Применение долгодействующих пептидов glp-1

Применение долгодействующих пептидов glp-1

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Изобретение относится к улучшенным применениям пептидов GLP-1 в терапии.

Сущность изобретения

В одном из вариантов воплощения настоящее изобретение относится к способу: а) снижения HbA1c; b) предотвращения или лечения диабета 2 типа, гипергликемии, нарушения толерантности к глюкозе или инсулиннезависимого диабета; или с) предотвращения или лечения ожирения, снижения веса тела и/или потребления пищи или стимулирования насыщения; где указанный способ включает введение агониста GLP-1 нуждающемуся в этом субъекту, где указанный агонист GLP-1: i) имеет время полужизни, по меньшей мере, 72 часа, где указанное время полужизни необязательно определяют с помощью анализа (II); ii) вводят в количестве, по меньшей мере, 0,7 мг в неделю, где такое количество эквивалентно, по меньшей мере, 0,7 мг семаглутида в неделю; и iii) вводят один раз в неделю или реже.

В одном из вариантов воплощения настоящее изобретение относится к агонисту GLP-1 для применения для: а) снижения HbA1c; b) предотвращения или лечения диабета 2 типа, гипергликемии, нарушения толерантности к глюкозе или инсулиннезависимого диабета; или с) предотвращения или лечения ожирения, снижения веса тела и/или потребления пищи или стимулирования насыщения, где указанное применение включает введение указанного агониста GLP-1 в количестве, по меньшей мере, 0,7 мг в неделю, где такое количество эквивалентно, по меньшей мере, 0,7 мг семаглутида в неделю, и где указанный агонист GLP-1 и/или введение необязательно представляют собой такой агонист и/или такое введение, как определено в настоящем документе.

В одном из вариантов воплощения настоящее изобретение относится к композиции, включающей агонист GLP-1, для применения для: а) снижения HbA1c; b) предотвращения или лечения диабета 2 типа, гипергликемии, нарушения толерантности к глюкозе или инсулиннезависимого диабета; или с) предотвращения или лечения ожирения, снижения веса тела и/или потребления пищи или стимулирования насыщения; где указанный агонист GLP-1 i) имеет время полужизни, по меньшей мере, 72 часа, где указанный время полужизни необязательно определяют с помощью анализа (II); и ii) вводят в количестве, по меньшей мере, 0,7 мг в неделю, где такое количество эквивалентно, по меньшей мере, 0,7 мг семаглутида в неделю; и где указанную композицию вводят один раз в неделю или реже, и где указанный агонист GLP-1 и/или введение необязательно необязательно представляют собой такой агонист и/или такое введение, как определено в настоящем документе.

Краткое описание графических материалов

На Фиг. 1 показано изменение уровня HbA1c после подкожного введения плацебо, семаглутида или лираглутида людям. * р<0,05 в сравнении с плацебо; ** р<0,001 в сравнении с плацебо (на основе скорректированных средних величин). Исходные значения приведены только для информации: данные скорректированы с помощью модели с учетом исходного значения HbA1c. Данные представляют собой скорректированные с помощью модели средние значения LS, FAS LOCF. Оценки получены из модели ANOVA с лечением, где страна и предшествующее лечение выступали в качестве фиксированных эффектов, и исходное значение HbA1c служило в качестве ковариата.

На Фиг. 2 показано среднее изменение HbA1c со временем по сравнению с исходным значением; данные представляют собой средние значения (1.96SE), FAS LOCF. Варианты лечения представляют собой плацебо (А); семаглутид, 0,1 мг (В, пунктирная линия), 0,2 мг (С), 0,4 мг (D), 0,8 мг (Е), 0,8 мг Т (F, пунктирная линия), 1,6 мг Т (G); лираглутид, 1,2 мг (Н), 1,8 мг (I).

На Фиг. 3 приведены субъекты, удовлетворяющие АСЕ или ADA критериям для гликемического контроля. Количество пациентов, удовлетворяющих критерию для каждого варианта лечения, указано в каждой строке. Варианты лечения представляют собой плацебо (А); семаглутид, 0,1 мг (В), 0,2 мг (С), 0,4 мг (D), 0,8 мг (Е), 0,8 мг Т (F), 1,6 мг Т (G); лираглутид, 1,2 мг (Н), 1,8 мг (I). * р<0,05 в сравнении с плацебо; ** р<0,001 в сравнении с плацебо; *** р<0,0001 в сравнении с плацебо (на основе скорректированных средних величин). Данные представляют собой FAS LOCF. Оценки получены из регрессионной логистической модели с лечением, где страна и предшествующее лечение выступали в качестве фиксированных эффектов, и исходное значение HbA1c служило в качестве ковариата. ADA, Американская диабетическая ассоциация; ААСЕ, Американская ассоциация клинических эндокринологов.

На Фиг. 4 показано изменение веса тела со временем; данные представляют собой средние значения (1.96SE), FAS LOCF. Варианты лечения представляют собой плацебо (А); семаглутид, 0,1 мг (В, пунктирная линия), 0,2 мг (С), 0,4 мг (D), 0,8 мг (Е), 0,8 мг Т (F, пунктирная линия), 1,6 мг Т (G); лираглутид, 1,2 мг (Н), 1,8 мг (I).

На Фиг. 5 показано изменение веса тела на 12 неделе по сравнению с исходным значением. ** р<0,001 в сравнении с плацебо; *** р<0,0001 в сравнении с плацебо (на основе скорректированных средних величин), f: исходные значения приведены только для информации: данные скорректированы с помощью модели с учетом исходного веса тела. Данные представляют собой скорректированные с помощью модели средние значения LS, FAS LOCF. Оценки получены из модели ANOVA с лечением, где страна и предшествующее лечение выступали в качестве фиксированных эффектов, и исходное значение веса тела служило в качестве ковариата.

SE: стандартная ошибка. FAS: набор данных для полного анализа. LOCF: перенос данных последнего наблюдения вперед.

Описание

Настоящее изобретение относится к улучшенному применению агонистов GLP-1 в терапии. В одном из вариантов воплощения настоящее изобретение относится к конкретному режиму дозирования агонистов GLP-1, который обеспечивает улучшенный эффект при заболеваниях или состояниях, такой как предотвращение и/или лечение диабета 2 типа и ожирения. В одном из вариантов воплощения способы настоящего изобретения неожиданно обеспечивают улучшенное снижение HbA1c и снижение веса тела. В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 вводят в количестве, которое обеспечивает улучшенное а) снижение HbA1c или b снижение веса тела по сравнению с введением 1,8 мг лираглутида в день или менее, например 0,8 мг лираглутида в день или менее.

В одном из вариантов воплощения настоящее изобретение относится к способу снижения HbA1c или предотвращения или лечения диабета 2 типа, гипергликемии, нарушения толерантности к глюкозе или инсулиннезависимого диабета, где указанный способ включает введение нуждающемуся в этом субъекту агониста GLP-1 в количестве, по меньшей мере, 0,7 мг в неделю, где такое количество эквивалентно, по меньшей мере, 0,7 мг семаглутида в неделю. В одном из вариантов воплощения способ представляет собой способ снижения HbA1c. В одном из вариантов воплощения способ представляет собой способ предотвращения или лечения диабета 2 типа. В одном из вариантов воплощения способ представляет собой способ предотвращения или лечения гипергликемии. В одном из вариантов воплощения способ представляет собой способ предотвращения или лечения нарушения толерантности к глюкозе. В одном из вариантов воплощения способ представляет собой способ предотвращения или лечения инсулиннезависимого диабета. В одном из вариантов воплощения способ настоящего изобретения включает замедление или предотвращение прогрессирования диабетического заболевания. В одном из вариантов воплощения достигается уровень HbA1c ниже 7%. В одном из вариантов воплощения уровень HbA1c определяют в соответствии со способом, определенным Исследованием по контролю диабета и его осложнений (DCCT). В одном из вариантов воплощения уровень HbA1c определяют в соответствии со способом, определенным Международной федерацией клинической химии (IFCC).

В одном из вариантов воплощения настоящее изобретение относится к способу лечения или предотвращения ожирения, снижения веса тела и/или потребления пищи или стимулирования насыщения, где указанный способ включает введение нуждающемуся в этом субъекту агониста GLP-1 в количестве, по меньшей мере, 0,7 мг в неделю, где такое количество эквивалентно, по меньшей мере, 0,7 мг семаглутида в неделю. В одном из вариантов воплощения способ представляет собой способ предотвращения или лечения ожирения. В одном из вариантов воплощения способ представляет собой способ снижения веса тела и/или потребления пищи. В одном из вариантов воплощения способ представляет собой способ стимулирования насыщения.

В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 имеет время полужизни, по меньшей мере, 24 часа, например, по меньшей мере, 48 часов, по меньшей мере, 60 часов, или, по меньшей мере, 72 часа, или, например, по меньшей мере, 84 часа, по меньшей мере, 96 часов, или, по меньшей мере, 108 часов, или, необязательно, по меньшей мере, 120 часов, по меньшей мере, 132 часа, или, по меньшей мере, 144 часов, где указанный время полужизни необязательно определяют с помощью анализа (II).

В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 вводят дважды в неделю или реже, один раз в неделю или реже, или один раз в неделю или реже. В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 вводят один раз в две недели или реже, один раз в три недели или реже либо один раз в месяц или реже.

В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 вводят в количестве, составляющем, по меньшей мере, 0,8 мг в неделю, по меньшей мере, 0,9 мг в неделю, или, по меньшей мере, 1,0 мг в неделю. В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 вводят в количестве, составляющем, по меньшей мере, 1,1 мг в неделю, по меньшей мере, 1,2 мг в неделю, или, по меньшей мере, 1,3 мг в неделю. В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 вводят в количестве, составляющем, по меньшей мере, 1,4 мг в неделю, по меньшей мере, 1,5 мг в неделю, или, по меньшей мере, 1,6 мг в неделю.

В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 вводят в количестве, эквивалентном, по меньшей мере, 0,8 мг семаглутида в неделю, по меньшей мере, 0,9 мг семаглутида в неделю, или, по меньшей мере, 1,0 мг семаглутида в неделю. В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 вводят в количестве, эквивалентном, по меньшей мере, 1,1 мг семаглутида в неделю, по меньшей мере, 1,2 мг семаглутида в неделю, или, по меньшей мере, 1,3 мг семаглутида 6 неделю. В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 вводят в количестве, эквивалентном, по меньшей мере, 1,4 мг семаглутида в неделю, по меньшей мере, 1,5 мг семаглутида в неделю, или, по меньшей мере, 1,6 мг семаглутида в неделю.

В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 выбирают из группы, состоящей из семаглутида, эксенатида, албиглутида и дулаглутида.

В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 вводят путем парентерального введения, такого как подкожная инъекция.

В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 представляет собой пептид GLP-1. В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 включает не больше чем 5, например, не больше чем 4 или не больше чем 3 аминокислотных остатка, которые были замещены, вставлены или удалены по сравнению с GLP-1 (7-37). В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 включает не больше чем 4 аминокислотных остатка, которые не кодируются генетическим кодом.

В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 представляет собой защищенный от DPPIV пептид GLP-1. В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 является стабилизированным по отношению к DPPIV.

В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 имеет ЕС₅₀, составляющую 3000 пМ или меньше, например 500 пМ или меньше или 100 пМ или меньше, где ЕС₅₀ необязательно определяют с помощью анализа (I).

В одном из вариантов воплощения настоящее изобретение относится к агонисту GLP-1 для применения для снижения HbA1c или для применения для предотвращения или лечения диабета 2 типа, гипергликемии, нарушения толерантности к глюкозе или инсулиннезависимого диабета, включающего введение агониста GLP-1 в количестве, по меньшей мере, 0,7 мг в неделю, где такое количество эквивалентно, по меньшей мере, 0,7 мг семаглутида в неделю. В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 и/или введение представляют собой такой агонист GLP-1 и/или такое введение, как определено в настоящем документе.

В одном из вариантов воплощения настоящее изобретение относится к агонисту GLP-1 для применения для предотвращения или лечения ожирения, для снижения веса тела и/или потребления пищи, или для стимулирования насыщения, включающего введение агониста GLP-1 в количестве, по меньшей мере, 0,7 мг в неделю, где такое количество эквивалентно, по меньшей мере, 0,7 мг семаглутида в неделю. В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 и/или введение представляют собой такой агонист GLP-1 и/или такое введение, как определено в настоящем документе.

В одном из вариантов воплощения настоящее изобретение относится к композиции, включающей агонист GLP-1 и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов, для применения для снижения HbA1c или для предотвращения или лечения диабета 2 типа, гипергликемии, нарушения толерантности к глюкозе или инсулиннезависимого диабета, где указанный агонист GLP-1 вводят в количестве, по меньшей мере, 0,7 мг в неделю, где такое количество эквивалентно, по меньшей мере, 0,7 мг семаглутида в неделю. В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 и/или введение представляют собой такой агонист GLP-1 и/или такое введение, как определено в настоящем документе.

В одном из вариантов воплощения настоящее изобретение относится к композиции, включающей агонист GLP-1 и один или несколько фармацевтически приемлемых эксципиентов для применения для предотвращения или лечения ожирения, для снижения веса тела и/или потребления пищи, или для стимулирования насыщения, где указанный агонист GLP-1 вводят в количестве, по меньшей мере, 0,7 мг в неделю, где такое количество эквивалентно, по меньшей мере, 0,7 мг семаглутида в неделю. В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 и/или введение представляют собой такой агонист GLP-1 и/или такое введение, как определено в настоящем документе.

В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 вводят с другим терапевтическим агентом. Введение с другим терапевтическим агентом может быть осуществлено как введение агониста GLP-1 и другого терапевтического агента в одном и том же терапевтическом окне (например, в течение двух недель, одной недели, или в течение 96, 72, или 48 часов, и т.п.). Лечение с помощью агониста GLP-1 в соответствии с настоящим изобретением может быть комбинировано с одним или несколькими дополнительными терапевтическими агентами, например, выбранными из антидиабетических агентов, агентов против ожирения, агентов, регулирующих аппетит, антигипертензивных агентов, агентов для лечения и/или предотвращения осложнений, вызванных диабетом или ассоциированных с диабетом, и агентов для лечения и/или предотвращения осложнений и расстройств, вызванных или ассоциированных с ожирением; примерами таких терапевтических агентов являются сульфонилмочевины, тиазолидиндионы, бигуаниды, меглитиниды, ингибиторы глюкозидазы, антагонисты глюкагона и ингибиторы DPPIV (дипептидил пептидаза-IV).

В одном из вариантов воплощения в настоящем документе выражение "эквивалентное количество", когда оно используется по отношению к агонистам GLP-1, относится к количествам первого агониста GLP-1 и второго агониста GLP-1, имеющим активность к рецептору GLP-1 (т.е. ЕС₅₀) в пределах ±30%, например в пределах ±20% или в пределах ±10% друг от друга, где активность необязательно определяют с помощью анализа (I), описанного в настоящем документе, и имеющим время полужизни в пределах ±30%, например, где время полужизни необязательно определяют с помощью анализа (II), описанного в настоящем документе.

В одном из вариантов воплощения в настоящем документе "эффективное количество" агониста GLP-1 означает количество, достаточное для лечения, облегчения или частичного купирования клинических проявлений данного заболевания или стадии и их осложнений. Количество, достаточное для этой цели, определяется как "эффективное количество". Эффективные количества для каждой цели будут зависеть от тяжести заболевания или повреждения, а также от веса и общего состояния здоровья субъекта. Следует иметь в виду, что определение подходящей дозы можно осуществить с использованием рутинного экспериментирования, путем построения матрицы значений и тестирования различных точек в матрице, все это находится в пределах компетентности врача или ветеринара.

В одном из вариантов воплощения использованный в настоящем документе термин "лечение" означает ведение и уход за пациентом с целью борьбы с состоянием, таким как заболевание или расстройство. В одном из вариантов воплощения термин "лечение" предназначен для включения полного спектра видов лечения данного состояния, от которого страдает пациент, например, введение активного соединения для облегчения симптомов или осложнений; для замедления прогрессирования заболевания, расстройства или состояния; для облегчения или снятия симптомов и осложнений; и/или для излечения или устранения заболевания, расстройства или состояния, а также для предотвращения состояния. В одном из вариантов воплощения предотвращение следует понимать как ведение и уход за пациентом с целью борьбы с заболеванием, состоянием или расстройством, и оно включает введение активных соединений для предотвращения появления симптомов или осложнений.

В одном из вариантов воплощения использованный в настоящем документе термин "гидрофильный спейсер" означает спейсер, который разделяет пептид и связывающий альбумин остаток химическим фрагментом, который включает, по меньшей мере, 5 атомов, отличающихся от водорода, 30-50% из которых представляют собой N или О.

В одном из вариантов воплощения использованный в настоящем документе термин "аналог" по отношению к полипептиду означает модифицированный пептид, где один или несколько аминокислотных остатка пептида были замещены другими аминокислотными остатками, и/или где один или несколько аминокислотных остатков были удалены из пептида, и/или где один или несколько аминокислотных остатка были добавлены к пептиду. Такое добавление или удаление аминокислотных остатков может быть осуществлено на N-конце пептида и/или на С-конце пептида. Для описания аналогов используется простая система: например Arg³⁴GLP-1 (7-37) Lys обозначает аналог GLP-1, в котором встречающийся в природе лизин в позиции 34 был замещен на аргинин и остаток лизина был добавлен к С-концу (позиция 38).

В одном из вариантов воплощения использованный в настоящем документе термин "пептид GLP-1" означает GLP-1 (7-37), аналог GLP-1, производное GLP-1 или производное аналога GLP-1.

В одном из вариантов воплощения использованный в настоящем документе термин "эксендин-4 пептид" означает эксендин-4 (1-39), аналог эксендина-4, производное эксендина-4 или аналог производного эксендина-4.

В одном из вариантов воплощения использованный в настоящем документе термин "защищенный от DPP-IV" по отношению к полипептиду означает полипептид, который был химически модифицирован, чтобы сделать указанное соединение устойчивым к пептидазе плазмы дипептидиламинопептидазе-4 (DPP-IV). Известно, что фермент DPP-IV в плазме участвует в деградации некоторых пептидных гормонов, например, GLP-1, эксендина-4 и т.п. Поэтому были приложены значительные усилия для разработки агонистов GLP-1, менее чувствительных к гидролизу, опосредованному DPP-IV, чтобы снизить скорость деградации в результате действия DPP-IV.

Настоящее изобретение также относится к агонисту GLP-1 по настоящему изобретению для применения в качестве лекарственного средства. В конкретных вариантах воплощения, агонист GLP-1 по настоящему изобретению может применяться для следующих видов терапевтического лечения:

(i) для предотвращения и/или лечения всех форм диабета, таких как гипергликемия, диабет 2 типа, нарушение толерантности к глюкозе, диабет 1 типа, инсулиннезависимый диабет, MODY (диабет взрослого типа у молодых), гестационный диабет, и/или для снижения HbA1c;

(ii) для замедления или предотвращения прогрессирования диабетического заболевания, например прогрессирования диабета 2 типа, замедления прогрессирования нарушения толерантности к глюкозе (IGT) до инсулинозависимого диабета 2 типа и/или замедления прогрессирования инсулиннезависимого диабета 2 типа до инсулинозависимого диабета 2 типа;

(iii) для предотвращения и/или лечения расстройств, таких как ожирение, например, путем уменьшения потребления пищи, снижения веса тела, подавления аппетита, стимулирования насыщения; для лечения или предотвращения компульсивного переедания, нервной булимии и/или ожирения, вызванного введением антипсихотика или стероида; снижения двигательной функции желудка; и/или замедления опорожнения желудка.

В другом конкретном варианте воплощения показанием является (i). В еще одном конкретном варианте воплощения показанием является (ii). В еще одном варианте воплощения показанием является (iii). В одном из вариантов воплощения показанием является диабет 2 типа и/или ожирение.

В одном из вариантов воплощения способ включает предотвращение, лечение, снижение и/или индукционную терапию одного или нескольких заболеваний или расстройств, определенных в настоящем документе. В одном из вариантов воплощения показаниями являются (i) и (iii). В одном из вариантов воплощения показаниями являются (ii) и (iii). В одном из вариантов воплощения способ включает предотвращение, лечение, снижение и/или индукционную терапию одного или нескольких заболеваний или расстройств, выбранных из а) и b), а) и с), b) и с) или а), b) и с), как определено в пункте 1 формулы изобретения.

В одном из вариантов воплощения настоящее изобретение относится к введению эффективного количества агониста GLP-1.

В одном из вариантов воплощения использованные в настоящем документе конкретные значения, приведенные в отношении чисел или интервалов, можно понимать как конкретное значение или как примерно конкретное значение.

Функциональные свойства

В первом функциональном аспекте, агонисты GLP-1 по настоящему изобретению имеют высокую активность. Также, или альтернативно, во втором функциональном аспекте, агонисты GLP-1 по настоящему изобретению имеют продолжительный фармакокинетический профиль. Также, или альтернативно, в третьем функциональном аспекте, агонисты GLP-1 по настоящему изобретению являются стабильными по отношению к деградации пищеварительными ферментами.

Биологическая активность (активность)

В соответствии с первым функциональным аспектом, агонисты GLP-1 по настоящему изобретению являются биологически активными, или активными. В конкретном варианте воплощения, "активность" относится к активности in vitro, т.е. эффективности в анализе функциональных свойств рецептора GLP-1, более конкретно к способности стимулировать образование цАМФ в клеточной линии, экспрессирующей клонированный человеческий рецептор GLP-1.

Стимулирование образования цАМФ в среде, содержащей человеческий рецептор GLP-1, можно предпочтительно определить с использованием стабильной трансфицированной клеточной линии, такой как ВНК467-12А (tk-ts13), и/или, используя для определения цАМФ анализ функциональных свойств рецептора, например, на основе конкуренции между эндогенно образованным цАМФ и экзогенно добавленным цАМФ, меченным биотином, где анализ цАМФ предпочтительно осуществлен с использованием специфичных антител, и/или где более предпочтительным анализом является анализ цАМФ AlphaScreen, такой как описанный в анализе (I).

В одном из вариантов воплощения термин полумаксимальная эффективная концентрация (ЕС₅₀) обычно относится к концентрации, которая индуцирует ответ, составляющий половину между исходным значением и максимумом в соответствии с кривой доза-ответ.ЕС₅₀ используется в качестве меры активности соединения и представляет собой концентрацию, при которой наблюдается 50% от максимального эффекта соединения.

Активность агонистов GLP-1 по настоящему изобретению in vitro можно определить, как описано выше, и ЕС₅₀ исследуемых агонистов GLP-1 были определены. Чем ниже ЕС₅₀, тем лучше активность.

В конкретном варианте воплощения среда имеет следующий состав (конечные концентрации в анализе): 50 мМ Трис-HCl; 5 мМ HEPES; 10 мМ MgCl₂ × 6H₂O; 150 мМ NaCl; 0,01% Tween; 0,1% BSA; 0,5 мМ IBMX; 1 мМ АТФ; 1 мкМ ГТФ; рН 7,4.

В другом конкретном варианте воплощения агонист GLP-1 по настоящему изобретению имеет активность in vitro, соответствующую ЕС₅₀, равной 3000 пМ или меньше, например, 2000 пМ или меньше, 1000 пМ или меньше или 500 пМ или меньше, или, например, меньше 200 пМ или меньше 100 пМ.

В другом конкретном варианте воплощения агонист GLP-1 по настоящему изобретению является активным in vivo, что можно определить, как известно в данной области техники, в любой подходящей модели на животных, а также в клинических исследованиях.

Мышь диабетической линии db/db являются примером подходящей модели на животных, и эффект снижения уровня глюкозы в крови можно определить в таких мышах in vivo, например, как описано в анализе (III), или как описано в Примере 43 в WO 09/030738.

Также, или альтернативно, влияние на потребление пищи in vivo можно определить в фармакологических исследованиях на свиньях, например, как описано в анализе (IV).

Увеличение продолжительности действия - время полужизни in vivo в карликовых свиньях

В соответствии со вторым функциональным аспектом, агонисты GLP-1 по настоящему изобретению имеют увеличенную продолжительность действия. В конкретном варианте воплощения увеличение продолжительности действия можно определить как время полужизни (Т_½) in vivo в карликовых свиньях после внутривенного введения. В дополнительных вариантах воплощения время полужизни составляет, по меньшей мере, 24 часа, например, по меньшей мере, 48 часов, по меньшей мере, 60 часов, по меньшей мере, 72 часа, или например, по меньшей мере, 84 часа, по меньшей мере, 96 часов, или, по меньшей мере, 108 часов.

Подходящий анализ для определения времени полужизни in vivo в карликовых свиньях после внутривенного введения раскрыт в анализе (II).

Деградация пищеварительными ферментами

В соответствии с третьим функциональным аспектом, агонисты GLP-1 по настоящему изобретению являются стабильными или стабилизированными по отношению к деградации одним или несколькими пищеварительными ферментами.

Пищеварительные ферменты включают, без ограничения, экзо- и эндопептидазы, такие как пепсин, трипсин, химотрипсин, эластазы и карбоксипептидазы. Стабильность можно тестировать по отношению к этим пищеварительным ферментам в форме очищенных ферментов или в форме экстрактов из желудочно-кишечного тракта.

В конкретном варианте воплощения, агонист GLP-1 по настоящему изобретению имеет время полужизни (Т_½) in vitro в экстракте тонкого кишечника крысы, деленное на соответствующее время полужизни (Т_½) GLP-1(7-37), составляющее, по меньшей мере, 1, например, выше 1,0, по меньшей мере, 1,2, по меньшей мере, 2,0, или, например, по меньшей мере, 3,0, или, по меньшей мере, 4,0. Другими словами, соотношение (SI) можно определить для каждого агониста GLP-1, а именно как время полужизни (Т_½) in vitro исследуемого агониста GLP-1 в экстракте тонкого кишечника крысы, деленное на соответствующее время полужизни (Т_½) GLP-1(7-37).

Подходящий анализ для определения времени полужизни in vitro в экстрактах тонкого кишечника крысы раскрыт в анализе (V).

Агонисты GLP-1

В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 включает остаток Aib в позиции 8.

В одном из вариантов воплощения аминокислотный остаток в позиции 7 указанного пептида GLP-1 выбран из группы, состоящей из D-гистидина, дезамино-гистидина, 2-амино-гистидина, β-гидрокси-гистидина, гомогистидина, N^α-ацетил-гистидина, α-фторметил-гистидина, α-метил-гистидина, 3-пиридилаланина, 2-пиридилаланина и 4-пиридилаланина.

В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 присоединен к гидрофильному спейсеру через аминокислотный остаток в позиции 23, 26, 34, 36 или 38 в соответствии с аминокислотной последовательностью GLP-1 (7-37).

В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 представляет собой эксендин-4, аналог эксендина-4 или производное эксендина-4.

В одном из вариантов воплощения пептидный агонист GLP-1 включает аминокислотную последовательность в соответствии со следующей формулой:

H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂.

В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 включает связывающий альбумин остаток, присоединенный через гидрофильный спейсер к С-концевому аминокислотному остатку указанного пептида GLP-1.

В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 включает второй связывающий альбумин остаток, присоединенный к аминокислотному остатку, который не является С-концевым аминокислотным остатком.

В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 выбран из группы, состоящей из смаглутида, албиглутида и дулаглутида.

В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 имеет следующую структуру:

His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-

Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Aib-Arg.

В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 имеет следующую структуру:

(His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-

Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg)2-

генетически слитый с человеческим альбумином.

В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 представляет собой дулаглутид.

В одном из вариантов воплощения агонисты GLP-1 по настоящему изобретению имеют активность GLP-1. В одном из вариантов воплощения термин "агонист GLP-1" следует понимать, как относящийся к любому соединению, включая пептидные и непептидные соединения, которые полностью или частично активируют человеческий рецептор GLP-1. В одном из вариантов воплощения "агонист GLP-1" представляет собой любое пептидное или непептидное низкомолекулярное соединение, которое связывается с рецептором GLP-1, предпочтительно с аффинной константой (K_D) или активностью (ЕС₅₀), составляющей меньше 1 мкМ, например, меньше 100 нМ, как измерено способами, известными в данной области техники (см., например, WO 98/08871). В одном из вариантов воплощения способы для идентификации агонистов GLP-1 описаны в WO 93/19175 (Novo Nordisk A/S), и примеры подходящих агонистов GLP-1, которые могут применяться в соответствии с настоящим изобретением, включают агонисты GLP-1, которые приведены в WO 2005/027978 (Novo Nordisk A/S), где раскрытия обеих заявок включены в настоящий документ посредством ссылки. "Активность GLP-1" относится к способности связываться с рецептором GLP-1 и инициировать путь передачи сигнала, приводящий к инсулинотропному действию или другим физиологическим эффектам, как это известно в данной области техники. Например, агонисты GLP-1 по настоящему изобретению можно протестировать на активность GLP-1 с использованием анализа, описанного в анализе (I) в настоящем документе.

В еще одном другом варианте воплощения агонист GLP-1 представляет собой стабильный агонист GLP-1. Использованный в настоящем документе термин "стабильный агонист GLP-1" означает агонист GLP-1, который имеет время полувыведения в плазме in vivo, составляющее, по меньшей мере, 24 часа для человека, где время полувыведения необязательно определяют с помощью способа, описанного ниже. Примеры стабильных агонистов GLP-1 можно найти в WO 2006/097537.

В одном из вариантов воплощения способ определения времени полувыведения соединения в плазме человека можно осуществить, как указано далее: соединение растворяют в изотоническом буфере, рН 7,4, PBS или любом другом подходящем буфере. Дозу инъецируют на периферии, предпочтительно в абдоминальную область или верхнюю часть бедра. Образцы крови для определения активного соединения забирают через определенные промежутки времени и в течение достаточного времени для достижения терминальной части элиминации (например, перед введением дозы, через 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 10, 12, 24 (2 день), 36 (3 день), 48 (3 день), 60 (3 день), 72 (4 день) и 84 (4 день) часов после введения дозы). Определение концентрации активного соединения осуществляют, как описано в Wilken et ai, Diabetologia 43 (51), 2000. Получаемые фармакокинетические параметры рассчитывают из данных зависимости концентрации от времени для каждого отдельного субъекта с применением некомпартментных способов с использованием коммерчески доступного программного обеспечения WinNonlin Version 2.1 (Pharsight, Сагу, NC, USA). Константу скорости терминальной элиминации оценивают с помощью логарифмической регрессии на терминальной логарифмической части кривой зависимости концентрации от времени и используют для расчета времени полувыведения.

В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 составлен в виде лекарственной формы таким образом, чтобы иметь время полужизни для человека, составляющее, по меньшей мере, 48 часов. Этого можно добиться с помощью препаратов с замедленным высвобождением, известных в данной области техники.

В одном из вариантов воплощения агонист GLP-1 представляет собой пептид GLP-1. В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 выбран из GLP-1 (7-35), GLP-1 (7-36), GLP-1 (7-36)-амида, GLP-1 (7-37), GLP-1 (7-38), GLP-1 (7-39), GLP-1 (7-40), GLP-1 (7-41) или их аналогов или производных. В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 включает не больше 15, например, не больше 10 или не больше 6 аминокислотных остатков, которые были замещены, вставлены или удалены по сравнению с GLP-1 (7-37). В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 включает не больше 4 аминокислотных остатков, которые не кодируются генетическим кодом. В еще одном варианте воплощения агонист GLP-1 представляет собой эксендин-4 или эксендин-3, аналог эксендина-4 или эксендина-3, или производное любого из них.

В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 выбран из группы, состоящей из семаглутида, эксенатида, албиглутида и дулаглутида. В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 представляет собой семаглутид. WO 06/097537 раскрывает семаглутид (Пример 4), моноацилированный агонист GLP-1 для введения один раз в день. В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 представляет собой эксенатид. В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 включает аминокислотную последовательность, соответствующую формуле: H-His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂.

Эксенатид представляет собой синтетический вариант эксендина-4, гормона, обнаруженного в слюне ящерицы-ядозуба. Эксенатид имеет биологические свойства, аналогичные GLP-1. В некоторых вариантах воплощения композиция представляет собой BYDUREON® (препарат эксенатида с длительным высвобождением в частицах PLGA). В одном из вариантов воплощения "композиция Bydureon®" относится к порошку, содержащему эксенатид, поли(D,L-лактид-когликолид) и сахарозу, который непосредственно перед инъекцией восстанавливают в растворителе, включающем натриевую соль кармеллозы, хлорид натрия, полисорбат 20, одноосновный фосфат натрия (например, его моногидрат), двухосновный фосфат натрия (например, его гептагидрат) и воду для инъекций. В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 имеет структуру (His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg)2-генетически слитый с человеческим альбумином. Албиглутид представляет собой гибридный белок рекомбинантный человеческий сывороточный альбумин(HSA)-GLP-1, вероятно, димер GLP-1, слитый с HSA. Входящий в состав пептид GLP-1 представляет собой аналог, в котором Ala в позиции 8 был замещен на Glu. В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 представляет собой дулаглутид. Дулаглутид представляет собой конструкцию GLP-1-Fc (GLP-1-линкер-Fc из IgG4). В одном из вариантов воплощения пептид GLP-1 имеет структуру His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Lys-Aib-Arg. Лираглутид, представляющий собой моноацилированный агонист GLP-1 для введения один раз в день, который продается с 2009 компанией Novo Nordisk A/S, раскрыт в WO 98/08871, Пример 37.

В одном из вариантов воплощения настоящее изобретение включает фармацевтически приемлемые соли агонистов GLP-1. Такие соли включают фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты, фармацевтически приемлемые соли металлов, аммонийные соли и соли алкиламмония. Также фармацевтически приемлемые соли присоединения кислоты включают гидраты, которые могут образовывать агонисты GLP-1.

В одном из вариантов воплощения способ введения агонистов GLP-1 может представлять собой любой способ, который эффективно транспортирует активное соединение к соответствующему или нужному месту действия, такой как парентеральное введение. В одном из вариантов воплощения лекарственные средства или фармацевтические композиции, включающие агонист GLP-1, такой как семаглутид, можно вводить нуждающемуся в этом пациенту парентерально. В одном из вариантов воплощения парентеральное введение можно осуществить путем подкожной, внутримышечной или внутривенной инъекции с помощью шприца, необязательно, шприца-ручки.

Альтернативно, пар