Средство (варианты) и способы восстановления микрофлоры

Средство (варианты) и способы восстановления микрофлоры

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники

Изобретение относится к микробиологии и медицине и может быть использовано для предотвращения и лечения заболеваний и состояний, связанных с нарушением нормальной (аутохтонной) микрофлоры (микробиоты) человека или животных.

Уровень техники

Известен широкий спектр заболеваний, которые могут быть вызваны или которые могут сопровождаться изменениями аутохтонной микрофлоры, или микробиоты (здесь и далее в описании термин «микрофлора» будет использоваться взаимозаменяемо с термином «микробиота»). Это связано с той важной ролью, которую играет микробиота в поддержании жизни и здоровья людей и животных. Установлено, что микробиота стимулирует перистальтику и обновление клеток кишечника, способствует элиминации патогенных микроорганизмов, стимулирует иммунитет, вырабатывает различные молекулы, необходимые макроорганизму, включая некоторые витамины, участвует в пищеварении, инактивирует биологически активные компоненты (биогенные амины) и др.

Выявлено много заболеваний различной локализации, которые сопровождаются или которые могут быть вызваны изменениями аутохтонной микрофлоры. К ним относятся язвенный колит, синдром раздраженного кишечника, синдром повышенной проницаемости кишечника, кандидоз слизистых, дисфункции кишечника, метеоризм, вагиноз и др. Особую опасность представляют изменения аутохтонной микрофлоры, возникающие на фоне гормональных нарушений, длительной антибиотикотерапии, рентгено- и химиотерапии, действия цитостатиков и других лекарственных препаратов, применяемых в трансплантологии, при онкологических заболеваниях, а также в результате применения противоопухолевых лекарственных средств. Кроме того, восстановление микрофлоры улучшает общее самочувствие и тем самым способствует повышению качества жизни.

Для устранения указанных нарушений были предложены разнообразные способы восстановления собственной микрофлоры, в том числе с помощью препаратов, приготовленных из отдельных бактерий аутохтонной микрофлоры (в частности, бифидо- и лактобактерий), комплексов бактерий и комплексов бактерий без их размножения, полученных из фекалий здоровых людей (см. US 6,572,854 "Use of bacteria endowed with arginine deiminase to induce apoptosis and/or reduce an inflammatory reaction and pharmaceutical or dietetic compositions containing such bacteria"; US RE 39,892 "Pharmaceutical compositions containing lactobacilli for treatment of vaginal infections and related method") или из разных бактерий фекалий (см. например, US 6,428,783 "Bank of autochthonous strains of microorganisms and methods of its use for recovery of intestinal microbiocenosis of the men").

Недостатками известных технических решений является отсутствие системного подхода, невысокая эффективность лечения дисбактериоза, обусловленная использованием либо всей микрофлоры кишечника в целом, либо некоторых традиционно применяющихся штаммов, преимущественно штаммов бифидо- и лактобактерий, а также разрозненность сведений и отсутствие научных исследований роли различных микроорганизмов и их различной эффективности для восстановления собственной микрофлоры, что в целом не позволяло до сих пор создать средство, обеспечивающее высокую эффективность лечения дисбактериоза и быстрое выздоровление собственной микрофлоры организма.

Из источников научно-технической и патентной информации неизвестна возможность создания такого банка аутохтонных штаммов микроорганизмов, который, с одной стороны, был бы единообразным, независимо от источника его получения, а с другой стороны, позволял бы получать хорошо воспроизводимые и предсказуемые результаты при восстановлении кишечного микробиоценоза человека.

Задачей предлагаемого изобретения является разработка способа получения лекарственного средства, которое, с одной стороны, было бы индивидуализированным и содержало аутохтонные микроорганизмы, присущие именно данному индивидууму, высокоэффективные для восстановления его кишечной микрофлоры, а с другой стороны, имело бы постоянный состав и обеспечивало хорошо воспроизводимые и предсказуемые результаты.

Настоящее изобретение основано на результатах научных исследований, полученных авторами в ходе изучения состава аутотохтонной микрофлоры разной локализации. В частности, в ходе этих исследований неожиданно было установлено, что микрофлора отделов желудочно-кишечного тракта, в частности слизистой кишечника, ротовой полости и кожи, имеет очень близкий или идентичный качественный состав определенных микроорганизмов, которые условно названы «ядром микрофлоры». В результате исследований было неожиданно установлено, что в пробах слюны, кожи, и в фекалиях содержатся представители одних и тех же таксонов микроорганизмов: в частности, Actinomycetales, Bacteroidales, Flavobacteriales, Bacillales, Lactobacillales, Clostridiales, Erysipelotrichales, Selenomonadales, Fusobacteriales, Neisseriales, Campylobacterales, Pasteurellales. При сходстве качественного состава различия касаются только количественной представленности тех или иных микробов в зависимости от их локализации в организме человека. Возможно, разные условия предпочтительны для определенных микробов, и другие при этом присутствуют в малом количестве, но не исчезают полностью.

Далее, исследования, проведенные в ходе создания настоящего изобретения, показали, что аутохтонная микрофлора наследуется по материнской линии, как это имеет место в случае наследования человеком митохондрий. Таким образом, по меньшей мере митохондрии и ядро микрофлоры детей, вне зависимости от их пола, получены от матери.

Дополнительное исследование было посвящено изучению роли бактериофагов в возникновении изменений микрофлоры, которые называют «болезнями микрофлоры». Известно, что нормальная микрофлора содержит в 10 раз больше бактериофагов, чем бактерий. Бактериофаги играют важную роль в поддержании гомеостаза нормальной микрофлоры. Вместе с тем с едой, питьем и при контакте с другими объектами и субъектами люди постоянно получают из окружающей среды большое число дополнительных бактериофагов, способных вызвать нежелательные изменения микрофлоры, которые могут привести к патологическому состоянию макроорганизма. В экспериментах, проведенных авторами изобретения, введение животным в пищу определенных фагов приводило к возникновению патологического синдрома, который проявляется в виде различных поражений сердца, почек, поджелудочной железы и онкологическими заболеваниями.

Основываясь на этих новых данных, авторы разработали средство и способ профилактики и лечения заболеваний, связанных с нарушениями функций и/или состава нормальной микрофлоры.

Краткое описание изобретения

Задачей изобретения является разработка нового средства и способа восстановления или создания нормальной аутохтонной микрофлоры.

Поставленная задача решается путем приготовления лекарственного средства для восстановления или создания микрофлоры субъекта, представляющего собой композицию, полученную из микроорганизмов, выделенных из собственной нормальной микрофлоры здоровых людей, при этом с данной целью используют микроорганизмы, выделенные из микрофлоры ротовой полости (слюны, слизистых), других отделов желудочно-кишечного тракта (кишечника, желудка и др.), кожи, фекалий. Дополнительно вместе с бактериями микрофлоры можно собрать, хранить и использовать бактериофаги микрофлоры. Перед употреблением средство может быть обогащено собственными бактериями, выращенными на богатой питательной среде в аэробных и анаэробных условиях, после посева хранящихся проб микробиоты.

В качестве донора микрофлоры могут выступать сам субъект-носитель (собственная микрофлора), мать, родные сестры и братья, а также родственники по материнской линии (сестры матери и их дети, все потомки в первом поколении, дети дочерей во втором поколении и т.д.) и другие доноры при отсутствии перечисленных. Собственная микрофлора может быть отобрана у субъекта в детско-юношеском возрасте.

Средство может быть приготовлено непосредственно, когда в нем возникла необходимость, а может быть приготовлено заранее и храниться в банке микрофлоры.

Согласно одному аспекту изобретения, предложено средство для восстановления или создания микрофлоры субъекта, содержащее активный компонент, содержащий микроорганизмы, выделенные из собственной микрофлоры субъекта или микрофлоры донора, выбранного из группы, включающей мать и/или других родственников по материнской линии.

Согласно одному из примеров реализации, микроорганизмы представляют собой бактерии, выделенные из собственной микрофлоры субъекта или микрофлоры донора, выбранного из группы, включающей мать и других родственников по материнской линии.

Согласно одному из примеров реализации, средство может содержать по меньшей мере один микроорганизм, выбранный из микроорганизмов, принадлежащих к: Actinomycetales, Bacteroidales, Flavobacteriales, Bacillales, Lactobacillales, Clostridiales, Erysipelotrichales, Selenomonadales; Fusobacteriales, Neisseriales, Campylobacterales, Pasteurellales.

Согласно одному из примеров реализации, средство может дополнительно содержать по меньшей мере один микроорганизм, выбранный из группы: Aerococcaceae, Burkholderiaceae, Carnobacteriaceae, Coriobacteriaceae, Erysipelotrichaceae, Eubacteriaceae, Lachnospiraceae, Leptotrichiaceae, Micrococcaceae, Peptostreptococcaceae, Porphyromonadaceae, Prevotellaceae, Pseudomonadaceae, Ruminococcaceae, Streptococcaceae, Veillonellaceae.

Согласно одному из примеров реализации, средство может дополнительно содержать археи и грибы, выделенные из собственной микрофлоры субъекта или микрофлоры донора, выбранного из группы, включающей мать и других родственников по материнской линии.

Согласно одному из примеров реализации, микроорганизмы представляют собой бактериофаги, выделенные из собственной микрофлоры субъекта или микрофлоры донора, выбранного из группы, включающей мать и других родственников по материнской линии.

Согласно одному из примеров реализации, микроорганизмы представляют собой бактерии и бактериофаги, выделенные из собственной микрофлоры субъекта или микрофлоры донора, выбранного из группы, включающей мать и других родственников по материнской линии.

Согласно одному из примеров реализации, соотношение бактерий к бактериофагам выбрано из следующих соотношений: от 1000:1 до 100:1, от 100:1 до 10:1, от 10:1 до 1:10; от 1:10 до 1:100; от 1:100 до 1:1000.

Согласно одному из примеров реализации, активный компонент в указанном средстве обогащен дополнительными микроорганизмами микрофлоры, выращенными на питательной среде, причем дополнительные микроорганизмы микрофлоры включают пока не культивируемые в отсутствие организма хозяина микроорганизмы микрофлоры.

Согласно одному из примеров реализации, средство согласно любому из вышеописанных аспектов дополнительно содержит по меньшей мере один фармацевтически приемлемый наполнитель.

Согласно одному из примеров реализации, фармацевтически приемлемый наполнитель выбран из группы, включающей следующие вещества: изотонический раствор хлорида натрия, активированный уголь, диоксид кремния, мел, сахар, лактоза, желатин, крахмал, поливиниловый спирт (ПВС), поливинилпирролидон (ПВП), целлюлоза, метил целлюлоза (МЦ), оксипропилметил целлюлоза (ОПМЦ), карбоксиметилцеллюлоза (КМЦ), натрий-карбоксиметилцеллюлоза (Na-КМЦ) и другие вещества, традиционно используемые в качестве фармацевтически приемлемых наполнителей.

Согласно одному из примеров реализации, активный компонент получен путем выращивания по меньшей мере части микроорганизмов, выделенных из микрофлоры указанного субъекта или микрофлоры донора, в аэробных и/или анаэробных условиях.

Согласно одному из примеров реализации, активный компонент получен путем выращивания по меньшей мере от 100 бактерий на 1 мл до 1000 бактерий на 1 мл, от 1000 бактерий на 1 мл до 10000 бактерий на 1 мл, от 10³ до 10⁵ бактерий на 1 мл, от 10⁵ до 10⁷ бактерий на 1 мл, от 10⁷ до 10⁹ бактерий на 1 мл, от 10⁹ до 10¹² бактерий на 1 мл или большего числа бактерий на 1 мл.

Согласно одному из примеров реализации, активный компонент содержит микроорганизмы, выделенные из микрофлоры, полученной из слюны, слизистых, кожи, желудочно-кишечного тракта, фекалий, с добавлением микроорганизмов из этой микрофлоры, выращенных на питательной среде и добавленных непосредственно перед приемом средства.

Согласно одному из примеров реализации, активный компонент содержит микроорганизмы, выделенные из микрофлоры слюны, слизистых, кожи, желудочно-кишечного тракта, фекалий, собранных в момент времени, предшествующий моменту воздействия на организм субъекта, которое может повлиять на состав нормальной микрофлоры.

Согласно одному из примеров реализации, активный компонент содержит микроорганизмы, выделенные из собственной микрофлоры субъекта или микрофлоры донора с добавлением микроорганизмов из этой микрофлоры, выращенных на питательной среде и добавленных до начала приема средства. В частности, микроорганизмы, предназначенные для добавления к активному компоненту для его обогащения, могут быть выращены на питательной среде и добавлены за период времени от 1 часа до 80 лет, примерно за один час, за период времени от 1 часа до 1 суток, примерно за 1 день, за период времени от 1 суток до 1 месяца, примерно за 1 месяц, за период времени от одного месяца до одного года, примерно за 1 год, за период времени от 1 года до 80 лет, до начала приема средства.

Согласно одному из примеров реализации, момент времени, предшествующий моменту начала воздействия на организм субъекта, представляет собой момент времени в детско-юношеском возрасте субъекта.

Согласно одному из примеров реализации, активный компонент приготовлен в форме, пригодной для замораживания и длительного хранения.

Согласно одному из примеров реализации, средство дополнительно содержит вспомогательные вещества, снижающие текучесть.

Согласно одному из примеров реализации, вспомогательные вещества, снижающие текучесть, выбраны из группы, включающей латекс, сорбент, полиэтиленгликоль, агар-агар, желатин, микробные питательные среды и другие вещества, способные снижать текучесть.

Согласно одному из примеров реализации, средство дополнительно содержит бактерии микрофлоры, повышающие способность микроорганизмов колонизовать определенные участки кожи или слизистой.

Согласно другому примеру реализации, средство содержит бактерии, которые обеспечивают колонизационную резистентность, в частности, вырабатывают вещества, которые подавляют и угнетают развитие чужеродных микробов, и не влияют или способствуют развитию собственных штаммов и видов, благодаря чему возникают ассоциации микроорганизмов, благотворно влияющих на жизнедеятельность организма в целом.

Согласно еще одному аспекту, предложена фармацевтическая дозированная форма для профилактики и/или лечения заболеваний и/или состояний, связанных с и/или сопровождающихся нарушением или отсутствием собственной микрофлоры субъекта, содержащая средство согласно описанному аспекту и примерам реализации и фармацевтически приемлемый наполнитель.

Согласно одному из примеров реализации, средство или фармацевтическая дозированная форма могут быть приготовлены в виде капсул, таблеток, пеллет, каплет, порошка, аэрозоля, лиофилизата, геля, крема суспензии, эмульсии, взвеси в питательной среде или другой подходящей жидкости, например, в воде.

Согласно одному из примеров реализации, средство или фармацевтическая дозированная форма могут быть приготовлены в форме, выбранной из форм, пригодных для растворения в ротовой полости, тонком кишечнике, желудке, толстой кишке, форм для буккального или сублингвального введения, форм для трансмукозального введения, например, с помощью эндоскопа, форм для интравагинального введения.

Согласно еще одному аспекту, предложен набор для профилактики и/или лечения заболеваний и/или состояний, связанных с и/или сопровождающихся нарушением или отсутствием собственной микрофлоры, содержащий средство или по меньшей мере одну фармацевтическую дозированную форму согласно любому из описанных аспектов и инструкции по введению субъекту.

Согласно еще одному аспекту, предложен способ профилактики и/или лечения заболеваний и/или состояний, связанных с и/или сопровождающихся нарушением или отсутствием собственной микрофлоры субъекта, включающий введение субъекту, который в этом нуждается, средства или фармацевтической дозированной формы согласно любому из описанных аспектов.

Согласно примерам реализации, предложенный способ предназначен для быстрого создания нормальной микробиоты у детей, рожденных кесаревым сечением, при этом активный компонент содержит микроорганизмы, выделенные из микрофлоры матери или микрофлоры другого родственника по материнской линии.

Согласно примерам реализации, предложенный способ предназначен для быстрого создания нормальной микробиоты у детей, рожденных естественным путем суррогатной матерью, при этом активный компонент содержит микроорганизмы, выделенные из микрофлоры генетической матери или микрофлоры ее родственника.

Согласно примерам реализации, предложенный способ предназначен для профилактики и/или лечения повышенной проницаемости кишечника и/или коррекции синдрома повышенной проницаемости кишечника (англ. «leaky gut syndrome»), при этом активный компонент содержит микроорганизмы, выделенные из собственной микрофлоры субъекта до начала индукции повышения проницаемости кишечника и/или микрофлоры его родственников по материнской линии в их молодом возрасте, и при этом микроорганизмы включают бактерии, выделенные из указанной микрофлоры, бактерии совместно с бактериофагами, выделенными из указанной микрофлоры, а также только изолированные бактериофаги, выделенные из указанной микрофлоры.

Согласно примерам реализации, предложенный способ предназначен для восстановления состава микрофлоры субъекта с увеличением продолжительности жизни субъекта, при этом активный компонент содержит микроорганизмы, выделенные из собственной микрофлоры субъекта ранее или микрофлоры его родственников по материнской линии в их молодом возрасте, и при этом микроорганизмы включают бактерии, выделенные из указанной микрофлоры, бактерии совместно с бактериофагами, выделенными из указанной микрофлоры, а также только изолированные бактериофаги, выделенные из указанной микрофлоры.

Согласно примерам реализации, предложенный способ предназначен для профилактики и/или лечения опухолевых заболеваний у субъекта, при этом активный компонент содержит микроорганизмы, включающие бактерии и/или бактериофаги, полученные из микрофлоры указанного субъекта ранее или микрофлоры родственников по материнской линии в их молодом возрасте.

Согласно примерам реализации любого из описанных аспектов, заболевания и/или состояния, связанные с и/или сопровождающиеся нарушением или отсутствием микрофлоры субъекта, выбраны из группы, включающей язвенный колит, синдром раздраженного кишечника, синдром повышенной проницаемости кишечника, кандидоз слизистых, дисфункции кишечника, метеоризм, вагиноз, опухолевые заболевания; заболевания и/или состояния, возникающие на фоне гормональных нарушений, длительной антибиотикотерапии, рентгено- и химиотерапии, действия цитостатиков и лекарственных препаратов, применяемых в трансплантологии, при онкологических заболеваниях, в результате применения противоопухолевых лекарственных средств; заболевания и/или состояния, связанные с рождением кесаревым сечением и рождением естественным путем суррогатной матерью.

Далее, предложен способ стимулирования иммунной системы организма, ослабленной в результате заболеваний и/или состояний, связанных с и/или сопровождающихся нарушением или отсутствием собственной микрофлоры субъекта, включающий введение средства или фармацевтической дозированной формы согласно любому из описанных аспектов.

Согласно одному аспекту изобретения, предложено применение средства согласно описанным аспектам для восстановления и/или создания микрофлоры субъекта.

Согласно другому аспекту изобретения, предложено применение средства согласно описанным аспектам для профилактики и/или лечения заболеваний и состояний, связанных с и/или сопровождающихся нарушением или отсутствием собственной микрофлоры.

Согласно еще одному аспекту изобретения, предложено применение средства, содержащего микроорганизмы, выделенные из организма субъекта, включающие бактерии и/или бактериофаги, полученные из микрофлоры этого же субъекта ранее или полученные из микрофлоры родственников по материнской линии в их молодом возрасте, для восстановления микрофлоры субъекта и увеличения продолжительности жизни.

Согласно еще одному аспекту изобретения, предложено применение средства, содержащего микроорганизмы, выделенные из организма субъекта, включающие бактерии и/или бактериофаги, полученные из микрофлоры этого же субъекта ранее или полученные из микрофлоры родственников по материнской линии в их молодом возрасте, для предотвращения и/или лечения повышенной проницаемости кишечника и устранения симптомов повышенной проницаемости кишечника.

Подробное описание изобретения

В настоящем описании термины «микрофлора», «микробиота», «микробиоценоз» взаимозаменяемы и относятся к совокупности разных типов микроорганизмов, населяющих какую-либо среду обитания.

В настоящем описании термины «микроб» и «микроорганизм» взаимозаменяемы и относятся к группе живых организмов, размеры которых составляют, в частности, менее 1 мм. К ним относят, в частности, простейшие, бактерии, вирусы, грибы, дрожжи.

К вирусам, в свою очередь, относят бактериофаги, которые представляют собой вирусы бактерий.

Некультивируемые или пока некультивируемые формы микроорганизмов представляют собой такие формы микроорганизмов, которые в отсутствие организма хозяина или в ответ на действие неблагоприятных факторов прекращают рост на питательных средах, но сохраняют жизнеспособность, а при улучшении условий культивирования возобновляют пролиферацию. Другими словами, в таком случае микроорганизмы переходят в некультивируемое состояние, в котором они могут находиться длительное время. Термин «пока некультивируемые» или «ранее некультивируемые», относящийся к микроорганизмам, означает, что на момент написания настоящей заявки для таких микроорганизмов неизвестна возможность обеспечения их роста на питательных средах в отсутствие организма хозяина (см., например, Colwell, R., Grimes J. "Nonculturable Microorganisms in the Environment", ASM Press, 2000. pp. 2-3).

Согласно одному из аспектов, предложено средство для восстановления или создания микрофлоры субъекта, содержащее активный компонент, содержащий микроорганизмы, выделенные из собственной микрофлоры субъекта или микрофлоры донора, выбранного из группы, включающей мать и/или родственников по материнской линии, и дополнительно, компонент, усиливающий действие средства.

Согласно одному из примеров реализации, микроорганизмы представляют собой бактерии, выделенные из материала, полученного у субъекта или донора, а также археи и/или грибы, выделенные из собственной микрофлоры субъекта или микрофлоры донора, выбранного из группы, включающей мать и/или родственников по материнской линии, и дополнительно, компонент, усиливающий действие средства.

Согласно одному из примеров реализации, в качестве дополнительного компонента, усиливающего действие средства, средство дополнительно содержит бактериофаги, выделенные из материала, полученного у субъекта или донора.

Согласно одному из примеров реализации, материал, полученный у субъекта или донора, может представлять собой материал, полученный из ротовой полости (слюну, соскобы, смывы со слизистой, мокроту), других отделов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) (пищевода, желудка, кишечника), фекалий, кожи, дыхательных путей, половых органов, уретры, конъюнктивы, наружного слухового прохода.

Согласно одному из примеров реализации, соотношение в средстве бактерий, выделенных из собственной микрофлоры, к бактериофагам, выделенным из собственной микрофлоры, составляет от 1000:1 до 1:1000.

Согласно одному из примеров реализации, соотношение бактерий к бактериофагам в средстве выбрано из следующих: от 1000:1 до 100:1, от 100:1 до 10:1, от 10:1 до 1:10; от 1:10 до 1:100; от 1:100 до 1:1000. Согласно одному из примеров реализации, в качестве дополнительного компонента, усиливающего действие средства, средство дополнительно содержит бактерии микрофлоры, выращенные на питательной среде, включающие пока не культивируемые микроорганизмы микрофлоры.

Согласно одному из примеров реализации, средство дополнительно содержит как бактериофаги, выделенные из материала, полученного у субъекта или донора, так и дополнительные микроорганизмы микрофлоры, выращенные на питательной среде, включающие пока не культивируемые микроорганизмы микрофлоры.

Указанные дополнительные микроорганизмы микрофлоры могут быть выращены на питательной среде заранее и храниться до добавления в активный компонент при подходящих условиях, при этом добавление указанных дополнительных микроорганизмов может быть осуществлено непосредственно перед приемом средства, в частности за примерно 1 час, примерно 1 день перед приемом средства.

Согласно одному из вариантов реализации микрофлора может представлять собой нормальную микрофлору здоровых людей, без ограничения перечисленным, микрофлору ротовой полости (слюны, соскобов, смывов со слизистой, мокроты), других отделов желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) (пищевода, желудка, кишечника), фекалий, кожи, дыхательных путей, половых органов, уретры, конъюнктивы, наружного слухового прохода. В качестве донора микрофлоры могут выступать сам носитель микрофлоры (собственная (аутохтонная) микрофлора), родные сестры и братья, мать, а также родные по материнской линии (сестры матери и их дети, все потомки в первом поколении, дети дочерей во втором поколении и т.д.) и другие доноры при отсутствии перечисленных (донорская микрофлора). В одном из примеров реализации микрофлора отобрана у субъекта или донора в детско-юношеском возрасте.

В одном из вариантов реализации субъект представляет собой животное, в частности млекопитающее, в частности, человека любого возраста, в том числе ребенка.

Отбор биологического материала у субъекта или донора проводят стандартными способами. В одном из примеров реализации биологический материал, отобранный у субъекта или донора, например, фекалии, размешивают в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия или другого подходящего буфера и фильтруют для удаления частиц непереваренной пищи, после чего микроорганизмы осаждают центрифугированием.

В одном из примеров реализации смывы с кожи или соскобы со слизистой получают стандартными методами, после чего к биологическому материалу добавляют стерильный изотонический раствор хлорида натрия или другой подходящий буфер.

В одном из примеров реализации для приготовления препарата используют свежесобранную слюну, например, объемом 5-10 мл, в которую добавляют смыв с ватного тампона, которым собирают микробы со слизистой щек. Смыв с тампонов проводят с помощью достаточного объема стерильного изотонического раствора хлорида натрия, например, 1,0 мл. В результате можно получить максимальное разнообразие бактерий ротовой полости, которое включает культивируемые и пока не культивируемые микробы. Далее процедура аналогична той, что используется для получения микробов из другого материала. В частности, полученный материал можно поместить в конические пробирки и провести быстрое осаждение центрифугированием. К полученному осадку можно добавить изотонический раствор хлорида натрия и приготовить индивидуальные дозы, включающие микробы в количестве от 0,001 до 10,0 мл исходной микробной смеси.

В одном из примеров реализации бактериофаги из материала субъекта или донора, после удаления из материала бактерий, фильтруют через фильтр с размером пор 0,17-0,25 мкм, после чего фаги смывают с фильтра минимальным количеством использованного буфера или изотоническим раствором хлорида натрия.

Объем биологического материала, отбираемого у субъекта или донора, определяют в зависимости от возраста субъекта или донора и места отбора материала. Специалист в данной области техники определит требуемый объем материала исходя из типа биологического материала, метода приготовления препарата, фармацевтической формы и типа введения, а также других факторов.

Термины «отобранные ранее», «полученные ранее», «выделенные ранее», относящиеся к микрофлоре и/или микроорганизмам согласно настоящему изобретению, в настоящем описании означают, в частности, что материал, микрофлора или микроорганизмы отобраны, получены или выделены у субъекта или донора до начала проведения восстановления или создания микрофлоры у субъекта, профилактики или лечения заболеваний и состояний, связанных с и/или сопровождающихся нарушением или отсутствием собственной микрофлоры субъекта, до начала воздействия на организм субъекта, которое может привести к нарушению, повреждению или уничтожению микрофлоры субъекта, а также до начала развития заболевания или состояния, связанного с и/или сопровождающегося нарушением или отсутствием собственной микрофлоры субъекта.

Микрофлору, отобранную у субъекта или донора, можно использовать непосредственно или хранить, в частности в банке микрофлоры.

Микрофлору или средство можно хранить при различных условиях, выбранных, в том числе, из следующих: при температуре примерно -70°C - -80°C, температуре жидкого азота или в виде лиофильно высушенного препарата. Пробы микрофлоры или средство согласно примерам реализации можно хранить в замороженном виде в отдельных флаконах для последующего использования.

Для хранения к пробам отобранной микрофлоры могут быть добавлены стабилизаторы, обеспечивающие их длительное сохранение, которое можно контролировать (например, не чаще 1 раза в год) в течение срока хранения по способности давать рост на специально разработанной авторами питательной среде. В одном из примеров реализации стабилизаторы выбраны из группы, включающей глицерин и другие потенциальные (коммерческие) стабилизаторы.

В одном из примеров реализации средство получают путем отбора у здоровых субъектов и/или доноров (например, родственников по материнской линии) биологического материала (в том числе, слюны, мокроты, фекалий), удаление из него небактериальных примесей, сохранение полученного материала в виде отдельных проб на протяжении жизни субъекта или донора. Количество бактерий в пробах может составлять от 10¹-10¹⁰, например, от 10¹ до 10³, от 10¹ до 10⁵, от 10³ до 10⁵, от 10⁵ до 10⁷, от 10⁶ до 10⁸, от 10⁷ до 10¹⁰, от 10³ до 10⁷, и количество бактериофагов в пробах может составлять от 10¹-10¹² в 1 мл/проба, например, от 10¹ до 10³, от 10¹ до 10⁵, от 10³ до 10⁵, от 10⁵ до 10⁷, от 10⁶ до 10⁸, от 10⁷ до 10¹⁰, от 10³ до 10¹² в 1 мл/проба.

В одном из примеров реализации средство можно использовать для перорального, энтерального, местного, трансбуккального, сублингвального, дуоденального, трансмукозального, интравагинального, ректального введения, в частности в виде клизм.

В одном из примеров реализации средство согласно описанным аспектам, содержащее штаммы аутохтонной микрофлоры здоровых людей, позволяет восстановить поврежденный бактериобиоценоз при нарушениях собственной микрофлоры, связанных с заболеванием, приемом антибиотиков, возрастом и др.

Введение субъекту средства, содержащего микроорганизмы, выделенные из аутохтонной микрофлоры субъекта или микрофлоры донора, обогащенной бактериофагами, выделенными из биологического материала, отобранного у субъекта и/или донора, и/или дополнительными микроорганизмами микрофлоры, выращенными на питательной среде, включающими пока не культивируемые микроорганизмы микрофлоры, позволяет быстро и эффективно восстановить микрофлору организма субъекта с помощью микроорганизмов и бактериофагов, присущих именно данному субъекту.

Обогащение средства дополнительными микроорганизмами микрофлоры, выращенными на питательной среде, включающими пока не культивируемые микроорганизмы микрофлоры, позволяет достичь концентраций микроорганизмов в средстве, максимально приближенных к концентрациям микроорганизмов в условиях организма субъекта в здоровом состоянии.

Согласно одному из примеров реализации, активный компонент может быть получен путем выращивания по меньшей мере части микрофлоры, например, по меньшей мере 100 бактерий на 1 мл или большого числа до 10¹² бактерий на 1 мл в аэробных или анаэробных условиях.

Согласно примерам реализации, активный компонент может быть получен путем выращивания по меньшей мере от 100 бактерий на 1 мл до 1000 бактерий на 1 мл, от 1000 бактерий на 1 мл до 10000 бактерий на 1 мл, от 10³ до 10⁵ бактерий на 1 мл, от 10⁵ до 10⁷ бактерий на 1 мл, от 10⁷ до 10⁹ бактерий на 1 мл, от 10⁹ до 10¹² бактерий на 1 мл или большего числа бактерий на 1 мл в аэробных или анаэробных условиях.

Согласно примерам реализации, активный компонент может присутствовать в составе средства в любом количестве, которое способно обеспечить требуемый эффект согласно описанным аспектам и примерам реализации, например, в эффективном количестве. Специалист в области медицины сможет без труда подобрать подходящее количество активного компонента для средства согласно настоящему изобретению, необходимое для достижения требуемого эффекта.

С возрастом количество микроорганизмов и бактериофагов микрофлоры может снижаться. Соответственно, в одном из примеров реализации микрофлору субъекта или донора отбирают у субъекта детско-юношеского возраста. Введение субъекту микрофлоры, отобранной в детско-юношеском возрасте, может способствовать более быстрому и более эффективному восстановлению микробиоценоза организма субъекта.

В некоторых случаях достаточно введения только бактериофагов, присущих организму субъекта. Бактериофаги являются вирусами бактерий, способствуют их изменчивости, приспособлению, а также могут вызывать их гибель. Обладая высокой чувствительностью, они действуют избирательно на определенные виды бактерий, не причиняя вреда нормальной микрофлоре кишечника. Соответственно, бактериофаги могут использоваться для лечения и профилактики заболеваний и состояний, связанных с нарушением нормального биоценоза организма.

Известно применение бактериофагов для повышения лечебного эффекта и восстановления нормальной микрофлоры. При отсутствии чувствительных к ним бактерий длительность пребывания бактериофагов в организме человека не более 1-3 дней. Они дают мало побочных реакций и осложнений, повышают эффективность лечения различными антибактериальными препаратами, способствуют повышению иммунитета. Известно, что бактериофаги могут использоваться для лечения дисбактериоза новорожденных и детей первого года жизни.

Однако известные препараты для лечения нарушений микрофлоры с использованием бактериофагов обладают рядом недостатков. Насколько известно авторам настоящего изобретения, имеющиеся препараты на основе бактериофагов узкоспецифичны вследствие использования конкретных фагов, которые разрушают определенные виды бактерий. Кроме того, в организме быстро появляются фагоустойчивые штаммы, поэтому лечение в этом случае не может быть продолжительным. Также бактериофаги могут вызвать аллергические реакции.

В отличие от известных препаратов с использованием бактериофагов, согласно настоящему изобретению используют бактериофаги, выделенные из материала, полученного у субъекта или донора по материнской линии. Это позволяет повысить эффективность восстановления микрофлоры, исключить аллергические реакции и также в частных случаях реализации обеспечить комплексное воздействие на организм, при котором активные компоненты состава согласно изобретению усиливают действие друг друга, в частности, присутствие наряду с бактериями собственной микрофлоры бактериофагов может способствовать подавлению развития чужеродных микроорганизмов и восстановлению нормальной микрофлоры субъекта.

Согласно примерам реализации, средство может быть однокомпонентным или мно