Комбинированная терапия с использованием антител к клаудину 18.2 для лечения рака

Комбинированная терапия с использованием антител к клаудину 18.2 для лечения рака

Иллюстрации

Показать все

Реферат

Область техники, к которой относится изобретение

Настоящее изобретение предоставляет комбинированную терапию для эффективного лечения и/или предотвращения заболеваний, связанных с клетками, экспрессирующими CLDN18.2, включая раковые заболевания, такие как рак желудка, рак пищевода, рак поджелудочной железы, рак легких, рак яичников, рак толстой кишки, рак печени, рак головы и шеи, рак желчного пузыря и их метастазы.

Уровень техники

Рак желудка и пищевода (гатроэзофагеальные раки; GE) принадлежат к числу злокачественных новообразований, с которыми связана самая высокая нереализованная потребность медицины. Рак желудка является второй причиной смерти от рака во всем мире. Частота случаев возникновения эзофагеального рака увеличилась за последние десятилетия, совпадая с изменением гистологического типа и первичной локализации опухоли. В настоящее время аденокарцинома пищевода является более распространенной в Соединенных штатах и западной Европе, чем плоскоклеточная карцинома, при этом большинство опухолей располагается в дистальном пищеводе. Уровень общей 5-летней выживаемости для GE рака составляет 20-25%, несмотря на агрессивность установленного стандартного лечения, связанного с существенными побочными эффектами.

У большинства пациентов обнаруживается местнораспространенная или метастазирующая опухоль, после чего они подвергаются первой линии химиотерапии. Режимы лечения, основанные на сочетании платины и производных фторпиримидина, обычно комбинируют с третьим соединением (например, таксаном или антрациклинами). Однако, медиана выживаемости без прогрессирования от 5 до 7 месяцев и средняя общей выживаемости от 9 до 11 месяцев - это самое лучшее, что можно ожидать.

Отсутствие существенной пользы от различных режимов комбинированной химиотерапии нового поколения в отношении этих видов рака стимулировало исследования, связанные с использованием таргентных (нацеленных на мишень) препаратов. В последнее время для лечения Her2/neu-положительных гастроэзофагеальных видов рака был одобрен трастузумаб. Однако данный вид лечения подходит только -20% пациентов, у которых экспрессируется данная мишень, поэтому потребность медицины в препаратах остается по-прежнему высокой.

Молекула плотных контактов клаудин 18 сплайс-варианта 2 (клаудин 18.2 (CLDN18.2)) является членом семейства белков клаудина - белков плотных контактов. CLDN18.2 представляет собой трансмембранный белок (27.8 kDa), содержащий четыре трансмембранных домена с двумя небольшими внеклеточными петлями.

В нормальных тканях отсутствует обнаружимая посредством RT-PCR экспрессия CLDN18.2, за исключением желудка. Проведение иммуногистохимического анализа с помощью CLDN18.2-специфических антител показывает, что желудок является единственной положительной тканью в отношении этого белка.

CLDN18.2 является высокоселективным гастральным антигеном, экспрессированным исключительно на короткоживущих дифференцированных эпителиальных клетках желудка. CLDN18.2 сохраняется в ходе злокачественной трансформации, и поэтому часто обнаруживается на поверхности клеток рака желудка человека. Более того, этот пан-опухолевый антиген эктопически активирован на значимых уровнях в аденокарциномах пищевода, поджелудочной железы и легких. Белок CLDN18.2 также локализуется в метастазах аденокарциномы желудка в лимфатических узлах и в отдаленных метастазах, в частности, в яичниках (так называемая опухоль Крукенберга).

Химерное IgG1 антитело IMAB362, направленное против CLDN18.2, было разработано компанией Ganymed Pharmaceuticals AG. IMAB362 распознает первый внеклеточный домен (ECD1) CLDN18.2 с высокой аффинностью и специфичностью. IMAB362 не связывается с каким-либо другим членом семейства клаудинов, включая близкородственный сплайс-вариант 1 клаудина 18 (CLDN18.1). IMAB362 демонстрирует узкую специфичность к опухолевым клеткам и сочетает в себе четыре независимых высокоактивных механизма действия. После связывания с мишенью IMAB362 опосредует уничтожение клеток с помощью ADCC, CDC и индукции апоптоза, вызванного перекрестным связыванием мишени на поверхности опухолевой клетки, и прямого ингибирования пролиферации. Таким образом, IMAB362 эффективно вызывает лизис CLDN18.2-положительных клеток, включая линию клеток рака желудка человека in vitro и in vivo. У мышей, несущих CLDN18.2-положительную линию клеток рака, наблюдается благоприятное действие на выживаемость, и вплоть до 40% мышей демонстрирует регрессию опухоли при лечении IMAB362.

Токсичность и РК/ТК профиль IMAB362 были тщательно исследованы на мышах и яванских макаках (cynomolgus), включая определение диапазона доз, 28-дневное исследование токсичности многократного применения препарата на макаках и 3-месячное исследование токсичности многократного применения препарата на мышах. Было показано, что при внутривенном введении (i.v.) многократные дозы IMAB362 хорошо переносятся и мышами (самая большая продолжительность еженедельного введения 3 месяца, самый высокий уровень доз 400 мг/кг) и яванскими макаками (до 5 еженедельных применений вплоть до 100 мг/кг). Не выявлено признаков системной или местной токсичности. В частности, ни в одном исследовании токсичности не наблюдалось токсического действия на желудок. IMAB362 не вызывает активацию иммунитета и высвобождение цитокинов. Не было отмечено неблагоприятных эффектов на репродуктивные органы самцов или самок. IMAB362 не связывается с тканями, не имеющими мишени. Исследование биораспределения на мышах показало, что причиной отсутствия гастральной токсичности вероятнее всего является компартментализация плотных контактов в месте просвета в здоровом эпителии желудка, которая, по-видимому, значительно уменьшает доступность IМАВ362 эпитопа. Эта компартментализация пропадает после злокачественной трансформации, что приводит эпитоп в состояние, поддающееся воздействию IMAB362.

ЕМАВ362 находится на ранней стадии клинических испытаний. Фаза I клинических испытаний проводится на людях. 5 дозовых групп (33 мг/м², 100 мг/м², 300 мг/м², 600 мг/м²,1000 мг/м²) по 3 пациента в каждой получали одно внутривенное введение IMAB362, наблюдение проводили в течение 28 дней. IMAB362 хорошо переносился, при этом не проводилось соответствующего исследования безопасности для пациентов. У одного пациента все измеренные опухолевые маркеры были значительно понижены в пределах 4 недель после лечения. В продолжающейся фазе IIа клинических исследований IMAB362 назначается повторно.

В данном документе мы предоставляем результаты, демонстрирующие, что химиотерапевтические средства могут стабилизировать или увеличивать экспрессию CLDN18.2 на поверхности раковых клеток, что приводит к повышению доступности CLDN18.2 для анти-CLDM18.2 антитела, такого как IМАВ362. Наблюдалось синергическое действие анти-CLDN18.2 антитела, такого как IMAB362, с определенными химиотерапевтическими режимами, в частности, химиотерапевтическими режимами, используемыми при лечении рака желудка или лечении солидных опухолей человека. Клетки рака человека, предварительно обработанные химиотерапевтическими средствами, являются более подверженными лизису, индуцированному мишень-специфическим антителом. На мышиных опухолевых моделях подавление опухоли с использованием анти-CLDN18.2 антитела в сочетании с химиотерапией превосходит применение анти-CLDN18.2 антитела в виде монотерапии.

Кроме того, представленные здесь данные показывают, что бисфосфонаты, такие как золендроновая кислота (ZA), в частности при введении в сочетании с рекомбинантным интерлейкином-2 (IL-2), дополнительно увеличивают активность анти-CLDN18.2 антитела, такого как IMAB362. Основным механизмом является активация и размножение высокоцитотоксической популяции иммунных клеток (γ9δ2 Т-клетки).

Раскрытие изобретения

В общем, настоящее изобретение предоставляет комбинированную терапию для эффективного лечения и/или предотвращения заболеваний, связанных с клетками, экспрессирующими CLDN18.2, включая раковые заболевания, такие как рак желудка, рак пищевода, рак поджелудочной железы, рак легких, такой как немелкоклеточный рак легкого (NSCLC), рак яичников, рак толстой кишки, рак печени, рак головы и шеи, рак желчного пузыря и их метастазы, в частности, метастазы рака желудка, такие как опухоль Крукенберга, метастазы в брюшину и/или лимфатические узлы. В частности, предпочтительными раковыми заболеваниями являются аденокарциномы желудка, пищевода, протока поджелудочной железы, желчевыводящих путей, легких и яичников.

В одном аспекте настоящее изобретение предоставляет способ лечения или предотвращения ракового заболевания, включающий введение пациенту антитела, обладающего способностью связываться с CLDN18.2, в комбинации со средством, стабилизирующим или увеличивающим экспрессию CLDN18.2. Экспрессия CLDN18.2 предпочтительно происходит на поверхности раковой клетки. Средство, стабилизирующее или увеличивающее экспрессию CLDN18.2, может быть введено до, одновременно с или после введения антитела, обладающего способностью связываться с CLDN18.2, или его комбинации.

Средство, стабилизирующее или увеличивающее экспрессию CLDN18.2, может быть цитотоксическим и/или цитостатическим средством. В одном варианте осуществления средство, стабилизирующее или увеличивающее экспрессию CLDN18.2, включает средство, вызывающее остановку клеточного цикла или накопление клеток в одной или более фазах клеточного цикла, предпочтительно в одной или более фазах клеточного цикла, отличных от G1-фазы. Средство, стабилизирующее или увеличивающее экспрессию CLDN18.2, может включать препарат, выбранный из группы, состоящей из антрациклинов, соединений платины, аналогов нуклеозидов, таксанов и аналогов камптотецина или его пролекарств, и их комбинаций. Средство, стабилизирующее или увеличивающее экспрессию CLDN18.2, может включать препарат, выбранный из группы, состоящей из эпирубицина, оксалиплатина, цисплатина, 5-фторурацила или его пролекарств, таких как капецитабин, доцетаксел, иринотекан, и их комбинаций. Средство, стабилизирующее или увеличивающее экспрессию CLDN18.2, может включать комбинацию оксалиплатина и 5-фторурацила или его пролекарств, комбинацию цисплатина и 5-фторурацила или его пролекарств, комбинацию, по меньшей мере, одного антрациклина и оксалиплатина, комбинацию, по меньшей мере, одного антрациклина и цисплатина, комбинацию, по меньшей мере, одного антрациклина и 5-фторурацила или его пролекарств, комбинацию, по меньшей мере, одного таксана и оксалиплатина, комбинацию, по меньшей мере, одного таксана и цисплатина, комбинацию, по меньшей мере, одного таксана и 5-фторурацила или его пролекарств, или комбинацию, по меньшей мере, одного аналога камптотецина и 5-фторурацила или его пролекарств. Средство, стабилизирующее или увеличивающее экспрессию CLDN18.2, может быть средством, вызывающим иммуногенную гибель клеток. Средство, вызывающее иммуногенную гибель клеток, может включать средство, выбранное из группы, состоящей из антрациклинов, оксалиплатина и их комбинаций. Средство, стабилизирующее или увеличивающее экспрессию CLDN18.2, может включать комбинацию эпирубицина и оксалиплатина. В одном варианте осуществления способ изобретения включает введение, по меньшей мере, одного антрациклина, по меньшей мере, одного соединения платины и, по меньшей мере, одного 5-фторурацила и его пролекарств. Антрациклин можно выбрать из группы, состоящей из эпирубицина, доксорубицина, даунорубицина, идарубицина и валрубицина. Предпочтительно, антрациклин является эпирубицином. Соединение платины можно выбрать из группы, состоящей из оксалиплатина и цисплатина. Нуклеозидный аналог может быть выбран из группы, состоящей из 5-фторурацила и его пролекарства. Таксан можно выбрать из группы, состоящей из доцетаксела и паклитаксела. Аналог камптотецина может быть выбран из группы, состоящей из иринотекана и топотекана. В одном варианте осуществления способ изобретения включает введение (i) эпирубицина, оксалиплатина и 5-фторурацила, (ii) эпирубицина, оксалиплатина и капецитабина, (iii) эпирубицина, цисплатина и 5-фторурацила, (iv) эпирубицина, цисплатина и капецитабина, или (v) фолиниевой кислоты, оксалиплатина и 5-фторурацила.

В одном варианте осуществления способ изобретения дополнительно включает введение средства, стимулирующего γδ Т-клетки. В одном варианте осуществления γδ Т-клетки являются Vγ9Vδ2 Τ-клетками. В одном варианте осуществления средство, стимулирующее γδ Т-клетки, является бисфосфонатом, таким как азотсодержащий бисфосфонат (аминобисфосфонат). В одном варианте осуществления средство, стимулирующее γδ Т-клетки, выбирают из группы, состоящей из золедроновой кислоты, клодроновой кислоты, ибандроновой кислоты, памидроновой кислоты, ризедроновой кислоты, минодроновой кислоты, олпадроновой кислоты, алендроновой кислоты, инкадроновой кислоты и их солей. В одном варианте осуществления средство, стимулирующее γδ Т-клетки, вводят в комбинации с интерлейкином-2.

Способ изобретения может дополнительно включать введение, по меньшей мере, одного дополнительного химиотерапевтического средства, которое может быть цитотоксическим средством.

Антитело, обладающее способностью связываться с CLDN18.2, может связываться с нативными эпитопами CLDN18.2, присутствующими на поверхности живых клеток. В одном варианте осуществления антитело, обладающее способностью связываться с CLDN18.2, связывается с первой внеклеточной петлей CLDN18.2. В одном варианте осуществления антитело, обладающее способностью связываться с CLDN18.2, опосредует уничтожение клетки с помощью одного или более из числа опосредованного комплементзависимой цитотоксичностью (CDC) лизиса, опосредованного антителозависимой клеточноопосредованной цитотоксичностью (ADCC) лизиса, индукции апоптоза и ингибирования пролиферации. В одном варианте осуществления антитело, обладающее способностью связываться с CLDN18.2, является моноклональным, химерным или гуманизированным антителом или фрагментом антитела. В одном варианте осуществления антитело, обладающее способностью связываться с CLDN18.2, является антителом, выбранным из группы, состоящей из (i) антитела, продуцированного и/или полученного от клона, депонированного под учетным номером DSM АСС2737, DSM АСС2738, DSM АСС2739, DSM АСС2740, DSM АСС2741, DSM АСС2742, DSM АСС2743, DSM АСС2745, DSM АСС2746, DSM АСС2747, DSM АСС2748, DSM АСС2808, DSM АСС2809 или DSM АСС2810, (ii) антитела, которое является химерной или гуманизированной формой антитела согласно (i), (iii) антитела, обладающего специфичностью антитела согласно (i) и (iv) антитела, содержащего антигенсвязывающий участок или антигенсвязывающий сайт, в частности, вариабельную область, антитела согласно (i) и предпочтительно обладающего специфичностью антитела согласно (i). В одном варианте осуществления антитело соединено с терапевтическим средством, таким как токсин, радиоизотоп, лекарственное средство или цитотоксическое средство.

В одном варианте осуществления способ изобретения включает введение антитела, обладающего способностью связывания с CLDN18.2, в дозе вплоть до 1000 мг/м². В одном варианте осуществления способ изобретения включает введение антитела, обладающего способностью связывания с CLDN18.2, повторно в дозе от 300 до 600 мг/м².

В одном варианте осуществления рак является CLDN18.2-положительным. В одном варианте осуществления раковое заболевание выбирают из группы, состоящей из рака желудка, рака пищевода, рака поджелудочной железы, рака легких, рака яичников, рака толстой кишки, рака печени, рака головы и шеи, рака желчного пузыря и их метастазов. Раковое заболевание может быть опухолью Крукенберга, метастазами в брюшину и/или лимфатические узлы. В одном варианте осуществления рак представляет собой аденокарциному, в частности, прогрессирующую аденокарциному. В одном варианте осуществления рак выбирают из группы, состоящей из рака желудка, рака пищевода, в частности, нижнего отдела пищевода, рака гастроэзофагиального соединения и гастроэзофагиального рака. Пациент может быть пациентом с отрицательным статусом по HER2/neu или пациентом с положительным статусом по HER2/neu, но не подходящим для лечения трастузумабом.

Согласно изобретению, CLDN18.2 предпочтительно имеет аминокислотную последовательность в соответствии с SEQ ID NO: 1.

В дополнительном аспекте настоящее изобретение предоставляет медицинский препарат, содержащий антитело, обладающее способностью связываться с CLDN18.2, и средство, стабилизирующее и увеличивающее экспрессию CLDN18.2. Медицинский препарат настоящего изобретения может дополнительно включать средство, стимулирующее γδ Т-клетки. Антитело, обладающее способностью связываться с CLDN18.2, и средство, стабилизирующее и увеличивающее экспрессию CLDN18.2, и необязательно средство, стимулирующее γδ Т-клетки, могут присутствовать в медицинском препарате в виде смеси или отдельно друг от друга. Медицинский препарат может представлять собой набор, включающий первый контейнер, содержащий антитело, обладающее способностью связывания с CLDN18.2 и контейнер, содержащий средство, стабилизирующее и увеличивающее экспрессию CLDN18.2, и необязательно контейнер, содержащий средство, стимулирующее γδ Т-клетки. Медицинский препарат может дополнительно включать напечатанные инструкции по применению препарата для лечения рака, в частности, для применения препарата в способе изобретения. Различными вариантами осуществления медицинского препарата и, в частности, средства, стабилизирующего и увеличивающего экспрессию CLDN18.2, и средства, стимулирующего γδ Т-клетки, являются описанные выше в отношении способа изобретения.

Настоящее изобретение также предоставляет описанные здесь средства, такие как антитело, обладающее способностью связывания с CLDN18.2, для применения в описанных здесь способах, например, для введения в комбинации со средством, стабилизирующим или увеличивающим экспрессию CLDN18.2, и необязательно средством, стимулирующим γδ Т-клетки.

Другие признаки и преимущества данного изобретения станут понятны из следующего подробного описания и пунктов формулы изобретения.

Краткое описание чертежей

Фигура 1. Действие химиотерапии на клетки рака желудка. Культивирование клеток KatoIII в течение 96 часов приводит к остановке клеточного цикла в G0/G1-фазе и отрицательной регуляции CLDN18.2. Цитостатические соединения, вызывающие остановку клеточного цикла в разных фазах клеточного цикла (S-фаза (5-FU) или G2-фаза (эпирубицин)), стабилизируют CLDN18.2-экспрессию.

Фигура 2. Действие химиотерапии на клетки рака желудка. a/b: Действие химиотерапии на уровни транскрипта и белка CLDN18.2 в клетках рака желудка, с: Результаты исследования с помощью проточной цитометрии внеклеточного связывания IMAB362 на клетках рака желудка, обработанных химиотерапевтическими средствами.

Фигура 3. Действие химиотерапии на клетки рака желудка. Цитостатические соединения, вызывающие остановку клеточного цикла в разных фазах клеточного цикла (S/G2-фаза (иринотекан) или G2-фаза (доцетаксел)).

Фигура 4. IМАВ362-индуцированный ADCC опосредует уничтожение клеток рака желудка после предварительной обработки химиотерапевтическими средствами.

Фигура 5. Действие химиотерапии на клетки рака желудка, а: Клетки, обработанные иринотеканом, доцетакселем или цисплатином демонстрируют более низкий уровень жизнеспособных клеток по сравнению с клетками, культивированными в среде, b: CLDN18.2 экспрессия в клетках, обработанных иринотеканом, доцетакселем или цисплатином, является повышенной по сравнению с клетками, культивированными в среде, c/d: Обработка клеток иринотеканом, доцетакселем или цисплатином увеличивает потенциальную возможность IMAB362 вызывать ADCC.

Фигура 6. Эффекты химиотерапии на CDC, индуцированный IMAB362.

Фигура 7. Эффекты химиотерапии на эффекторные клетки.

Фигура 8. Размножение РВМС в культурах с добавлением ZA/IL-2.

Фигура 9. Обогащение Vγ9Vδ2 Т-клеток в РВМС культурах с добавлением ZA/IL-2.

Фигура 10. Обогащение Vγ9Vδ2 Т-клеток в среде с добавлением ZA и увеличивающейся дозы IL-2.

Фигура 11. Размножение и цитотоксическая активность Vγ9Vδ2 Т-клеток после совместной инкубации с ZA-активированными моноцитами и клетками рака человека.

Фигура 12. ZA-зависимое развитие различных типов клеток в РВМС-культурах.

Фигура 13. Поверхностные маркеры на Vγ9Vδ2 Т-клетках после ZA/IL-2 обработки.

Фигура 14. ADCC активность Vγ9Vδ2 Т-клеток в сочетании с IMAB362 на CLDN18.2-положительных NUGC-4 клетках рака желудка.

Фигура 15. ADCC активность IMAB362 с использованием Vγ9Vδ2 Т-клеток в качестве эффекторных клеток.

Фигура 16. Действие ZA на поверхностное расположение CLDN18.2 на клетках-мишенях.

Фигура 17. Эффекты химиотерапии и ZA/IL-2- обработки на эффекторные клетки.

Фигура 18. Исследование биораспределения конъюгированных антител у мышей.

Фигура 19. Раннее лечение HEK293~CLDN18.2 ксенотрансплантов опухоли.

Фигура 20. Лечение развитых HEK293~CLDN18.2 ксенотрансплантов опухоли.

Фигура 21. Действие IMAB362 на рост подкожных ксенотрансплантов рака желудка.

Фигура 22. Эффекты иммунотерапии IMAB362 на NCI-N87~CLDN18.2 ксенотранспланты карциномы желудка.

Фигура 23. Эффекты комбинированной терапии ГМАВ362 и режима EOF на NCI-N87~CLDN18.2 ксенотранспланты.

Фигура 24. Эффекты комбинированной терапии IMAB362 и EOF режима на NUGC-4~CLDN18.2 ксенотранспланты.

Фигура 25. Действие ZA/IL-2-индуцированных Vγ9Vδ2 Т-клеток на контроль макроскопических опухолей с использованием IMAB362 у мышей NSG.

Фигура 26. Эффекты комбинированной терапии IMAB362 и EOF режима на CLS-103~cldn18.2 аллотрансплантаты опухолей.

Осуществление изобретения

Несмотря на то, что настоящее изобретение подробно описано далее, понятно, что это изобретение не ограничивается конкретными методиками, протоколами и реагентами, описанными здесь, поскольку они могут отличаться. Также следует понимать, что использованная в описании терминология предназначается только для описания отдельных вариантов осуществления и не предназначается для ограничения объема настоящего изобретения, который будет ограничиваться только прилагаемыми пунктами формулы изобретения. Если не указано иначе, все технические и научные термины, использованные в описании, имеют те же самые значения, которые обычно понятны среднему специалисту в данной области техники.

В дальнейшем будут описаны элементы настоящего изобретения. Эти элементы перечисляются в конкретных вариантах осуществления, однако, должно быть понятно, что они могут объединяться любым образом и в любом количестве для создания дополнительных вариантов осуществления. Различным образом описанные примеры и предпочтительные варианты осуществления не должны истолковываться как ограничивающие настоящее изобретение только точно описанными вариантами осуществления. Следует понимать, что это описание поддерживает и рассматривает варианты осуществления, которые объединяют точно описанные варианты осуществления с любым числом раскрытых и/или предпочтительных элементов. Более того, любые перестановки и комбинации всех описанных элементов в этой заявке следует рассматривать как раскрытые описанием настоящей заявки, если не оговорено иное.

Предпочтительно, использованные в описании термины определяются так, как описано в "A multilingual glossary of biotechnological terms: (IUPAC Recommendations)", H.G.W. Leuenberger, B. Nagel, и H. Kölbl, Eds., Helvetica Chimica Acta, CH-4010 Basel, Switzerland, (1995).

При осуществлении настоящего изобретения используются, если не указано иначе, обычные методы химии, биохимии, клеточной биологии, иммунологии и методы рекомбинантных ДНК, которые объясняются в литературе, посвященной данной области техники (смотри, например, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd Edition, J. Sambrook et al. eds., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor 1989).

На всем протяжении этого подробного описания и последующих пунктов формулы изобретения, если контекст не требует иного, следует понимать, что слово "содержать" и его варианты, такие как "содержит" и "содержащий", предполагает включение определенного члена, целого числа или стадии или группы членов, целых чисел или стадий, а не исключение любого другого члена, целого числа или стадии или группы членов, целых чисел или стадий, хотя в некоторых вариантах осуществления такой другой член, целое число или стадия или группа членов, целых чисел или стадий может исключаться, т.е. объект изобретения заключается во включении установленного члена, целого числа или стадии или группы членов, целых чисел или стадий. Термины "а" и "an" и "the" и подобные ссылки, использованные в контексте описания изобретения (особенно в контексте формулы изобретения) следует истолковывать как включающие и единственное и множественное число, если в описании не указано иначе или иное явно не продиктовано контекстом. Перечисление пределов значений в описании служит только как способ сокращения упоминания в отдельности каждого отдельного значения, попадающего в предел. Если не указано иное, каждое индивидуальное значение включается в подробное описание, как если бы оно было отдельно перечислено в описании. Все описанные здесь методы могут осуществляться в любом подходящем порядке, если в описании не указано иначе или иным образом явно не противоречит контексту. Использование всех без исключения примеров или характерных выражений (например, "такой как"), предоставленных в описании, предназначается только для лучшей иллюстрации изобретения и не ограничивает рамки изобретения, заявленные в иной форме. Формулировки подробного описания не должны быть истолкованы, как означающие какой-либо незаявленный элемент, существенный для осуществления изобретения на практике.

На протяжении текста данной заявки процитировано несколько документов. Каждый из приведенных в описании документов (включая все патенты, патентные заявки, научные публикации, спецификации производителя, инструкции и т.д.), будь то выше или ниже, полностью включается в описание путем отсылки. Ничто в описании не следует рассматривать как допущение, что изобретение не имеет права датировать такое раскрытие в соответствии с предшествующим изобретением.

Термин "CLDN18" относится к клаудину 18 и включает любые варианты, включая клаудин 18 сплайс-вариант 1 (клаудин 18.1 (CLDN18.1)) и клаудин 18 сплайс-вариант 2 (клаудин 18.2 (CLDN18.2)).

Термин "CLDN18.2" предпочтительно имеет отношение к человеческому CLDN18.2 и, в частности, к белку, содержащему, предпочтительно состоящему из аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 1 из списка последовательностей или варианта указанной аминокислотной последовательности.

Термин "CLDN18.1" предпочтительно имеет отношение к человеческому CLDN18.1 и, в частности, к белку, содержащему, предпочтительно состоящему из аминокислотной последовательности в соответствии с SEQ ID NO: 2 из списка последовательностей или варианта указанной аминокислотной последовательности.

Термин "вариант" согласно изобретению имеет отношение, в частности, к мутантам, сплайс-вариантам, изоформам, аллельным вариантам, видовым вариантам и видовым гомологам, в частности, имеющимся в природе. Аллельный вариант имеет отношение к изменению в нормальной последовательности гена, значение которого часто непонятно. Полное генетическое секвенирование часто устанавливает многочисленные аллельные варианты для данного гена. Видовым гомологом является последовательность нуклеиновых кислот или аминокислот, происходящая от другого вида, отличающегося от вида происхождения данной последовательности нуклеиновых кислот или аминокислот. Термин "вариант" будет включать любые посттрансляционно модифицированные варианты и конформационные варианты.

Согласно изобретению термин "CLDN18.2-положительный рак" означает рак с участием раковых клеток, экспрессирующих CLDN18.2, предпочтительно на поверхности указанных раковых клеток.

Термин "поверхность клетки" используется в соответствии с его обычным значением в данной области, и таким образом включает внешнюю поверхность клетки, доступную для связывания с белками и другими молекулами.

CLDN18.2 экспрессируется на поверхности клеток в том случае, если он располагается на поверхности указанных клеток, и является доступным для связывания CLDN18.2-специфическими антителами при добавлении их к клеткам.

Согласно изобретению, CLDN18.2 является незначительно экспрессированным в клетке, если уровень экспрессии является более низким по сравнению с экспрессией в клетках желудка или ткани желудка. Предпочтительно, уровень экспрессии составляет менее чем 10%, предпочтительно менее чем 5%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1% или 0.05% экспрессии в клетках желудка или ткани желудка или даже ниже. Предпочтительно, CLDN18.2 является незначительно экспрессированным в клетке, если уровень экспрессии превышает уровень экспрессии в нераковой ткани, отличной от ткани желудка, не больше, чем в 2 раза, предпочтительно в 1,5 раза, и предпочтительно не превышает уровень экспрессии в указанной нераковой ткани. Предпочтительно, CLDN18.2 является незначительно экспрессированным в клетке, если уровень экспрессии ниже предела обнаружения, и/или если уровень экспрессии является слишком низким, чтобы обеспечить возможность связывания CLDN18.2- специфическими антителами при добавлении их к клеткам.

Согласно изобретению CLDN18.2 экспрессируется в клетке, если уровень экспрессии превышает уровень экспрессии в нераковой ткани, отличной от ткани желудка, предпочтительно более, чем в 2 раза, предпочтительно в 10 раз, в 100 раз, в 1000 раз или в 10000 раз. Предпочтительно, CLDN18.2 экспрессируется в клетке, если уровень экспрессии выше предела обнаружения, и/или если уровень экспрессии является достаточно высоким, чтобы обеспечить возможность связывания CLDN18.2-специфическими антителами при добавлении их к клеткам. Предпочтительно, экспрессированный в клетке CLDN18.2 экспрессируется или экспонируется на поверхности указанной клетки.

Согласно изобретению термин "болезнь" относится к любому патологическому состоянию, включая рак, в частности, к описанным в данном документе формам рака. Любые упоминания рака или конкретные формы рака в данном документе также включают его метастазы. В предпочтительном варианте осуществления болезнь, которую необходимо лечить в соответствии с настоящей заявкой, затрагивает клетки, экспрессирующие CLDN18.2.

"Болезни, связанные с клетками, экспрессирующими CLDN18.2", или сходные выражения означают согласно изобретению, что CLDN18.2 экспрессируется в клетках больной ткани или органа. В одном варианте осуществления экспрессия CLDN18.2 в клетках больной ткани или органа является повышенной по сравнению с состоянием в здоровой ткани или органе. Повышение имеет в виду повышение, по меньшей мере, на 10%, в частности, по меньшей мере, на 20%, по меньшей мере, на 50%, по меньшей мере, на 100%, по меньшей мере, на 200%, по меньшей мере, на 500%, по меньшей мере, на 1000%, по меньшей мере, на 10000% или даже более. В одном варианте осуществления экспрессия обнаружена только в больной ткани, тогда как экспрессия в здоровой ткани подавлена. Согласно изобретению, болезни, связанные с клетками, экспрессирующими CLDN18.2, включают раковые заболевания. Кроме того, согласно изобретению раковыми заболеваниями предпочтительно являются те, в которых раковые клетки экспрессируют CLDN18.2.

При использовании в описании термин "раковая болезнь" или "рак" включает болезнь, характеризующуюся неправильно регулируемым клеточным ростом, пролиферацией, дифференцировкой, адгезией и/или миграцией. Под "раковой клеткой" имеется в виду аномальная клетка, которая растет посредством быстрой, неконтролируемой клеточной пролиферации и продолжает расти после стимула (воздействия), инициирующего прекращение нового роста. Предпочтительно "раковая болезнь" характеризуется клетками, экспрессирующими CLDN18.2, а раковая клетка экспрессирует CLDN18.2. Клетка, экспрессирующая CLDN18.2, предпочтительно является раковой клеткой, предпочтительно описанных здесь видов раков.

"Аденокарцинома" представляет собой рак, возникающий в железистой ткани. Эта ткань к тому же является частью большой группы тканей, известных как эпителиальная ткань. Эпителиальная ткань включает кожу, железы и целый ряд других тканей, выстилающих полости и органы тела. С точки зрения эмбриологии эпителий происходит из эктодермы, эндодермы и мезодермы. Чтобы относиться к аденокарциноме, клетки необязательно должны быть частью железы, при условии, что они обладают секреторными свойствами. Эта форма карциномы может возникать у некоторых высших животных, включая людей. Хорошо дифференциованные аденокарциномы имеют тенденцию походить на железистую ткань, из которой они происходят, в то время как плохо дифференцированные могут не походить на железистую ткань. С помощью окрашивания клеток, полученных из биопсийного материала, патолог определяет, является ли опухоль аденокарциномой или другим типом рака. Аденокарциномы могут возникать во многих тканях организма вследствие повсеместного распространения желез в организме. Наряду с тем, что каждая железа не может секретировать одно и то же вещество, когда у клетки существует внешнесекреторная функция, она считается железистой, и поэтому ее злокачественная форма называется аденокарциномой. Злокачественные аденокарциномы вторгаются в другие ткани и дают метастазы, также проникающие в другие ткани. Аденокарцинома яичника является наиболее распространенным типом карциномы яичника. Сюда включаются серозные и слизитые аденокарциномы, светлоклеточная аденокарцинома и эндометриоидная аденокарцинома.

Под "метастазированием" имеется в виду распространение раковых клеток из первоначального местоположения в другую часть организма. Образование метастаза является очень сложным процессом и зависит от отделения злокачественных клеток от первичной опухоли, вторжения (инвазии) во внеклеточный матрикс, проникания в эндотелиальные базальные мембраны для проникновения в полость тела и сосудов, а затем, после транспортировки кровотоком, инфильтрации в органы-мишени. Наконец, рост новой опухоли в месте-мишени зависит от ангиогенеза. Метастазы опухоли могут возникать даже после удаления первичной опухоли, так как опухолевые клетки или компоненты могут остаться и развить метастатический потенциал. В одном варианте осуществления термин "метастаз" согласно изобретению имеет отношение к "отдаленному метастазу", т.е. метастазу, удаленному от первичной опухоли и системы региональных лимфатических узлов. В одном варианте осуществления термин "метастаз" согласно изобретению относится к метастазу в лимфатический узел. Одной конкретной формой метастаза, который поддается лечению с помощью терапии изобретения, является метастаз, берущий начало от рака желудка как первичного очага. В предпочтительных вариантах осуществления такой метастаз рака желудка является опухолью Крукенберга, метастазами в брюшину и/или метастазами в лимфатические узлы.

Опухоль Крукенберга является редкой метастатической опухолью яичника, насчитывающей от 1% до 2% от всех опухолей яичника. Прогноз опухоли Крукенберга остается плохим, при этом не существует общепринятого лечения для опухоли Крукенберга. Опухоль Крукенберга является метастатической перстневидноклеточной аденокарциномой яичника. Желудок является первичным очагом для большинства случаев опухоли Крукенберга (70%). Карциномы толстой кишки, аппендикса и молочной железы (в основном инвазивная дольковая карцинома) являются следующими самыми распространенными первичными локализациями. Сообщалось о единичных случаях опухоли Крукенберга, происходящих из карциномы желчного пузыря, желчных протоков, поджелудочной железы, тонкого кишечника, Фатерова сосочка, шейки матки и мочевого пузыря/мочевого протока. Интервал между постановкой диагноза первичной карциномы и последующим обнаружением поражения яичника составляет обычно 6 месяцев или меньше, однако сообщалось и о более длительных сроках. Во многих случаях, первичная опухоль является очень маленькой и может остаться незамеченной. Предшествующая карцинома желудка или другого органа в анамнезе наблюдается только в 20%-30% случаев.

Опухоль Крукенберга является примером селективного распространения рака, чаще всего в направлении желудок - яичник. Эта «ось» распространения опухоли исторически привлекает внимание многих патоморфологов, в частности, когда было обнаружено, что новообразования в желудке селективно метастазируют в яичники, не задействуя другие ткани. Путь метастазов карциномы желудка в яичники был загадкой в течение длительного времени, однако т