Лечение злокачественных новообразований на основе стратификации по caix

Лечение злокачественных новообразований на основе стратификации по caix

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники, к которой относится изобретение

Изобретение относится к соединению, нацеленному на карбоангидразу IX, для применения при лечении злокачественных новообразований, где применение включает количественное определение экспрессии CAIX, а также определение балла CAIX на основании экспрессии CAIX. Настоящее изобретение дополнительно относится к способу диагностики, прогнозирования и/или классификации злокачественных опухолевых заболеваний, включающему количественное определение экспрессии CAIX, и определение балла CAIX.

Уровень техники

Трансмембранный белок карбоангидраза IX (CAIX) является представителем большого семейства ферментов-карбоангидраз, которые обладают способностью катализировать обратимую гидратацию диоксида углерода в угольную кислоту, что приводит к снижению рН (Opavsky R, et al., Genomics 1996, 33: 480 487). Повышающая регуляция экспрессии генов CAIX происходит в ответ на гипоксию через прямую активацию транскрипции с помощью индуцируемого гипоксией фактора-1 альфа (HIF-1 α), и, как полагают, участвует в определении и поддержании кислой среды гипоксических клеток, в частности, в пределах гипоксических областей опухолей (Wykoff et al., Cancer Res 2000, 60: 7075-708; Svastova et al., FEBS Letters 2004 577: 439-445).

Антиген G250 тесно связан с многочисленными карциномами, такими как почечно-клеточная карцинома. Антиген G250 впервые был описан как антиген, ассоциированный с раком почки (WO 88/08854). Позднее было установлено, что этот антиген идентичен опухоль-ассоциированному антигену MN, антигену клеточной поверхности с активностью карбоангидразы, также называемому CAIX.

Нормальная экспрессия CAIX имеет место в желудочной, кишечной и желчной слизистых оболочках, где его физиологическая роль заключается в регуляции рН. Кроме его нормального паттерна экспрессии, экспрессия CAIX была обнаружена в различных опухолях, включая карциномы шейки матки, пищевода, толстой кишки, легкого, поджелудочной железы, желчного пузыря и светлоклеточную почечно-клеточную карциному (англ. Renal Cell Carcinoma, RCC).

Следовательно, антитела против CAIX, могут быть использованы при лечении рака. Анти-G250 антитела описаны, например, в ЕР 637336, WO 93/18152, WO 95/34650, WO 00/24913, WO 02/063010, WO 04/025302, WO 05/037083, WO 2011/139375 и их зарубежных эквивалентах. Кроме того, в WO 02/062972 описывается линия клеток гибридомы DSM АСС2526, которая производит моноклональные антитела к G250. Моноклональное антитело G250 распознает антиген предпочтительно экспрессируемый на мембранах клеток почечно-клеточной карциномы (RCC), но не экспрессируемый в нормальном проксимальном тубулярном эпителии. Антитело к G250 связывается с антигеном G250, который также называют MN-антигеном (см., например, WO 93/18152) или CAIX (карбоангидразой IX).

Способы определения экспрессии CAIX известны специалистам в данной области и включают, без ограничения перечисленным иммуногистохимическое окрашивание срезов тканей, которое описано, например, в Bui et al., Clinical Cancer Research 2003, 9: 802-811, Atkins et al., Clin. Cancer Res 2005, 11: 3714-3721, US 5,989,838, US 6,004,535, US 6,093,548, US 7,524,634, US 7,851,455. Такие способы могут быть использованы при прогнозе светлоклеточной почечно-клеточной карциномы человека.

Раскрытие изобретения

Задача настоящего изобретения заключается в создании способов, которые позволяют охарактеризовать CAIX-ассоциированные злокачественные опухолевые заболевания, а также предсказать, насколько эффективно и успешно будет лечение соединениями, нацеленными на CAIX. Согласно настоящему изобретению эта задача решается путем определения нового балла CAIX и его использования при лечении, диагностике, прогнозировании и классификации рака.

Таким образом, первый аспект настоящего изобретения относится к соединению, нацеленному на карбоангидразу IX (CAIX) для применения при лечении рака, где применение включает количественное определение экспрессии CAIX, по меньшей мере, одного в одном образце опухоли, полученном из объекта, подлежащего лечению, определение балла CAIX на основании экспрессии CAIX в образце опухоли, после чего объект подвергается лечению, если достигается определенный балл CAIX. Таким образом, подлежащий лечению рак характеризуется предварительно определенным баллом CAIX.

Согласно настоящему изобретению балл CAIX предпочтительно определяется или, соответственно, рассчитывается на основании экспрессии CAIX, описанной сочетанием выраженности опухолевых клеток и интенсивностью их окрашивания. Другими словами, количество/процент антигена CAIX, экспрессируемого опухолевыми клетками, а также интенсивность окрашивания окрашенных опухолевых клеток оба учитываются в балле CAIX используемом в данном документе. Экспрессию САIХ можно рассматривать как меру плотности антигена предпочтительно меру плотности полипептида CAIX в опухолевой ткани пациента, страдающего от рака, подлежащего лечению, предпочтительно, где рак представляет собой RCC или ccRCC. Балл CAIX является величиной, характеризующей количество иммунореактивности маркера, такого как CAIX, в образце. В балле учитывается как интенсивность окрашивания, так и процент клеток, окрашенных в определенном диапазоне интенсивностей. Балл определяется суммированием продуктов процента клеток, окрашенных до заданной интенсивности окрашивания (0-100) в образце (например, срез ткани рака ccRCC) и интенсивности окрашивания (0-3). Предпочтительно, балл может отражать специфический компартмент, например цитоплазму, мембрану и ядро. Балл также может быть определен с использованием числовой шкалы интенсивности окрашивания от 0 до 4. При этом балл находится в диапазоне от 0 до 400, вместо от 0 до 300, как в случае балла с интенсивностью окрашивания 0-3 (McClelland et al., Cancer Res. 50:3545-3550, 1990).

В частности, балл CAIX определяется и/или рассчитывается по формуле:

балл CAIX = (0 × процент жизнеспособных опухолевых клеток без окрашивания) + (1 × процент жизнеспособных опухолевых клеток со слабозаметной интенсивностью окрашивания) + (2 × процент жизнеспособных опухолевых клеток с умеренной интенсивностью окрашивания) + (3 × процент жизнеспособных опухолевых клеток с сильной интенсивностью окрашивания).

Например, образец с 10% с интенсивностью окрашивания 1, 20% с интенсивностью окрашивания 2 и 20% с интенсивностью окрашивания 3 и 20% неокрашенных клеток имеет балл (1 × 10)+(2 × 20)+(3 × 20)+(0 × 50)=110 или, при ином расчете (1 × 10/100)+(2 × 20/100)+(3 × 20/100)+(0 × 50/100)=1,1.

Балл CAIX может принимать любое значение от 0 (нет окрашивания) до 300 (100% жизнеспособные опухолевых клеток с интенсивностью окрашивания 3+) или 0 и 3 предпочтительно, если от 0,0 до 3,0.

В контексте настоящего изобретения «выраженность опухолевых клеток» или количество опухолевых клеток, экспрессирующих антиген CAIX, рассматривается в формуле балла CAIX в соответствии с настоящим изобретением указанием учетного процента жизнеспособных опухолевых клеток и интенсивности их окрашивания. Жизнеспособные опухолевые клетки могут быть подсчитаны или определены способами, известными специалистам в данной области. Например, количество клеток и/или соответствующий учетный процент могут быть определены путем визуального подсчета или с помощью компьютерных программ, таких как системы автоматической обработки изображений.

Выраженность опухолевых клеток как часть балла CAIX оценивается по четырехуровневой шкале (0, 1+, 2+ и 3+). Значение 0 выводится из окрашивания CAIX, сравнимого с контрольными образцами и представляет собой отсутствие экспрессии CAIX. Значения шкалы 1+ - 3+ выводятся из среднего образца опухолевых клеток, экспрессирующих CAIX, которые демонстрируют окрашивание опухолевых клеток от едва заметной до сильной. Обычный гистолог или патологоанатом со средней квалификацией в данной области может осуществить классификацию традиционным анализом на глаз (Cregger et al., Arch. Pathol. Lab. Med., 2006, 130: 1026-1030). Абсолютное значение интенсивности окрашивания может зависеть, например, от примененного окрашивающего реагента, окрашиваемой опухолевой ткани и т.п. Однако, в частности, эта проблема может быть преодолена с помощью вышеописанной системы-шкалы, содержащей степени от +1 до +3.

Интенсивность окрашивания в опухолевых клетках возрастает почти пропорционально от едва заметного окрашивания до сильного окрашивания. Диапазон этого линейного повышения интенсивности окрашивания опухолевых клеток, экспрессирующих CAIX, делится на три группы, имеющие значения от 1+ до 3+, с соответствующим увеличением интенсивности окрашивания, являющимся одинаковым для каждой группы. Другими словами, жизнеспособные опухолевые клетки делятся на клетки с нечеткой или едва заметной интенсивностью окрашивания (степень 1+), умеренной интенсивностью окрашивания (2+) и сильной интенсивностью окрашивания (3+).

После того, как балльная система была установлена для конкретного окрашивающего агента и конкретных опухолевых клеток в среднем образце опухолевых клеток, образующем систему координат, она может быть использована для дальнейших образцов опухолевых клеток, то есть соответствующая балльная система для CAIX, конечно, не создается для каждого образца опухолевых клеток.

«Интенсивность окрашивания» в соответствии с настоящим изобретением означает процент опухолевых клеток в каждой из ступеней четырехуровневой шкалы. Процент может быть любым от 0% до 100%. Интенсивность окрашивания определяется как процент опухолевых клеток, демонстрирующих слабое или едва заметное окрашивание мембраны для ступени +1, как процент опухолевых клеток, демонстрирующих умеренное окрашивание мембраны для ступени +2, как процент опухолевых клеток, демонстрирующих умеренное окрашивание мембраны для ступени +3 для каждого образца ткани (таблица 1).

Классификация опухолевых клеток, экспрессирующих CAIX, в соответствующей группе шкалы может быть легко осуществлена сравнением интенсивности окрашивания образца с эталонных опухолевым образцом, на котором была основана балльная система CAIX. Таким образом, вполне возможно, что образцы опухолевых клеток, не включают все три группы шкалы.

Специалистам в данной области известны способы определения интенсивностей окрашивания, либо для определения балльной системы, либо для сравнения различных образцов клеток или классификации клеток в балльную систему с целью сравнения интенсивности окрашивания (см. также Cregger et al., 1026, Arch. Pathol. Lab. Med., vol. 130, July 2006). Определение интенсивности окрашивания или классификации в балльной системе может осуществляться вручную или с помощью компьютерного программы или любым другим подходящим способом. В предпочтительном воплощении, балльная система применяется с использованием стандартизованных анализов контроля опухолей в сочетании с устройством, которое обеспечивает количественный и объективный вывод информации.

Ниже будет показан пример расчета балла CAIX для 100% выраженности экспрессии антигена CAIX с 40% умеренной и 60% сильной интенсивностями окрашивания. Дальнейшие примеры для других степеней экспрессии CAIX, другое содержание интенсивности окрашивания и соответствующие показатели приведены в таблице 2.

Расчет балла CAIX:

100% выраженность экспрессии антигена CAIX с 40% умеренной и 60% сильной интенсивностями окрашивания

(1*(0/100))+(2*(40/100))+(3*(60/100))

0+0,8+1,8=2,6

Согласно настоящему изобретению балл CAIX основан на экспрессии CAIX, которую необходимо определить. В данном описании термины экспрессия CAIX и экспрессия белка CAIX можно использовать взаимозаменяемо. Предпочтительно, если термин экспрессия CAIX связан с количеством экспрессированного белка CAIX. Таким образом, еще один аспект настоящего изобретения относится к соединению, нацеленному на CAIX для применения при лечении рака, где применение включает количественное определение белка CAIX, по меньшей мере, одного опухолевого образца полученного из объекта, подлежащего лечению, определение балла CAIX, основанного на белке CAIX в опухолевом образце, и лечение объекта при достижении предварительного определенного значения балла CAIX.

Другой аспект настоящего изобретения относится к соединению, нацеленному на карбоангидразу IX (CAIX) для применения при лечении рака, включающий введение терапевтически эффективного количества антагониста CAIX пациенту, если было обнаружено, что рак пациента имеет балл CAIX, равный или больше чем 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2.5 или 2,6. В предпочтительном воплощении, балл CAIX равен или больше чем 200, 210, 220, 230, 240, 250 или 260, наиболее предпочтительно, если балл CAIX равен или больше чем 260.

Еще одно воплощение настоящего изобретения относится к соединению, нацеленному на карбоангидразу IX (CAIX) для применения при лечении рака причем, по меньшей мере, один опухолевый образец ткани объекта, подлежащего лечению, характеризуется баллом CAIX, по меньшей мере, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5 или 2,6, более предпочтительно, если, по меньшей мере, 200, 210, 220, 230, 240, 250 или 260, наиболее предпочтительно, если, по меньшей мере, 260.

В силу этого экспрессированный CAIX подвергается количественной оценке, если экспрессия имеет место в одном или нескольких образцах, полученных из объекта, подлежащего лечению. Предпочтительно, если образец полученный из объекта, подлежащего лечению, представляет собой образец ткани рака, подлежащего лечению. Более предпочтительно, если образец ткани рака, подлежащий лечению, представляет собой образец ткани, полученный из почечно-клеточной карциномы (RCC), наиболее предпочтительно, если из светлоклеточной почечно-клеточной карциномы (ccRCC).

Предпочтительно, если экспрессированный CAIX количественно определяется окрашиванием опухолевых клеток, предпочтительно иммуногистохимическим окрашиванием, более предпочтительно иммуногистохимическим окрашиванием, при котором белок CAIX или полипептид CAIX специфически связывается с моноклональными антителами, более предпочтительно с моноклональными антителами с доменом связывающим эпитоп на N-конце CAIX, еще более предпочтительно моноклональным антителом М75, наиболее предпочтительно моноклональным антителом, которое секретируется из гибридомы VU-M75, которая имеет учетный номер АТСС НВ 11128. Специалисту в данной области техники известны подходящие способы иммуногистохимического окрашивания. Наборы для иммуногистохимического окрашивания коммерчески доступны и включают, без ограничения перечисленным, набор CAIX IHC, предлагаемый Oncogene Science 100 Acorn Парк Драйв, Кембридж, Массачусетс 02140, США. Другой пример способа иммуногистохимического окрашивания описан, например, в ЕР 1501939 В1. Иммуногистохимическое окрашивание срезов тканей может быть сделано с помощью анти-CAIX антитела с использованием пероксидазного метода с демаскировкой антигена с помощью термической обработки, как описано в системе окрашивания Dako (Dako Corporation, Carpenteria, CA). Антитела, используемые в иммуноанализе и/или иммуногистохимическом окрашивании могут быть поликлональными или моноклональными. Предпочтительно, если используются моноклональные антитела. В способе иммуногистохимического окрашивания в соответствии с настоящим изобретением могут быть использованы меченые или немеченные антитела. Меченые средства обнаружения включают метки, которые могут содержать люминесцентные средства, ферменты, коферменты, радионуклеотиды, хемилюминесцентные средства, субстраты ферментов, частицы, красители и т.д. Соответствующие анализы включают иммуноферментные анализы, флуоресцентные иммунологические анализы, радиоиммуноанализ, тИФА и т.д. Детектирующие антитела для применения в иммуногистохимическом окрашивании тканей включают моноклональные антитела М75, MN9, MN, 12, MN7. Детектирующими антителами, предпочтительно используемые в соответствии с настоящим изобретением, являются М75. Антитело М75 дополнительно описано в US 5,981,711 и является частью набора CAIX IHС, предлагаемого Oncogene Science (см. выше). Особенно предпочтительными являются способы окрашивания, которые обеспечивают измеримые и/или сопоставимые результаты, такие как интенсивность красителя, интенсивности флуоресценции, радиосигналы, ферментативную активность и т.д.

В соответствии с предпочтительным воплощением, экспрессируемая CAIX включает полипептид CAIX или фрагмент полипептида CAIX. В соответствии с другим предпочтительным вариантом, экспрессируемая CAIX содержит мРНК, кодирующую полипептид CAIX или фрагмент полипептида CAIX. Специалисту в данной области техники известны способы определения количества мРНК в образце клетки, такие как Нозерн-блоттинг, микроанализы, ПЦР в реальном времени и т.д.

В соответствии с предпочтительным воплощением объект подвергается лечению, если балл CAIX в образце опухоли, полученном из объекта составляет ≥2,0, предпочтительно из объекта в возрасте менее 65 лет. В дальнейшем, более предпочтительном воплощении, балл составляет ≥2,1, более предпочтительно ≥2,2, более предпочтительно ≥2,3, еще более предпочтительно ≥2,4, еще более предпочтительно ≥2,5. Анализ всех возможных баллов CAIX от 0,0 до 3,0, показывает, что чем больше увеличивается балл CAIX, тем более значительным является эффект лечения. Пациенты, имеющие балл CAIX ≥2,6, демонстрируют статистически значимый терапевтический эффект при лечении соединением, нацеленным на CAIX, в частности анти-G250 антителом. Также балл CAIX ≥2,6 рассматривается в качестве наиболее предпочтительного воплощения. Предпочтительно, если образец опухоли, полученный из объекта, представляет собой, по меньшей мере, один образец ткани злокачественной опухоли из объекта, подлежащего лечению. Более предпочтительно, если образец опухоли, полученный из объекта, представляет собой, по меньшей мере, один образец ткани полученной из почечно-клеточной карциномы (RCC) объекта, подлежащего лечению, наиболее предпочтительно, полученной из светлоклеточной почечно-клеточной карциномы (ccRCC).

В соответствии с другим предпочтительным воплощением балл CAIX или предварительно определенный балл CAIX равен или больше, чем 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5 или 2,6. В некоторых вариантах осуществления, балл CAIX равен или больше, чем 200, 210, 220, 230, 240, 250 или 260. В предпочтительном воплощении, балл CAIX равен или больше, чем 260.

Молекула, нацеленная на CAIX, может быть любым соединением, специфически распознающим CAIX, опосредующим свою активность путем связывания с CAIX или его фрагментом или вариантом его сплайсинга; необратимым связыванием при входе в активный участок, и/или ингибированием CAIX путем координации с цинковым ионом в активном сайте CAIX. Предпочтительно, если соединение, нацеленное на CAIX, специфически взаимодействует с полипептидом CAIX. В частности взаимодействующее с (например, распознающее или связывающееся с) означает, что соединение, нацеленное на CAIX, например антитело имеет большее сродство к CAIX, чем к другим полипептидам. В одном воплощении соединение, нацеленное на CAIX, взаимодействует с (т.е. связывается с или распознает) или модулирует активность полипептида CAIX и/или опосредует антитело-зависимую клеточную цитотоксичность (ADCC) и/или комплемент опосредованную цитотоксичность (CDC). Таким образом, в соответствии с одним из вариантов осуществления, нацеленное соединение представляет собой ингибитор CAIX. Указанный ингибитор CAIX может действовать на уровне белка или уровне нуклеиновых кислот. Примеры ингибиторов CAIX, например, действующих на уровне белка, включают, без ограничения перечисленным, пептиды и анти-CAIX антитела, а также функциональные фрагменты этих антител или малых органических молекул, предпочтительно, имеющих молекулярную массу ниже 500 г/моль. Примеры анти-CAIX антител или антител против CAIX описаны в ЕР 637336, WO 93/18152, WO 95/34650, WO 00/24913, WO 02/063010, WO 04/025302, WO 05/037083, WO 2011/. 139375, Murri-Plesko et al., Eur J Pharmacol 2011, 657: 173-183. Примеры небольших органических молекул включают, без ограничения перечисленным, сульфонамиды, гетероароматические сульфонамиды, сульфаматы, кумарины и тиокумарины и BAY-79-4620. Примерами ингибиторов, действующих на уровне нуклеиновой кислоты, являются молекулы миРНК, рибозимы и/или антисмысловые молекулы.

В соответствии с особенно предпочтительным воплощением соединение, нацеленное на CAIX, и/или ингибитор представляет собой анти-CAIX антитело и/или функциональный фрагмент такого антитела. В соответствии с предпочтительным воплощением фрагмент анти-CAIX антитела обладает по существу той же CAIX-связывающей и/или ингибирующей активностью, что и полноразмерное анти-CAIX антитело и/или эпитоп-связывающий фрагмент анти-CAIX антитела.

В другом предпочтительном воплощении антитело и/или фрагмент такого антитела выбирают из группы, состоящей из поликлональных антител, моноклональных антител, их антигенсвязывающих фрагментов, таких как F(ab')₂, Fab', SFV, dsFv и химеризированный, гуманизированный и полностью человеческий их варианты. В соответствии с другим предпочтительным воплощением, это анти-CAIX антитело или эпитоп-связывающий фрагмент связываются с аминокислотной последовательностью LSTAFARV и/или ALGPGREYRAL.

Согласно еще одному особенно предпочтительному воплощению соединение, нацеленное на CAIX, является антителом против G250 и/или его эпитоп-связывающим фрагментом. Анти-G250 антитела, например, описаны в ЕР-В-0637336. Особенно предпочтительно, если противоопухолевое антитело представляет собой гуманизированное или химерное антитело против G250 и/или его фрагмент. Антитела для применения в настоящем изобретении, могут быть получены любым подходящим способом, известным в данной области, включая, без ограничения перечисленным, способы, описанные в РСТ/ЕР02/01282 и РСТ/ЕР02/01283, которые включены в данный документ ссылкой.

Особенно предпочтительным антителом является cG250, предпочтительно гирентуксимаб (INN). Другим особенно предпочтительным воплощением изобретения является моноклональное антитело G250, продуцируемое гибридомной клеточной линией DSM АСС 2526. Антитело cG250 представляет собой химерную версию легкой цепи IgG1 каппа исходно мышиного моноклонального антитела mG250.

Рак, подлежащий лечению, представляет собой рак, который характеризуется экспрессией CAIX. В частности, рак характеризуется наличием балла CAIX, определенного в данном документе, ≥2,0, предпочтительно, из объекта в возрасте менее 65 лет, и, в частности, имеющего балл CAIX ≥2,6, как указано выше. В соответствии с особенно предпочтительным воплощением объект, подлежащий лечению, имеет возраст менее 65 лет, и балл CAIX ≥2,6.

Предпочтительно, если рак или рак пациента выбран из группы, включающей карциномы шейки матки, карциномы пищевода, карциномы желудка, карциномы ободочной кишки, карциномы яичника, карциномы печени, карциномы мочевого пузыря, карциномы легкого, рак головы и шеи, карциномы желчевыводящих путей и почечно-клеточные карциномы.

В особенно предпочтительном воплощении рак представляет собой светлоклеточную почечно-клеточную карциному (RCC).

В наиболее предпочтительном воплощении настоящего изобретения светлоклеточную почечно-клеточную карциному лечат введением антитела G250, и, в частности, cG250, предпочтительно, гирентуксимаба.

Предпочтительно, если у объекта, подлежащего лечению, был диагностирован неметастатический тип рака или заболевание без метастазов, более предпочтительно, если у объекта неметастатический тип рака или неметастатическое заболевание и/или был диагностирован высокий риск рецидива.

В соответствии с другим воплощением соединение, нацеленное на CAIX, и, в частности анти-G250 антитело, должно использоваться после того, как объект, подлежащий лечению, претерпел иссечение первичной опухоли, предпочтительно, нефрэктомию опухоли, более предпочтительно, нефрэктомию опухоли и лимфаденэктомию. Предпочтительно, если эта первичная опухоль является G250 антиген-экспрессирующей опухолью, в частности, выбранной из группы карцином шейки матки, карцином пищевода, карцином желудка, карцином ободочной кишки, карцином печени, карцином мочевого пузыря, карцином легких, карцином желчевыводящих путей, рака головы и шеи и светлоклеточной почечно-клеточной карциномы (ccRCC).

Соответственно в еще одном предпочтительном воплощении соединение, нацеленное на CAIX, и, в частности анти-G250 антитело, используется в качестве адъювантной терапии. С точки зрения настоящего изобретения, адъювантная терапия описывает способ поразить оставшиеся раковые клетки, которые не видны. Адъювантные способы лечения, как правило, используются после первичного лечения, такого как хирургия или лучевая терапия, для того, чтобы избежать каких-либо рецидивов рака. Пример адъювантной терапии представляет собой дополнительное лечение, обычно предоставляемое после операции, когда все обнаруженное заболевание было удалено, но при котором сохраняется статистический риск рецидива в связи с невыявленным заболеванием. Виды адъювантной терапии включают в себя химиотерапию, гормональную терапию, лучевую терапию и/или иммунотерапию. Например, лучевая терапия или системная терапия обычно дается в качестве адъювантной терапии после операции по удалению рака молочной железы. Системная терапия может состоять из химиотерапии, иммунотерапии или модификаторов биологического ответа или гормональной терапии. Предпочтительно, если используется соединение, нацеленное на CAIX, в соответствии с настоящим изобретением, адъювантная терапия может быть объединена с любым из этих типов известной адъювантной терапии.

Еще один аспект настоящего изобретения относится к соединению, нацеленному на CAIX, для использования при лечении злокачественной опухоли, экспрессирующей CAIX, где раковые клетки характеризуется баллом CAIX ≥2,0 и, в частности, ≥2,6.

Конечно же, может быть использовано любое соединение, нацеленное на CAIX, как указано выше. Предпочтительно, если соединение, нацеленное на CAIX, представляет собой анти-G250 антитело, в частности антитела к cG250, и/или его эпитопсвязывающий фрагмент.

В соответствии с другим воплощением соединение, нацеленное на CAIX, и, в частности антитело к cG250, для применения при лечении светлоклеточной почечно-клеточной карциномы, имеет CAIX баллов ≥2,0 и, в частности ≥2,6.

В соответствии с другим воплощением соединение, нацеленное на CAIX, и, в частности антитело cG250, для использования при лечении светлоклеточной почечно-клеточной карциномы, имеющей балл CAIX ≥2,0 и где объект, подлежащий лечению, младше 65 лет и/или имеет балл CAIX ≥2,6.

Еще один аспект настоящего изобретения относится к способу диагностики, прогнозирования и/или классификации злокачественного опухолевого заболевания, включающий:

(a) количественную оценку экспрессии CAIX в образце рака путем окрашивания, и

(b) классификацию злокачественного опухолевого заболевания в зависимости от выраженности и интенсивности окрашивания окрашенных раковых клеток.

Способ диагностики может дополнительно содержать определение балла CAIX, как описано выше.

Диагностируемый и/или классифицируемый рак предпочтительно является раком, описанным выше, в частности светлоклеточной почечно-клеточной карциномой. Предпочтительно, этот рак имеет балл CAIX ≥2,0, еще более предпочтительно - если ≥2,6.

Прогностическое воплощение включает применение балла CAIX для прогноза будет ли пациент, подвергаемый лечению, реагировать на лечение соединением, нацеленным на CAIX или нет, в частности на лечение анти-G250 антителом. Это, в частности, используется для прогнозирования, будет ли пациент реагировать на лечение антителами к cG250, предпочтительно, гирентуксимабом. Другими словами, может быть спрогнозировано, кто из пациентов, вероятно, извлечет выгоду из лечения соединениями, нацеленными на CAIX. Например, пациенты с светлоклеточной почечно-клеточной карциномой, у которых соответствующий образец опухолевых клеток демонстрирует балл CAIX ≥2,6, скорее всего, выиграют от лечения антителом, предпочтительно cG250-антителом, предпочтительно гирентуксимабом.

Пациенты с высокой Т-стадией (Т3/Т4), низкой градацией (G1/G2), без вовлечения лимфатических узлов (N0/NX) и без метастатического заболевания (М0), имеют худший прогноз при низком балле CAIX по сравнению с пациентами с высоким баллом CAIX.

Еще один аспект настоящего изобретения относится к способу лечения рака, который включает:

(a) определение с помощью окрашивания экспрессии CAIX в раковой клетке, полученной из объекта, подлежащего лечению,

(b) определение балла CAIX по выраженности и интенсивности окрашивания раковых клеток, и

(c) введение соединения, нацеленного на CAIX, если на стадии (b) было превышено предварительно определенное пороговое значение CAIX.

В соответствии с предпочтительным воплощением соединение, нацеленное на CAIX, по настоящему изобретению, в частности анти-G250 антитело, вводят в виде монотерапевтического протокола, предпочтительно вводят в виде монотерапии.

Соединение, нацеленное на CAIX, и, в частности, анти-G250 антитело, предпочтительно антитело к cG250, более предпочтительно гирентуксимаб, можно также вводить в протоколе комбинированной терапии или в качестве комбинированной терапии, например, как уже говорилось выше, адъювантное лечение анти-G250 антителом может быть объединено с любым другим типом адъювантной терапии. Предпочтительно, если совместно с антителом для увеличения антитело-зависимой клеточной цитотоксичности (ADCC) и/или для активации иммунной системы пациента, например, NK-клеток вводиться цитокин. Этот цитокин предпочтительно выбирают из группы, состоящей из интерлейкинов, таких как IL-2, -3, -4, -5, -6, -7, -8, -9, -10, -12, -13, -14, и -15, интерферон, например, IFN-α, IFN-β и IFN-γ, α-TFN, TNF-β фактор роста нервов, лиганды CD40, CD27, Fas и CD30, макрофаги ингибирования белка, RANTES, активные фрагменты фармацевтически приемлемых аналогов и производных, и их смесей. Более предпочтительно, если цитокин выбирают из IL-2 и IFN-альфа. Конечно же возможно сочетание с другими цитотоксическими средствами, например доксорубицином, цисплатиной или карбоплатиной и другими неопластическими средствами.

Специалист может определить дозу соединения, нацеленного на CAIX, и, в частности к G250-антиген специфического антитела, на основании, например, возраста, массы, состояния и тяжести заболевания. Режим дозирования либо 20 мг, либо 50 мг cG250-антитела, например, на одного пациента в еженедельном цикле, будет доставлять концентрации выше 0,5 мкг/мл, предпочтительно, 1 мкг/мл и, следовательно, должен быть достаточным для эффективности. Таким образом, в предпочтительном варианте вводится еженедельная доза G250-специфичных антител 5-250 мг/неделю, более предпочтительно 10-100 мг/неделю и, наиболее предпочтительно от 20 мг/неделю до 50 мг/неделю.

В соответствии с предпочтительным воплощением, G250 антиген-специфичное антитело и/или фрагмент антитела вводят объекту, нуждающемуся в этом, по меньшей мере, в две стадии обработки, в которых вводят различные, предпочтительно уменьшающиеся количества антитела.

Более предпочтительно, если способ по настоящему изобретению включает введение в два этапа G250-антиген-специфичного антитела и/или фрагмента антитела субъекту, нуждающемуся в этом, причем

(а) на первой стадии лечения G250-антиген-специфичное антитело вводят в дозе 10-250 мг/неделю, предпочтительно 20-100 мг/неделю, более предпочтительно 30-100 мг/неделю, более предпочтительно 30-55 мг/неделю и, наиболее предпочтительно 50 мг/неделю, и

(б) на второй стадии G250-антиген-специфической антитело вводят в дозе 5-100 мг, предпочтительно 10-50 мг, более предпочтительно 15-25 мг, наиболее предпочтительно, 20 мг/неделю.

Еще более предпочтительно, если первая стадия лечения включает введение 50 мг/неделю G250-специфичного антитела, а вторая стадия лечения включает введение 20 мг/неделю.

Противоопухолевое антитело предпочтительно вводят внутривенно, предпочтительно путем инфузии или внутривенной инъекции. Введение антитела путем инфузии предпочтительно осуществляют вплоть до около 30 минут, более предпочтительно примерно за 15 минут. Конечно же, соединение, нацеленное на CAIX, может быть также введено внутрибрюшинно или внутримышечно.

Схемы дозирования с еженедельными инфузиями 20 или 50 мг антитела против cG250 в течение вплоть до 20 недель, по всей видимости, хорошо переносятся и не приводят к значительному развитию НАСА.

Поэтому предпочтительно, если первая стадия лечения включает вплоть до 12 недель, предпочтительно вплоть до 6 недель, еще более предпочтительно вплоть до одной недели, а на второй стадии лечения включает вплоть до 156 недель, предпочтительно вплоть до 104 недель, более предпочтительно вплоть до 52 недель, еще более предпочтительно вплоть до 12-24 недель.

В наиболее предпочтительном воплощении первая стадия лечения включает вплоть до одной недели и введение одной нагрузочной дозы составляет 50 мг/неделю антитела к cG250, а вторая стадия лечения включает вплоть до 24 недель, и введение составляет 20 мг/неделю антитела к cG250 для лечения светлоклеточной почечно-клеточной карциномы.

В другом предпочтительном воплощении первая стадия лечения включает вплоть до одной недели и введение одной нагрузочной дозы 50 мг/неделю cG250 антитела внутривенно, и на второй стадии лечения включает вплоть до 24 недель, и введение 20 мг/неделю cG250 антитела для лечения светлоклеточной почечно-клеточной карциномы, предпочтительно, если на второй стадии лечения включает, по меньшей мере, 8 последовательных внутривенных введений 20 мг/неделю cG250 антитела для лечения светлоклеточной почечно-клеточной карциномы.

Соединение, нацеленное на CAIX, в частности антитело к cG250, может, конечно же, быть введено в фармацевтическую композицию. Это фармацевтически приемлемая композиция может содержать приемлемые носители, разбавители и/или адъюванты. Термин «носитель», используемый в данном документе, включает носители, наполнители и/или стабилизаторы, которые являются нетоксичными для клетки или млекопитающего подвергнутого их воздействию в используемых дозах и концентрациях. Часто физиологически приемлемые носители представляют собой водные растворы с заданным рН или липосомы. Примеры физиологически приемлемых носителей включают буферы, такие как фосфат, цитрат и другие органические кислоты; антиоксиданты, включая аскорбиновую кислоту, низкомолекулярные (менее чем приблизительно 10 остатков) полипептиды; белки, такие как сывороточный альбумин, желатин или иммуноглобулины; гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон; аминокислоты, такие как глицин, глутамин, аспарагин, аргинин или лизин; моносахариды, дисахариды и другие углеводы, включая глюкозу, маннозу или декстрины, желатинирующие агенты, таких как EDTA, сахара, спирты, такие как маннит или сорбит; солеобразующие противоионы, такие как натрий; и/или неионные ПАВ, такие как TWEEN, полиэтилен или полиэтиленгликоль.

В особенно предпочтительном воплощении соединение, нацеленное на CAIX, вводят в нормальном физиологическом растворе (стерильный 0,9% раствор поваренной соли в воде).

В соответствии с особенно предпочтительным воплощением антитело к cG250 вводят в физиологическом растворе путем внутривенной инфузии, например, 100 мл раствора в течение 15 мин.

Термин «карбоангидраза IX» и «CAIX», «СА9», «МН» и «G250» в настоящем описании считаются синонимомами.

«CG250» и гирентуксимаб используются взаимозаменяемымо.

«Антиген» относится к лиганду, который может связываться, например, с антителом. Части антигена, которые вступают в контакт с антителом, названы «эпитопами».

Если не указано иное, «окрашивание», используемое в данном документе, относится к любому способу, который делает видимыми опухолевые клетки. Предпочтительным способом «окрашивания» является иммуногистохимическое окрашивание, как описано выше.

Краткое описание чертежей

Фиг. 1: HR (отношение рисков) и р-значения для увеличивающихся значений балла CAIX для ITT-популяций (популяции всех пациентов, начавших получать лечение; Intent-to-treat, ITT) и PP-популяций (популяции всех пациентов, выполнивших требования протокола; Per Protocol, РР).

Фиг. 2: DFS по группе (cG250 по сравнению с плацебо) для порогового значения CAIX 2,6.

Фиг. 3: кривая DFS для РР-популяции с баллами CAIX ≥2,6.

Фиг. 4: Высокий балл CAIX (≥2,0) и возраст <65 лет (ITT-популяция).

ПРИМЕРЫ

Следующие результаты основаны на рандомизированном двойном слепом исследовании Фазы III, проведенном для оценки адъювантной терапии cG250 в сравнении с плацебо у пациентов со светлоклеточной почечно-клеточной карциномой (ccRCC) и высоким риском рецидива.

Задачи:

Задачи данного исследования заключались в оценке безрецидивной выживаемости (disease free survival, DFS) на терапии гирентуксимабом по сравнению с плацебо и в оценке общей выживаемости (overall survival, OS) на терапии гирентуксимабом по сравнению с плацебо.