Способ прогнозирования угрозы невынашивания беременности ранних сроков при цитомегаловирусной инфекции путем определения в крови плацентарного фактора роста

Способ прогнозирования угрозы невынашивания беременности ранних сроков при цитомегаловирусной инфекции путем определения в крови плацентарного фактора роста

Реферат

Область применения: изобретение относится к области медицины, а именно к проблеме создания новых способов прогнозирования прерывания и невынашивания беременности ранних сроков инфекционного генеза, в том числе при цитомегаловирусной инфекции.

Уровень техники

Высокий процент гестационных потерь (20-25%) и широкое распространение цитомегаловирусной (ЦМВ) инфекции среди женщин репродуктивного возраста (75-90%) [7, 8] указывают на медико-социальную значимость данной проблемы.

Важно и то, что ЦМВ обладает высокой тератогенной значимостью - второе место после вируса краснухи, что способствует нарушению морфогенеза плаценты и эмбриональных структур, пролонгирующих прерывание и невынашивание беременности ранних сроков [3, 8].

Вышеизложенные данные определяют необходимость разработки прогностических критериев угрозы прерывания при данной патологии у женщин, что позволит снизить число репродуктивных потерь за счет формирования групп риска и комплекса лечебно-профилактических мероприятий.

На сегодняшний день диагностике и прогнозированию невынашивания беременности инфекционного генеза посвящено немало работ. Известны способы прогнозирования невынашивания беременности ранних сроков инфекционного генеза путем определения в сыворотке крови растворимой формы рецептора sFlt-1 [2], содержания в слизи цервикального канала интерлейкина-12 [4] и уровня MIP-1α [5].

Вышеперечисленные факторы как изолированно, так и в сочетании друг с другом могут свидетельствовать о нарушении процессов имплантации и сопутствующей ему гибели и отторжении эмбриона на ранних этапах беременности. В связи с этим, наибольшую диагностическую ценность имеют способы, позволяющие проводить раннюю диагностику и прогнозирование угрожающих состояний беременности инфекционного генеза.

Аналогами данного изобретения являются приведенные выше способы прогнозирования невынашивания беременности инфекционного генеза [2, 4, 5], основными недостатками которых являются трудоемкость и неспецифичность.

Наиболее близким по техническому решению является способ прогнозирования неразвивающейся беременности, путем определения в сыворотке крови содержания плацентарного фактора роста (PlGF) [12]. При снижении его в 2,7 и более раза относительно нормы прогнозируют неразвивающуюся беременность.

Несмотря на достоинства данного метода, недостатком являются то, что при оценке угрожающего течения беременности учитывается один из клинических вариантов проявлений невынашивания - гибель эмбриона с его задержкой в полости матки, тогда как наши исследования раскрывают конкретные этиопатогенетические взаимосвязи между содержанием PlGF в сыворотке крови ЦМВ-серопозитивных беременных, уровнем активности инфекции на первом триместре и риском угрозы прерывания. Данный способ принят за прототип.

Недостатки прототипа устраняются в заявляемом способе.

Задача изобретения - повышение точности способа прогнозирования угрозы невынашивания беременности ранних сроков при цитомегаловирусной инфекции для своевременного лечения и выработки оптимальной тактики ведения беременности с целью снижения перинатальной заболеваемости и смертности.

Поставленная задача решается тем, что у беременных женщин с выявленной цитомегаловирусной инфекцией на первом триместре беременности проводят определение в сыворотке крови уровня антител IgM и содержания PlGF и при уровне антител IgM к ЦМВ 2,0 ЕД/мл и более и показателях PlGF 53,70 пг/мл и менее прогнозируют прерывание беременности.

Технический результат состоит в том, что данный способ обладает высокой точностью, чувствительностью и специфичностью.

Плацентарный фактор роста (PlGF) относят к проангиогенным факторам, регулирующим морфогенез плаценты и васкуляризацию ее ворсин, что обеспечивает процессы инвазии трофобласта и формирование маточно-плацентарного кровообращения [11]. Его секреция гигантскими клетками трофобласта, как показывают исследования, является сигналом, инициирующим и координирующим васкуляризацию в decidua и плаценте во время раннего эмбриогенеза [9]. Неадекватное формирование и дисфункция сосудов плаценты приводят к развитию недостаточности первой волны инвазии трофобласта и обусловленную этим редукцию маточно-плацентарного кровообращения, гипоплазию плаценты и задержку внутриутробного развития эмбриона [6, 13]. Эти данные согласуются с результатами исследования A. Khaliq и соавт. [10], которые считают, что локализация в большом количестве мРНК и протеина PlGF в синцитиокапиллярной мембране ворсин плаценты указывает на то, что PlGF может выступать как паракринный медиатор формирования кровеносных сосудов плаценты в процессе ангиогенеза.

Вместе с тем, в литературе отсутствуют данные, доказывающие вовлеченность PlGF в патогенез ранних выкидышей при цитомегаловирусной инфекции.

Таким образом, PlGF следует рассматривать как важную регуляторную составляющую при цитомегаловирусной инфекции, определяющую события, которые характеризуют прерывание и невынашивание беременности ранних сроков.

Изучение содержания PlGF в сыворотке крови позволит оценить характер процессов имплантации при цитомегаловирусной инфекции.

Вышеизложенное явилось основанием к исследованию показателей PlGF, определяемого в сыворотке крови женщин при цитомегаловирусной инфекции на первом триместре беременности, для прогноза угрозы невынашивания. Наши исследования позволили установить количественные показатели PlGF в сыворотке крови, которые являются определяющими для отбора женщин высокой группы риска по невынашиванию беременности ранних сроков при цитомегаловирусной инфекции.

Способ осуществляют следующим образом:

У беременных с выявленной цитомегаловирусной инфекцией на первом триместре исследуют сыворотку крови, полученную из цельной крови, взятой из локтевой вены утром натощак в количестве 5 мл. Определение уровня антител IgM к ЦМВ и показателей PlGF проводят методом иммуноферментного анализа с использованием стандартных тест-систем ЦMB-IgM-ИФА-БЕСТ (Россия) и Quantikine PlGF Human (США). Учет реакции проводят на иммуноферментном анализаторе Stat Fax-2100 (США) согласно протоколам для постановки иммуноферментного анализа от фирмы-производителя в сыворотке крови.

При уровне антител IgM к ЦМВ 2,0 ЕД/мл и более и показателях PlGF 53,70 пг/мл и менее прогнозируют прерывание беременности ранних сроков, что позволяет акушеру-гинекологу своевременно назначить адекватную терапию.

Достоверность способа была подтверждена нашими исследованиями. По заявляемому способу обследовано 45 беременных на первом триместре беременности, из них - 20 были ЦМВ-серопозитивными (1 группа) и 25 - ЦМВ-серонегативными (2 группа). В 1 группе диагностирована реактивация цитомегаловирусной инфекции, о чем свидетельствовал высокий уровень антител IgM к ЦМВ 2,0±0,16 ЕД/мл (оптическая плотность контрольного образца - 0,210 ЕД/мл). Показатели PlGF по сравнению со 2 группой (69,00±1,28 пг/мл) уменьшались до 53,70±1,61 пг/мл (р=0,000). Все женщины 1 группы имели клинические признаки угрозы прерывания беременности, которая, несмотря на проводимую сохраняющую терапию, закончилась самопроизвольным выкидышем.

Таким образом, учитывая достоверность различий, показатель PlGF в сыворотке крови женщин при цитомегаловирусной инфекции на первом триместре беременности 53,70 пг/мл и менее, определяемый до начала терапии, является прогностическим маркером угрозы прерывания беременности.

Статистический анализ исходных данных осуществлялся с использованием лицензионных пакетов прикладных программ Microsoft Exel 2007, Statistica 6.0.

Точность метода определения PlGF составляет 88,2%, чувствительность - 83,3%, специфичность - 90,9,7%. Предсказательная ценность положительного теста составляет 95,2%, предсказательная значимость отрицательного теста - 71,4%.

Преимущество заявляемого метода состоит в том, что у беременных с цитомегаловирусной инфекцией на основании высокочувствительных современных лабораторных маркеров инфекционно-воспалительного процесса производится прогнозирование угрозы невынашивания, с целью своевременного назначения адекватной терапии. В клинической практике это позволит снизить угрозу перинатальных потерь за счет своевременного выявления беременных группы риска и начала адекватных лечебных мероприятий.

Данный способ неинвазивен, обладает быстротой исполнения с использованием стандартных тест-систем, что позволяет широко использовать его в практическом здравоохранении.

Пример 1. Беременная А., 24 г., находилась на стационарном лечении в АОПБ ДНЦ ФПД. Повторнобеременная. Диагноз: Беременность 8-9 недель. Угрожающий аборт. Хроническая цитомегаловирусная инфекция - стадия обострения.

При обследовании была проведена ПЦР диагностика содержимого цервикального канала, выявлено ДНК ЦМВ, при иммуноферментном исследовании сыворотки крови - типоспецифические антитела к ЦМВ классов М и G. Уровень антител IgM к ЦМВ - 2,2 ЕД/мл. Диагностирована реактивация цитомегаловирусной инфекции.

Определен PlGF, показатели соответствовали 53,2 пг/мл. Заключение: прогнозируется угроза прерывания беременности с неблагоприятным исходом.

Беременной назначен курс сохраняющей терапии, который результатов не дал. Боли внизу живота усилились, появились кровянистые выделения из половых путей. На сроке 9 недель произошло прерывание беременности, что подтвердило правильность прогноза.

Пример 2. Беременная С., 25 л., находилась на стационарном лечении в АОПБ ДНЦ ФПД. Повторнобеременная. Диагноз: Беременность 9-10 недель. Отягощенный акушерско-гинекологический анамнез. Хроническая цитомегаловирусная инфекция, латентное течение.

При обследовании была проведена ПЦР диагностика. ДНК ЦМВ не выявлено. При иммуноферментном исследовании сыворотки крови определялись типоспецифические антитела к ЦМВ класса G. Диагностировано латентное течение хронической цитомегаловирусной инфекции.

Определен PlGF, показатели составили 71,3 пг/мл. Заключение: физиологическое течение беременности.

У данной пациентки беременность пролонгировалась и завершилась родами в срок 38-39 недель. Данный клинический пример подтверждает возможность прогнозирования физиологического течения беременности

Источники информации

1. Подходы к диагностике цитомегаловирусной инфекции в акушерстве и неонатологии / М.Л. Алексеева, А.Н. Екимов, В.Е. Екимова [и др.] // Проблемы репродукции. - 2010. - №5. - С. 52-56.

2. Дубровина C.O., Маклюк A.M. Способ прогнозирования невынашивания беременности ранних сроков инфекционного генеза / Патент РФ №2444734, 10.03.2010.

3. Кулаков В.И., Гуртовой Б.Л., Орджоникидзе Н.В., Тютюнник B.Л. Цитомегаловирусная инфекция в акушерстве. В помощь практическому врачу. – М.: ГАОЭТАР-МЕД. - 2001. - 32 с.

4. Левкович М.А. Способ прогнозирования невынашивания беременности при урогенитальной инфекции / Патент РФ №2341799, 20.12.2008.

5. Левкович М.А., Линде В.А., Палиева Н.В., Андреева В.О., Нефедова Д.Д. Способ прогнозирования невынашивания беременности в ранние сроки / Патент РФ №2501017, 10.12.2013.

6. Милованов А.П., Фокин Е.И., Рогова Е.В. Основные патогенетические механизмы хронической плацентарной недостаточности. Архив патологии. - 1995. - Т. 57, №4. - С. 11-15.

7. Раздинский В.Е., Запертова Е.Ю., Миск В.В. Генетические и иммунологические аспекты привычного невынашивания беременности // Акушерство и гинекология. - 2005. - С. 6., Сидельникова В.М. Привычная потеря беременности // Иммунологические аспекты невынашивания беременности. - М., 2007. - С.70-71.

8. Сидельникова В.М. Привычная потеря беременности // Иммунологические аспекты невынашивания беременности. М., 2007. - C. 70-71.

9. Purification and characterization of a naturally occurring vascular endothelial growth factor-placenta growth factor heterodimer / DiSalvo J, Bayne ML, Conn G [et al.] // J Biol Chem 1995; 270: 7717-7723.

10. Automated evaluation of angiogenic effects mediated by VEGF and PLGF homo-and heterodimers / Kurz H, Wilting J, Sandau K [et al.] // Microvasc Res 1998; 55(1): 92-102.

11. Decidual vascularization and the expression of angiogenic growth factors and proteases in first trimester spontaneous abortions / Plaisier M, Dennert I, Rost E [et al.] // Hum. Reprod. 2009 Jan; 24(1): 185-97.

12. Plasma Placenta Growth Factor Levels in Midtrimester Pregnancies / Tjoa ML, van Vugt JM, Mulders MA [et al.] // Obstet Gynecol. 2001; 98(4): 600-607.

13. Plasma Tumor Necrosis Factor-a Solube Receptor p55 (sTNF p55) Concentration in Eclamptic, Preeclamptic and Normotensive Pregnant Women / Wiliams MA, Mahomed K, Farrand A [et al.] // 11th World Congress of the International Society for the Study of Hypertension in Pregnancy (ISSHP). 572.

Способ прогнозирования угрозы невынашивания беременности ранних сроков при цитомегаловирусной инфекции путем исследования сыворотки крови иммуноферментным методом, отличающийся тем, что в сыворотке крови определяют уровень антител IgM к ЦМВ и показатели P1GF, и при уровне антител IgM к ЦМВ 2,0 ЕД/мл и более и показателях P1GF 53,70 пг/мл и менее прогнозируют прерывание беременности.