Патент ссср 314356

Патент ссср 314356

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ОЛИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Сова Соеетокик

Социалистическик

Республик

Зависимый от патента ¹

МПК С 12d 13/00

Заявлено 15.И1.1968 (№ 1259048/31-16) Приорп-ст 19Х11.1967, № 18542 А;67, Италия

Комитет по делам изобретений и открытий ори Совете Мииистрое

СССР

УДК 615.45:615.711.7 (088.8) Опубликовано 07.IX.1971. Бюллетень ¹ 27

Дата опубликования описания 16.XI.1971

Авторы изобретения

Иностранцы

Алба Мариа Амичи, Анаклето Мингетти, Туллио Скотти и Селестино Спалла (Италия) Иностранная фирма

«Сосиета Фармацеутики Италиа> (Италия) Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АЛКАЛОИДОВ СПОРЬ1НЬИ

Изобретение относится к медицине.

Известен способ получения алкалоидов спорыньи путем глубинной ферментации культуры рода Claviceps в аэробных условиях на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли при температуре до 30 С и кислой среде, с последующим выделением целевого продукта.

Предложенный способ характеризуется использованием штамма Claviceps purpurea

1 . I. 32/17.

Штамм Claviceps purpurea F, 1. 32/17 выделен из спорыньи в стадиии покоя, собранной на колосьях ржи близ Брунико (Бользано).

Мицелий молодых культур состоит из гифов диаметром 2,5 — 4 мк с мало заметнымп перегородками. Молодые гифы обычно нс имеют ветвей. Растущие гифы ветвятся, и перегородки становятся более отчетливыми, гифы утончаются, и диаметр их получает значительное искривление, обусловленное наличием клеток различных диаметров. Время от времени гифы разрываются на уровне перегородок и образуют искривленные фрагменты, которые проявляют свойства автоспор. В зависимости от состава среды штамм F. I.

32/17 образует или не образует конидии, которые имеют правильную овальную форму размером от 2,5 — 3,5 до 5,3 — 6,5 л к.

Штамм Claviceps purpurea F. I. 32/17 вы5 ращивают глубинным методов в аэробных условиях на питательной среде, содержащей источники азота, углерода и минеральные соли. Источниками углерода могут служить глюкоза, сахароза, декстрин, сорбит, маннит, 10 rëèöeðèí, лимонная кислота, янтарная кислота, а исго шиком азота — аммиак аспарагин, и, творожные гидролпзагы, дрож>KeLou экстракт, мясной 3КсТраКТ, соевая 11v ка, соли аммония, например азотиокислые, 15 сернокислые или хлориды. Минеральными солями являются «лориды, иитраты, карбонаты, сульфаты, фосфаты щелочных металлов, магния, железа, цинка и марганца.

Пример 1. Исходную культуру, выра20 щенную иа скосе питательной среды, содержащей гл.окозу 40 г, (NH4) 2НРО,, 5 г, К Нl 04

1 г, Мд$04.7Н20 2,5 г, КС1 0,5 г, FeSO4 7Н О

10 мг, ZrISO4 7Н О 10 мг, агар-агар 18 г, дистиллированную воду до 1000 сиз, высевают

25 на скос аналогичной среды, выдерживают в течение 8 дней при 28 С. Полученную таким образом культуру высевают в колбы объемом

3141356

Предмет изобретения

Составитель В. Муравьева

Техред Л. В. Куклина Корректор В. И. )Колудева

Редактор Т. Фадеева

Заказ 3! 55/16 Изд. № 1321 Тираж 473 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5

Типографии, пр. Сапунова, 2

300 ил, в каждой из которых находилось по

50 снз SC среды (глюкоза 80 г, пептон 16 г, водопроводная вода до 1000 ял, рН 5,9.

Колбы выдерживают в течение 4 дней при

24 С во вращающемся аппарате при непрерывном встряхивании, скорость вращения

220 об/,иин. От полученных таким способом культур 10 высевают в колбы объемом

300 л1л со средой (сахароза 60 г, глицерин

60 с,из, глюкоза 80 г, дрожжевой экстракт

0,1 г лимонная кислота 15 г, КС1 0,125 г, К НРО4 0,5 г, MgSO4.7ÍãO 0,5 г, FeSO4.7НвО

7 лг, ZnSO4.7Í Î 6 мг, дистиллированная вода до 1000 л1л). Колбы 13 дней выдерживают.

Содержание смеси алкалоидов в культуре составляло 2000у ил, в которой эрготамина

48% и эргокриптина 52%.

Пример 2. Содержимое 120 колб с титром 2000 — 2500 у смз соединяют и полученные

5 л культуры отфильтровывают. Фильтрат и мицелий экстрагируют порознь. Фильтрат при рН 9 экстрагируют дважды 3 л хлороформа (каждый раз). Хлороформ откачивают при

20 — 30 С до 1/„.- первоначального объема и экстр агируют 2% -ным водным раствором янтарной кислоты. Мицелий смешивают с 50%ным водным ацетоном, содержащим 2з/< янтарной кислоты, и отфильтровывают. Фильтрат при рН 9 экстрагируют хлороформом.

Экстракт и фильтрат сливают, упаривают до небольшого объема и осаждают гексаном.

Полученный сырой продукт растворяют в

13 смз ледяной уксусной кислоты и добавляют к нему метанол в количестве 110 сиз.

Далее добавляют 5%-ный раствор серной кислоты в метаноле в количестве 13 с,из, и реакционную массу выдерживают в течение ночи при 3 С, Маточную жидкость концентрируют в атмосфере азота при пониженном давлении до малого объема. Остаток разбавляют водой и при рН 9,5 экстрагируют хлороформом. Экстракт концентрируют в вакууме при

30 С до малого объема и пропускают через

10 колонку с 400 г силикагеля в хлороформе.

Элюируют с помощью хлороформа эргокриптин, который упаривают досуха. Остаток растворяют в бензоле, взятом в соотношении 1: 20, и концентрируют до 1/1 исходного объема. Ре15 акционную массу оставляют на ночь при 5 С.

При этом получают 4,8 г эргокриптина. При продолжительном элюировании из силикагеля хлороформом с 4% метанола получают другие фракции, выход которых при испаре20 нии досуха составлял 0,7 г.

25 Способ получения алкалоидов спорыньи, например эрготамина и эргокриптина, путем глубинной ферментации культуры рода

Claviceps в аэробных условиях на питательной среде, содержащей источники углерода, 30 азота и минеральные соли при температуре до 30 С и кислой среде, с последующим выделением целевого продукта, отлачающийся тем, что используют штамм Claviceps

purpUrea F, 1. 32/17.