Ингибирование резорбции кости с помощью связывающих rank-l пептидов

Ингибирование резорбции кости с помощью связывающих rank-l пептидов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение относится к способам ингибирования резорбции кости и/или активности остеокластов в течение продолжительных периодов времени с применением аминокислотных последовательностей, которые направлены против Лиганда Рецептора-Активатора Ядерного фактора Каппа B (RANK-L). Более конкретно, в настоящем изобретении предлагаются полипептиды, направленные против RANK-L, в конкретных дозовых интервалах для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости или активности остеокластов.

Предшествующий уровень техники

Ремоделирование (обновление) кости является процессом, с помощью которого скелет взрослого непрерывно резорбируется (удаляется) и формируется (замещается). Костное ремоделирование включает в себя синтез костного матрикса с помощью остеобластов и его резорбцию клетками остеокластов. Остеокласты, выделенные из гематопоэтических клеток, представляют собой уникальные формы тканевых макрофагов, которые обладают способностью резорбции костной ткани. Остеобласты представляют собой специализированные фибробласты, которые обладают способностью секретировать костный коллаген. Существует тонкая координация среди активностей этих костных клеток, которая связывает процессы образования кости и резорбции кости.

Ремоделирование кости контролируется с помощью баланса между RANK-L/RANK и OPG, который является ложным рецептором RANK-L. RANK-L и его рецептор RANK являются существенными для развития и активации остеокластов. Секретируемый белок OPG является эффективным ингибитором созревания и активации остеокластов. При нормальном костном гомеостазе RANK-L и OPG участвуют в цитокиновой оси, которая жестко контролирует образование остеокластов из моноцитарных предшественников. RANK-L, экспрессированный остаобластами и стромальными клетками костного мозга, связывается со своим функциональным рецептором RANK для стимуляции дифференцировки остеокластов из клеток-предшественников и пролиферации и активности зрелых остеокластов. OPG, который экспрессируется остеобластами, стромальными клетками, дендритными клетками и мегакариоцитами, ограничивает данный процесс, действуя как растворимый ложный рецептор для RANK-L.

Молекула семейства TNF, RANK-L, кодируется единственным геном (rankl), который находится на хромосоме 13q14 человека. мРНК RANK-L высоко экспрессируется в кости и в костном мозге, а также в лимфоидных тканях (лимфатические узлы, тимус, селезенка, фетальная печень и пейеровы бляшки) (Anderson et al. 1997, Nature 390: 175-179; Wong et al. 1997, J. Biol. Chem. 272: 25190-25194; Lacey et al. 1998, Cell 93: 165-176; Yasuda et al. 1998, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95: 3597-3602). Альтернативный сплайсинг мРНК RANK-L обеспечивает возможность экспрессии в виде трансмембранного гликопротеина типа II длиной 316 или 270 аминокислот или в виде растворимого лиганда длиной 243 аминокислоты (Kong et al. 1999, Nature 397: 315-323; Nagai et al. 2000, Biochem Biophys. Res. Commun. 269: 532-536). Кроме того, RANK-L может высвобождаться из мембрано-связанного состояния с помощью металлопротеиназ, в том числе TNF-альфа конвертазы (Lum et al. 1999, J. Biol. Chem. 274: 13613-13618). Все четыре изоформы RANK-L ассоциированы в тримерные молекулы, способные к передаче сигналов остеокластогенеза.

RANK (рецептор-активатор NFкаппаB; также известный как TRANCE-R, ODAR, или TNFRSF11A), экспрессированный на преостеокластах, представляет собой единственный рецептор для RANK-L на этих клетках (Li et al. 2000, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 97: 1566-1571). За активацией RANK с помощью RANK-L следует его взаимодействием с членами семейства TNF-рецептор-ассоциированных белков (TRAF), активация ядерного фактора (NF)-каппа B и c-Fos, JNK, c-src, и серин/треониновой киназы Akt/PKB (Anderson et al. 1997, Nature 390: 175-179; Hsu et al. 1999, Proc. Acad. Sci. USA 96: 3540-3545).

OPG (остеопротегерин; «протектор кости»; также известный как фактор, ингибирующий остеокластогенез (OCIF)), представляет собой растворимый 110-кДа, дисульфидосвязанный гомодимерный гликопротеин, продуцируемый и высвобождаемый активированными остеобластами (Simonet et al. 1997, Cell 89: 309-319). Он гомологичен членам семейства TNF-рецепторов, функционирует в качестве ложного рецептора для RANK-L и конкурирует с RANK за связывание с RANK-L. Следовательно, OPG представляет собой эффективный ингибитор созревания и активации остеокластов (Simonet et al. 1997, Cell 89: 309-319; Lacey et al. 1998, Cell 93: 165-176; Kong et al. 1999, Nature 397: 315-323), с уменьшением, таким образом, резорбции.

Более подробный обзор системы OPG/RANK-L/RANK как медиатора формирования и деструкции кости представлен в Khosla (2001 Endocrinology 142: 5050-5055), Holstead Jones et al. (2002, Ann. Rheum. Dis. 61 (Suppl II): ii32-ii39), Bezerra et al. (2005, Brazilian J. Med. Biol. Res. 38: 161-170) и McClung (2006, Current Osteoporosis Reports 4: 28-33).

Некоторые костные нарушения происходят, когда имеется дисбаланс между компонентами резорбции и формирования активности костного ремоделирования (разобщенность костного гомеостаза). Дисбаланс между активностями остеокластов и остеобластов может возникать в результате широкого спектра гормональных изменений или пертурбаций факторов воспаления и роста, таких как, например, изменение баланса между OPG и RANK-L. Когда резорбция кости идет быстрее, чем формирование кости, то с течением времени происходит чистая потеря костной массы. Это, очевидно, в результате может привести к низкой плотности костной массы (остеопении) или остеопорозу. Когда формирование кости превышает резорбцию, то происходит чистое увеличение костной массы (остеопетроз).

Избыточная потеря костной массы или деструкция, вызванная более высоким уровнем RANK-L, более низким OPG или и тем и другим имеет место при многих болезненных состояниях, включая остеопороз в период постменопаузы (Eghbali-Fatourechi et al. 2003, Journal of Clinical Investigation 111: 1221-1230; Tsangari et al. 2004, Bone 35: 334-342; Abdallah et al. 2005, Calcified Tissue International 76: 90-97).

В течении более чем десяти лет доступны фармакологические агенты для уменьшения риска переломов. Антикатаболические лекарственные средства (эстрогены, бисфосфонаты, кальцитонин и селективные модуляторы эстрогенных рецепторов) уменьшают резорбцию кости, в то время как анаболические агенты, такие как рекомбинантный человеческий гормон паращитовидной железы (РТН), увеличивает формирование кости и размер кости. Бифосфонатный класс лекарственный средств является одним из наиболее часто используемых для лечения остеопороза. Хотя данный класс лекарственных средств, как правило, достаточно безопасен, пероральное введение этих препаратов является сложным и ассоциировано с побочными эффектами со стороны желудочно-кишечного тракта у небольшого количества пациентов в клинической практике. В клинических испытаниях сейчас исследуется внутривенное введение бисфосфонатов с увеличенными интервалами.

Недавнее обнаружение системы OPG/RANK-L/RANK как главных регулирующих факторов в патогенезе костных заболеваний и нарушений типа остеопороза обеспечивает уникальные мишени для терапевтических агентов. У лабораторных животных и у людей введение форм OPG значительно ингибировало активность остеокластов и улучшало прочность кости (Bekker et al. 2001, J. Bone Miner. Res. 16: 348-360; Campagnuolo et al. 2002, Arthritis Rheum. 46: 1926-1936; Bezerra et al. 2005, Brazilian J. Med. Biol. Res. 38: 161-170; McClung 2006, Current Osteoporosis Reports 4: 28-33). В ранних исследованиях на человеке полноразмерное человеческое антитело против RANK-L («Denosumab») уменьшало обновление кости и улучшало плотность кости (Body et al. 2003, Cancer 97: 887-892; Bekker et al. 2004, J. Bone Miner. Res. 19: 1059-1066; McClung 2006, Current Osteoporosis Reports 4: 28-33; Lewiecki 2006, Expert Opin. Biol. Ther. 6: 1041-1050; McClung et al. 2006, N. Engl. J. Med. 354: 821-831). Однако такие полные антитела сталкиваются с недостатками полноразмерных антител, такими как высокая стоимость получения, низкая стабильность и их большой размер, который, например, затрудняет их доступ к определенным скрытым эпитопам.

Сущность изобретения

Заявитель обнаружил, что введение человеческим субъектам полипептидов, описанных в данном документе, которые специфично связываются с RANKL (также обозначен в данном документе как «полипептид(ы) по изобретению»), обеспечивает неожиданно устойчивый продолжительный эффект в отношении резорбции кости и/или активности остеокластов у человеческих субъектов, что наблюдалось посредством изменений в соответствующих биомаркерах (таких как CTX-1, NTX-1 TRACP5b, PINP, и/или BAP). Например, изменение в одном или в нескольких маркерах костного метаболизма и/или костного гомеостаза может быть измерено в течение, по меньшей мере, 30 дней после введения. Изменение в одном или в нескольких маркерах костного метаболизма и/или костного гомеостаза может проявляться в течение более продолжительных периодов времени, как, например, по меньшей мере, в течение 60 дней, по меньшей мере, в течение 90 дней, по меньшей мере, в течение 120 дней, по меньшей мере, в течение 150 дней, по меньшей мере, в течение 180 дней, по меньшей мере, в течение 210 дней, по меньшей мере, в течение 240 дней, по меньшей мере, в течение 270 дней, по меньшей мере, в течение 300 дней, по меньшей мере, в течение 330 дней, или, по меньшей мере, в течение 360 дней. Данный эффект достигается быстро, что видно по уменьшению количества наблюдаемых биомаркеров, в некоторых воплощениях, через 8 часов после введения полипептида, который специфично связывается с RANKL.

Неожиданно устойчивый продолжительный эффект в отношении RANK-L-опосредованной резорбции кости и активности остеокластов главным образом был вызван гораздо более высокой эффективностью (IC₅₀) полипептида по изобретению in vivo, чем было спрогнозировано на основании известного уровня техники и доклинической информации. Благодаря этой повышенной эффективности полипептида по изобретению наблюдали неожиданный устойчивый и продолжительный эффект в отношении RANK-L-опосредованной резорбции кости и активности остеокластов у человеческих субъектов по сравнению с тем, который оценивали на основе доклинического моделирования. Как следствие требуется вводить меньше терапевтических молекул (т.е. более низкая доза) или необходимо применять менее частое дозирование терапевтической молекулы для того чтобы получить такой же эффект в отношении RANK-L-опосредованной резорбции кости и активности остеокластов (наблюдаемого посредством изменений в соответствующих биомаркерах, таких как CTX-1, NTX-1, TRACP5b, PINP, и/или BAP).

Таким образом, изобретение относится к применению полипептидов, описанных в данном документе, для ингибирования резорбции кости и/или активности остеокластов у субъекта в течение неожиданно продолжительных периодов времени, конкретно принимая во внимание вводимые дозы. Изобретение также предусматривает менее частое введение и/или введение субъекту более низкой дозы полипептидов, описанных в данном документе, с поддержанием при этом эффективного ингибирования резорбции кости и/или активности остеокластов у субъекта в течение неожиданно продолжительных периодов времени, особенно принимая во внимание вводимые дозы. Конкретно, в изобретении предлагаются фармакологически активные агенты, композиции, способы и/или режимы дозирования, которые имеют некоторые преимущества по сравнению с агентами, композициями, способами и/или режимами дозирования, которые используются в настоящее время и/или известны в данной области, включая способность менее частого введения или введения более низких доз с получением эквивалентных эффектов в отношении ингибирования RANK-L-опосредованнной резорбции кости и/или активности остеокластов.

Согласно одному аспекту изобретения предлагаются способы ингибирования резорбции кости или активности остеокластов у субъекта. Способы включают введение субъекту полипептида, который специфично связывается с Лигандом Рецептора Активатора Ядерного Фактора каппа B (RANK-L) (также обозначаемого как «полипептид по изобретению»). Количество вводимого полипептида является эффективным для изменения одного или нескольких маркеров костного метаболизма и/или костного гомеостаза в течение, по меньшей мере, 30 дней после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,01 мг/кг до около 10 мг/кг. В некоторых воплощениях маркеры костного метаболизма выбраны из перекрестно-связывающего телопептида коллагена I типа (CTX-1), N-концевого телопептида коллагена I типа (NTX-1), тартрат-устойчивой изоформы 5b кислой фосфатазы (TRACP5b), N-концевого пропептида проколлагена I типа (P1NP) и специфичной для кости щелочной фосфатазы (BAP). В некоторых воплощениях, один или несколько из CTX-1, NTX-1, TRACP5b, P1NP и BAP измеряют с использованием тИФА, специфичного для CTX-1, NTX-1, или TRACP5b; радиоиммуноанализа, специфичного для P1NP, или иммуноферментного анализа, специфичного для BAP, соответственно.

Согласно другому аспекту изобретения предлагаются способы ингибирования резорбции кости или активности остеокластов у субъекта. Способы включают введение субъекту полипептида, который специфично связывается с Лигандом Рецептора Активатора Ядерного Фактора каппа B (RANK-L) (полипептида по изобретению). Количество вводимого полипептида является эффективным для снижения сывороточного уровня перекрестно-связывающего телопептида коллагена I типа (CTX-1), по меньшей мере, на 30%, по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 30 дней после введения. Изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 30% в течение, по меньшей мере, около 30 дней после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 0,003 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,003 мг/кг до около 0,03 мг/кг. В других воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 30 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 0,003 мг/кг.

В некоторых воплощениях CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 60 дней после введения. Соответственно, изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 30% в течение, по меньшей мере, около 60 дней после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 0,01 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,01 мг/кг до около 0,1 мг/кг. В некоторых воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 30 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 0,01 мг/кг.

В некоторых воплощениях CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 90 дней после введения. Соответственно, изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 30% в течение, по меньшей мере, около 90 дней после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 0,01 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,01 мг/кг до около 0,1 мг/кг. В некоторых воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 90 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 0,01 мг/кг.

В некоторых воплощениях CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 120 дней после введения. Соответственно, изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 30% в течение, по меньшей мере, около 120 дней после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 0,01 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,01 мг/кг до около 0,1 мг/кг. В других воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 120 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 0,01 мг/кг.

В некоторых воплощениях CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 150 дней после введения. Соответственно, изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 30% в течение, по меньшей мере, около 150 дней после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 0,01 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,1 мг/кг до около 1 мг/кг. В некоторых воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 150 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 0,1 мг/кг.

В некоторых воплощениях CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 180 дней после введения. Соответственно, изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 30% в течение, по меньшей мере, около 180 дней после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 0,1 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 1 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,1 мг/кг до около 10 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,1 мг/кг до около 1 мг/кг. В других воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 180 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 0,1 мг/кг. В других воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 180 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 1 мг/кг.

В некоторых воплощениях CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 210 дней после введения. Соответственно, изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 30% в течение, по меньшей мере, около 210 дней после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 0,1 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 1 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,1 мг/кг до около 10 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,1 мг/кг до около 1 мг/кг. В других воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 210 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 0,1 мг/кг. В других воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 210 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 1 мг/кг.

В некоторых воплощениях CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 270 дней после введения. Соответственно, изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 30% в течение, по меньшей мере, около 270 дней после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 0,1 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 1 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,1 мг/кг до около 10 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,1 мг/кг до около 1 мг/кг. В других воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 270 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 0,1 мг/кг. В других воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 30% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 270 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 1 мг/кг.

Согласно другому аспекту изобретения количество вводимого полипептида является эффективным при снижении сывороточного уровня перекрестно-связывающего телопептида коллагена I типа (CTX-1), по меньшей мере, на 45%, по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 30 дней после введения. Таким образом, изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 45% в течение, по меньшей мере, около 30 дней после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 0,01 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,01 мг/кг до около 0,1 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,01 мг/кг до около 3 мг/кг. В других воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 30 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 0,01 мг/кг.

Согласно другому аспекту изобретения количество вводимого полипептида является эффективным при снижении сывороточного уровня перекрестно-связывающего телопептида коллагена I типа (CTX-1), по меньшей мере, на 45%, по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 60 дней после введения. Таким образом, изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 45% в течение, по меньшей мере, около 60 дней после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 0,01 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,01 мг/кг до около 0,1 мг/кг. В некоторых воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 60 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 0,01 мг/кг.

Согласно другому аспекту изобретения количество вводимого полипептида является эффективным при снижении сывороточного уровня перекрестно-связывающего телопептида коллагена I типа (CTX-1), по меньшей мере, на 45%, по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 90 дней после введения. Таким образом, изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 45% в течение, по меньшей мере, около 90 дней после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 0,03 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,03 мг/кг до около 0,3 мг/кг. В некоторых воплощениях, СТХ-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 90 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 0,03 мг/кг.

В некоторых воплощениях CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение от около 30 дней до около 3 месяцев после введения. Соответственно, изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 45% в течение, по меньшей мере, от около 30 дней до около 3 месяцев после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,01 мг/кг до около 0,3 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,03 мг/кг до около 0,3 мг/кг. В некоторых воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 30 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее от около 0,03 мг/кг до около 0,3 мг/кг. В других воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 30 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 0,03 мг/кг.

Согласно другому аспекту изобретения количество вводимого полипептида является эффективным при снижении сывороточного уровня перекрестно-связывающего телопептида коллагена I типа (CTX-1), по меньшей мере, на 45%, по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 120 дней после введения. Таким образом, изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 45% в течение, по меньшей мере, около 120 дней после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 1 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, от около 1 мг/кг до около 1 мг/кг. В других воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 120 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 0,1 мг/кг.

В некоторых воплощениях CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 150 дней после введения. Соответственно, изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 45% в течение, по меньшей мере, около 150 дней после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 1 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 1 мг/кг до около 10 мг/кг. В других воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 150 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 1 мг/кг.

В некоторых воплощениях CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 180 дней после введения. Соответственно, изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 45% в течение, по меньшей мере, около 180 дней после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве, по меньшей мере, 1 мг/кг. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 1 мг/кг до около 10 мг/кг. В других воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 180 дней после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 1 мг/кг.

В некоторых воплощениях CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение от около 3 дней до около 6 месяцев после введения. Соответственно, изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 45% в течение, по меньшей мере, от около 3 дней до около 6 месяцев после введения. В некоторых воплощениях, полипептид вводят в количестве от около 0,3 мг/кг до около 1 мг/кг. В некоторых воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 3 месяцев после введения, и полипептид вводят в количестве от около 0,3 мг/кг до около 1 мг/кг. В других воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 3 месяцев после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 0,3 мг/кг.

В некоторых воплощениях CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение от около 6 месяцев до около 1 года после введения. Соответственно, изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1, на уровне, по меньшей мере, 45% в течение, по меньшей мере, от около 6 месяцев до около 1 года после введения. В некоторых воплощениях полипептид вводят в количестве от около 1 мг/кг до около 10 мг/кг. В некоторых воплощениях полипептид вводят в количестве от около 1 мг/кг до около 3 мг/кг. В некоторых воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 6 месяцев после введения, и полипептид вводят в количестве от около 1 мг/кг до около 3 мг/кг. В других воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 45% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение около 3 месяцев после введения, и полипептид вводят в количестве менее чем или равном 1 мг/кг.

В некоторых воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 50% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 30 дней после введения, как, например, в течение, по меньшей мере, 60 дней после введения, в течение, по меньшей мере, 90 дней после введения, в течение, по меньшей мере, 120 дней после введения, в течение, по меньшей мере, 150 дней после введения, в течение, по меньшей мере, 180 дней после введения, в течение времени, которое является промежуточным по отношению к этим или длиннее, как описано в другом месте в данном документе и как показано в примерах и фигурах, представленных в данном документе. Соответственно изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 50%, по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1 на уровне, по меньшей мере, 50% в течение, по меньшей мере, 60 дней после введения, в течение, по меньшей мере, 90 дней после введения, в течение, по меньшей мере, 120 дней после введения, в течение, по меньшей мере, 150 дней после введения, в течение, по меньшей мере, 180 дней после введения, в течение периода времени, который является промежуточным по отношению к этим или длиннее, как описано в другом месте в данном документе и как показано в примерах и фигурах, представленных в данном документе.

В некоторых воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 60% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 30 дней после введения, как, например, в течение, по меньшей мере, 60 дней после введения, в течение, по меньшей мере, 90 дней после введения, в течение, по меньшей мере, 120 дней после введения, в течение, по меньшей мере, 150 дней после введения, в течение времени, которое является промежуточным по отношению к этим или длиннее, как описано в другом месте в данном документе и как показано в примерах и фигурах, представленных в данном документе. Соответственно изобретение также относится к полипептиду по изобретению для ингибирования RANK-L-опосредованной резорбции кости и/или активности остеокластов, где количество вводимого полипептида эффективно для уменьшения сывороточного уровня CTX-1, по меньшей мере, на 60%, по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем, и для поддержания сывороточного уровня CTX-1 на уровне, по меньшей мере, 60% в течение, по меньшей мере, 60 дней после введения, в течение, по меньшей мере, 90 дней после введения, в течение, по меньшей мере, 120 дней после введения, в течение, по меньшей мере, 150 дней после введения, в течение времени, которое является промежуточным по отношению к этим или длиннее, как описано в другом месте в данном документе и как показано в примерах и фигурах, представленных в данном документе.

В некоторых воплощениях, CTX-1 уменьшается, по меньшей мере, на 70% по сравнению с уровнем до лечения или нормальным уровнем в течение, по меньшей мере, 30 дней после введения, как, например, в течение, по меньшей мере, 60 дней после введения, в течение, по меньшей мере, 90 дней после введения, в течение, по меньшей мере, 120 дней после введения, в течение времени, которое является промежуточным по отношению к этим или длинн