Способ получения термостойкого экзотоксинного комплекса

Способ получения термостойкого экзотоксинного комплекса

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

бзкб„

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

286348 союз Советскиз

Социалистическив

Республик

Зависимое от авт. свидетельства ¹

Заявлено 16.711.1969 (№ 1350495/30-15) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 10.Х1.1970. Бюллетень № 34

Дата опубликования описания 20.1.1971

Кл, 45L, 15/00

МПК А 01п 15/00

УДК 663:632.953:632. .937.15 (088.8) йомитет оо аелатв

«аобретениЯ и открытиЯ ори Совете Министров

CCCP

Авторы изобретения Л. П. Синицына, Н. А. Острогская, Н. А. Белова, А. П. Бирюкова и Л. Т. Коломиец

Заявитель Всесоюзный научно-исследовательский институт микробиологических средств защиты растений и бактериальных препаратов

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ТЕРМОСТОЙКОГО

ЭКЗОТОКСИН НОГО КОМПЛЕКСА

Изобретение относится к производству бактериальпых препаратов, применяемых для защиты расгений от насекомых-вредителей.

Известны бактериальные препараты для защиты растений от насекомых-вредителей энтобактерин, дендробациллин, пнсектин, которые готовят на штаммах спорообразуюших кристаллоносных бактерий группы Bacillus

thuringiensis и которые состоят из спор и кристаллических включений. Эти препараты применяются для борьбы с листогрызущпми гусеницами из семейства чешуекрылых.

Известны также препараты, основанные на бактериях этой >ке группы (I серотип — Вас.

thuringiensis var, thuringiensis), но с более широким спектром действия — чешуекрылые, двукрылые, жесткокрылые и полу>кесткокрылые. К таким препаратам относятся, в частности, турицид и бактан.

Более широкий круг действия двух последних препаратов объясняется наличием в них, помимо спор и кристаллов (токсического белка), еще и термоустойчивого экзотоксинного комплекса, называемого «мушиным токсином» по названию тест-объекта Musca domestica 1., чувствительного к экзотоксину. Экзотокспн оказался токси-IHbiм для гусениц, бабочек и личинок двукрылых, прямокрылых и перепончатокрылых насекомых. Экзотокспн токсичен для пчел, однако в дозах, применяемых в сельскохозяйственном производстве (1 — 2 кг/га) он нетоксичен.

Недостатком некоторых известных бактерпальных препаратов является отсутствие в них экзотоксинного комплекса. Именно это обстоятельство и сокращает спектр действия бактериальных инсектицидов. Выявление бактерий, способных синтезировать экзотоксин, имеет большое практическое значение, потому что па

10 этом принципе можно получать бактериальпые препараты.

Установлено, что Bacillus insectus Guk. способен производить термостойкий экзотоксин15 ный комплекс.

Предлагается способ получения термостойкого экзотоксинного комплекса, включающий культивирование бактерии-продуцента на обычных питательных средах с последующей

20 сепарацией и стерилизацией культуральной жидкости, как это принято при получении экзотоксннного комплекса с использованием известных для этой цели бактерий, при котором. в качестве бактерии-продуцента берут Вас;

25 insectus Guk, Предлагаемый способ был апробирован в. лабораторных условиях.

Культуральную жидкость, содержащую термоустойчпвый экзотоксинный комплекс, полу30 чали путем культивирования Вас. insectus Guk

286348

Количество, ч, погибших личинок и пупариев

Вид бактерии окуклившихся личинок вылетевших мух

Вас. Insectus Guk .

Вас. thurlnglensls var.

thiirIngIensIs .

Вас. thurlnglensls var.

ga1brlac

Вас. thiirlnglensls var.

d end roll m u s

Вас. 1:rlnglensls var.

caucasIcus .

13,3

100,0

100,0

0,0

0,0

Предмет изобретения

92,2

24,5

75,5

Способ получения термостойкого экзоток35 синного комплекса, включающий культивирование бактерии-продуцента на питательной среде с последующей сепарацией и стерилизацией культуральной жидкости, отличающийся тем, что, с целью расширения спектра действия

40 бактериальных препаратов, основанных на использовании спор, белковых кристаллов и или экзотоксинов, в качестве бактерии-продуценга берут Bacillus insectus Guk.

32,7

93,3

67,3

95,5

30,1

69,9

Контроль 1 (корм без экзотоксина) 34,5

92,2

65,2

Контроль 11 (корм без экзотоксина+питательная среда для

Вас. Insectus Guk

92,2

24,5

75,5

Составитель М. Дранишников

Редактор В. П. Борисова Техред Т. П. Курилко Корректоры: Л. Л. Евдонов и О. Б. Тюрина

Заказ 3932/19 Тираж 480 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, K-35, Раушская наб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2 в течение 48 час на среде, содержащей 3% кукурузного экстракта и 0,7% глюкозы, в сосудах на качалке. Полученную культуральную жидкость подвергали сепарации с помощью центрифуги (3000 об/мин) и стерилизации в течение 20 нин при 1 атм (для уничтожения спор и кристаллов).

Таким же образом получали культуральные жидкости четырех бактерий, причем в качестве эталона была взята культуральная жид- 10 кость бактерии Вас. thQringiensis var. ййг1пgiensis, которая продуцирует экзотоксинный комплекс.

Испытание проводили на личинках комнатной мухи, взятой в качестве тест-объекга.

Культуральную жидкость давали с кормом в дозе 1 мл на 1 г корма.

В каждом варианте было по 90 шт. личинок.

Результаты испытаний приведены в таблице. 20

Влияние стерильной культуральной жидкости некоторых бактерий на выживаемость комнатной мухи.

Из таблицы видно, что культуральная жидкость Вас. insectus Guk. обладает высокой токсичностью по отношению к личинкам комнатной мухи, которая вполне сравнима с токсичFJ0cTbFo культуральной жидкости Вас. ййг1п

giensis var. thuringiensis и, конечно, значительно выше чем у других бактерий, которые не образуют экзотоксинного комплекса.

Летальная концентрация культуральной кидкости Вас. insectus Guk, при которой погибает половина личинок и пупариев (ЛК„-O), для комнатной мухи составила 1,5 — 2,0%, Испытание культуральной жидкости Вас.

ir;sectus Guk. на гусеницах капустной совки также дало удовлетворительные результаты.

Погибло 80% гусениц. Энтобактерин, дендробациллин и инсектин, как известно, не поражают гусениц капустной совки, Предлагаемый способ получения термостойкого экзотоксинного комплекса позволяет изготовлять известными способами энтомонотогенные бактериальные препараты, содержашие споры, белковые кристаллы и экзотоксинный комплекс, а также препараты, содержащие только экзотоксин.