Патент ссср 316991

Патент ссср 316991

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

3I699I

ОПИСАНИЕ

ИЗОБ ЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союа Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства №

Л!П1х G 01п 33/16

Заявлено 31.VI1.1970 (№ 1469046/31-16) с присоединением заявки №

Приоритет

Опубликовано 07.Х.1971. Бюллетень ¹ 30

Дата опубликования описания 21.XII.1971

Комитет по делам иаобрвтений и открытиЯ при Совете Мииистрсв, СССР

УДК 612.129

Авторы изобретения

Заявитель

А. А. Ноженко и A. А. Шмидт

Л атвийский научно-исследовательский институт экспер и ментал ьной и клинической медицины

СПОСОБ ИССЛЕДОВАНИЯ НУКЛЕОТИДОВ

Предмет изобретения

Изобретение относится к медицине, точнее к физико-химическим методам исследования биологических объектов и веществ.

Известен способ исследования нуклеотидов высоковольтным электрофорезом на бумаге.

Однако этот способ не обеспечивает достаточной точности исследования и не может быть использован для изучения нуклеотидов в эритроцитах i(poBH.

Цель изобретения — повысить точность исследования нуклеотидов эритроцитов и увеличить срок хранения образцов.

Это достигается тем, что навески предварительно обрабатывают органическим растворителем, например диэтиловым эфиром, и затем фиксируют ненуклеотидные вещества органическими растворителями, например смесью этанола, ацетона и эфира. Из пробы экстрагируют нуклеотиды, промывают экстракт и подвергают его электрофорезу.

При удалении липоидпых веществ на 0,1 лл промьггых эритроцптов берут 9 лл диэтилового эфира, проводя обработку в течение 4 лин.

Соотношение компонентов смеси этанола, ацетона и эфира, используемой для фиксирования нуклеотидных веществ, составляет 1:1:30.

Пример. 0,1 — 0,2 лл охлажденной крови количестI:cIIIIo переносят в центрифужные пробирки с охлаждающей цитратной жидкостью, перемешивают и центрифугируют 6 мин при

1500 oo/ëèê. Эритроциты дважды промьшшот и добавляют к гпм 30-кратное количество дпэтп IQBolo эфира. После перемешпванпя и «,IIIвания эфира к остатку дооавляют смел дп5 этилового эфира, этанола и ацетона в «оотношении 30:1:1, которую после псремсшпванпя удаляют струей воздуха от водо«труйпого пасоса. Из обработанной органпче«1(пмп растворителями пробы экстрагируют нуклеотиды об10 работкой 5% -ным раствором трпхлоруксу«ной кислоты, Экстракт отделяют центрифугированпем, трижды промывают охлажденным до минус 9 С эфиром и наносят на стартовые полоски iIo 0,1 лл. После высушивания поло15 ски накладывают на смоченну1о хроматографическую бумагу и проводят электрофорез в условиях охлаждения при напря кении

850 — 950 в, силе тока 2,5 а, падении,потенциала 30 в/сл и рИ 3,9 в течение 2 час. Элюпро20 ванне осуществляют 5 лот 0,1 н. раствором оляной кислоты. Спектрофотометрируют прп

260 лк.

1. Способ исследования нуклеотпдов высоковольтным элекгрофорезом па бумаге, отлн30 чаюи(ийся тем, что, с целью повышения то шоСi ст

Тсx ";! T. Т. Ускова Корректоры: В. Петрова и Е. Ласточкина

I ãlt:! !< !!it Д. Пинчук

Л<<едз 34о4 13 11з.!. K 1441 Тира:и I73 ПОЯТ!Ясное

IIIIIIIIIIII 1(с»итсга !То ис,!2!>: изобрстctttit! t! открытий ири C<,истс Министров СССР

3 (осана,, 4(-35, Раун!ская иаб., ТЬ 4, 5

Тииоср(и1и1;!, <р. Саиуиов(1, 2 сти после (03 21!и я и к!1 СО Г:1. ТОВ 3 p IIT po",. !т 013 !1 увеличения срока .(рапспия о(!раз!3013,:i2вс к!! предвя рт<тельпо оор 20;ITI I 2io i ор 1;!т! и!!секи . растворителем, па !ример диэ!Пс!о!3!!м э(1!иром, и ЗатСМ фп",ИрСТОт ИЕПуКЛЕОГ;Тд:!ЫС 1!СИТ :.;.;:

ОрГ2 Пи !eel< !1 3t ll p 2(fтво!311 !Сл 51м И, I II i pl! ì р гме(ь!О эт2ttnл".:i!i! т !112 и эфира, иэ i..!00 эксf pаГир!, ТОT 113 к. !сотиды, промываlот экстр 2KT И IIO !13ep 1 21OT СГО 2Ëel<ÒpOôOpÑÇÚ .

2. Спосоо 1!О и. 1, отли!<а!01ц!4йс.1 тем, что

0,1 лл t!poli» ы.< эрптроцитов оораод!тыва!От (! лл ГТиэт:"1;!ового эфира в тече

1:1:30.