Всесоюзна и гнп-тр^ййуг'-библмо^'г^^а

Всесоюзна и гнп-тр^ййуг'-библмо^'г^^а

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

O ll H C A H H E

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К ПАТЕНТУ

304762

Овес Саввтвкив

Сацивлиатичво кис

Республик л

Зависимый от патента

МПК С 12d 13/00

Заявлено 15.1X,1969 (№ 1363593/31-16)

Приоритет 27.IX.1968, № 763,408, США

Номитет по пелам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 615.739.6(088.8) Опубликовано 25Х.1971. Бюллетень № 17

Дата опубликования описания 12.VII,1971

Автор изобретения

Иностранец

Джером Бернбаум (Соединенные Штаты Америки) Иностранная фирма

«Мерк энд Ко., Инкг» (Соединенные Штаты Америки) СЕСОЮЭНдй

МЕНТ88-ПН1Р,Щу,.

БИБЛИ

Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ДВУСПИРАЛЬНОЙ

РИБОНУКЛЕИНОВОЙ КИСЛОТЫ

Изобретение относится к области биохимии и касается способов получения двуспираль.ной рибонуклеиновой кислоты.

Известны способы получения двуспиральной рибонуклеиновой кислоты из клеток Eschetichia coli путем заражения мутангом бактериофага ic последующим .выделением продукта с помощью фенола.

Указанные способы не обеспечивают удовлетворительного выхода, целевого продукта.

Целью настоящего изобретения является увеличение,вьгхода двуспиральной рибонуклеиновой кислоты. Для достижения этой цели в культуру через 45 — 120 мин после заражения 1вносят антибиотик в количестве 5—

200 мкг/лл. Далее процесс выделения рибонуклеиновой кислоты ведут известным путем.

При получении двуспиральной рибонуклеиновой кислоты по предлагаемому способу выращивания клеток Е. coli может производиться на любой из известных питательных сред, например, на среде с триптоном или среде с жидкостью, в,которой было намочено зерно.

После достижения концентрации клеток

5 10> — 5 10в и более в 1 мл среды производят заражение мута нтом бактериофага, например MV-9, так, чтобы на одну бактерию приходилось бы от трех до тридцати клеток вируса. Через 45 — 120 чин после зара кения в культуру вносят антибиотик, ингибирующнй протеиновый синтез, например, сгрептомнц и, окситетрациклин, xëopàìôåíttêoë в количестве 5 — 200 11кг на 1 11.1 культуры.

Пример 1. Культуру E. coli выращивают на среде, содержащей в 1 л воды 10 г триптона; 1,0 г дрохкжевого экстракта; 1,0 г декстрозы; 8,0 г x;IopHCTolo натрия; 0,22 г iëoðèñòoão кальция и 15,0 г агара. Прививочные клетки

1О получают выращиванием в течение 16 ч11с пр 1

37 С на той жс среде, но без at apa. Выращивание ведут при 37 С при аэрации и встря1иaaI;IIII. После достижения концентраци11 клеток 5.10в на 1 .11л среды добавляют вирус

15 МХ -9 так, чтобы Ita одну бактерию приходилось бы шесть инфицирующих вирусных частиц. Через 60 лшн после заражения доонвляют хлорамфеникол B количестве 50 лкг/.11л и продолжают культивирование еще 240 11нн.

20 Выход рибонуклеиновой кислоты прн этом увеличивается на 54 % по сравнению с кон1ролем, в который антибиотик не добавлялся.

Пример 2. Ведут синтез в условиях, oIIHcBHHbIx,В,примере 1, но пр именя!0 Г окситет25 рациклин в количестве 50 11кг1.11.1. Выход двуспиральной рибонуклеиновой кислоты, 11о сравнению с контролем, повышается на 48%.

Пр им ер 3. Ведут синтез в условиях, оп11санных B примере 1, но применяют стрсптоми304762

Составитель Н. Эскин

Тсхрсд Е. Борисова

Корректор E. Н. Миронова

Редактор М. В. Макарова

Заказ 1800/10 Изд. Ы 758 Тираж 473 Т1одиисиое

Ц!111ИПИ 1хо1иитета по делам изобретений и открытий ири Совстс Министров СССР

Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4,5

Типография, пр. Сапунова, 2 цш1 в количестве 50 11кг/л1.г. Вы од двуспираль;1ой рибонуклеиновой кислоты, по сравнению с контролем, повышается на 45",о.

П р и м с р 4. Для выращивания применяют

IKH. KOOT, B KOTOPO1i

3 ту жIIäкость риз ОаВЛЛIQT pаВпым Оо ьcмом воды, добавлением едкого патра доводят рН о 7,0; нагревают 1 нас при 100 С, охлаждаIoT, отделяют примеси центрифугированисм, разбазляют в 10 раз,водой, пагревают до кипения, охлаждают и вновь центрифугируют.

Когда концентрация и IcToK достигает

1,28 л1г/л1л (по сухому весу), добавляют бактсрпофаг М1 -9 и далее ведут процесс, как это описано 3 примере 3, вводя стрсптомицин через 90 л1ин после заражения в количестве

100 лкг/,11;г. Выход двуспиральной рибонуклеиновой кислоты по сравнению с контролем по.вышается на 113,/о.

Предмет изобретения

Способ получения двуспиральной рибонуклеиновой кислоты из клеток Escherichia coli, зараженных мутантом бактериофага, от,1и10 кающийся тем, что, с целью увеличения выхода продукта, в культуру через 45 — 120 11ин после заражения ВнОсЯт ант ибиотик В коли Iсстве 5 — 200 икг/u,ã. Далее процесс выделения рибонуклеиновой кислоты:ведут известным

15 путем,