Дермальная инъецируемая стерильная композиция

Дермальная инъецируемая стерильная композиция

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Настоящее изобретение относится к области стерильных инъецируемых композиций на основе гиалуроновой кислоты или ее соли и предназначенных для лечения дефектов и изъянов кожи.

Гиалуроновая кислота, которая в природе присутствует в коже, известна своими вязкоупругими свойствами и также своей очень высокой склонностью абсорбировать воду. Ее свойства в значительной степени способствуют эластичности кожи.

Принимая во внимание ее свойства и ее качества биологической совместимости, устойчивости и отсутствия токсичности, данное соединение, таким образом, использовали на протяжении более чем 10 лет во многих приложениях в областях медицины и косметологии и, в частности, эстетических процедурах.

Таким образом, гиалуроновую кислоту используют для заполнения морщин и для снижения или даже устранения локального ослабления структуры дермы, представленного морщиной или угнетенным состоянием кожи, обычно посредством прямой инъекции в дерму, в рассматриваемой области.

Немодифицированная гиалуроновая кислота обладает прекрасной биосовместимостью и идентична эндогенной гиалуроновой кислоте.

Однако гиалуроновую кислоту по существу используют в форме геля на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты, и, как следствие, в модифицированной форме, принимая во внимание повышенную устойчивость данной конкретной формы к деградации, высоким температурам и вследствие этого - к стерилизации.

Данные гели на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты могут быть получены разными способами. Обычно в данных способах требуются две главные стадии, причем первая заключается в гидратировании гиалуроновой кислоты для ее превращения в водный гель, и вторая нацелена на поперечное сшивание указанного водного геля в присутствии агента, способного вызывать его поперечное сшивание (также называемый «поперечно сшивающим агентом»). Данный агент обычно выбран из эпоксида, альдегида, полиазиридила и дивинилсульфона (DVS) или бутандиолдиглицидилового эфира (BDDE), и вследствие этого является синтетическим по природе.

В качестве иллюстрации данных способов можно, в частности, упомянуть способы, описанные в документах US 2006/0105022, WO 2006/056204 и US 2007/0036745.

Поперечно сшитые гели, представленные в настоящее время в продаже и полученные с помощью традиционных поперечно сшивающих агентов, обычно имеют степени модификации выше чем 4% или даже степени модификации вплоть до 10%.

В целях настоящего изобретения подразумевается, что термин «степень модификации» обозначает соотношение числа молей поперечно сшивающего агента, присоединенного к гиалуроновой кислоте, и числа молей гиалуроновой кислоты, образующей указанный поперечно сшитый гель. Данное количество можно, в частности, измерять 1D ¹НЯМР-анализом (ядерный магнитный резонанс) поперечно сшитого геля.

Подразумевается, что выражение «число молей гиалуроновой кислоты» означает число молей повторяющейся дисахаридной единицы гиалуроновой кислоты, причем дисахаридная единица состоит из D-глюкуроновой кислоты и D-N-ацетилглюкозамина, связанных друг с другом посредством чередующихся бета-1,4 и бета-1,3 гликозидных связей.

Однако, с целью получения гиалуроновой кислоты, как можно более близкой к эндогенной гиалуроновой кислоте, было бы желательно получать гели на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты с более низкой степенью модификации.

Следует признать, что поперечно сшитые гели с более низкими степенями модификации (то есть от 1% до 2%) уже были предложены. К сожалению, оказывается, что они являются низко когезивными и имеют низкую устойчивость к разрушению. Данные недостатки, в частности, проявляются в колебании реологических свойств в ограниченном диапазоне вязкоэластичности (диапазон вязкоэластичности представлен диапазоном напряжения, в котором G' остается постоянным во время измерения посредством градуального изменения напряжения. Ширину данного диапазона вязкоэластичности можно, в частности, оценивать путем измерения переходного напряжения, то есть напряжения, при котором значение G' уменьшается и становится равным значению Gʺ).

Вследствие этого, данные характеристики должны быть улучшены для применения в заполнении морщин.

Более конкретно, сохраняется необходимость в гелях поперечно сшитой гиалуроновой кислоты с самыми низкими, насколько это возможно, степенями модификации, которые в то же время остаются удовлетворительными в отношении демонстрируемых механических свойств.

Вопреки всем ожиданиям, авторы изобретения отметили, что такой гель можно получать в том случае, когда стадию поперечного сшивания проводят в присутствии определенного типа соединения.

Таким образом, согласно первому аспекту изобретения его предметом является гель на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты, который получают в результате поперечного сшивания гиалуроновой кислоты или ее соли в присутствии по меньшей мере эффективного количества по меньшей мере одного эндогенного полиамина в качестве поперечно сшивающего агента, причем указанное поперечное сшивание проводят в условиях, благоприятных для проведения реакции ковалентного сочетания указанной гиалуроновой кислоты и указанного(ых) эндогенного(ых) полиамина(ов).

Следует признать, что полиамины, которые, тем не менее, отличаются от полиаминов, рассматриваемых согласно изобретению, уже были предложены для образования гидрогелей на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты.

Так, согласно публикациям Xiang Mei Yuan et al. (Journal of biomaterials Applications 0(0) 1-9; 27 February 2012) и Junseok Yeom et al. (Bioconjugate Chem., 1991 (2) 232-241), а также заявке WO 2012/008722, предложены гидрогели на основе гиалуроновой кислоты (НА), поперечно сшитые в присутствии гексаметилендиамина (HMDA). Однако, рассматриваемый полиамин, а именно гексаметиленднамин (HMDA), представляет собой синтетический диамин и, вследствие этого, не эндогенный диамин. Кроме того, количества поперечного сшивающего агента (HMDA), используемые в данном предшествующем уровне техники, находятся в интервале от 25% до 72% и приводят к очень высоким степеням модификации от 5% до 35%.

Подразумевается, что термин «количество поперечно сшивающего агента» обозначает соотношение числа молей полиамина(ов) и числа молей гиалуроновой кислоты, используемой для синтеза геля.

Наконец, как следует из примеров ниже в данном документе, гели НА-HMDA, как оказывается, являются значительно менее эффективными с точки зрения механических свойств, чем гели, полученные согласно изобретению.

В отношении эндогенных полиаминов, рассматриваемых согласно изобретению, согласно заявке WO 2008/015249 предложено, в свою очередь, использовать их вместе с частицами гиалуроновой кислоты для местного применения в качестве антивозрастного активного агента и в качестве антиоксиданта. По очевидным причинам, такая смесь очень отличается от гелей, рассматриваемых согласно изобретению.

В публикации Di Meo et al. (Biomacromolecules, 2006, 7: 1253-60) описано образование гидрогелей посредством реакции Уги или также конденсации гиалуроновой кислоты и спермидина. Таким образом, вовлекается механизм, который отличается от механизма, рассматриваемого в настоящем изобретении. Кроме того, гидрогели, полученные таким образом и не предназначенные для применения согласно изобретению, получаются в результате способа с использованием больших количеств поперечно сшивающего агента (от 5% до 25%).

Таким образом, авторы изобретения отметили, что эндогенный полиамин представляет собой предпочтительный поперечно сшивающий агент для получения геля на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты, соответствующий упомянутым выше ожиданиям, а именно обладающий сниженной степенью модификации, по сравнению с теми, которые наблюдаются в случае обычно рассматриваемых поперечно сшивающих агентов, и механическими свойствами и устойчивостью к стерилизации, которые являются особенно удовлетворительными.

Действительно, поперечно сшитые гели по изобретению имеют значительно сниженную степень модификации, а именно меньше чем или равную 1%, оставаясь в то же самое время удовлетворительными в отношении механических свойств.

Оказывается, что поперечно сшитый гель по изобретению также имеет преимущество в том, что он состоит из соединений, которые в природе присутствуют в большинстве живых организмов и, в частности, людях.

С точки зрения данной псевдоестественной природы он удовлетворяет возрастающую потребность потребителей в данном отношении.

Наконец, вероятно, что свойства, характерные для эндогенных полиаминов, рассматриваемые согласно изобретению, сохраняются в геле на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты, полученном согласно изобретению. Дело в том, что поскольку данные свойства имеют антиоксидантный эффект или даже антивозрастной эффект, они особенно приятны в контексте настоящего изобретения.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения его предметом является стерильная инъецируемая дерматологическая композиция, содержащая в физиологически приемлемой среде по меньшей мере один гель на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты по изобретению.

В целях настоящего изобретения термин «кожа» охватывает кожу лица, шеи, линии шеи, рук, головы, живота и/или ног, а также губ.

Подразумевается, что термин «стерильный» характеризует окружающую среду, способную обеспечивать соединения, рассматриваемые в композиции по изобретению, и/или указанную композицию, которая их содержит, безвредность, требуемую для введения в или через кожу, в частности, внутриэпидермального и/или внутрикожного, и/или подкожного введения. В частности, существенно, чтобы композиция, содержащая указанные соединения и которую нужно вводить в соответствии с инъекционным методом, например, в соответствии с методом мезотерапии, не содержала какого-либо загрязняющего вещества, способного вызывать вредную побочную реакцию в организме хозяина.

В целях настоящего изобретения подразумевается, что термин «инъецируемый» обозначает композицию, механические свойства которой подходят для рассматриваемого применения, а именно ее введения в или через кожу, в частности, для заполнения морщин.

Таким образом, композиция по изобретению является инъецируемой посредством тонкой иглы для подкожных инъекций (в частности, с диаметром, меньше чем 18G или даже меньше чем 27G), и преимущественно имеет модуль упругости (G') от 20 до 1000 Па, предпочтительно от 40 Па до 400 Па, с фазовым углом (δ), меньше чем 45°.

Данный модуль упругости (G') и фазовый угол (δ) измеряют посредством протокола, определенного ниже.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения его предметом является дерматологическая или косметическая композиция, содержащая по меньшей мере один гель на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты по изобретению.

Данное воплощение, которое не ограничивается в отношении способа введения, следовательно, позволяет вводить указанную композицию местно.

Согласно другому аспекту настоящего изобретения его предметом является набор, содержащий следующие компоненты:

- упаковка, содержащая по меньшей мере одну дозу геля на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты по изобретению или композиции по изобретению; и

- устройство для инъецирования в, или через кожу, или устройство для микроперфорации кожи, предназначенное для введения указанной дозы.

Согласно еще одному аспекту изобретения его предметом является применение поперечно сшитого геля или композиции по изобретению для заполнения объемных дефектов кожи и, в частности, заполнения морщин.

Согласно еще одному аспекту изобретения его предметом является применение поперечно сшитого геля или композиции по изобретению для предупреждения и/или лечения признаков хронологического старения кожи и/или относящихся к коже признаков, которые вызваны внешними факторами, такими как стресс, атмосферное загрязнение, табак или длительное воздействие ультрафиолетового (УФ) излучения.

Согласно еще одному аспекту изобретения его предметом является применение поперечно сшитого геля или композиции по изобретению для предупреждения и/или лечения модификации внешнего вида кожи.

Согласно еще одному аспекту изобретения его предметом является применение поперечно сшитого геля или композиции по изобретению для предупреждения и/или лечения модификации вязкоупругих или биомеханических свойств кожи.

В целях настоящего изобретения подразумевается, что термин «предупреждение» означает снижение риска возникновения явления.

Согласно другому аспекту изобретения его предметом является косметический способ лечения кожи, включающий по меньшей мере одну стадию введения, в или через кожу, поперечно сшитого геля или композиции по изобретению.

Согласно еще одному аспекту настоящего изобретения последнее относится к способу получения поперечно сшитого геля гиалуроновой кислоты или ее соли, включающему по меньшей мере стадии, заключающиеся в следующем:

а) берут водный гель гиалуроновой кислоты или ее соли в поперечно несшитом состоянии,

б) гель, полученный на стадии а), приводят в контакт с эффективным количеством по меньшей мере одного эндогенного полиамина,

в) поперечное сшивание указанной смеси, образованной на стадии б), причем указанное поперечное сшивание проводят в условиях, благоприятных для проведения реакции ковалентного сочетания указанной гиалуроновой кислоты и указанного(ых) эндогенного(ых) полиамина(ов), и

г) выделение указанного поперечно сшитого гидрогеля.

Согласно одному конкретному воплощению способ также включает стадию д) остановки поперечно сшивания, заключающуюся в помещении поперечно сшитого геля в условия, благоприятные для остановки его поперечного сшивания, причем данную стадию возможно проводить перед, совместно с, или после стадии выделения г).

Гель на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты

Как указано ранее, гель на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты по изобретению получают в результате поперечного сшивания по меньшей мере гиалуроновой кислоты или ее соли с, в качестве поперечно сшивающего агента, по меньшей мере одним эндогенным полиамином, причем указанное поперечное сшивание проводят в условиях, благоприятных для реакции сочетания указанной гиалуроновой кислоты и указанного(ых) эндогенного(ых) полиамина(ов).

Гиалуроновые кислоты представляют собой линейные полисахариды с чередующимися единицами D-глюкуроновой кислоты и N-ацетил-D-глюкозамина.

В природе они присутствуют в нескольких тканях и разрушаются посредством гиалуронидаз, которые присутствуют во всем организме, или посредством механизмов окисления.

В целях настоящего изобретения предполагается, что термин «эндогенный полиамин» обозначает полиамин, который в природе присутствует в живых организмах и, в частности, организме человека.

Следовательно, полиамин по изобретению отличается от гексаметилендиамина (HMDA), который представляет собой полиамин синтетического происхождения.

В качестве представления эндогенных полиаминов у животных эукариот вполне конкретно можно упомянуть путресцин (или 1,4-диаминобутан), спермидин (или 1,8-диамино-5-азаоктан) и спермин (1,12-диамино-5,9-диазадодекан).

Спермин представляет собой тетраамин и синтезируется из спермидина.

Преимущественно, эндогенный полиамин, используемый для получения поперечно сшитого геля по изобретению, может быть выбран из спермидина, спермина и их смеси, и еще лучше спермина.

Данный выбор является еще более преимущественным, так как спермин и спермидин участвуют в многочисленных фундаментальных клеточных механизмах, таких как синтез ДНК и экспрессия генов. При использовании местно, их положительные эффекты на улучшение состояния кожи и уменьшение признаков старения уже были описаны (в частности, см. заявку WO 2006/048671). Считается, что данные соединения также являются предпочтительными антиоксидантами и антивозрастными активными агентами.

Реакцию сочетания, рассматриваемую в настоящем изобретении для осуществления реакции поперечного сшивания между гиалуроновой кислотой и эндогенным(и) полиамином(ами), проводят посредством реакции между функциональной аминогруппой и карбоновой кислотой, приводя, таким образом, к образованию функциональной амидной группы.

Другими словами, реакция поперечного сшивания, рассматриваемая в настоящем изобретении, приводит к образованию молекул поперечно сшитой гиалуроновой кислоты, ковалентно связанной с эндогенным(и) полиамином(ами). Электростатических взаимодействий не происходит.

Вопреки всем ожиданиям, полученные поперечно сшитые гели, с учетом того, что рассматриваемые степени модификации значительно снижены, демонстрируют механические свойства, которые являются очень удовлетворительными или даже недостижимыми посредством традиционных способов, как упомянуто ранее.

Таким образом, согласно одному конкретному воплощению поперечно сшитый гель по изобретению преимущественно имеет степень модификации меньше чем или равную 1%, предпочтительно от 0,1% до 1% и еще лучше от 0,4% до 0,8%.

Как указано ранее, «степень модификации» соответствует соотношению числа молей эндогенного полиамина, присоединенного к гиалуроновой кислоте, и числа молей гиалуроновой кислоты, образующей указанный поперечно сшитый гель. Данное количество можно, в частности, измерять посредством 1D ¹Н ЯМР-анализа поперечно сшитого геля.

Следует напомнить, что предполагается, что выражение «число молей гиалуроновой кислоты» означает число молей повторяющихся дисахаридных единиц гиалуроновой кислоты, причем дисахаридная единица состоит из D-глюкуроновой кислоты и D-N-ацетилглюкозамина, связанных друг с другом посредством чередующихся бета-1,4 и бета-1,3 гликозидных связей.

Согласно одному конкретному воплощению поперечно сшитый гель по изобретению является таким, что он может содержать от 0,5 масс. % до 40 масс. % гиалуроновой кислоты, не подвергнувшейся реакции поперечного сшивания, относительно общего количества гиалуроновой кислоты.

Согласно другому конкретному воплощению поперечно сшитый гель по изобретению может иметь концентрацию гиалуроновой кислоты от 5 до 30 мг/г.

Согласно еще одному конкретному воплощению поперечно сшитый гель по изобретению может иметь модуль упругости (G') от 20 до 1000 Па, предпочтительно от 40 Па до 400 Па.

Согласно одному конкретному воплощению поперечно сшитый гель по изобретению может находиться в форме преимущественно упругого, вязкоупругого гидрогеля с фазовым углом (δ) составляющим менее 45°.

Согласно одному предпочтительному воплощению поперечно сшитый гель по изобретению может иметь модуль упругости (G') от 20 до 1000 Па, предпочтительно от 40 Па до 400 Па, в сочетании с фазовым углом (δ) составляющим менее 45°.

В частности, гель на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты согласно изобретению можно инъецировать посредством иглы для подкожных инъекций с диаметром от 34G до 18G.

Согласно еще одному конкретному воплощению поперечно сшитый гель по изобретению является высококогезивным. Данная характеристика проявляется, в частности, через высокое переходное напряжение, определенное способом градуального изменения напряжения, составляющее больше чем 100 Па.

Модуль упругости (G', в Па) и фазовый угол (δ, в °) могут быть измерены согласно следующему протоколу:

Измерения проводят при 25°C при частоте 1 Гц, с градуальным изменением напряжения, используя реометр Thermo Haake RS3000 с геометрией конус/плита 1°/ диаметр 35 мм.

G' и δ записывают при приложенном напряжении деформации 5 Па, то есть в диапазоне вязкоэластичности, где G' и δ остаются стабильными. Затем также записывают значение переходного напряжения (когда G' снижается до значения, равного модулю вязкости Gʺ).

Для когезивного геля по изобретению данное переходное напряжение, таким образом, выше чем 100 Па.

Наконец, согласно одному конкретному воплощению поперечно сшитый гель по изобретению может обладать высокой устойчивостью к стерилизации (потеря G', вызванная стерилизацией, составляет меньше чем 50%).

Стерилизацию можно проводить в автоклаве (влажное тепло) при Т°≥121°C, так чтобы получать F0>15 (показатель стерильности).

Как указано ранее, реакцию поперечного сшивания для получения поперечно сшитого геля по изобретению проводят в условиях, благоприятных для проведения реакции ковалентного сочетания указанной гиалуроновой кислоты и указанного(ых) эндогенного(ых) полиамина(ов).

В целях настоящего изобретения подразумевается, что термин «благоприятные условия» означает элемент, который инициирует указанную реакцию сочетания.

Выбор данного инициирующего элемента очевидно входит в число навыков специалистов в данной области техники.

Обычно, данную реакцию сочетания проводят посредством по меньшей мере одного соединения «активатора», при необходимости в сочетании с по меньшей мере одним «вспомогательным агентом реакции сочетания».

Например, такой активатор может выполнять функцию превращения углерода карбоксильной группы гиалуроновой кислоты в более электрофильный углерод и, вследствие этого, таким образом, стимулирования его реакционной способности в отношении одной из аминогрупп эндогенного полиамина.

Активатор может преимущественно представлять собой конденсационный агент, например, соль пиридиния, например, 2-хлор-1-водорастворимых карбодиимидов, таких как 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид (EDC), 1-этил-3-(3-триметиламинопропил)карбодиимид (ETC), 1-циклогексил-3-(2-морфолиноэтил)карбодиимид (CMC), и также их солей, и их смесей, и предпочтительно представлен EDC.

Предпочтительно, вспомогательный агент реакции сочетания, когда он присутствует, может быть выбран из N-гидроксисукцинимида (NHS), N-гидроксибензотриазола (HOBt), 3,4-дигидро-3-гидрокси-4-оксо-1,2,3-бензотриазола (HOOBt), 1-гидрокси-7-азабензотриазола (HAt) и N-гидроксисульфосукцинимида (сульфо-NHS) и их смесей, и предпочтительно представлен HOBt.

Даже более предпочтительно, такой активатор может быть выбран из EDC, при необходимости в сочетании с HOBt в качестве вспомогательного агента реакции сочетания.

EDC позволяет активировать карбоновую кислоту посредством образования промежуточного соединения с карбоксилатом. Добавление HOBt к реакционной среде позволяет, в частности, избегать какой-либо эпимеризации и стимулировать реакцию.

Способ получения поперечно сшитого геля

Как указано выше, настоящее изобретение также относится к способу получения поперечно сшитого геля гиалуроновой кислоты или ее соли, включающему по меньшей мере стадии, заключающиеся в следующем:

а) берут водный гель гиалуроновой кислоты или ее соли в поперечно несшитом состоянии,

б) гель, полученный на стадии а), приводят в контакт с эффективным количеством по меньшей мере одного эндогенного полиамина,

в) поперечное сшивание указанной смеси, образованной на стадии б), причем указанное поперечное сшивание проводят в условиях, благоприятных для проведения реакции ковалентного сочетания указанной гиалуроновой кислоты и указанного(ых) эндогенного(ых) полиамина(ов), и

г) выделение указанного поперечно сшитого гидрогеля.

Согласно одному конкретному воплощению способ также включает стадию д) остановки поперечного сшивания, заключающуюся в помещении поперечно сшитого геля в условия, благоприятные для остановки его поперечного сшивания, причем данную стадию возможно проводить перед, совместно с или после стадии выделения г).

Согласно одному конкретному воплощению стадию поперечного сшивания в) можно проводить в присутствии по меньшей мере одного активатора, возможно в сочетании с по меньшей мере одним вспомогательным агентом реакции сочетания, то есть соединениями, которые стимулируют реакционную способность по меньшей мере одного из двух соединений, подлежащих связыванию, предпочтительно выбранными из соединений, упомянутых ранее.

Данную стадию добавления активатора и возможно вспомогательного агента реакции сочетания можно, вследствие этого, преимущественно проводить совместно со стадией поперечного сшивания в).

Согласно одному конкретному воплощению гиалуроновая кислота, используемая для получения геля по изобретению, может находиться в форме соли.

Предпочтительно, соль гиалуроновой кислоты может быть выбрана из соли натрия, соли калия, соли цинка, соли серебра и их смеси, предпочтительно соли натрия.

Преимущественно, гиалуроновая кислота, используемая для получения геля по изобретению, может иметь среднюю молекулярную массу, находящуюся в интервале от 50000 до 10000000 дальтон, предпочтительно от 500000 до 4000000 дальтон.

Корректирование количества гиалуроновой кислоты для проведения реакции поперечного сшивания очевидно входит в число навыков специалистов в данной области техники.

Преимущественно, гиалуроновую кислоту или ее соль можно использовать в способе получения поперечно сшитого геля по изобретению в содержании от 0,5 масс. % до 12 масс. %, предпочтительно от 1 масс. % до 4 масс. %, относительно общей массы смеси, полученной в конце стадии б), то есть перед проведением стадии поперечного сшивания в).

Корректирование количества эндогенного(ых) полиамина(ов) для проведения реакции поперечного сшивания очевидно входит в число навыков специалистов в данной области техники.

Количество поперечно сшивающего агента соответствует соотношению числа молей полиамина(ов) и числа молей гиалуроновой кислоты, используемой для синтезирования геля.

Преимущественно, один или более чем один эндогенный полиамин можно использовать в способе получения геля на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты по изобретению в содержании от 0,1% до 3%, предпочтительно от 0,5% до 1,5%, по числу молей полиамина(ов) относительно числа молей гиалуроновой кислоты, которые присутствуют в реакционной среде, то есть среде стадии б).

Преимущественно, активатор(ы), при необходимости в сочетании с одним или более чем одним вспомогательным агентом реакции сочетания, можно использовать в способе получения геля на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты по изобретению в содержании, таком, что число молей активатора(ов) и, при необходимости, вспомогательного(ых) агента(ов) реакции сочетания, относительно числа молей гиалуроновой кислоты реакционной среды (n активатора / n НА) составляет от 0,1 до 2, предпочтительно от 0,5 до 1,5.

Гель на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты получают с учетом присутствия по меньшей мере одного эндогенного полиамина.

Следовательно, поперечное сшивание можно проводить с использованием только данного типа поперечно сшивающего агента. Однако, данное поперечное сшивание можно также проводить с учетом одновременного присутствия по меньшей мере одного дополнительного, в частности, традиционного поперечно сшивающего агента.

Преимущественно, данный дополнительный поперечно сшивающий агент можно затем учитывать в значительно уменьшенном количестве, по сравнению с количествами, традиционно поддерживаемыми в том случае, когда его используют в качестве единственного поперечно сшивающего агента.

Данный дополнительный поперечно сшивающий агент может быть выбран из эпоксида, альдегида, полиазиридила, полиаминов, отличных от эндогенных полиаминов, полифосфатов, дивинилсульфона (DVS) и их смесей, предпочтительно из поперечно сшивающих агентов на основе эпоксида, которые предпочтительно являются бифункциональными или мультифункциональными.

Предпочтительно, дополнительный поперечно сшивающий агент может быть выбран из эпоксида, более предпочтительно из 1,4-бутандиолдиглицидилового эфира (BDDE), диэпоксиоктана или 1,2-бис(2,3-эпоксипропил)-2,3-этилена, 1,4-бис(2,3-эпоксипропокси)бутана, 1,4-бисглицидилоксибутана, 1,2-бис(2,3-эпоксипропокси)этилена, 1-(2,3-эпоксипропил)-2,3-эпоксициклогексана и их смесей, и еще лучше 1,4-бутандиолдиглицидилового эфира (BDDE).

Кроме того, во время реакции поперечного сшивания также может рассматриваться присутствие неорганической соли галогенида щелочного металла.

Действительно, неожиданно авторы изобретения отметили, что присутствие неорганической соли галогенида щелочного металла "при проведении реакции поперечного сшивания позволяет дополнительно улучшать реологические свойства поперечно сшитого геля при той же степени поперечного сшивания.

В целях настоящего изобретения подразумевается, что термин «соль галогенида щелочного металла» обозначает соединение, образованное катионом щелочного металла и анионом, обязательно представляющим атом галогена.

Преимущественно, атом галогена может быть выбран из фтора, хлора, брома и йода, и предпочтительно представлен хлором.

Предпочтительно, неорганическая соль галогенида щелочного металла по изобретению может быть выбрана из солей натрия, солей калия и солей цезия, и еще лучше представлена солью натрия.

Даже более предпочтительно, неорганическая соль галогенида щелочного металла по изобретению может представлять собой NaCl.

NaCl фактически обладает преимуществом, заключающимся в том, что является физиологически приемлемой, и она является одним из компонентов одного из сырьевых материалов, которые являются частью композиции гелей на основе поперечно связанной гиалуроновой кислоты.

Преимущественно, неорганическую(ие) соль(и) галогенида щелочного металла можно использовать в способе по изобретению в содержании от 0,5 масс. % до 20 масс. %, предпочтительно от 1 масс. % до 10 масс. % относительно общей массы смеси, полученной в конце стадии б).

Ввиду вышеупомянутого, способ получения геля на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты по изобретению требует, во-первых, следующего: берут водный гель, содержащий по меньшей мере гиалуроновую кислоту в поперечно несшитой форме, в сочетании с по меньшей мере одним эндогенным полиамином в качестве поперечно сшивающего агента.

В целях настоящего изобретения подразумевается, что термин «поперечно несшитый» обозначает водный гель гиалуроновой кислоты, который поперечно несшит или не трансформирован, то есть раствор гиалуроновой кислоты, цепи полимера которой не связаны одна с другой сильными или ковалентными связями.

Более конкретно, водный гель, рассматриваемый на стадии а), можно получать заранее путем объединения в соответствующей емкости следующих компонентов:

(i) водная среда;

(ii) по меньшей мере гиалуроновая кислота или ее соль в поперечно несшитой форме; и

(iii) при необходимости, по меньшей мере один эндогенный полиамин; и гомогенизации полученной смеси, причем порядок добавления в емкость указанных соединений (i), (ii) и (iii) не важен.

Другими словами, в том случае, когда для водного геля стадии а) рассматривается присутствие по меньшей мере одного эндогенного полиамина, тогда стадии а) и б) способа по изобретению проводят одновременно.

Согласно первому варианту воплощения данный водный гель может быть образован введением в емкость водной среды и гиалуроновой кислоты с одновременной и/или последующей гомогенизацией образованной таким образом смеси, и затем, при необходимости, добавлением поперечно сшивающего агента с одновременной и/или последующей гомогенизацией.

Согласно второму варианту воплощения данный водный гель можно получать введением в емкость водной среды, гиалуроновой кислоты и поперечно сшивающего агента с одновременной и/или последующей гомогенизацией образованной таким образом смеси.

Данный второй вариант воплощения является преимущественным, так как проводят единственную стадию гомогенизации.

Преимущественно, данную стадию образования водного геля можно проводить при температуре ниже 35°C, предпочтительно при температуре, находящейся в интервале от 15 до 25°C, и еще лучше при температуре окружающей среды.

Водный гель, рассматриваемый на стадии а), является преимущественно гомогенным.

Данное качество гарантировано операцией, в которой водный гель гомогенизируют, причем указанная операция, возможно, представляет собой стадию, предшествующую стадии а).

Цель данной операции, возможно проводимой в присутствии поперечно сшивающего агента, более конкретно заключается в гидратации и полной гомогенизации гиалуроновой кислоты в водной среде и, при необходимости, поперечно сшивающего агента, и, таким образом, содействии оптимизации качеств ожидаемого поперечно сшитого геля.

Действительно, по очевидным причинам, гомогенность поперечно сшитого геля тесно связана с гомогенной природой геля перед поперечным сшиванием.

Считается, что гомогенизация является удовлетворительной, когда полученный раствор имеет гомогенную окраску, без агломератов и однородную вязкость. Ее можно преимущественно проводить в мягких рабочих условиях для предупреждения разрушения цепей гиалуроновой кислоты.

Данная стадия тем более важна, когда гиалуроновая кислота имеет большую молекулярную массу. Тогда гидратация такого соединения фактически имеет тенденцию вызывать образование раствора высокой вязкости, в котором обычно наблюдают появление агломератов.

Как следует из упомянутого выше, смесь, образованную на стадии б), или даже, при необходимости, водный гель стадии а), когда рассматривается наличие поперечно сшивающего агента, впоследствии подвергают реакции поперечного сшивания, проиллюстрированной стадией в) способа получения геля на основе поперечно сшитой гиалуроновой кислоты по изобретению.

Как указано ранее, данное поперечное сшивание проводят в условиях, благоприятных для проведения реакции сочетания указанной гиалуроновой кислоты и указанного(ых) эндогенного(ых) полиамина(ов).

Благоприятные условия, которые нужно поддерживать для индукции данной реакции сочетания и, вследствие этого, реакции поперечного сшивания, может зависеть от молекулярной массы гиалуроновой кислоты, от водной среды и от природы поперечно сшивающего агента, в данном случае полностью или частично образованного эндогенным полиамином.

Данные благоприятные условия могут, в частности, выражаться в присутствии по меньшей мере одного активатора, при необходимости, в сочетании с по меньшей мере одним вспомогательным агентом реакции сочетания, как указано выше.

Как указано ранее, стадию добавления активатора и, при необходимости, вспомогательного агента реакции сочетания, можно предпочтительно проводить совместно со стадией поперечного сшивания в).

Однако, согласно одному конкретному воплощению активатор и, при необходимости, вспомогательный агент реакции сочетания добавляют перед стадией поперечного сшивания в), и более конкретно перед стадией добавления по меньшей мере одного эндогенного полиамина.

Согласно другому воплощению данную стадию добавления активатора и, при необходимости, вспомогательного агента реакции сочетания проводят вместе со стадией б), в случае чего стадию б) тогда проводят вместе со стадией поперечного сшивания в).

Кроме того, степень поперечного сшивания также зависит от продолжительности стадии поперечного сшивания, применяемой для смеси, полученной в конце стадии б). Чем длительнее период времени, тем выше степень поперечного сшивания, однако, с оптимумом, который нельзя превышать, иначе существует риск разрушения гиалуроновой кислоты.

Таким образом, когда поперечное сшивание гиалуроновой кислоты проводят в присутствии EDC и HOBt, стадию поперечного сшивания в) можно проводить на протяжении периода, находящегося в интервале от 30 минут до 72 часов, предпочтительно от 3 до 24 часов.

Как описано ранее, остановка поперечного сшивания (стадия д) может происходить перед, вместе с или после стадии выделения геля г).

Такая стадия д) может требовать помещения поперечно сшитого геля или геля, подвергающегося поперечному сшиванию, или даже емкости, содержащей его, в условия, благоприятные для остановки указанного поперечного сшивания или же в условия, способные останавливать образование связей между разными цепями полисахаридов.

Данную стадию можно инициировать естественным путем, если все реагенты расходуются во врем