Pcv2b дивергентная вакцинная композиция и способы её применения

Pcv2b дивергентная вакцинная композиция и способы её применения

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники, к которой относится изобретение

Представленное изобретение касается цирковируса свиней. Более конкретно, настоящее изобретение касается вакцинной композиции, включающей PCV2b дивергентный ORF2 антиген, и его применение в вакцине для защиты свиней против PCV2, включая высоковирулентный дивергентный штамм цирковируса свиней типа 2b (PCV2b) и мультисистемный синдром истощения после отъема (PMWS).

Предпосылки создания изобретения

Цирковирус свиней типа 2 (PCV2), член семейства Circoviridae, рода Circovirus, представляет собой небольшой круговой безоболочечный вирус, который впервые был открыт в 1998. PCV2 является одним из двух наиболее распространенных патогенов, встречающихся в свиноводстве, где другим является Mycoplasma hyopneumoniae (M. hyo). Свинья, инфицированная PCV2, демонстрирует синдром, который обычно называют как мультисистемный синдром истощения после отъема (PMWS). PMWS клинически характеризуется истощением, бледностью кожных покровов, худосочностью, респираторным дистрессом, диареей, иктеричностью и желтухой. В дополнение к PMWS, PCV2 связывают с несколькими другими заболеваниями, включая псевдобешенство, репродуктивный и респираторный синдром свиней (PRRS), энзоотическую пневмонию, болезнь Глассера, стрептококковый менингит, сальмонеллез, после отъемный колибактериоз, диетический гепатоз и гнойную бронхопневмонию. Различные клинические проявления инфекции PCV2 у свиней по всем возрастным группам стали известными как заболевания, связанные с цирковирусом свиней (PCVAD), и характеризуются слабостью и задержкой роста. PRRS вирус, вирус свиного гриппа (SIV), M. hyo и другие бактерии участвуют в качестве основных сопутствующих факторов в развитии PCVAD. PCVAD постоянно был угрозой для свиноводства во всем мире, что вызывало большие экономические потери.

Изоляты PCV2 в настоящее время подразделяются на три генотипа: PCV2a, PCV2b и PCV2c. PCV2 содержит две основных открытых рамки считывания (ORF), которые кодируют белок, связанный с репликацией (ORF1, 945 nt), и вирусный капсид (ORF2, 702 nt). PCV2 претерпел значительные генетические вариации в последние годы. По-новому эмергентный PCV2 мутант с дополнительным лизином (K) на С-конце ORF2-кодированного капсидного белка, который сравнивали с классическими PCV2a и PCV2b генотипами, был выделен в 2008 из образца сыворотки от абортированный свиньи (Guo et al., 2010, Virology Journal 7: 273). В данном по-новому эмергентном PCV2 мутанте одна базовая делеция в положении 1039 в геномной последовательности в результате приводила к мутации стоп-кодона (от UAA до AAG) в ORF2, что дает ORF2 ген 705 nt и новый стоп-кодон (Guo et al., 2011, Virology Journal 8: 291). Кроме того, Knell et al. ранее сообщали, что мутации могли происходить в ORF2 гене, поскольку делеция (Т) была найдена в положении 1042 в 1767 nt генома одного штамма (GenBank no. AY713470), что привело к удлинению на одну аминокислоту (лизин) на С-конце ORF2-кодированного капсидного белка (Knell et al., 2005, Veterinary Microbiology 109: 169-177). Olvera et al. также сообщали относительно удлинения на один лизиновый остаток на С-конце капсидного белка из-за мутации в стоп-кодоне ORF2 (Olvera et al., 2007, Virology 357: 175-185). Кроме того, штамм PCV2, называемый "JSTZ", с GenBank номером доступа No. JQ413808, был обнаружен и идентифицирован в образцах кала поросенка с тяжелой диареей в Китае, и его полный 1767 nt геном секвенировали (Li et al., 2012, Journal of Virology (jvi.asm.org), p. 4716). Филогенетический анализ на основе генома штамма PCV2 JSTZ и ORF других китайских штаммов PCV2 показали, что штамм PCV2 JSTZ принадлежал к новому генотипу в Китае (Li et al., 2012, выше).

Guo et al. оценивали относительную вирулентность мутантного штамма PCV2, названного PCV2b/rBDHor BDH (Gen Bank номер доступа №НМ038017), который был выделен в 2008 из образца от абортированной свиньи с PMWS и подтвердил большую вирулентность мутантного штамма PCV2 у поросят, чем у того, что связан с классическими PCV2a и PCV2b генотипами (Guo et al., 2012, PLoS ONE (plosone.org), Vol. 7, Issue 7, e41463, 1-10). Данный мутантный штамм PCV2 продемонстрировал более серьезные признаки сходные с PMWS, которые характеризуются слабостью, кашлем, одышкой, диареей, всколоченной шерстью покрытия и депрессией. Более того, патологические повреждения и виремии, а также, вирусные нагрузки в лимфатических узлах, миндалинах и селезенке, были значительно более тяжелыми для поросят, вызванные мутантным штаммом PCV2 по сравнению с теми, которые в группах, инфицированных классическим PCV2a и PCV2b. Кроме того, значительно более низкий средний дневной прирост массы был зафиксирован в группе, инфицированной мутантным штаммом PCV2, чем в группах, инфицированных преобладающими генотипами PCV2a и PCV2b (Guo et al., 2012, выше).

Два PCV2 штамма, US 22625-33 и US 22664-35, недавно были идентифицированы в случаях неудачи с предполагаемой вакциной у PMWS-пострадавших свиней в системе производства, расположенной в Соединенных Штатах (Xiao et al., 2012, Journal of Virology (jvi.asm.org), Vol. 86, No. 22, p. 12469). Полный геном данных двух штаммов США, как было обнаружено, был в составе 1767 nt, и размер его ORF2 гена составлял 705 nt, кодирующий ORF2 белок 234 аа, который был на одну аминокислоту длиннее, чем у общего PCV2. Филогенетический анализ с нуклеотидными последовательностями ORF2 классических PCV2a и PCV2b штаммов предположил, что как U.S. PCV2 штаммы US 22625-33, так и US 22664-35 тесно связаны с PCV2b. По сравнению с классическим PCV2b одна базовая делеция в пределах ORF2 гена в результате приводила к добавлению одной аминокислоты (лизина) в С-конец ORF2 белка. Кроме того, последовательность BLAST и сравнение показало, что оба штамма PCV2 США имели высокий уровень идентичности (99,9%) с PCV2 штаммом, BDH, обнаруженным в Китае, и, как сообщалось, имели повышенную вирулентность. Одна молчащая мутация (1677А→1677Т) в ORF1 была найдена между BDH двумя мутантными U.S. PCV2. В соответствии с новым определением PCV2 генотипа и номенклатурными критериями (Cortey, et al., 2011, Vet. Microbiol. 149:522-523; Segales, et al., 2008, Vet. Rec. 162: 867-868) все из данных новых мутантных PCV2 штаммов могли быть классифицированы как генотип PCV2b, на основании филогенетического анализа нуклеотидной последовательности гена ORF2 (Xiao et al., 2012, выше).

Ввиду сообщений о повышении вирулентности нового дивергента PCV2b, а также его присутствие в случаях неудачи с предполагаемой вакциной в Соединенных Штатах, что необходимо, является эффективной вакцина против данного нового PCV2b дивергента. Предпочтительно то, что данная вакцина будет совместима с другими антигенами свиней, такими как M. hyo и PRRS вирус.

Сущность изобретения

Представленное изобретение предусматривает вакцинную композицию для защиты свиней против PCV2, включая высоковирулентный дивергентный штамм цирковируса свиней типа 2b (PCV2b), где композиция включает PCV2b дивергентный ORF2 полипептид, где ORF2 полипептид содержит лейцин (L) в положении 89, треонин (Т) в положении 90 и аспарагин (N) в положении 134, в соответствии с нумерацией SEQ ID NO: 1. В одном варианте осуществления композиция также предусматривает гетерологическую защиту против классических штаммов PCV2a и PCV2b.

В одном варианте осуществления композиция находится в форме инактивированного, PCV2b дивергентного целого вируса, который содержит и/или экспрессирует PCV2b дивергентный ORF2 полипептид.

В другом варианте осуществления композиция находится в форме инактивированного химерного вируса, где химерный вирус содержит инактивированный рекомбинантный цирковирус свиней типа 1, который содержит и/или экспрессирует PCV2b дивергентный ORF2 полипептид.

В еще другом варианте осуществления композиция находится в форме выделенного рекомбинантного PCV2b дивергентного ORF2 полипептида. В одном варианте осуществления выделенный рекомбинантный PCV2b дивергентный ORF2 полипептид экспрессируется из вектора. В другом варианте осуществления вектор представляет собой бакуловирус или парапоксвирус. В следующем варианте осуществления вектор представляет собой живой или инактивированный вектор.

В одном варианте осуществления PCV2b дивергентный ORF2 полипептид, который включает лейцин (L) в положении 89, треонин (Т) в положении 90 и аспарагин (N) в положении 134, в соответствии с нумерацией SEQ ID NO: 1, дополнительно включает, по меньшей мере, один остаток, выбранный из группы, состоящей из: лизина (K) в остатке 59, лизина (K) в остатке 234, треонина (Т) в остатке 190, изолейцина (I) в остатке 53, аспарагина (N) в остатке 68, аргинина (R) или глицина (G) в остатке 169 и изолейцина (I) в остатке 215, в соответствии с нумерацией SEQ ID NO: 1.

В другом варианте осуществления PCV2b дивергентный ORF2 полипептид, который включает лейцин (L) в положении 89, треонин (Т) в положении 90 и аспарагин (N) в положении 134, в соответствии с нумерацией SEQ ID NO: 1, дополнительно включает лизин (K) в остатке 59 и лизин (K) в остатке 234, в соответствии с нумерацией SEQ ID NO: 1.

В следующем варианте осуществления PCV2b дивергентный ORF2 полипептид, который включает лейцин (L) в положении 89, треонин (Т) в положении 90, аспарагин (N) в положении 134, лизин (K) в остатке 59 и лизин (K) в остатке 234, в соответствии с нумерацией SEQ ID NO: 1, дополнительно включает треонин (Т) в остатке 190, изолейцин (I) в остатке 53, аспарагин (N) в остатке 68, аргинин (R) или глицин (G) в остатке 169 и изолейцин (I) в остатке 215, в соответствии с нумерацией SEQ ID NO: 1.

В одном варианте осуществления PCV2 дивергентный ORF2 полипептид представлен аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1, или ее фрагментом.

В другом варианте осуществления композиция, которая включает PCV2 дивергентный ORF2 полипептид, дополнительно включает, по меньшей мере, один дополнительный свиной антиген. В одном варианте осуществления, по меньшей мере, один дополнительный антиген является защитным против заболевания у свиней, вызванного микроорганизмом.

В одном варианте осуществления микроорганизм включает бактерию, вирус, или простейшее. В другом варианте осуществления микроорганизм выбирают из, но не ограничиваются этим, следующего: вируса свиного репродуктивного и респираторного синдрома (PRRSV), свиного парвовируса (PPV), Haemophilusparasuis, Pasteurellamultocida, Streptococcumsuis, Staphylococcus hyicus, Actinobacillluspleuropneumoniae, Bordetellabronchiseptica, Salmonella choleraesuis, Salmonella enteritidis, Erysipelothrixrhusiopathiae, Mycoplamahyorhinis, Mycoplasma hyosynoviae, бактерий липтоспиры, Lawsoniaintracellularis, вируса свиного гриппа (SIV), антигена Escherichia coli, Brachyspirahyodysenteriae, свиного респираторного коронавируса, вируса эпизоотической диареи свиней (PED), ротавируса, вируса гепатита (TTV), свиного цитомегаловируса, свиных энтеровирусов, вируса энцефаломиокардита, патогена, вызывающего заболевание Ауески, классической свиной лихорадки (CSF) и патогена, вызывающий свиной трансмиссивный гастроэнтерит, или их комбинаций.

В некоторых вариантах осуществления композиция согласно представленному изобретению дополнительно включает адъювант. В одном варианте осуществления адъювант выбирают из, но не ограничиваются этим, адъюванта масло-в-воде, полимерного и водного адъюванта, адъюванта вода-в-масле, гидроксидалюминиевого адъюванта, адъюванта витамина E и/или их комбинаций. В другом варианте осуществления композиция согласно представленному изобретению дополнительно включает фармацевтически приемлемый носитель.

Представленное изобретение также предусматривает способ иммунизации свиньи против PCV2, включая дивергентный штамм PCV2b, где способ включает введение свинье композиции согласно представленному изобретению, как описано выше. Данная композиция для введения включает PCV2b дивергентный ORF2 полипептид, где ORF2 полипептид включает лейцин (L) в положении 89, треонин (Т) в положении 90 и аспарагин (N) в положении 134, в соответствии с нумерацией SEQ ID NO: 1. Как описано выше, данный PCV2b дивергентный ORF2 полипептид может дополнительно включать, по меньшей мере, один остаток, выбранный из следующих: лизина (K) в остатке 59, лизина (K) в остатке 234, треонина (Т) в остатке 190, изолейцина (I) в остатке 53, аспарагина (N) в остатке 68, аргинина (R) или глицина (G) в остатке 169 и изолейцин (I) в остатке 215, в соответствии с нумерацией SEQ ID NO: 1.

В одном варианте осуществления композиция для введения включает вирус, содержащий и/или экспрессирующий PCV2b дивергентный ORF2 полипептид. В другом варианте осуществления композиция для введения включает выделенный рекомбинантный PCV2b ORF2 полипептид.

В одном варианте осуществления способа согласно представленному изобретению композицию могут вводить внутримышечно, интрадермально, трансдермально, подкожно, интраназально или перорально, или другими способами, известными квалифицированному специалисту в данной области. В другом варианте осуществления композицию вводят одной дозой. В еще другом варианте осуществления композицию вводят двумя дозами.

В следующем варианте осуществления композицию вводят свиньям, имеющим материнские антитела против PCV2.

В одном варианте осуществления композицию вводят свиньям в возрасте 3 недель или старше.

Представленное изобретение, кроме того, предусматривает набор. Данный набор включает бутылочку, содержащую вакцинную композицию в соответствии с представленным изобретением для защиты свиней против высоковирулентного дивергентного штамма цирковируса свиней типа 2b (PCV2b). Данная вакцинная композиция включает PCV2b дивергентный ORF2 полипептид, где ORF2 полипептид включает лейцин (L) в положении 89, треонин (Т) в положении 90 и аспарагин (N) в положении 134, в соответствии с нумерацией SEQ ID NO: 1. Как описано выше, данный PCV2b дивергентный ORF2 полипептид может дополнительно включать, по меньшей мере, один остаток, выбранный из следующих: лизин (K) в остатке 59, лизин (K) в остатке 234, треонин (Т) в остатке 190, изолейцин (I) в остатке 53, аспарагин (N) в остатке 68, аргинин (R) или глицин (G) в остатке 169 и изолейцин (I) в остатке 215, в соответствии с нумерацией SEQ ID NO: 1.

В одном варианте осуществления набора вакцинная композиция находится в форме вируса, содержащего и/или экспрессирующего PCV2b дивергентный ORF2 полипептид. В другом варианте осуществления набора вакцинная композиция находится в форме выделенного рекомбинантного PCV2b дивергентного ORF2 полипептида.

В одном варианте осуществления набора вакцинная композиция в бутылочке обеспечивается как готовая к применению жидкая композиция. В другом варианте осуществления набора вакцинная композиция в бутылочке обеспечивается в лиофилизированной форме. В следующем варианте осуществления набор может включать разбавитель. В еще другом варианте осуществления набор может дополнительно включать руководство пользователя, которое содержит информацию о введении вакцинной композиции.

Краткое описание чертежей

Фигура 1 показывает выравнивания аминокислотных последовательностей между капсидной последовательностью PCV2b дивергентного штамма, названного "PCV2B-DIV-MUT", и тем, что из классического PCV2A штамма (названного ISU-40895) и классического PCV2b штамма (названного NMB).

Фигура 2 представляет собой график, показывающий геометрическое среднее, рассчитанное методом наименьших квадратов, копий ДНК на день обработки. *Все "0" были превращены в 1 с целью получения графических изображений.

Фигура 3 представляет собой график, показывающий геометрическое среднее, рассчитанное методом наименьших квадратов, фекальных выделений (ДНК копии) на день обработки после контрольного заражения. *Все "0" были превращены в 1 с целью получения графических изображений.

Фигура 4 представляет собой график, показывающий титры PCV2 ИФА S/P по методу наименших квадратов (НК) на день обработки и обработку.

Фигура 5 представляет собой график обратно преобразованного геометрического среднего, рассчитанного по методу наименьших квадратов, копий ДНК на день обработки.

Фигура 6 представляет собой график обратно преобразованного геометрического среднего, рассчитанного методом наименьших квадратов, фекальных выделений (ДНК копии) на день обработки после контрольного заражения.

Фигура 7 представляет собой график, показывающий титры PCV2 ИФА S/P по методу НК на день исследования

Краткое описание последовательностей

Как используется в данном документе, изоляты PCV2, представленные SEQ ID NO: с 1 до 57 и 66, представляют собой типовые примеры PCV2b дивергентных штаммов.

SEQ ID NO: 1 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2b дивергентного штамма, названного PCV2B-DIV-MUT в данном документе.

SEQ ID NO: 2 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2b дивергентного штамма, названного PCV2B-DIV-MUT в данном документе.

SEQ ID NO: 3 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 штамма: 798-1, с номером доступа GenBank №AB462384.

SEQ ID NO: 4 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 штамма: 798-1, с номером доступа GenBank №AB462384.

SEQ ID NO: 5 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 штамма: FF, с номером доступа GenBank №DQ231516.

SEQ ID NO: 6 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 штамма: FF, с номером доступа GenBank №DQ231516.

SEQ ID NO: 7 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 штамма: VC 2002-k2, с номером доступа GenBank №EF990645.

SEQ ID NO: 8 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 штамма: VC 2002-k2, с номером доступа GenBank №EF990645.

SEQ ID NO: 9 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: GY09, с номером доступа GenBank №GQ845025.

SEQ ID NO: 10 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 штамма: GY09, с номером доступа GenBank №GQ845025.

SEQ ID NO: 11 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: XS09, с номером доступа GenBank №GQ845028.

SEQ ID NO: 12 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 штамма: XS09, с номером доступа GenBank №GQ845028.

SEQ ID NO: 13 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: SDld01, с номером доступа GenBank №HM535640.

SEQ ID NO: 14 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 изолята: SDld01, с номером доступа GenBank №HM535640.

SEQ ID NO: 15 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: SDld02, с номером доступа GenBank №HM755880.

SEQ ID NO: 16 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 изолята: SDld02, с номером доступа GenBank №HM755880.

SEQ ID NO: 17 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: НМ01, с номером доступа GenBank №HM755881.

SEQ ID NO: 18 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 изолята: НМ01, с номером доступа GenBank №HM755881.

SEQ ID NO: 19 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 штамма: NIVS-1, с номером доступа GenBank №HQ378157.

SEQ ID NO: 20 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 штамма: NIVS-1, с номером доступа GenBank №HQ378157.

SEQ ID NO: 21 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: С/2010-2*, с номером доступа GenBank №JF683394.

SEQ ID NO: 22 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 изолята: С/2010-2*, с номером доступа GenBank №JF683394.

SEQ ID NO: 23 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: G/2009-2, с номером доступа GenBank №JF683408.

SEQ ID NO: 24 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 изолята: G/2009-2, с номером доступа GenBank №JF683408.

SEQ ID NO: 25 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: I/2010, с номером доступа GenBank №JF927984.

SEQ ID NO: 26 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 изолята: I/2010, с номером доступа GenBank №JF927984.

SEQ ID NO: 27 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: J/2010, с номером доступа GenBank №JF927985.

SEQ ID NO: 28 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 изолята: J/2010, с номером доступа GenBank №JF927985.

SEQ ID NO: 29 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: К/2010, с номером доступа GenBank №JF927986.

SEQ ID NO: 30 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 изолята: К/2010, с номером доступа GenBank №JF927986.

SEQ ID NO: 31 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: М/2010, с номером доступа GenBank №JF927988.

SEQ ID NO: 32 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 изолята: М/2010, с номером доступа GenBank №JF927988.

SEQ ID NO: 33 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду PCV2 изолята: WB/ROM89, с номером доступа GenBank №JN006445.

SEQ ID NO: 34 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид PCV2 изолята: WB/ROM89, с номером доступа GenBank №JN006445.

SEQ ID NO: 35 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: EU-RO-F4-3, с номером доступа GenBank №JN382188.

SEQ ID NO: 36 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 изолята: EU-RO-F4-3, с номером доступа GenBank №JN382188.

SEQ ID NO: 37 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: HNing09, с номером доступа GenBank №JN411096.

SEQ ID NO: 38 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 изолята: HNing09, с номером доступа GenBank №JN411096.

SEQ ID NO: 39 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: YWu09, с номером доступа GenBank №JN411099.

SEQ ID NO: 40 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 изолята: YWu09, с номером доступа GenBank №JN411099.

SEQ ID NO: 41 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: CH-IVT4, с номером доступа GenBank №JX984586.

SEQ ID NO: 42 представляет собой нуклеотидную последовательность гена капсида полной длины PCV2 изолята: CH-IVT4, с номером доступа GenBank №JX984586.

SEQ ID NO: 43 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: CH-IVT6, с номером доступа GenBank №JX984588.

SEQ ID NO: 44 представляет собой нуклеотидную последовательность гена капсида полной длины PCV2 изолята: CH-IVT6, с номером доступа GenBank №JX984588.

SEQ ID NO: 45 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: CH-IVT7, с номером доступа GenBank №JX984589.

SEQ ID NO: 46 представляет собой нуклеотидную последовательность гена капсида полной длины PCV2 изолята: CH-IVT7, с номером доступа GenBank №JX984589.

SEQ ID NO: 47 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята, с номером доступа GenBank №JX984590.

SEQ ID NO: 48 представляет собой нуклеотидную последовательность гена капсида полной длины PCV2 изолята, с номером доступа GenBank №JX984590.

SEQ ID NO: 49 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: CH-IVT9, с номером доступа GenBank №JX984591.

SEQ ID NO: 50 представляет собой нуклеотидную последовательность гена капсида полной длины PCV2 изолята: CH-IVT9, с номером доступа GenBank №JX984591.

SEQ ID NO: 51 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: CH-IVT10, с номером доступа GenBank №JX984592.

SEQ ID NO: 52 представляет собой нуклеотидную последовательность гена капсида полной длины PCV2 изолята: CH-IVT10, с номером доступа GenBank №JX984592.

SEQ ID NO: 53 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: CH-IVT11, с номером доступа GenBank №JX984593.

SEQ ID NO: 54 представляет собой нуклеотидную последовательность гена капсида полной длины PCV2 изолята: CH-IVT11, с номером доступа GenBank №JX984593.

SEQ ID NO: 55 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины PCV2 изолята: GDYX, с номером доступа GenBank №JX519293.

SEQ ID NO: 56 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2 изолята: GDYX, с номером доступа GenBank №JX519293.

SEQ ID NO: 57 представляет собой полную геномную последовательность PCV2 изолята: GDYX, с номером доступа GenBank №JX519293.

SEQ ID NO: 58 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины классического PCV2a изолята: ISU-40895, с номером доступа GenBank №AF264042.

SEQ ID NO: 59 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины PCV2a изолята: ISU-40895, с номером доступа GenBank №AF264042.

SEQ ID NO: 60 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины классического PCV2a изолята: Imp.1010-Stoon, с номером доступа GenBank №AF055392.

SEQ ID NO: 61 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины классического PCV2a изолята: Imp.1010-Stoon, с номером доступа GenBank №AF055392.

SEQ ID NO: 62 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины классического PCV2a штамма: NMB, с номером доступа GenBank №GU799576.

SEQ ID NO: 63 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины классического PCV2b изолята: NMB, с номером доступа GenBank №GU799576.

SEQ ID NO: 64 представляет собой аминокислотную последовательность, которая соответствует капсиду полной длины классического PCV2c штамма: DK1980PMWSfree, с номером доступа GenBank №EU148503.

SEQ ID NO: 65 представляет собой нуклеотидную последовательность, кодирующую капсид полной длины классического PCV2c штамма: DK1980PMWSfree, с номером доступа GenBank №EU148503.

SEQ ID NO: 66 представляет собой полную геномную последовательность PCV2 дивергента, названного "PCV2b-DIV-MUT".

Детальное описание изобретения

Как используется в описании и формуле изобретения, единственное число включает ссылки на множественное число, если контекст четко не указывает на иное. Например, термин "белковый антиген" включает множественность белковых антигенов, включая их смеси.

Как используется в данном документе, термин "содержащий" подразумевает, что композиции и способы включают перечисленные элементы, но не исключает других элементов.

Как используется в данном документе, термины "PCV2b дивергентный штамм", "PCV2b дивергент", "PCV2 мутант", "новый мутантный PCV2", "мутантный PCV2" и подобные относятся к высоковирулентному PCV2b штамму, который кодирует ORF2 капсидный полипептид, который включает лейцин (L) в положении 89, треонин (Т) в положении 90 и аспарагин (N) в положении 134, в соответствии с нумерацией SEQ ID NO: 1. Кодированный PCV2b дивергентный ORF2 полипептид может дополнительно включать, по меньшей мере, один остаток, выбранный из: лизина (K) в остатке 59, лизина (K) в остатке 234, треонина (Т) в остатке 190, изолейцина (I) в остатке 53, аспарагина (N) в остатке 68, аргинина (R) или глицина (G) в остатке 169 и изолейцина (I) в остатке 215 в соответствии с нумерацией SEQ ID NO: 1.

Как используется в данном документе, термин "PCV2b дивергентный ORF2 полипептид" предназначается для того, чтобы включать вирус, содержащий и/или экспрессирующий PCV2b дивергентный ORF2 полипептид, таким образом, что ORF2 полипептид представляет собой компонент самого вируса (например, белковая оболочка вируса). Вирус может представлять собой PCV, но не должен истолковываться, чтобы ограничиваться такими, и может включать другие вирусы. Данный термин также предназначен для того, чтобы включать выделенный рекомбинантный PCV2b дивергентный ORF2 полипептид.

Термин "антиген" касается соединения, композиции, или иммуногенного вещества которое может стимулировать продуцирование антительного или Т-клеточного ответа, или обоих, у животного, включая композиции, которые вводятся инъекционно или абсорбируются у животного. Иммунный ответ может быть сгенерирован к целой молекуле, или к части молекулы (например, эпитопу или гаптену). Термин "антиген" может включать целый вирус, полипептид, или его фрагмент.

Как используется в данном документе, термин "вакцинная композиция" включает, по меньшей мере, один антиген или иммуноген в фармацевтически приемлемом носителе, приемлемом для индуцирования иммунного ответа у хозяина. Вакцинные композиции могут вводить в дозах и способами, хорошо известными квалифицированному специалисту в области медицины и ветеринарии, принимая во внимание факторы, такие как возраст, пол, вес, вид и состояние животного-реципиента, и способ введения. Способ введения может быть чрескожным, посредством введения через слизистую оболочку (например, пероральный, назальный, анальный, вагинальный) или посредством парентерального способа (интрадермальный, трансдермальный, внутримышечный, подкожный, внутривенный или внутрибрюшинный). Вакцинные композиции могут вводиться самостоятельно, или могут совместно вводиться, или последовательно вводиться с другими лечениями или терапиями. Формы введения могут включать суспензии, сиропы или эликсиры и препараты для парентерального, подкожного, интрадермального, внутримышечного или внутривенного введения (например, инъекционного введения), такие как стерильные суспензии или эмульсии. Вакцинные композиции могут быть введены как спрей, или смешанные с едой и/или водой, или доставлены в смеси с приемлемым носителем, разбавителем или эксципиентом, таким как стерильная вода, физиологический солевой раствор, глюкоза, или аналогичные. Композиции могут содержать вспомогательные вещества, такие как увлажняющие или эмульгирующие агенты, рН буферные агенты, адъюванты, желирующие или повышающие вязкость добавки, консерванты, ароматические агенты, красители и тому подобные, в зависимости от способа введения и желаемого препарата. Стандартные фармацевтические тексты, такие как "Remington's Pharmaceutical Sciences" (1990), могут давать консультацию по получению подходящих препаратов, без излишних экспериментов.

Как определено в данном документе, "иммуногенная или иммунологическая композиция", касается смеси химически связанных веществ, которая содержит, по меньшей мере, один антиген, который вызывает иммунологический ответ у хозяина клеточного и/или антитело-опосредованого иммунного ответа к композиции или вакцине, вызывающей интерес.

Термин "иммунный ответ", как используется в данном документе, касается ответа, вызванного у животных. Иммунный ответ у животных может касаться клеточного иммунитета (CMI), гуморального иммунитета, или может включать оба. Представленное изобретение также предусматривает ограниченный ответ к части иммунной системы. Как правило, "иммунологический ответ" включает, но не ограничиваются этим, один или больше из следующих эффектов: продуцирование или активацию антител, В клетки, хелпер-Т-клетки, супрессор-Т клетки, и/или цитотоксические T клетки и/или yd-T клетки, специфически направленных на антиген или антигены, включенные в композицию или вакцину, представляющей интерес. Предпочтительно хозяин будет демонстрировать или терапевтический, или защитный иммунологический ответ, таким образом, что устойчивость к новой инфекции будет расширяться, и/или клиническая тяжесть заболевания будет снижаться. Такая защита будет продемонстрирована или путем уменьшения или отсутствия симптомов, которые обычно демонстрируются инфицированным хозяином, более быстрым временем восстановления, и/или сниженным титром вируса у инфицированного хозяина.

Как используется в данном документе, термин "иммуногенность" означает способность продуцировать иммунный ответ у хозяина-животного против антигена или антигенов. Данный иммунный ответ формирует основу защитного иммунитета, вызванного вакциной против конкретного возбудителя инфекции.

"Адъювант", как используется в данном документе, означает композицию, состоящую из одного или больше веществ, которые усиливают иммунный ответ к антигену(ам). Механизм, по которому действует адъювант, полностью не известен. Считается, что некоторые адъюванты усиливают иммунный ответ за счет медленного высвобождения антигена, тогда как другие адъюванты являются сильно иммуногенными сами по себе, и считается, что функционируют синергетически.

Как используется в данном документе, термин "мультвалентный" означает вакцину, содержащую больше, чем один антиген, или из одних и тех же микробиологических видов (например, различные изоляты Mycoplasma hyopneumoniae или PCV), из различных видов (например, изоляты как из Pasteurellahemolytica, так и Pasteurellamultocida), или вакцину, содержащую комбинацию антигенов из различных родов (например, вакцина, содержащая антигены из Pasteurellamultocida, Salmonella, Escherichia coli, Haemophilussomnus и Clostridium).

Термин "свинья" или "поросенок", как используется в данном документе, означает животное свиного происхождения, в то время как "свиноматка" касается самки свиньи репродуктивного возраста и способности. "Молодая свинья" представляет собой самку свиньи, которая никогда не была беременной.

Как используется в данном документе, термин "вирулентный" означает изолят, который сохраняет свою способность быть инфекционным у животного-хозяина и способен вызывать заболевание у животного-хозяина.

"Инактивированный вакцина" означает вакцинную композицию, содержащую возбудитель инфекции или патоген, который больше не способен к репликации или росту. Возбудитель может быть бактериальным, вирусным, протозойным или грибковым по происхождению. Инактивация может быть достигнута с помощью различных способов, включая замораживание-оттаивание, химическую обработку (например, обработку β-пропиолактоном (BPL) или формалином), обработку ультразвуком, излучением, теплом или какими-либо другими традиционными средствами, достаточными для предотвращения репликации или роста организма, сохраняя при этом его иммуногенность.

Термин "вариант", как используется в данном документе, касается полипептида или последовательности нуклеиновых кислот, кодирующих полипептид, который имеет одну или больше консервативных аминокислотных вариаций или других незначительных модификаций, таким образом, что соответствующий полипептид имеет практически эквивалентную функцию по сравнению с немутантным типом полипептида. Термин "вариант" также может касаться микроорганизма, содержащего полипептид или последовательность нуклеиновых кислот, имеющую также указанные вариации или модификации.

"Консервативная вариация" означает замену аминокислотного остатка другим биологически аналогичным остатком, или замену нуклеотида в последовательности нуклеиновой кислоты, таким образом, что кодированный аминокислотный остаток не изменится, или является другим биологически подобным остатком. Примеры консервативных вариаций включают замещение одного гидрофобного остатка, такого как изолейцин, валин, лейцин или метионин, на другой гидрофобный остаток, или замещение одного полярного остатка на другой, такое как замещение аргинина на лизин, глютаминовой кислоты на аспарагиновую кислоту, или глутамина на аспарагин и тому подобные. Термин "консервативная вариация" также включает замещенную аминокислоту вместо родительской аминокислоты, при условии, что антитела, индуцированные замещенным полипептидом также иммунореагируют с родительским (незамещенным) полипептидом.

Как используются в данном документе, термины "фармацевтически приемлемый носитель" и "фармацевтически приемлемый наполнитель" являются взаимозаменяемыми и касаются жидкого носителя, содержащего вакцинные антигены, который, может инъекционно вводится хозяину без побочных эффектов. Подходящие фармацевтически приемлемые носители, известные в данной области с уровня техники включают, но не ограничиваются этим, стерильную воду, солевой раствор, глюкозу, декстрозу, или буферные растворы. Носители могут включать вспомогательные вещества, включая, но не ограничиваются этим, разбавители, стабилизаторы (то есть сахара и аминокислоты), консерванты, увлажняющее агенты, эмульгирующие агенты, рН буферные агенты, добавки повышающие вязкость, окрашивающие добавки и тому подобные.

"Североамериканский PRRS вирус" означает какой-либо PRRS вирус, имеющий генетические характеристики, ассоциированные с изолятом североамериканского PRRS вируса, такие как, но не ограничиваются этим, PRRS вирус, который был впервые выделен в Соединенных Штатах приблизительно около 1990-х (смотри, например, Collins, J.E., et al., 1992, J. Vet. Diagn. Invest. 4: 117-126); изолят североамериканског