Патент ссср 317215

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

О П И С А Н И Е 3I7215

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союэ Советских

Социалистических

Республик

К ПАТЕНТУ

Зависимый от пате!гга М

Заявлено 09.V1.1969 (¹ 1337123 30-15) МПК С 12d 9114

Приоритет 11 VI.1968, М 17570 А,68. Италия

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

Опубликовано 07.Х.1971. Вюл ieicIII, ¹ 30

УДК 615.779.9(088.8) Дата опубликования описания 7.I.1972

Авторы изобретения

Иностранцы

Эрнесто Котта, Пьера Джулита (Италия) и Аврора Санфилиппо (Австрия) Иностранная фирма

«Сосьета Фармасеутикив и «Фармиталияв (Италия) Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИЬЙ01ЙЧЕСКО10 КОМПЛЕКСА

Изобретение относится к спосооам полу пения антибиотиков с использованием грибовпродуцентов, в частности к способам, при которых в качестве продуцентов берут грибы из группы Streptomycetes.

Известен способ получения, например, антибиотического комплекса либаномицина, который основан на культивировашш ряда штаммов Str. 1тоат!! В азроог!ых т словиях на питательной среде, содержащei»icioчники усвояемого углерода, усвояемого азота и минеральные соли.

Для получения антибиотического комплекса аксеномицина, включающего аксеномицин

А (F. I. — 2604А) и аксеномицин Ь (1 .1.—

2604В) предлагается способ, ociioiiaII»iiii также на кулы ивировании !редставителя

Streptomycetes, а именно Streptoiiiyces Iisandr п. sp. (Streptomyces 1 . 1. — 2604) (Societa FarmaceIItici Ital i a) .

Str. lisandri выделы из образца почвы с участка в Лизандоро Олмос (Аргентина), зарегистрирован и депонирован в Инстит те фитопатологии при Миланском университете (Италия) под ¹ IPV1951, затем в Университете Руджера (США) под ¹ 1МК()3935 и в

Государственном микологическом институт те в Ферри Лейн, Кью, Сюррей (Великобритания) под _#_o. 137178. Я

11ри выра!ц: ванин на обычной среде всгстативный Мицелий состоит из более или менее тонких гиф толщиной 0,5 — 0,9 л!к, длинных H обильно разветвленных, конидофоры

5 длинные и прямолинейные, толщиной 1,1—

1,3 лк. Гифы развствля!отся по моноподиальному типу, образуя споры нормальной длинь!, завитые в плотную спираль H

15 В табл. 1 обобщены свойства культур, полученных на различных среда при 28 <. . 1lав бл!одсния дел;, iii на 3, 8, 15, 20»30-и деш !o ;Ie инокулирован:!я. Микроорганизмы хар;!ктсризуются быстрым и обильным размножс20 нием с образованием компактного плотного вегетативного мицелия, поверхность когорого гладкая при выращивании на си}ггстичсской среде и слегка складчатая при выращивании ла орган!пиеской среде. На синтетической сре25 .Ie вегстатии!ый м !целий бесцветен, в то

i3 ;eìÿ как его обратная сторона может быть окрашена в различные цветовые оттенки от соломеш о-желтого до темно-желтого, каштаново-коричневого или серого с фиолетоЛ -;;; f:ij 11:!1(11!1 ! 8„)". С.) "8 8;::11.!. 5((! (-! )"(., (. = 11;51.) .С! 1-: ". "!) С 3;

1(1, 1; 1 >гД

Г) (1

1, I:, tI! I1f.: С.(С11, ili! :I i :1 Р! I lj (И вЂ”: 1 . I!() I >1 1>С(1 i)J . !.

1 i) ) ) ), 1,:"); —.)):1,, "1 1 (1; ) (.!),:;I >« I5 t . (:! I (1,1С>, (;! i() " (С:f i li 1> l I Л С.1 j !!, !1!! . 1 )!! i, 6) 1 I:, !8)Î л1.51) . ()(8 ;1 1: 1. l I(I !, .,! 1 11:-; 1.3 I! t l(I. :

1!(!1(! t t)1>i(lf). l l, I f

) (I!. 5.!! ); 7: — i> i!(t) !8,1 — ) — 8 t)

1 (5,()() - - t (),-1() ) (), " 6 — ) 8

lf j>I I (l fl -) f 1 . > .f fl > f(8;)8 (! ): 1,!15

) )(! (-!)".-"- = — — .,), 1) 1 (),() 1: 1,".1,1>....; .;,! 11, ! 1, ; 1 Г) 1 1 1 1 !» ., ) > .:: С . . Л11 Р 1. ф 1! (),!; -1) 5 1,5.

1" I !,:, .. 111 !(О.I Å,:(,f!()" 1,;;11. 3!

tljjjj :. l " l!. :(l< lI1;Jj>; )>J!

) — 2.)-! 11 ЗЗГ: ))j-: t,t;> tf.. . (1>1 1()) С .1(!) 1! !>i. : СI I; !".! ))>) 3

;I 1fj i*! 1, > j I 3 ();1(1 " j (,->! г; 11 1: ) f l",. !С 1. !>,J() . ; ) 1 ССС: . 1(). (6,"-: — 6.86 - - ""- —: () . ),-) () (у() )() (! ) (! )8 г

> t!jTjj 1."г(! (>1>|1!Т1(((3)3 11 I(T! (5 t!f)" :. г г> j l )! Г (5 1 !3()Л. - :I:) 11 3Ñ. .(!t. .

1г>С -г тС(11!11л -1(г -, .1

) ) j, l, I 1 г

l1. 1!1:: IС:.С I! j!;.I: I 3! : 13 > Ji!> . : : ! 11 \ I Р 0;!1 ::()!!(С( 5 3(:

1 !!> )1 Iт,>!>,,, 1,1> 11 1 !! ! (f, С !", >.; 1: )) 1 С .,!

Т >1, J> 1 l 1()it j тт);!(-(), (° г(, . )! . 1 .. 11, 3 i j : );) 1) ::;) г) : ., ; ! . !, 1! 5 (1 I I>! 1 11;)1!! f! " I.!.13 >: (! Itl (!,г;1

1,1С::С,11111:,:,- (! "3

Jt!I II . li, .I Jf l, !,.. 1С:1:!

:. )),: . г (Р (), :. I Ill I,J I . !3 If )1(С ! 1,1 Л

)),:,. Г:,;!;! !,1 I - ":! — ., ) j (3!(7(1(t;! 1113; " П 1.> "J I:.11>!Х 1,) .(1 1 !

);) 3 1;: 1; (>1 .

t 1 с ..1(>, !O I i!;5 1,, 3 (>1,:1.."5>.1," :; !

11!С вЂ” 31) !.1:(Ч ."СС(3"..:1. .;. !

31?215

48 час определяли показатель ДИМ. Полученные данные приведены в табл. 5.

Таблица 6!

ttI Ю,С

С33

v t= 2 C> и о о !

Таблица 5

Виды животных

Результат

Значение показателя

Д И Л!,!1у;з/с.!1В

Ак сеномицин А

Аксеном;1цин Б!

Очень с iëüíî устойчивьш,даже при двукратном введении его в течение месяца

Крупный рогз10 тый скот

Sacchar0myccs св!.1ВЬсгgсияis . 0,04 !

Candida a1bicans 1,25

0,04

1,25

Овцы

Собаки

Очень сильно тстойчивый

30 Очень сильно устой гивый

Испытание на выносливость

Испи!Тания на выносливость проводили, ь на крупном рогатом скоте, 013133х и сооаках путем введения аксеномицина Л и акссномицина Б в дозе 20 л!г. кг. Результаты приведены в табл. 6.

l>. 3i3.!l:. Iи 13 до:3(. 20 .3!г ьг . Г1, 3и0.1изитель!!o после 18 час испыти11ия. После обрабо "i! зксементы пгдвсргали исследованию для регу20 л:.1: Oва11ня !!ыбрал1вания параз1!тов. 1ерез

- 4 t((Ic после обработк11 двс собак!! оыл1! уби1: . а I! X К 11Ш Е Ч 1 И и О 1>1 Л П 0 Д13 Е Р Г И У т И С С Л Е ДO В a1 l!Iii ДЛЯ Р:1;3с 11 10>Н:1Я НаЛ!«1ИЯ СКОЛЕКС

313 оста в>11 имися собаками вели наблюде25 н11Я и !ерез 30 дней после обработки. Экскремс: ты исслсдога I!I 11а:1аличие яиц ленто ll!î-! i3 310 "313ß. Роз льтаты п,3:!ведены B табл. ii.

Антигельминтная активность при введении собакам

Лнтигельминтную активность проверяли на

1 6 iic I I B O T II bi X > к о г о р ь1 м 0 f >f л 11 в 13 Сдевы ленто!IIblc черви (Cestoda). Лнтиб:1отик

Таблица 7

1Iеслсдовинис кишcчникa

1битого животного

11сследованис экскрементов через 30 дней

КОЕП1ЧССТВО

ЖИВОТНЫХ

11Ге Ic10I3auIIi экекреs .cliто!3 через Н3, к!>лько чзееs

Паразиты

Dicilidium caninum

ВЫДЕ1CIIIIC I:1300.:0ÒÈ:IÎÂ И

СК0 1 II K0 I3 !Е реэ 1 !а С

0Tpltuà TcnüII0C о-,ридатсльнос

ВЬ!ДЕ. !ЕЧ!НЕ Н РОГ.ТОТИДО!3 ЧГрез 1 — Ii ñ вы,".Гленис рез 1- 3 час

ИООГЛ..ТИ„-ОЗ:!Е отрiiuaтсльпос

ПИОГЛОТИДОВ

ВЫ !Е.ТЕН:i! рсз 2 час

ll»0vn0TII,T0I3 «сВЬ!ДЕ. CIIII рез 2 час

ВЫДЕЛЕ!Ii .C i:Pi>C. ОТИ 3013 iCроз 1 -" час

". Р О: Л 0 -.11" 0 В Ч ЕВЫ Е.II ii!".. рез 3 час

Il m ë I Ii 0â:C

ВЫДСЛЕIIИ С.i1>0ãë0Tunîâ че131>1;IC:IЕ11И Г рсз 2 час

ВЫДСЛЕНИЕ ПРОГ.IOT".1013 IC 1303 1 час выделе:!Нс .:рога.>тид013 !срез 2 inc

ИРОГЛОТНДОВ: Евыделениi рсз 3 час

Данные табл. 7 показывают, что Во всех новению паразитов. что было подтверждено подве13гн3 Tblx обраб3отке ккивотных BIIT!IOIIO- а11;1 I!1303: 3!xo!I;IBxIB!ITOB !1 кишсчни1 а; битык тические вещества привели к полному исчез- 30 3к:.::ютных. т;, (((!) T; t-; ));

11

)(. !(! t() . . (1 т.

Б! ) .1 (! (, ° ) It

Р(!.(! !

) 8 — —.

1 1

) ) 1 (! 1

1 (Г!, "((,! ( (.!)(! ! л Й:)

:. ((1 .,;, I I t, 1 )! (), (1!))1 ", I

)Д . ° !!

f .(1

1 1 .! ((1!

i t :! !. . (! : . (;

1 )! . 1. !:

) ) 1 () -

I (, ! ! (, . i,!)(,)!, ()

1)

) \

1. ) ) 1! (:! )!

1, ) ) 1,(i (! .!

С,, 11

1! !) (i

) ): () (! . I i (! !,. i

1 () 317215

13

Лммоний ccPIIOI lfc;II>li I

Моиофосфат калия

Вод2 водопроводн 211

0,1

0,01 до 100.

Предмет изобретения

Составитель М. Дранишников

Техрсд Т. Ускова

Редактор Д. Пинчук

Кор!ректоры: Е. Зимина и E. Усова

Заказ 3926,119 Изд. М 1440 Тираж 473 Подписное

ЦИИИПИ Ком!!тета по делам изобретений и откр стии при Согс,с,ЧИ33истров СССР

1Ч«сква,,3К-35, Раушская наб., д. 4,,5

Типография, пр. Сапунова, 2

Бульон перемсшива!От при 400 o0,в!!!н, 2эрируют примерно одним обьсмом воздуха 112 один обьсм среды в 1 Гиии и и;!кубируют при

27 — 28 С в течение примерно 24 час. К концу этого периода для инокулироваиия 50 л ферментационной среды применя!От 3 л полученной суспензии мицелия.

Ферментационная среда им ст следующий состав, /о.

Глюкоза 8

Мука соевая 3

Экстракт кукурузы 2

Кальций углекислый 1

Натрий хлористый 0,25

Масло соевое 0,5

Вода водопроводная до 100.

После стерилизации при 121 С в течение

30 л1ии и инокулирования среду перемешивают с помощью турбинной дисковой мешалки с четырьмя плоскими лопастями и аэрируют путем подачи 0,7 л воздуха на 1 л среды в 1 мии при 27 — 28 С в течение 120 час. Мицелий, собранный после фильтрования 5 л культуры в бульоне, экстрагируют 4)(3 л метанола. Экстракты объединяют и упаривают в вакууме. Водный остаток промыва от .1етролейным эфиром, после чего экстрагируют четыре раза равными объемами н-бутилового спирта. Экстракты смешивают и упаривают в вакууме досуха. Остаток растворяют в 100лл метилового спирта. Нсрастворившуюся часть отбрасывают, а раствор упаривают. OcTaTOI суспендируют в 200 лл хлороформа и затем отфильтровывают. Хлороформный раствор концентрируют и осаждают петролейным эф 1ром. Получается 2,0 г сырого продукта. Oîдержащего антибиотик аксеномицин Л и аксеномицин Б.

Сырой продукт очищают путем распределения по принципу противотока в двухфазной системе хлороформ: четыреххлорис1ый углерод: метанол: вода=3:2:4:1. Фракционирование Но 50 пробиркам показывает, что максимум активности получают в проб:Ip»ax от 10 до 20 0,20 г чистого комплекса аксе IoМИ iil:.Ic! !ОЛУЧ2ЮТ УПИР!122НИС<М ОДСРжИМО О

; l l!х I;!30(>i!00» .!Осcxa. 110,!<

110КИЗЫ132 Т ПРИ cli12.1ИЗС llo МСТО;1У ГОН»ОСЛОЙil 0H; 0:

3H iciCИИЯМИ К1 0,-10 ci 0,61 ОО!.иСТСтВСН 10.

1 !3дслсlii!c д13у; 1!»3 ив!1ы. 13cùcc Г13 Осуlцссl l3;I f1oi с i!oil!0!II!HO xi 031210! Рафии на си.lик2

Голc 13 I!o.ioli кс. < c. :i;f или ва lот р11 7,0 с no)0 тощ! !О 0,00 М fpo.ôaTIIO:0 б>фсра. Добавляют 33 )f3 !!0130131»000p23!Ioii цслл!Олозы. Для

1 < . I.ом ii:! <: al.. а 11! TH OHÎ 1И к2 с poo) СТ< Я кол011ка диаметром 2,4 cd! и высотой 30 ст!. IIри эл10ир0132:IH>I смесью и-бути;1013ый cllHpT: у кci elias кисло Га: вода =4: 0,5: 1 (по объему) пол<:lc! Ioò фракции, содержащие 0,60 г соеди ciIfI» ь и затем 0,25 г сосдинениЯ А. Каждый 11з c!!ITI!биоти ов, выделен:1ый с помощью метанола Н3 остатка после выпар:!вания элюагов, извле:,аюг путем удаления растворителя и высушивания до постоянного веса над пятиокисью фосфора при остаточном давле;и:i 0,2 лл рт. cr.;1ри комнатно11 температуPC.

1. Способ получения антибиотическо-о ком"

30 f.ëc са на основе культивирования грибаиродуце1!та из гру31кы Streptomvcetes в аэробных условиях на жидкой среде, содержащей и!сто шики свояемого углсрода, усвояемо:0 азо-.а и минеральные соли, отличаю-! ц!тра

Л 11т. I.— 260-EA) и,.ксе:1омицин Б (1т. 1.—

2604В) в ка<1сстве Гр:!ба продуцента берут

Stre;:tali!i cps 1isaIIcIri n. sp. 181ГС1310пl ccs

40 I . I.— 2604) (Societa I aroiaccH(ici 11а11;!), 2. Способ п0 и. 1, огла1а<01цш ci

45 3. С пособ по 1. 1, 0Tлfcча10ЩИ110Я Tcм, что

c!:!ТибИОт11ЧССКИй КОМ!-.ЛСК раЗдсляЮт На 2Кс С! I 0 f I I I H H Л H 2 к с С И О м И ц И н Ь .

4, Способ по пи. 1 и 3, отличаю1ц!1йг31 тем, 1!О акссномицин Л и а cei!Oi;:щин Ь:!ерсво50 Ят в соли нетокс11чных кислот.