Способ производства /-лизина

Способ производства /-лизина

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

итг о-: ., . @я с; бил :о-с в, „, ОП И

ИЗОБРЕТЕНИЯ

267509

Союз Советских

Социалистических

Республик

К ПАТЕНТУ

Зависимый от патента №

Кл. 6Ь, 16/03

12q, 6/01

Заявлено 06.Ч!11.1966 (№ 1095893/28-13) МПК С 120

С 07f

УДК 663.11:576.8.097 (088.8) Приоритет 14.Ш.1966, № 15376, Япония

Опубликовано 01ЛЧ.1970. Бюллетень № 12

Дата опубликования описания ЗО.ЧП.1970

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

Лвторы изобретения

Иностранцы

Кийоши Накаиама, Харуо Танака и Хироши Хагино (Япония) Иностранная фирма

«Киова Хакко Когио Компани Лимитед» (Япония) Заявитель

СПОСОЬ П РО И 3 ВОДС ГВА 1-Л ИЗ И HA

Изобретеиие относится к микробиологической промышленности, а именно к способам производства 1-лизина с помощью ферментации.

Известны способы получения l-лизина путем глубинного выращивания продуцирующих его микроорганизмов на питательной среде, содержащей углеводы, азотные, фосфорные соли и стимуляторы роста, с последующим отделением клеток от культуральной жидкости, например, фильтрацией и выделением 1-лизина из культуральной жидкости на ионообменных смолах.

Однако для биосинтеза 1-лизина используют ограниченный комплекс микроорганизмов.

Целью изобретения является расширениекомплекса микроорганизмов, используемых для биосинтеза l-лизина.

Для этого в качестве микроорганизмов-продуцентов используют штаммы BTQV4/actепшп

ammoniagenes АТСС № 19350, ATCC № 19351, АТСС № 19352, АТСС № 19353, АТСС № 19354, АТСС № 19355 и АТСС № 19356.

Микроорганизмы-продуценты l-лизина, например штаммы Brevibacterium ammoniagenes

АТСС № 19350, АТСС № 19351, АТСС № 19352, АТСС № 19353, АТСС № 19354, АТСС № 19355 и АТСС № 19356, требующие для своего роста треонин, лейцин, изолейцин, фенилаланин, цистин или цистеин, выращивают в аэробных условиях на питательной среде, содержащей источники углерода — различные углеводы; источники азота — аммиак и соли аммония, например хлористый аммоний, сульфат аммония, нитрат аммония, карбонат аммония, фосфат аммония, ацетат аммония; стимуляторы роста — дрожжевой экстракт, гидролизат казеи1О на, мясной экстракт; неорганические вещества — первичный кислый фосфорнокислый калий, вторичный кислый фосфорнокислый калий, сульфат магния, хлористый натрий, сернокислое железо, сернокислый марганец и уг15 лекислый кальций.

Ферментацию проводят в течение 2 — 5 дней при 24 — 37 С и рН 5,1 — 8,5. Затем культуральную жидкость отделяют от бактериальных клеток одним из известных способов, например

20 фильтрацией, и пропускают через слой ионообменной смолы, которая адсорбирует l-лизин.

П р и м ер 1. B качестве бактерии, используемой для посева, применяют Brevibacterium

ammoniagenes № 4948 ЛТСС 19350, (штамм, 25 требующии треонин).

Этот штамм инокулируют в 250 хтл среды, используемой для посева и имеющей состав

В %:

267509

Количество накопившегося 1-лизина ла/мл

Применяемый штамм

6,5

)х 4948 АТСС 19350 (штамм, требующий № 518 АТСС 19351 (штамм, требующий № 5130 АТСС 19352 (штамм, требующий № 5366 АТСС 19353

20 (штамм, требующий № 5313, АТСС 19354 (штамм, требующий № 5128 АТСС 19355 (штамм, требующий

М 5134 АТСС 19356 (штамм, требующий треонин) фенилаланин) гистидин) метионин) цистеин) лейцин) изолейцин) 4,2

3,1

4,3

2,1

2,1

1,5

Предмет изобретения

Составитель В. Дунье

Техред Л. Я. Левина Корректор Л. И. Гаврилова

Редактор H. Вирко

Заказ 2075710 Тираж 480 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, Я-35, Раушская наб., д. 475

Типография, пр. Сапунова, 2 глюкозы 2, пептона 1, дрожжевого экстракта 1 и хлористого натрия 0,2.

Выращивание проводят при 30 С в течение

24 час.

Полученные при этом бактерии, служащие для посева, инокулируют в количестве 10% по объему в коническую колбу, содержащую

30 ил ферментационной среды следующего состава, /о ..

Глюкоза 7,5

Сульфат аммония 1,5

Первичный кислый фосфорно-кислый калий 0,05

Вторичный кислый фосфорно-кислый калий 0,05

Сульфат магния 0,025

N — Z-амин 0,5

Карбонат кальция 2,0 рН среды равен 7,0, а биоцин присутствует в количестве 30,0 мкг на 1 л, Встряхивание культуры при доступе воздуха проводят при 30 С в течение 4 дней.

Накопление l-лизина 7,2 кг/мл.

Культуральную жидкость отделяют от бактериальных клеток фильтрацией и пропускают через слой ионообменной смолы, обладающей слабыми щелочными свойствами.

Колонку, заполненную смолой, промывают водой и производят отмывку адсорбента с помощью 0,15 н. аммиачной воды. Полученные растворы, содержащие 1-лизин, соединяют вместе и концентрируют, Затем концентрированный раствор доводят до кислой среды (рН 4,0) и дополнительно концентрируют.

В результате получают 10,5 г кристаллического l-лизин-1-гидрохлорида со степенью чистоты, соответствующей техническому продукту, Пример 2. Культивирование производят таким же образом и при тех же условиях, как было описано в примере 1, с той лишь разницей, что ферментационная среда содержит

7,5/о фруктозы и 0,5/о мясного экстракта вместо глюкозы и N — Z-амина.

В результате получают 6,1 мг/мл 1-лизина, содержащегося в жидкости для выращивания культуры.

Количество l-лизина, накопившегося в среде для выращивания культуры под воздействием различных штаммов Brevibacterium ammoniagenes, приведено в таблице.

30 Способ производства 1-лизина путем глубННного выращивания продуцирующих его микроорганизмов на питательной среде, содержащей углеводы, азотные, фосфорные соли и стиму. ляторы роста, с последующим отделением кле.

35 ток от культуральной жидкости, Например, фильтрацией и выделением 1-лизина из культуральной жидкости на ионообменных смолах, отличающийся тем, что, с целью расширения комплекса микроорганизмов, используемых

40 для биосинтеза 1-лизина, в качестве микроорганизмов-продуцентов используют один из штаммов АТСС М 19350, АТСС № 19351, АТСС № 19352, АТСС № 19353, АТСС № 19354, АТСС № 19355 и АТСС № 19356

45 рода Brevibacterium ammoniagenes.