Штамм инми арм 647 bacillus thurjngiensis var. thuringiensis (berliner)

Штамм инми арм 647 bacillus thurjngiensis var. thuringiensis (berliner)

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

268796

Сома Советских

Социалистических

Респуйлик

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 09.IV.1968 (№ 1232465/30-15) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 10.IV.1970. Бюллетень № 14

Дата опубликования описания 1бХ11.1970

Кл. 4И, 15, 00

МПК А 01п 15, 00

УДК 632.937.15 (088.8) Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

ШТАММ ИНМИ АРМ 647 BACILLIJS THURINGIENSIS VAR.

THURINGIENSIS (ВЕК1.1ЫЕК) Штамм был выделен в Ин титуте микробиологии АН Армянской ССР в процессе изучения возбудителей бактериальных болезней тутового шелкопряда. Источником явилась погибшая куколка тутового шелкопряда в период весенней выкормки из племенной шелководческой станции в г. Ереване.

Исходная культура бактерий активно спорулировала с образованием ромбовидных параспориальных включений — энтомоцидных токсинов. В результате дальнейшего культивирования исходной культуры была получена стойкая аспарагиновая раса, лишенная способности образовывать энтомоцидные кристаллы. Однако при этом штамм активно продуцировал другой энтомоцидный токсин, растворимый в культуральной жидкости и обладающий термостабильностью.

Далее дано описание аспорогенной разно видности, которую можно отнести к Вас. thuringiensis серотипу Berliner.

Вегетативные клетки прямые, палочковидные, (1,2 — 1,4) Q (3 — б мк) . Подвижные, в виде коротких и длинных цепочек. Перитрихи, грамположительны. Споры не образуются, в процессе развития внутри клеток ромбовидные кристалловидные образования не наблюдаются. При цитохимическом изучении (окраска суданом черным) в клетках обильно выявляются жировые включения.

На мясо-пептонном «гаре образует бело|вато-серые плоские зернистые колочии с ризоидными краями. Колонии в сред не врастают и легко снимаются петлей. На мясо-пептон5 ном бульоне обильный рост без образования пленки. На мясо-пептонном агаре+сусло=

= агар — беловато-желтые колонии с бугристыми прожилками, влажно-блестящие.

Обильный рост.

1р На мясо-пептонном агаре с добавлением яичного желтка — обильный рот без пигментации.

На синтетических средах (СР1-СРП) умеренный рост с сильно ризоидными краями, 15 беловатые колонии.

На ломтиках картофеля и моркови — беловато-серый рост, влажно-блестящий. Пигментация ломтиков отсутствует.

2р Усваивает аммонийный азот, для роста необходимо присутствие аминокислот.

Усваивает тактике глюкозу, фруктозу, рибозу, сахарозу, мальтозу, трегалозу, глицерин, целлобиозу, крахмал, салицин с образовани25 ем кислоты без выделения газа. Слабо усваивает арабинозу, рамнозу, ксилозу, галактозу, лактозу, раффинозу, мелибиозу, мелезитозу, талозу, маннит, сорбит, дудьцит, инулин, инозит, эритрпн. Усваивает нитраты, оксалаЗр ты .и сукцинаты в виде аммонийных солей.

268796

Молоко слабо пептонизирует, желатин умеренно разжижает. Крахмал гидролизует.

Денитрификация сильно положительна.

Ацегилметилкарбинол не образует, Индол и сероводорд не образует.

Гемолизины (на среде с кровью человека) слабо выражены, типа Р-гемолизина. Лецитиназу активно образует, Серологическая типизация с сывороткой, полученной к жгутикову (Н) антигену, свидетельствует о принадлежности данного штамма к разновидности Вас, thuringiensis var.

thuringiensis (Berliner), серотипу 1 по классификации Бенефуа и Де Бержак (1962,1963).

Антагонистические свойства к другим видам бактерий очень слабо выражены. Подвержен действию лабораторных и производственных фагов.

Факультативный аэроб, оптимум роста при

35 — 37 С.

Образует термостабильный токсин, .вызывающий гибель мух и гусениц тутового шелкопряда.

Проведенные опыты показали, что этот штамм образует энтомоцидный токсин, не разрушающийся при автоклавировании. Токсин продуцируется на многих питательных средах, содержащих источники органического азота и усвояемые углеводороды. Для этого вполне пригодным является мясо-пептонный бульон, а также среда следующего состава, г:

КН РО4 6,8, NgSO4 ° 7Н О 0,123, MnSO4 °

° 4Н О 0,002, ZnSO4.7Í O 0,014, СаС1 4Н О

0,183, пепетон 7,5, глюкоза 10,0; вода дистиллированная до 1,0 л.

К этой среде добавляют 10 мл раствора сульфата аммония из расчета 1 г этой соли на 100 мл .воды с 2 г Fe (SO4) з.

Инкубация культур на указанных средах ведется при 28 — 30 С в условиях глубинного выращивания, Образование термостабильного энтомоцидного токсина отмечается у культур уже однодневного возраста. Энтомоцидная активность нативной жидкости не теряется после автоклавпрования при 120 С в течение

15 мин.

Опыты показали, что при вскармливании комнатной мухи нативным фильтратом (вместе с сахарным сиропом) описываемого штамма наблюдается почти полная гибель мух.

Тутовый шелкопряд в стадии гусеницы, вскармливаемый нативным фильтратом штамма, погибает в стадии куколок на 100 /о.

В контрольных вариантах с культурой Вас.

thuringiensis var. thuringiensis, которая используется в производстве бактериальных инсектицидов, смертность насекомых была в два-три раза ниже.

Особенности предлагаемого штамма по сравнению с другими штаммами Вас. thuringiensis видны также из табл. 1, 2 и 3, Предмет изобретения

Штамм ИНМИ Арм 647 Bacillus thuringiensis var. thuringiensis (Berliner).

Зарегистрирован в Институте микробиологии АН Армянской CCP.

Морфология клеток. Клетки прямые, палочковидные размером (1,2 — 1,4) )((3 — 6 мк) .

Подвижные, встречаются в виде коротких и длинных цепочек Перитрихи, грамположительны. Споры и ромбовидные включения в клетках не образуются. Окраска суданом черным выявляет внутри клеток жировые включения, многочисленные у молодых форм.

Отношение к кислороду..факультативный аэроб. Максимум роста при 35 — 37 С.

Мясо-пептонный агар. Беловато-кремовые плоские зернистые колонии с ризоидными краями. Колонии в среду не врастают и легко снимаются петлей. Пигменты не образуются.

Мясо-пептонный агар+сусло, Балинг 7 .

Беловато-желтые колонии с бугристыми прожилками, влажноблестящие. Обильный рост.

Мясо-пептонный агар с яичным желтком.

Обильный рост без п игментации.

Мясо-пептонный бульон. Обильный рост, без образования пленки.

Молоко. Слабо пептонизирует с образованием сгустка. желатин. Умеренно разжижает.

Крахмал. Гидролизует.

Картофель и морковь. Хороший беловатосерый рост без пигментации.

Глюкоза, фруктоза, рибоза, сахароза, мальтоза, трегалоза, глицерин, целлобиоза, салицин. Усваивает с образованием кислоты, без выделения газа.

Арабиноза, рамноза, ксилоза, галактоза, лактоза, раффиноза, мелибиоза, мелезитоза, талоза, маннит, дульцит, сорбит, инулин, инозит, эритрин. Не усваивает, Протезы, амилазы, лецитиназы. Продуцирует, Нитраты. Восстанавливает.

Ацетилметилкарбинол, индол, сероводород.

Не образует.

Гемолизины. Образует слабо, преимущественно Р-гемолизин.

Сероагглютинация. Специфически агглютинируется с сывороткой, полученной к жгутиковому антигену от культур Вас. thuringiensis var. thuringiensis (Berliner).

Продуцирует термостабильный энтомоцидный токсин, активный по отношению к мухам и гусеницам тутового шелкопряда.

268796

Таблица 1

11ерекрестная сероагглютинация различных разновидностей спороносных бактерий — продуцентов энтомоцндных токсинов

Агглютинирующая сыворотка

Жгутиковый аитиген (культура бактерий) Серотип о о

Bac. thuringiensis ССЕВ-457

Bac. thuringiensis ИНМИ Арм 647

Вас. thuringiensis var. caucasicus

ИНМИ Арм 805

Таблица 2

Антагонистическое действие культур разновидности Berliner серотипа 1 и штамма ИНМИ

Арм 647

Тест-культура

Культура-продуцеит

Вас. thuringiensis ССЕВ-058

Вас. thuringiensis ССЕВ-457

Вас. thuringiensis ССЕВ-462

Вас. thuringiensis ИНМИ Арм 647

Таблица 3

Гибель тутового шелкопряда от фильтрата культур кристаллофо нов (однократная ежедневная дача гусеницам автоклавированного фильтрата) Количество погибших, %

Начало под кормок (возраст) Культура бактерий всего куколок гусениц

0

Ш

1Ч

5

10

Вас. thuringiensis var. caucasicus

ИНМИ Арм 811

Ш

IV

Вас. thuringiensis ССЕВ-457

Вас. thuringiensis ИНМИ Арм 647

III

IV

Составитель М. Дранишников

Редактор E. П. Хорина Техред А. А. Камышиикова Корректор А. И. Гаврилова

Заказ 1778/8 Тираж 480 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва Ж-35, Раушская наб., д. 4(5

Тинография, пр. Сапунова, 2

ЬЮ с

1 ю о

Щ

v са 0 оз 0

В

Ю

ID

v л а3 Q7 оз е

М с

Ю

1» ц) г Т

cQ

0

CQ 0

В

Е о

L» a с

Qi с

В

Ql

I» ) QJ

v ca

1»

07

v=

col

1 (б.с (:3 о о со о с » с) с

CO <ц

l3 >

l»

> а со и К ц) со

I»

v ю

СЭ CI3

63 щ оз м сб

-с

v g о у

Е х сБ

4) и о

Ф у си

Ю ф v с а

CO

1

CO

v о

6l

cn >