Грызуны с гуманизированным il-7

Грызуны с гуманизированным il-7

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники

Настоящее изобретение относится к животным, не являющимся человеком (например, млекопитающие, например грызуны, такие как мыши, крысы и хомяки), которые содержат генетическую модификацию с заменой в эндогенном локусе последовательности гена интерлейкина-7 (IL-7) нечеловеческого происхождения последовательностью гена человеческого IL-7. Также изобретение относится к грызунам и другим не являющимся человеком животным, у которых происходит экспрессия человеческого IL-7 или гуманизированного IL-7 в локусе под контролем эндогенных регуляторных последовательностей нечеловеческого происхождения или в эндогенном локусе IL-7 нечеловеческого происхождения, который содержит эндогенные регуляторные последовательности нечеловеческого происхождения.

Уровень техники

В данной области техники известны трансгенные мыши, которые имеют случайным образом вставленные трансгены, которые содержат последовательность человеческого IL-7. Однако, большинство, если не все, из таких трансгенных мышей не оптимальны по тому или другому аспекту. Например, большинство мышей, трансгенных по человеческому IL-7, характеризуются аномальными уровнями и/или соотношениями некоторых клеток, включая Т-клетки, что, скорее всего, обусловлено нарушениями регуляции развития иммунных клеток, например развития Т-клеток.

В данной области техники сохраняется потребность в животных, не являющихся человеком, которые содержат последовательности, кодирующие человеческий IL-7, где данные последовательности, кодирующие человеческий IL-7, находятся в эндогенном локусе IL-7 нечеловеческого происхождения, а также в животных, не являющихся человеком, которые экспрессируют человеческий IL-7 под контролем эндогенных регуляторных элементов нечеловеческого происхождения. В данной области техники существует потребность в животных, не являющихся человеком, которые экспрессируют человеческий IL-7 настолько физиологически релевантным для животного, не являющегося человеком, образом, насколько это возможно. В данной области техники существует потребность в животных, не являющихся человеком, которые экспрессируют человеческий IL-7, у которых отсутствует существенное отклонение от нормы в периферических Т-клетках и/или в соотношениях подтипов Т-клеток.

Сущность изобретения

Настоящее изобретение относится к генетически модифицированным животным, не являющимся человеком, а также к генетически модифицированным клеткам, тканям и нуклеиновым кислотам нечеловеческого происхождения, которые содержат геномную последовательность человеческого IL-7 в эндогенном локусе IL-7 нечеловеческого происхождения. Животные, не являющиеся человеком, экспрессируют гуманизированный белок IL-7 в модифицированном локусе, регулируемом одной или более эндогенными регуляторными последовательностями нечеловеческого происхождения модифицированного эндогенного локуса IL-7. В различных вариантах осуществления не являющиеся человеком животные представляют собой грызунов, например, мышей, крыс, хомяков и т.п. В определенном варианте осуществления грызун представляет собой мышь или крысу.

В различных вариантах осуществления и объектах настоящего изобретения не являющиеся человеком животные содержат модифицированный ген IL-7 в зародышевой линии животного, не являющегося человеком, в модифицированном эндогенном локусе IL-7, причем данный модифицированный эндогенный локус IL-7 содержит гуманизацию по меньшей мере участка эндогенного гена IL-7. В различных вариантах осуществления мыши являются гетерозиготными или гомозиготными в отношении модифицированного локуса IL-7. В одном варианте осуществления настоящее изобретение предоставляет животное, не являющееся человеком, у которого отсутствует первый эндогенный аллель IL-7 и которое содержит гуманизацию второго эндогенного аллеля IL-7. В различных вариантах осуществления и объектах настоящего изобретения гуманизация представляет собой гуманизацию одного или более экзонов и/или интронов. В различных вариантах осуществления и объектах настоящего изобретения предложены не являющиеся человеком животные, имеющие модифицированный локус IL-7, причем в модифицированном животном сохраняются одна или обе из эндогенной 5'-нетранслируемой области нечеловеческого происхождения и эндогенной 3'-нетранслируемой области нечеловеческого происхождения.

В некоторых вариантах осуществления изобретения не являющиеся человеком животные по настоящему изобретению содержат 5-нетранслируемую область, содержащуюся в последовательности SEQ ID NO: 1 В некоторых вариантах осуществления изобретения не являющиеся человеком животные по настоящему изобретению содержат 3'-нетранслируемую область, содержащуюся в последовательности SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления не являющиеся человеком животные по настоящему изобретению содержат 5'-нетранслируемую область, содержащуюся в последовательности SEQ ID NO: 1, и 3'-нетранслируемую область, содержащуюся в последовательности SEQ ID NO: 2.

В некоторых вариантах осуществления изобретения не являющиеся человеком животные по настоящему изобретению содержат 5-нетранслируемую область, которая представляет собой SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах осуществления изобретения не являющиеся человеком животные по настоящему изобретению содержат 3'-нетранслируемую область, которая представляет собой SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления изобретения не являющиеся человеком животные по настоящему изобретению содержат 5-нетранслируемую область, которая представляет собой SEQ ID NO: 1, и 3'-нетранслируемую область, которая представляет собой SEQ ID NO: 2.

В некоторых вариантах осуществления изобретения гуманизированный ген IL-7 по настоящему изобретению имеет последовательность, которая по меньшей мере на 50% (например, на 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% или более) идентична непрерывной последовательности, содержащей экзоны 2-6 человеческого гена IL-7. В некоторых конкретных вариантах осуществления изобретения человеческий ген IL-7 по настоящему изобретению содержит последовательность SEQ ID NO: 3. В некоторых вариантах осуществления изобретения гуманизированный ген IL-7 по настоящему изобретению имеет последовательность, которая отражает гуманизацию, как представлено на фигуре 1.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения генетически модифицированный грызун содержит замену в эндогенном локусе IL-7 грызуна эндогенной геномной последовательности IL-7 грызуна на геномную последовательность человеческого IL-7.

В одном варианте осуществления генетически модифицированный грызун содержит первую регуляторную последовательность грызуна, расположенную выше по цепи (по отношению к направлению транскрипции гена IL-7) относительно геномной последовательности человеческого IL-7, и вторую регуляторную последовательность грызуна, расположенную ниже по цепи относительно геномной последовательности человеческого IL-7. В одном варианте осуществления первая регуляторная последовательность грызуна содержит промотор и/или энхансер из грызуна и вторая регуляторная последовательность грызуна содержит 3'-нетранслируемую область (3'-untranslated region, 3'-UTR).

В одном варианте осуществления грызун представляет собой мышь и содержит эндогенный локус мышиного гена IL-7, имеющий мышиный экзон 1 и человеческие экзоны 2, 3, 4, 5 и 6. В одном варианте осуществления эндогенный локус мышиного гена IL-7 содержит, по направлению от верхней части до нижней части относительно направления транскрипции, мышиный экзон 1, по меньшей мере, участок первого мышиного интрона и граничащий с ним человеческий геномный фрагмент, содержащий человеческие экзоны от человеческого экзона 2 до человеческого экзона 6. В одном варианте осуществления мышь дополнительно содержит прилегающую последовательность эндогенной мышиной ДНК, содержащую полный эндогенный вышележащий (относительно направления транскрипции гена IL-7) мышиный промотор IL-7 и регуляторную область, причем непрерывная мышиная ДНК находится выше по цепи относительно человеческого геномного фрагмента; и дополнительно содержит прилегающую последовательность эндогенной мышиной 3'-UTR-ДНК, расположенную ниже по цепи относительно человеческого геномного фрагмента.

В одном варианте осуществления мышь содержит мышиную последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и их комбинации. В определенном варианте осуществления мышь содержит мышиную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1 и SEQ ID NO: 2.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложена генетически модифицированная мышь, которая содержит замену, в мышином эндогенном локусе, IL-7 эндогенной геномной последовательности мышиного IL-7 на геномную последовательность человеческого IL-7 с целью образования модифицированного локуса, причем геномная последовательность человеческого IL-7 содержит по меньшей мере один человеческий экзон и модифицированный локус содержит мышиную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и их комбинации.

В одном варианте осуществления замена содержит человеческий геномный фрагмент, содержащий экзоны от 2-го до 6-го, и данный человеческий геномный фрагмент соединен с мышиным экзоном 1 с образованием модифицированного эндогенного локуса мышиного IL-7, причем модифицированный мышиный локус IL-7 содержит мышиную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и их комбинации.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен генетически модифицированный грызун, содержащий ген IL-7, который содержит экзон 1 грызуна и по меньшей мере участок интрона 1 грызуна и последовательность экзонов 2, 3, 4, 5 и 6 человеческого IL-7 из гена человеческого IL-7, причем данный грызун содержит последовательность, выбранную из вышележащей (относительно направления транскрипции) регуляторной последовательности гена IL-7 грызуна, 3'-UTR IL-7 грызуна и их комбинации.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложена генетически модифицированная мышь, которая содержит последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 и их комбинации; причем у данной мыши отсутствует эндогенная последовательность, кодирующая экзоны от 2-го до 5-го мышиного белка IL-7, и данная мышь содержит нуклеотидную последовательность в эндогенном мышином локусе IL-7, где данная нуклеотидная последовательность кодирует экзоны 2, 3, 4, 5 и 6 человеческого IL-7.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен генетически модифицированный грызун, который экспрессирует человеческий или гуманизированный белок IL-7 из эндогенного локуса IL-7 грызуна, причем данный локус модифицируют с целью экспрессии по меньшей мере одного экзона человеческого IL-7. В одном варианте осуществления локус IL-7 грызуна модифицирован с целью экспрессии человеческого или гуманизированного белка IL-7, кодируемого последовательностью, содержащей по меньшей мере два экзона человеческого IL-7. В одном варианте осуществления локус IL-7 грызуна модифицирован с целью экспрессии человеческого или гуманизированного белка IL-7, кодируемого последовательностью, содержащей по меньшей мере три экзона человеческого IL-7. В одном варианте осуществления локус IL-7 грызуна модифицирован с целью экспрессии человеческого или гуманизированного белка IL-7, кодируемого последовательностью, содержащей по меньшей мере экзоны 2, 3, 4, 5 и 6 (то есть от 2-го до 6-го) человеческого IL-7. В одном варианте осуществления локус IL-7 грызуна модифицирован с целью экспрессии человеческого белка IL-7. Некоторые определенные объекты настоящего изобретения относятся к локусу IL-7 грызуна, модифицированному с целью экспрессии человеческого белка IL-7, последовательность которого отражает белок, кодируемый локусом, как показано на фигуре 1. Некоторые определенные объекты настоящего изобретения относятся к локусу IL-7 грызуна, модифицированному с целью экспрессии человеческого белка IL-7, содержащего последовательность, кодируемую экзонами 2-6 человеческого гена IL-7. Некоторые определенные объекты настоящего изобретения относятся к локусу IL-7 грызуна, модифицированному с целью экспрессии человеческого белка IL-7, содержащего последовательность, кодируемую экзонами 2-6 человеческого гена IL-7, как изложено в SEQ ID NO: 3.

8 одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен генетически модифицированный грызун, который экспрессирует человеческий или гуманизированный белок IL-7 из эндогенного локуса IL-7 грызуна, который модифицирован, чтобы содержать, по меньшей мере, экзоны от 2-го до 6-го человеческого IL-7 вместо экзонов от 2-го по 5-го из IL-7 грызуна.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен генетически модифицированный грызун, который экспрессирует человеческий или гуманизированный белок IL-7 из гуманизированного эндогенного локуса IL-7 грызуна, содержащего кодирующую область гуманизированного эндогенного IL-7 грызуна, причем гуманизированный эндогенный локус IL-7 грызуна содержит все эндогенные регуляторные элементы из грызуна, которые присутствуют впереди (относительно точки начала транскрипции у грызуна дикого типа) кодирующей области IL-7 грызуна дикого типа и позади (относительно точки начала транскрипции у грызуна дикого типа) кодирующей области IL-7 грызуна дикого типа.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен генетически модифицированный грызун, который экспрессирует человеческий или гуманизированный белок IL-7 из гуманизированного локуса IL-7 грызуна, причем данный локус содержит регуляторные области грызуна, расположенные выше и ниже по цепи относительно нуклеотидной последовательности, кодирующей человеческий или гуманизированный белок IL-7, причем человеческий или гуманизированный белок IL-7 экспрессируется с паттерном экспрессии, который является приблизительно таким же, что и паттерн экспрессии белка IL-7 грызуна в грызуне дикого типа. В одном варианте осуществления уровень экспрессии человеческого или гуманизированного IL-7 в сыворотке является приблизительно таким же, что и уровень экспрессии белка IL-7 грызуна в сыворотке у грызуна дикого типа.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен генетически модифицированный грызун, который экспрессирует гуманизированный белок IL-7, причем популяция лимфоцитов данного грызуна характеризуется популяцией В-клеток, численность которой является приблизительно такой же, что и популяция В-клеток у соответствующей по возрасту мыши дикого типа. В одном варианте осуществления модифицированный грызун характеризуется популяцией зрелых В-клеток, численность которой является приблизительно такой же, что и численность популяции зрелых В-клеток у соответствующей по возрасту мыши дикого типа. В одном варианте осуществления гуманизированный белок IL-7 идентичен человеческому белку IL-7. В одном варианте осуществления гуманизированный белок IL-7 содержит человеческую последовательность, закодированную, по меньшей мере, экзонами от 2-го до 6-го из человеческого гена IL-7.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен генетически модифицированный грызун, который экспрессирует гуманизированный белок IL-7, причем популяция лимфоцитов данного грызуна характеризуется популяцией Т-клеток, численность которой является приблизительно такой же, что и численность популяции Т-клеток у соответствующей по возрасту мыши дикого типа. В одном из вариантов осуществления модифицированный грызун демонстрирует популяцию зрелых Т-клеток, численность которой является приблизительно такой же, что и численность популяции зрелых Т-клеток у соответствующей по возрасту мыши дикого типа. В одном из вариантов осуществления модифицированный грызун демонстрирует популяцию периферийных Т-клеток, численность которой является приблизительно такой же, что и численность популяции периферийных Т-клеток у соответствующей по возрасту мыши дикого типа. В одном варианте осуществления гуманизированный белок IL-7 идентичен человеческому белку IL-7. В одном варианте осуществления гуманизированный белок IL-7 содержит человеческую последовательность, закодированную, по меньшей мере, экзонами от 2-го до 6-го из человеческого гена IL-7.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен генетически модифицированный грызун, который экспрессирует гуманизированный белок IL-7, причем популяция лимфоцитов данного грызуна характеризуется популяцией Т-клеток, который проявляет соотношение CD4:CD8, которое приблизительно равно соотношению CD4:CD8 в популяции Т-клеток у соответствующей по возрасту мыши дикого типа. В одном варианте осуществления гуманизированный белок IL-7 идентичен человеческому белку IL-7. В одном варианте осуществления гуманизированный белок IL-7 содержит человеческую последовательность, закодированную, по меньшей мере, экзонами от 2-го до 6-го из человеческого гена IL-7.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен генетически модифицированный грызун, который экспрессирует гуманизированный белок IL-7, причем данный грызун обладает свойством, выбранным из: отсутствие склонности к развитию хронического колита; отсутствие сверхэкспрессии IL-7 в лимфоцитах слизистой оболочки толстого кишечника; нормальная экспрессия, или экспрессия дикого типа, IL-7 в лимфоцитах слизистой оболочки толстого кишечника; отсутствие тяжелого дерматита; отсутствие дерматита, характеризующегося массивной кожной инфильтрацией с накоплением мононуклеарных клеток; демонстрация соотношения CD4:CD8 в популяции Т-клеток, которое приблизительно равно соотношению CD4:CD8 в популяции Т-клеток у соответствующей по возрасту мыши дикого типа; демонстрация паттерна экспрессии человеческого IL-7, который является приблизительно таким же, что и паттерн экспрессии белка IL-7 грызуна у грызуна дикого типа; и комбинация этих характеристик.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен генетически модифицированный грызун, который экспрессирует гуманизированный белок IL-7, причем у данного грызуна отсутствует склонность к развитию хронического колита.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен генетически модифицированный грызун, который экспрессирует гуманизированный белок IL-7, причем данный грызун не демонстрирует сверхэкспрессию IL-7 в лимфоцитах слизистой оболочки толстого кишечника.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен генетически модифицированный грызун, который экспрессирует гуманизированный белок IL-7, причем у данного грызуна не проявляется дерматит, характеризующийся массивной кожной инфильтрацией с накоплением мононуклеарных клеток.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен генетически модифицированный грызун, который экспрессирует гуманизированный белок IL-7, причем у данного грызуна не проявляется лимфопролиферация в дерму.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен генетически модифицированный грызун, который экспрессирует гуманизированный белок IL-7, причем частота проявления В и/или Т-клеточных лимфом у данного грызуна не выше, чем у соответствующей по возрасту мыши дикого типа.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложена генетически модифицированная мышь, которая экспрессирует гуманизированный белок IL-7 или человеческий белок IL-7, причем данная мышь не более склонна, чем мышь дикого типа, к развитию патологии, выбранной из колита, хронического колита, острого дерматита, патологической и/или массивной инфильтрации дермы мононуклеарными клетками, лимфопролиферации дермы, В-клеточных лимфом, Т-клеточных лимфом, уменьшения числа зрелых В и/или Т-клеток, уменьшения числа периферических В и/или Т-клеток, аномальных количеств CD4+ Т-клеток, аномальных количеств CD8+ Т-клеток и их комбинации.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложена генетически модифицированная мышь, которая экспрессирует человеческий белок IL-7, последовательность которого отражает замену последовательности мышиного гена IL-7 последовательностью человеческого гена IL-7, причем последовательность человеческого гена IL-7 содержит экзоны 2-6 человеческого гена IL-7. Некоторые определенные объекты настоящего изобретения относятся к замене последовательности, содержащей экзоны 2-5 мышиного гена IL-7. Некоторые определенные объекты настоящего изобретения относятся к человеческому гену IL-7, который содержит SEQ ID NO: 3. Некоторые определенные объекты настоящего изобретения относятся к экспрессии человеческого белка IL-7, которая находится под контролем мышиных регуляторных элементов.

В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложена генетически модифицированная мышь, которая не экспрессирует мышиный белок IL-7 в детектируемых количествах. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения предложен геном мыши, как описано здесь, который содержит полную или частичную делецию мышиного гена IL-7. Некоторые определенные объекты настоящего изобретения относятся к геному мыши, как описано здесь, который содержит делецию эндогенной последовательности гена IL-7, соответствующей экзонам 2-5.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложено генетически модифицированное животное, не являющееся человеком, содержащее, в своей зародышевой линии, замену по меньшей мере одного экзона IL-7 нечеловеческого происхождения на по меньшей мере один человеческий экзон IL-7 с целью образования гена, кодирующего человеческий или гуманизированный IL-7, причем данная замена происходит в эндогенном локусе IL-7 нечеловеческого происхождения, где ген, кодирующий человеческий или гуманизированный IL-7, находится под контролем эндогенных регуляторных элементов нечеловеческого происхождения.

В одном варианте осуществления генетически модифицированное животное, не являющееся человеком, представляет собой грызуна. В одном варианте осуществления грызун выбран из крысы и мыши.

В одном варианте осуществления ген, кодирующий человеческий или гуманизированный IL-7, содержит человеческие экзоны, выбранные из группы, состоящей из человеческого экзона 1, человеческого экзона 2, человеческого экзона 3, человеческого экзона 4, человеческого экзона 5, человеческого экзона 6 и их комбинации. В одном варианте осуществления ген, кодирующий человеческий или гуманизированный IL-7, содержит не более чем пять человеческих экзонов.

В одном варианте осуществления генетически модифицированное животное, не являющееся человеком, представляет собой грызуна, который является мышью, и модифицированный локус содержит замену мышиных экзонов 2, 3, 4 и 5 человеческим геномным сегментом, содержащим экзоны 2, 3, 4, 5 и 6 человеческого IL-7.

В одном варианте осуществления ген, кодирующий человеческий или гуманизированный IL-7, содержит кДНК, кодирующую человеческий или гуманизированный белок IL-7.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения генетически модифицированное животное, не являющееся человеком, содержащее, в своей зародышевой линии, трансген, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую ген человеческого или гуманизированного IL-7, причем ген человеческого или гуманизированного IL-7 фланкирован с обеих сторон эндогенными регуляторными последовательностями нечеловеческого происхождения.

В одном варианте осуществления генетически модифицированное животное, не являющееся человеком, представляет собой грызуна. В одном варианте осуществления грызун выбран из группы, состоящей из мыши, крысы и хомяка.

В одном варианте осуществления генетически модифицированное животное, не являющееся человеком, содержит человеческий экзон, выбранный из группы, состоящей из человеческого экзона 1, человеческого экзона 2, человеческого экзона 3, человеческого экзона 4, человеческого экзона 5, человеческого экзона 6 и их комбинации. В одном варианте осуществления ген человеческого или гуманизированного IL-7 содержит по меньшей мере пять человеческих экзонов.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен гуманизированный локус IL-7, содержащий экзон 1 нечеловеческого происхождения, человеческий экзон 2, человеческий экзон 3, человеческий экзон 4, человеческий экзон 5 и человеческий экзон 6. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения гуманизированный локус IL-7 дополнительно содержит 5'- и 3'-нетранслируемые области нечеловеческого происхождения, фланкирующие экзон 1 нечеловеческого происхождения и человеческий экзон 6. В некоторых определенных вариантах осуществления гуманизированный локус человеческого IL-7 содержит человеческую 3'-нетранслируемую область или участок ее, которая граничит с 3'-нетранслируемой областью нечеловеческого происхождения. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения гуманизированный локус IL-7 содержит 5-нетранслируемую область нечеловеческого происхождения или участок ее, а также экзон 1 нечеловеческого происхождения, который граничит с человеческим экзоном 2. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения гуманизированный локус IL-7, который содержит структуру, представленную на фигуре 1.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен гуманизированный локус IL-7, содержащий человеческие экзоны 2-6 человеческого гена IL-7, функционально связанные с регуляторными последовательностями IL-7 нечеловеческого происхождения. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения гуманизированный локус IL-7 по настоящему изобретению содержит экзон 1 IL-7 нечеловеческого происхождения. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения гуманизированный локус IL-7 по настоящему изобретению содержит экзон 1 IL-7 нечеловеческого происхождения и интрон 1 IL-7 нечеловеческого происхождения. В некоторых определенных вариантах осуществления гуманизированный локус IL-7 по настоящему изобретению содержит человеческую 3'-нетранслируемую область или участок ее, которая граничит с 3'-нетранслируемой областью нечеловеческого происхождения или участком ее. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения гуманизированный локус IL-7 по настоящему изобретению содержит 5'-нетранслируемую область нечеловеческого происхождения или участок ее, а также экзон 1 нечеловеческого происхождения, который граничит с человеческим экзоном 2.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения предложен гуманизированный локус IL-7, содержащий последовательность, которая кодирует белок IL-7, который является по существу человеческим. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения гуманизированный локус IL-7 по настоящему изобретению содержит последовательность, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 98% идентична последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения гуманизированный локус IL-7 по настоящему изобретению содержит SEQ ID NO: 3. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения белок IL-7 по настоящему изобретению кодируется последовательностью, которая по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 55%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 65%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 75%, по меньшей мере на 80%, по меньшей мере на 85%, по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95% или по меньшей мере на 98% идентична последовательности SEQ ID NO: 3. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения белок IL-7 по настоящему изобретению кодируется последовательностью SEQ ID NO: 3.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения предложен способ получения животного, не являющегося человеком, с геном, кодирующим человеческий или гуманизированный IL-7, содержащим модификацию зародышевой линии животного, не являющегося человеком, с целью включить в себя ген, кодирующий человеческий или гуманизированный IL-7, фланкированный с обеих сторон эндогенными регуляторными последовательностями IL-7 нечеловеческого происхождения.

В одном варианте осуществления способа по изобретению модификация имеется в эндогенном локусе IL-7 нечеловеческого происхождения.

В одном варианте осуществления способа животное, не являющееся человеком, представляет собой грызуна. В одном варианте осуществления грызун выбран из группы, состоящей из мыши, крысы и хомяка.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложено генетически модифицированное животное, не являющееся человеком, которое генетически модифицировано с целью экспрессии человеческого IL-7 с паттерном экспрессии, который представляет собой такой же паттерн экспрессии, что и наблюдаемый для являющегося человеком животного дикого типа того же рода и вида. В одном варианте осуществления животное, не являющееся человеком, представляет собой грызуна. В конкретном варианте осуществления грызун выбран из мыши и крысы.

В одном варианте осуществления уровень человеческого IL-7, экспрессируемого в животном, не являющегося человеком, приблизительно такой же, что и уровень IL-7 нечеловеческого происхождения у соответствующей мыши дикого типа. В одном варианте осуществления животное, не являющееся человеком, представляет собой грызуна. В конкретном варианте осуществления грызун выбран из мыши и крысы.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложена конструкция ДНК, содержащая в направлении от 5' к 3' по отношению к направлению транскрипции нуклеотидную последовательность, гомологичную некодирующей 5'-последовательности мышиного IL-7, человеческий геномный фрагмент, кодирующий человеческий белок IL-7, но не содержащий человеческую регуляторную последовательность выше или ниже по цепи относительно последовательности, кодирующей человеческий белок IL-7, и нуклеотидную последовательность, гомологичную некодирующей 3'-последовательности мышиного IL-7.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложена конструкция ДНК, содержащая в направлении от 5' к 3' по отношению к направлению транскрипции нуклеотидную последовательность, которая содержит область гомологии к последовательности экзона 1 мышиного IL-7, человеческий геномный фрагмент, кодирующий человеческий белок IL-7, но не содержащий человеческую регуляторную последовательность выше или ниже по цепи относительно последовательности, кодирующей человеческий белок IL-7, и нуклеотидную последовательность, гомологичную некодирующей 3'-последовательности мышиного IL-7.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложен генетически модифицированный грызун, причем данный грызун содержит конструкцию ДНК, как описано здесь.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложено применение конструкции ДНК, описанной здесь, для создания грызуна или клетки грызуна, экспрессирующей человеческий белок IL-7. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения грызун или клетка грызуна не экспрессирует в детектируемых количествах белок IL-7 грызуна.

В одном варианте осуществления настоящего изобретения предложена генетически модифицированная клетка грызуна, причем данная клетка грызуна содержит замену в эндогенном локусе IL-7 грызуна последовательности гена, кодирующей IL-7 грызуна, человеческой геномной последовательностью, кодирующей человеческий IL-7. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения выполнена замена при помощи конструкции ДНК, описанной здесь. В некоторых конфетных вариантах осуществления настоящего изобретения клетка грызуна представляет собой клетку крысы. В некоторых конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения клетка грызуна представляет собой клетку мыши.

В одном варианте осуществления человеческая геномная последовательность содержит непрерывную человеческую нуклеотидную последовательность, охватывающую экзоны от экзона 2 человеческого IL-7 до экзона 6 человеческого IL-7.

В одном варианте осуществления генетически модифицированный грызун содержит промотор мышиного IL-7 в эндогенном локусе IL-7 грызуна.

В одном варианте осуществления клетка выбрана из плюрипотентной клетки, индуцированной плюрипотентной клетки, тотипотентной клетки, ES-клетки и яйцеклетки.

В одном варианте осуществления клетка секретирует человеческий IL-7. В одном варианте осуществления клетка, которая секретирует человеческий IL-7, выбрана из эпителиальной клетки (например, кишечной эпителиальной клетки), гепатоцита, кератиноцита, дендритной клетки и фолликулярной дендритной клетки. В одном варианте осуществления клетка грызуна представляет собой дендритную клетку костного мозга. В одном варианте осуществления клетка, которая секретирует человеческий IL-7, представляет собой стромальную клетку тимуса; в конкретном варианте осуществления стромальная клетка тимуса представляет собой эпителиальную клетку коркового вещества.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения предложен эмбрион грызуна, причем данный эмбрион содержит по меньшей мере одну донорную клетку грызуна (например, ES-клетка, плюрипотентная клетка, тотипотентная клетка и т.д.), содержащую замену эндогенной нуклеотидной последовательности, кодирующей IL-7 грызуна, последовательностью нуклеиновой кислоты, кодирующей человеческий IL-7 в эндогенном локусе IL-7 грызуна. В одном варианте осуществления донорная клетка представляет собой мышиную ES-клетку и эмбрион представляет собой хозяйский мышиный эмбрион, который является эмбрионом на стадии, предшествующей моруле, морулой или бластоцистом.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения предложена ткань грызуна, которая содержит ген гуманизированного IL-7 в эндогенном локусе IL-7 грызуна, причем ткань грызуна выбрана из ткани тимуса, селезенки, эпидермальной ткани и ткани кишечника.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения предложена генетически модифицированная мышь, которая содержит последовательность ДНК, которая кодирует человеческий IL-7, причем данная мышь не экспрессирует мышиный IL-7 и демонстрирует Т-клеточную популяцию, которая имеет приблизительно такую же численность, что и Т-клеточная популяция мыши дикого типа.

В одном варианте осуществления мышь характеризуется популяцией периферических Т-клеток, которая имеет приблизительно такой же размер, что и популяция периферических Т-клеток мыши дикого типа.

В одном варианте осуществления популяция Т-клеток представляет собой популяцию мышиных Т-клеток.

В одном варианте осуществления мышь не более склонна, чем мышь дикого типа, к развитию опухоли В-клеток, содержащей про-В или пре-В-клетку.

В одном из вариантов осуществления мышь не более склонна, чем мышь дикого типа, к развитию лимфоидной опухоли.

В одном варианте осуществления у мыши не обнаруживается лимфопролиферативное расстройство при отсутствии известного возбудителя лимфопролиферативных заболеваний.

В одном варианте осуществления у мыши не обнаруживается патологическая инфильтрация Т-клеток в кожном слое. В одном варианте осуществления у мыши не проявляется симптом алопеции (облысения).

В одном варианте осуществления распределение по размерам большинства Т-клеток генетически модифицированной мыши приблизительно такое же, что и у соответствующей по возрасту мыши дикого типа. В конкретном варианте осуществления у генетически модифицированной мыши не обнаруживается увеличение Т-клетки.

В одном из вариантов осуществления настоящего изобретения предложен грызун, который экспрессирует гуманизированный или человеческий белок IL-7 в эндогенном модифицированном локусе IL-7 грызуна, причем сывороточная концентрация человеческого IL-7 в грызуне является физиологически нормальной.

В одном из вариантов осуществления н