный эффект на почку, отличный от эффекта контроля глюкозы крови, и соответственно, завершили настоящее раскрытие. Ингибитор DPP-IV согласно настоящему раскрытию уменьшает концентрацию липида плазмы и печени путем ингибирования активности DPP-IV и промотирования метаболизма липидов. Кроме того, DPP-IV имеет эффекты улучшения почечной функции; улучшения микроальбуминурии; ослабления почечного фиброза; улучшения патологического увеличения почки; увеличения экспрессии нефрина; и ингибирования экскреции нефрина. Заболевания почек, которые могут быть предотвращены или вылечены с помощью композиции согласно настоящему раскрытию, включают заболевания, которые показывает различные клинические симптомы, вызванные различными причинами; и заболевания почек проявляются независимо от диабета, т.е. недиабетическая нефропатия, а также диабетическая нефропатия.

Заболевания почек, которые могут быть предотвращены или вылечены с помощью композиции согласно настоящему раскрытию, могут быть диабетической нефропатией, гломерулонефритом, гипертензивным заболеванием почек, поликистозной болезнью почек, воспалительным заболеванием почек (гломерулонефритом, среди прочего) и токсической нефропатией, вызванной, среди прочего, лекарственными средствами или различными токсинами. Клинически, заболевание почек может быть, среди прочего, гломерулярным заболеванием почек, являющимся следствием патологии клубочка, связанной с протеинурией, и тубулоинтерстициальным заболеванием, являющимся результатом патологического мезангия канальца, в широком смысле.

Фармацевтически приемлемые соли согласно настоящему раскрытию включают, среди прочего, уксусную кислоту, бензолсульфоновую кислоту, бензойную кислоту, камфорсульфоновую кислоту, лимонную кислоту, этансульфоновую кислоту, фумаровую кислоту, глюконовую кислоту, глутаминовую кислоту, бромистоводородную кислоту, соляную кислоту, изэтионовую кислоту, молочную кислоту, малеиновую кислоту, яблочную кислоту, миндальную кислоту, метансульфоновую кислоту, муциновую кислоту, азотную кислоту, памовую кислоту, пантотеновую кислоту, фосфорную кислоту, янтарную кислоту, серную кислоту, винную кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту и адипиновую кислоту. Фармацевтически приемлемые соли могут быть выбраны из группы, состоящей из уксусной кислоты, лимонной кислоты, соляной кислоты, яблочной кислоты, фосфорной кислоты, янтарной кислоты, винной кислоты и адипиновой кислоты, но не ограничены вышеупомянутыми кислотами.

Гидрат соединения согласно настоящему раскрытию, представленного Химической формулой 1, его оптического изомера или его фармацевтически приемлемых солей может включать стехиометрическое или нестехиометрическое количество воды, связанной нековалентными межмолекулярными силами. Гидрат может содержать 1 экв. воды или больше, предпочтительно 1-5 экв. воды. Эти гидраты могут быть получены путем кристаллизации соединения, представленного Химической формулой 1 или 2, его оптического изомера или его фармацевтически приемлемых солей согласно настоящему раскрытию из воды или растворителя, содержащего воду.

Сольват соединения согласно настоящему раскрытию, представленного Химической формулой 1 и его оптического изомера или его фармацевтически приемлемых солей может включать стехиометрическое или нестехиометрическое количество растворителя, связанного нековалентными межмолекулярными силами. Предпочтительно, растворитель является нелетучим, нетоксичным, и примеры растворителей, подходящих для использования на человеке, включают, среди прочего, этанол, метанол, пропанол и метиленхлорид.

Соединение, представленное Химической формулой 1, его оптический изомер, его фармацевтически приемлемые соли или его гидрат или сольват является ингибитором DPP-IV (Дипептидил пептидазы IV). Ингибитор DPP-IV имеет способность понижать уровень глюкозы крови путем ингибирования расщепления GLP-1 для поддержания его активности.

Фармацевтическая композиция согласно настоящему раскрытию может включать другие дополнительные активные ингредиенты кроме соединения Химической формулы 1. Дополнительные активные ингредиенты могут иметь идентичную или отличную активность по отношению к Химической формуле 1.

Например, дополнительные активные ингредиенты могут быть антидиабетическим лекарственным средством. Поэтому фармацевтическая композиция согласно настоящему раскрытию может дополнительно содержать другие антидиабетические лекарственные средства. Антидиабетические лекарственные средства могут быть выбраны из группы, состоящей из бигуанида, сенсибилизатора инсулина, средства, усиливающего секрецию инсулина, ингибитора α-глюкозидазы и антагониста каннабиноидного рецептора 1, но не ограничены вышеупомянутыми средствами.

Бигуанид согласно настоящему раскрытию является лекарственным средством, оказывающим, среди прочего, эффекты промотирования анаэробного гликолиза, включающего бигуанидную структуру; улучшения действия инсулина в периферической области; ингибирования абсорбции глюкозы из кишечника; и ингибирования гликонеогенеза в печени. Бигуанид может быть выбран из группы, состоящей из метформина, буформина, фенетилбигуанида, но не ограничен вышеупомянутым.

Сенсибилизатор инсулина согласно настоящему раскрытию является лекарственным средством, действующим как понижающее уровень глюкозы крови путем улучшения дисфункции инсулина, и он характеризуется как имеющий общую TZD (тиазолидин-дион) структуру. Сенсибилизатор инсулина действует на PPAR (Активируемый пролифератором пероксисомы рецептор). Сенсибилизатор инсулина может быть выбран из группы, состоящей из троглитазона, циглитазона, росиглитазона, пиоглитазона и энглитазона, но не ограничен вышеупомянутым.

Средство, усиливающее секрецию инсулина согласно настоящему раскрытию, является лекарственным средством, промотирующим секрецию инсулина β-клетками поджелудочной железы. Оно может представлять собой лекарственное средство, имеющее структуру сульфонилмочевины или не сульфонилмочевины. Предпочтительно, средство, усиливающее секрецию инсулина, может представлять собой: лекарственные средства, имеющие структуру сульфонилмочевины, выбранные из группы, состоящей из глибенкламида (также известного как глибурид), глипизида, гликлазида, глимепирида, толазамида, толбутамида, ацетогексамида, карбутамида, хлорпропамида, глиборнурида, глихидона, глисентида, глисоламида, глисоксепида, гликлопиамида, глициламида и глипентида; или лекарственные средства, имеющие несульфонилмочевинную структуру, репаглинид или натеглинид, но не ограниченные вышеупомянутым.

Ингибитор α-глюкозидазы согласно настоящему раскрытию является лекарственным средством, имеющим, среди прочего, функцию ингибирования расщепления и абсорбции крахмала и дисахарида путем конкурентного ингибирования α-глюкозидазы, которая является одним из пищеварительных ферментов кишечника. Ингибитор α-глюкозидазы может быть выбран из группы, состоящей из акарбозы, воглибозы, эмиглитата и миглитола, но не ограничен вышеупомянутым.

Антагонист каннабиноидного рецептора 1 согласно настоящему раскрытию является лекарственным средством, контролирующим метаболизм глюкозы и липидов, а также массу тела и энергетический баланс, путем ингибирования избыточной активности эндоканнабиноида. Антагонист каннабиноидного рецептора 1 может быть выбран из группы, состоящей из римонабанта, отенабанта, ибинабанта и суринабанта, но не ограничен вышеупомянутым.

Кроме того, например, дополнительные активные ингредиенты композиции согласно настоящему раскрытию могут быть ингредиентами, которые могут ингибировать действие ангиотензина. Поэтому фармацевтическая композиция согласно настоящему раскрытию может дополнительно включать ингибитор ангиотензинпревращающего фермента или блокатор рецептора ангиотензина II.

Ингибитор ангиотензинпревращающего фермента может быть выбран из группы, состоящей из каптоприла, эналаприла, беназеприла, имидаприла, лисиноприла, приноприла, рамиприла, моэксиприла, фосиноприла и квинаприла, но не ограничен вышеупомянутым.

Блокатор рецептора ангиотензина II может быть выбран из группы, состоящей из кандесартана, эпросартана, ирбесартана, лозартана, телмисартана и валсартана, но не ограничен вышеупомянутым.

Кроме того, например, дополнительные активные ингредиенты композиции согласно настоящему раскрытию могут быть гипотензивными средствами. Поэтому фармацевтическая композиция согласно настоящему раскрытию может дополнительно включать CCB (блокатор кальциевых каналов), бета-блокатор или диуретики, но не ограничиваясь вышеупомянутым.

Термин »фармацевтически приемлемый», используемый в настоящем раскрытии, направлен на молекулярное тело и другие ингредиенты композиций, которые являются физиологически приемлемыми при введении их млекопитающим, включая человека, и обычно не генерируют неприемлемые ответы.

Композиция согласно настоящему раскрытию может дополнительно включать носители. Термин «носитель», представленный в настоящем раскрытии, направлен на разбавители, эксципиенты или носители, вводимые с активными соединениями. Эти фармацевтические носители могут представлять собой: воду; солевой раствор; водный раствор декстрозы; водный раствор глицерина; и стерильную жидкость, такую как масло, включая петролеум, животный жир, растительное масло или синтетическое масло, такое как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло и кунжутное масло. Подходящие фармацевтические носители представлены в следующей ссылке - "Remington's Pharmaceutical Sciences" by E.W. Martin, 18th Edition. Наиболее предпочтительным носителем для настоящего раскрытия является такой, который обеспечивает непосредственное высвобождение, другими словами, который высвобождает все или большинство активных ингредиентов за короткий период, такой как 60 минут или меньше, предоставляя возможность быстрой абсорбции лекарственных средств.

Предпочтительно, соединение согласно настоящему раскрытию, представленное Химической формулой 1, его оптический изомер, его фармацевтически приемлемые соли или его гидрат или сольват содержатся в количестве 0,1-50,0 вес.% в расчете на общую массы композиции, но не ограничиваются вышеупомянутым. Композиция согласно настоящему раскрытию может быть введена в различных лекарственных формах для перорального введения или парентерального введения, когда ее вводят клинически. Разбавители или добавки, такие как наполнители, экстендеры, связующие, увлажнители, разрыхлители и сурфактанты среди прочего в обычном употреблении могут использоваться для составления.

Твердые лекарственные формы для перорального введения включают, среди прочего, таблетки, пилюли, порошки, гранулы и капсулы, и эти твердые лекарственные формы могут быть получены путем добавления по меньшей мере одной добавки, например, среди прочего, крахмала, карбоната кальция, сахарозы, лактозы и желатина, к фармацевтической композиции согласно настоящему раскрытию. Кроме того, могут также использоваться лубриканты, такие как магний, стеарат и тальк.

Жидкие лекарственные формы для перорального введения включают суспензии, жидкость для внутреннего употребления, эмульсии и сиропы. Кроме того, могут содержаться различные добавки, такие как увлажнители, подсластители, ароматизаторы и консерванты, отличные от простых разбавителей, такие как вода и жидкий парафин.

Лекарственные формы для парентерального введения включают стерильные водные растворы, неводные растворы, суспензии, эмульсии, лиофилизованные составы и суппозитории. Пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, растительные масла, такие как оливковое масло, инъецируемые сложные эфиры, такие как этилолеат, могут использоваться в качестве неводных растворителей и эмульсий. Витепсол, макрогол, tween 61, масло какао, laurinum, глицерин и желатин могут использоваться в качестве основного материала суппозиториев. Фармацевтическая композиция согласно настоящему раскрытию может быть введена подкожно, внутривенно или внутримышечно в случае парентерального введения.

Дозировка фармацевтической композиции согласно настоящему раскрытию может находиться в диапазоне от 0,5 мг до 100 мг в сутки для взрослого человека с массой тела 70 кг. Однако оптимальная дозировка для введения может быть легко определена специалистом, и она может варьировать в зависимости от различных факторов, включая, среди прочего: заболевания и их серьезность; содержание активных ингредиентов и других ингредиентов, содержащихся в композиции; типы состава; возраст, массу тела, здоровье, пол, диету пациентов; путь и время введения; уровень экскреции композиции; период лечения; лекарственные средства, используемые одновременно.

Настоящее раскрытие относится к способу профилактики или лечения заболеваний почек путем введения терапевтически эффективного количества соединения, представленного Химической формулой 1; его оптического изомера; его фармацевтически приемлемой соли; или его гидрата или сольвата пациентам.

Термин ‘пациент’ относится к млекопитающим, включая человека, и 'введение' относится к предоставлению желаемых веществ пациентам любыми подходящими способами. Термин ‘терапевтически эффективное количество’ относится к количеству активного ингредиента или фармацевтической композиции, вызывающему биологические или медицинские ответы от животных или человека, которые рассматриваются так таковые исследователями, ветеринарами, врачами или другими клиническими специалистами. Он включает количество, которое может приводить к облегчению симптомов заболеваний или нарушений, подвергаемых лечению. Для специалиста очевидно, что терапевтически эффективное количество и частота введения активных ингредиентов согласно настоящему раскрытию могут варьировать в зависимости от желаемых эффектов.

Настоящее раскрытие относится к применению соединения, представленного химической формулой 1, его оптического изомера, его фармацевтически приемлемой соли или его гидрата или сольвата в получении лекарственного средства для лечения заболеваний почек.

Эффект изобретения

Фармацевтическая композиция согласно настоящему раскрытию для предупреждения или лечения заболеваний почек, включающая соединение, представленное химической формулой 1, его оптический изомер, его фармацевтически приемлемые соли или его гидрат или сольват в качестве активного ингредиента, имеет эффекты улучшения метаболизма липидов; предотвращения гистологических повреждений, включая почечный фиброз; и облегчения микроальбуминурии. Поэтому композиция может быть использована для лечения заболеваний почек.

Краткое описание чертежей

Фигура 1 показывает графики, демонстрирующие изменение активности DPP-IV в плазме согласно стадиям диабета.

Фигура 2 показывает графики, демонстрирующие изменение активности DPP-IV в почке, печени, сердце и жировой ткани согласно стадиям диабета.

Фигура 3 показывает графики, демонстрирующие изменение активности DPP-IV в почке, печени, сердце и жировой ткани после введения ингибитора DPP-IV.

Фигура 4 показывает график, демонстрирующий изменение метаболизма липидов после введения ингибитора DPP-IV.

Фигура 5 иллюстрирует результат наблюдения относительно стеатоза печени после введения ингибитора DPP-IV.

Фигура 6 является графиком, показывающим изменение микроальбуминурии после введения ингибитора DPP-IV.

Фигура 7 показывает увеличение почечного мезангия после введения ингибитора DPP-IV; и график, показывающий результат оценки.

Фигура 8 иллюстрирует депонирование почечного фибриллярного белка после введения ингибитора DPP-IV.

Фигура 9 является графиком, показывающим оценку гистологического изменения на Фигуре 8.

Фигура 10 является графиком, показывающим экспрессию почечных фибриллярных белков после введения ингибитора DPP-IV.

Фигура 11 является графиком, показывающим экспрессию почечных белков метаболизма липидов после введения ингибитора DPP-IV.

Фигура 12 иллюстрирует результат ПЦР почечных белков метаболизма липидов после введения ингибитора DPP-IV.

На Фигуре 13, график с левой стороны показывает мочевую экскрецию нефрина после введения ингибитора DPP-IV на мышиной модели диабетической нефропатии; и правая сторона иллюстрирует эффекты ингибитора DPP-IV на экспрессию нефрина почечных клубочков, наблюдаемые посредством иммунного окрашивания.

Фигура 14 показывает графики, демонстрирующие эффекты на микроальбуминурию (A) и экскрецию нефрина (B) после индукции заболеваний почек и одновременного введения ингибитора DPP-IV мышиной модели недиабетической нефропатии.

Фигура 15 показывает графики, показывающие эффекты на микроальбуминурию (A) и экскрецию нефрина (B) после стимулирования заболеваний почек и затем введения ингибитора DPP-IV мышиной модели недиабетической нефропатии.

Фигура 16 иллюстрирует результат наблюдения относительно экспрессии гена DPP-IV после стимулирования почечных подоцитов, клеток проксимального канальца и клеток мезангия с высокой глюкозой, ангиотензином II и жирной кислотой.

Фигура 17 является графиком, показывающим сравнение ингибирующих действий в отношении активности DPP-IV между стандартными ингибиторами DPP-IV (линаглиптин, саксаглиптин и ситаглиптин) и ингибитором DPP-IV согласно настоящему раскрытию.

Фигура 18 иллюстрирует эффекты стандартных ингибиторов DPP-IV (линаглиптин, саксаглиптин и ситаглиптин) и ингибитора DPP-IV согласно настоящему раскрытию на экспрессию нефрина после стимулирования почечных подоцитов высокой глюкозой и ангиотензином II.

Описание вариантов осуществления

Настоящее раскрытие будет далее описано более полно с помощью сопровождающих примеров. Однако настоящее раскрытие может быть воплощено во многих различных формах и не должно быть истолковано как ограниченное вариантами осуществления, сформулированными здесь.

Кроме того, образцы и растворители, описанные далее, были куплены от Sigma-Aldrich Korea, если не указано иное.

Примеры

<Пример 1> Оценка массы тела, потребления пищи, потребления воды, сахара в крови натощак, диуреза, значения гемоглобина A1c и кровяного давления

(1) Подготовка недиабетической контрольной группы, диабетической группы и группы введения DA1229

Использовались мыши 6-недельного возраста. Мышей db/m принимали как недиабетическую контрольную группу (7 для каждой стадии, n=28), и мышей db/db разделяли на диабетическую группу (7 для каждой стадии, n=28) и группу введения DA1229 (n=8). 0,3% (вес./вес., 300 мг/кг/сутки) DA1229, ингибитора DPP-IV, смешивали с кормом и давали группе введения DA1229, в то время как диабетической группе давали только корм.

(2) Измерение массы тела, потребления пищи, потребления воды, глюкозы крови натощак, диуреза, значения гемоглобина A1c и кровяного давления

Массу тела, потребление пищи, потребление воды, глюкозу крови натощак, диурез, значение гемоглобина A1c (HbAlc) и кровяное давление (т.е. систолическое кровяное давление, SBP) недиабетической контрольной группы (db/m контрольная группа) и диабетической группы (db/db) измеряли в неделю 0, 4, 8 и 12 после введения; и эти параметры для группы введения DA1229 измеряли в неделю 12. HbAlc измеряли с использованием анализатора DCA 2000+ (Bayer Healthcare, Вупперталь, Германия).

Результат показан ниже в Таблице 1.

[Таблица 1]
Параметр	нед.	db/m Кнтр. Гр.	db/db	db/db+DA1229
Масса тела (г)	00	24,3±0,5	36,1±1,0***	N.A.
44	27,4±1,2	47,2±2,0***	N.A.
88	30,7±0,9	54,9±1,2***	N.A.
112	33,5±1,1	58,9±2,1***	57,2±2,5***
Суточное потребление пищи (г)	00	2,36±0,14	5,44±0,34***	N.A.
44	3,36±0,04	7,42±0,09***	N.A.
88	3,90±0,15	7,15±0,09***	N.A.
112	3,02±0,27	6,01±0,03***	5,67±0,08***
Суточное потребление воды (г)	00	5,5±0,3	12,9±0,6***	N.A.
44	4,6±0,2	14,8±0,5***	N.A.
88	4,7±0,1	15,1±0,0***	N.A.
112	4,1±0,2	16,8±0,4***	8,6±0,4**, #
Глюкоза крови натощак (мл/сутки)	00	163±15	248±13	N.A.
44	190±11	472±43***	N.A.
88	168±6	458±22***	N.A.
112	153±6	562±53***	466±66#
Диурез (мл/сутки)	00	0,30±0,09	0,42±0,07	N.A.
44	0,23±0,05	1,84±0,28***	N.A.
88	0,19±0,02	1,04±0,16*	N.A.
112	0,21±0,02	1,25±0,36**	1,07±0,29**
HbAlc (%)	00	3,32±0,84	6,18±0,19**	N.A.
44	4,56±0,09	8,90±0,36***	N.A.
88	4,50±0,18	9,90±0,37***	N.A.
112	5,14±0,19	9,21±0,43***	8,58±0,79***
SBP (ммHg)	112	118±16	115±15	124±11

В Таблице 1 каждое значение выражали как среднее ± SEM, и статистический анализ проводили на каждой группе в тот же период. *P <0,05; **P <0,01; ***P <0,001 по сравнению с контрольной группой db/m; #P <0,05 по сравнению с db/db.

Масса тела увеличивалась; и потребление пищи, потребление воды, глюкоза крови натощак, диурез заметно увеличивались в диабетической группе по сравнению с недиабетической контрольной группой.

В группе введения DA1229, которой DA1229 вводили в течение 12 недель, никаких существенных различий не было обнаружено по сравнению с диабетической группой в отношении массы тела, потребления пищи и диуреза. Однако потребление воды и глюкоза крови натощак были заметно снижены.

Можно было понять, что DA1229 выполняет функции уменьшения глюкозы крови и снижения экскреции глюкозы.

<Пример 2> Оценка активности DPP-IV

DPP-IV (Дипептидил пептидаза IV) является ферментом, расщепляющим инкретин. Инкретин является гормоном, секретируемым из тонкого кишечника и промотирующим секрецию инсулина. Когда активность DPP-IV ингибируется, активность инкретина сохраняется, и секреция инсулина промотируется.

Поэтому активность DPP-IV в плазме и каждом органе оценивали, чтобы подтвердить что активность DPP-IV эффективно ингибировалась с помощью DA1229. Недиабетическую контрольную группу, диабетическую группу и группу введения DA1229 готовили таким же образом, как в Примере 1(1), и использовали для эксперимента.

Активность DPP-IV была измерена при помощи способа флуорофотометрического тестирования (J. Med. Chem. 2005, 48, 141-151), описанного ранее. Фигура 1 показывает активность DPP-IV в плазме. Недиабетическая контрольная группа и диабетическая группа не показали значительной разницы в активности DPP-IV на каждой стадии развития диабета (см. ФИГ. 1A) Однако было замечено, что активность DPP-IV была заметно уменьшена на 20-ю неделю введения в группе введения ингибитора DPP-IV по сравнению с недиабетической контрольной группой и диабетической группой (см. ФИГ. 1B)

Фигура 2 показывает активность DPP-IV каждой стадии развития диабета в почке, печени, сердце и жировой ткани недиабетической контрольной группы и диабетической группы. Было показано, что активность DPP-IV была высокой в каждом органе. Относительно недиабетической контрольной группы и диабетической группы, активность DPP-IV в печени, сердце и жировой ткани не очень отличалась по сравнению друг с другом (см. ФИГ. 2B-2D), но в почке DPP-IV диабетической группы значительно увеличивался по мере прогрессии диабета (см. ФИГ. 2A)

Фигура 3 показывает активность DPP-IV в почке, печени, сердце и жировой ткани недиабетической контрольной группы и диабетической группы и группы введения DA1229 на 20-ю неделю введения. Активность DPP-IV в каждом органе группы введения DA1229 была заметно уменьшена по сравнению с таковой недиабетической контрольной группы и диабетической группы, и это уменьшение было особенно заметно в почке (см. ФИГ. 3A)

Можно было понять на основании вышеупомянутых результатов, что DA1229 ингибирует активность DPP-IV в каждом органе, и в частности, он эффективно ингибирует активность DPP-IV в почке.

<Пример 3> Оценка метаболизма липидов

У страдающих диабетом пациентов липиды крови имеют тенденцию к повышению, и липиды имеют тенденцию депонироваться в печени (т.е. стеатоз пече