Способ разделения белковых смесей электрофорезол1
Иллюстрации
Реферат
\ 1.
ОПИСАЙИЗОБРЕТЕН
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕП
32I746
Союз Советских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства ¹
Заявлено 24.1Х.1968 (№ 1274655, 23с присоединением заявки ¹
Приоритет
1ЧПК б Oln 27/27
Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров
СССР
УДК 543.545 4(088 8) Опубликовано 19.Х1.1971. Б?о,-;,? стен
Дата опубли
Авторы изобретения
А. Д. Шутов и И. А. Вайнтрауб
Кишиневский государствен«ый университет
Заявитель
СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВЫХ СМЕСЕЙ
ЗЛ ЕКТРО Ф ОР ЕЗОМ
Изобретение относится к области р a;,7ñ 70ния белковых смесей.
Известен способ разделения белковых смесей электрофорезом в полиакриламидном геле путем непрерывного удаления белка, выходящего из электрофоретической колонки с полиакриламидным гелем током буферного раствора с последующим отбором фракций на коллекторе.
Но происходит разбавление растворов белков в процессе разделения. Невозможно также разделять большие количества белков без увеличения объема полиакриламидного геля.
Для разработки такого способа препаративного электрофореза в полиакриламидном геле, который позволил бы при сохранении вь?с0кой разрешающей способности разделять большие количества исходной смеси белков без увеличешгя объема полиакрилах!«диого геля и разбавления растворов белков, предлагают процесс вести в камере, разделяемой мембранами из геля на одну внутреннюю и две наружные камеры, объем которых меш.ше внутренней, с отключением и изменение;i направления тока при достизкении внешней Iloверхности мембраны следующим по подвижности белком и обменом содержимого наружн ых камер, в одной из которых содержится наиболее подвижны I OB:IOI<, Ii c IIOBTopeillieil
«222ièli: о:1:",. з;;IIII 70 полного разделения
С»ССИ «2 КО: !70«СНТ?!. .:?ЛЕКТРОфОРСЗ ?IРОВОДЯТ В ПРЯМОy! O ?ЫIОХ! сосуде 1, перс;орожснном мембранами 2 и 8
5 одина!<Ово>! Т0 7!i!ll Ill>l, IIB.-QTOBëñíïû»è из лиакрнламп,!IÎГÎ Гсля и,",вумя мембранами 4, пзготовлсl?:1: !ми пз целлофана. В сосуде имеются два элсктрода о.
Внутрепшою камеру с?, ограпшченную мсм10 бранами 2 и Л Bç полна.;риламидного геля, заполняют раствором, coдержащим с»есь двуx белков, отличающихся по электрофореT!! lC0ÊÎé 110,".Bi!;i< IIÎCTII Г ПО>11121
15 I<2. lcp!>I ", 1110;;!12>!o I б феp III>111 р 2cTBopo>I, П р и в !< . !о i с 11 « I i токи 1I 0 7, $211cTBlic м эл екТР ? IC !0!0 НО ?Я О". IКИ, .!11ГРИ?, УЯ К OДНO >IУ
112 Э, lCКТРОДОВ. !ICI?РЕРЫ?>1«0 !70СТУП210Т В«УTPB мсмб!12:!»I 2. i!cpcмсщаясь внутри мембоаны
20 к 11«< Ill il li ". 11020;1хl!Осгil, Оелки oop23уlот, вс по;1вижиыс границы. После того, как rpa1 ill l 2 ООЛ С, .107«н>К «ОГО ОСЛ «2 ДОСТИГНЕТ
n«!liic!i нов>рх ости;1:»0021!û 2, пос leg!!I!it на глпает и р»ходит? во гпсшн?ою камеру !!
25 и остается и ней> так как целлофановая мембрана !!с.?,.о!1!1 ?асма для белков. -1 роз н" ко ГО;. Ос врсхlя Граllи? 2 хlснсс поди?и<;«« î бел?,2 дос-, ига "i. г>пешней поверх«ос<7! мсм оран ы 2. В это время отключают
30 то.<, раствор !!з «2»ср?а !>, содержащий нско 3 торое количество более подвижного Gc -, i((!, переносят в камеру с, а буферный растаnp из
HBixrepbi c iIepeHoc5IT п K3>,1ер> b ток обратного направления. Г!ри этом белки, вошедшие в мембрану 2 при прямом папрявленни тока, возвраща!отся â камеру и, а оелки, содержащиеся в камере а, мигрируют В стоРонУ мембРаны 5 и, пспРеРь(гтпо цостУпаЯ в нее, вновь образуют две по (ви>((пь с границы, аналогичные описанным вьппс, Тn; обратного направления пропускают до тех пор, пока весь белок из мембраны 2 i:c- Вернется в кайзеру а, а гранина менес I!0, чп>.(ного белка в мембране > не достпгпci .",Пешней ее поверхности. 32 это время пскоторос количество более подвижного белка и реходит в камеру с, уже содер)кап,ую u;.HOB, ПЕрЕНЕСЕННЫй ИЗ КаМЕрЫ b. СЛСд ЗЯ 03 И:т! операции по замене сод -р" H!»Ot к.::,!ср b и с и изменению направления тока по TopHIOT многократно до тех пор, пока более подви>кный белок не перейдет практически ш>лностью из внутренней камеры а во BIICILII кпо.
Поскольку толщина мембран 2 и,» оди !акова, время, за которое грашп;а мсп". П(>движного белка достигнет внеш 1 и повсрхности одной из мембран, равно врсмспп, псобходимому для полного выхода бслксв пз противопол03кнои:)lсмОраны ВО niiy I рспп lоlо камеру.
Разделение слОжны.; смссеЙ, содс13 к Ящик более двух белков, осущсствля -05 I.oc,-сдовательным отделением I:2: (;-,о: о пз !121! более подвижных белкоь.
Для разделсш(я бслков 13 бс(ь(,!и (00,. ;:Hx раствора без увеличения объс:::я " ..;:, Псй камеры раствор разделяемой смес,,(()" т, ) ко(3 из внешнего сосуда подвсрга!От H .И ;ре=-рывпо циркуляции через внутренн!О;о ка,!".I3>,, Циркуляцию осуществляют с помощью >!Etxpoiiacoca.
Для пОВышепия I(ollöci! Гряцl(п растворов каждого из белков смеси в п1р оц(ессе их разделения внешние камеры b и с изготгшлnna!Or с таким расчетом, чтобы объсм каждой из
ННх был меньше объема ряствора рязделясмой смеси.
Для 2Втомятизации 331>(Сны р2cт >nj;Оn ВО внешних камерах b и с и изме) сн sr tia: ра,;— ления тока используют два:!луня: ра меxaнического привода с клапанами j»c;! o-;ü::-вано плунжерное стройство;. -клапана .;:-. .Hнических микроб!Ореток системы (I c(!Ic!!xа(и датчи:-; времени 1командпь(Й (с:;",;::;:: I(H."I прибор КЗП-12 3 ) .
Условия для проведен!(я прс:!3,;à ll:!:Oão разделения смеси белков могут бь. (1, ра "счиTBHbI ОРИЕНТИРОВОт!Но 113 OCIIOHHHEIH j:CÇ i .HIITHтов аналитическсгo раздeëcïèÿ.
Предлагаемый crtocoG прс!!2()ат(„„)o: î р (зделения белков электрофopcaîì г, .(олпа.(.„.)п.(H i. пдпом Гсл .>(Ожет б1>(ть ll j> Ei 3lelre1t для р 2 3, лсиия (ox i"iti веществ (нуклеиновых кислот ! др.), прп ie." мембрана может оыть изготовлена тai кс из zpyi rix .;атериалов, таки. .
5 ИЯк H! i! p, (1 Гapona> кр 2. (>12 ) I>lib Й Гс,,I> и "!p, I I p H 3I i )Ъ РЯЗдс:IHIO!. С т!СCb 1!О!
ОЛИГомс(3013 GU и С(О CЫ)>ОрО ГО>(I!01 миня.
10 I n !è !Ccò!30 1:Я. ;1 "лясмОЙ cxlccil бсл оп>, г
Обт см ра. Здслясмой смсси бслкО т, г(л
1(опцс(гграци5(мономсра в расГвор" исходной смеси бслКОВ, О>
Ооъсм впугpcrr!ici; камеры, с.)("
0o-. см г((с;III(;!"! камеры, с,)(Т о. Иц И и 2 l>t C >I G p (! I I bl, >ща !ь IGj> all»I C.!(2
Ооъсм нолпакр;(ла Iticrtin o гсË 51 т С.! i"
Копцсн Пап,ия гел", "">(о
Раствори;ель — тр:rсc-цптратпый
Gyp>cj3 p; 8,б
Г?1302(звод!Ггсль(1()сп xi HI j>oriacoca, 3(.г»(ас
1 2 и р яи(с и 13 с, > лОтпость тока, ((,"ñ )(.>О Бpc .IЯ пpопуc((апия тока В Одпол! паправлсшш, л(((я
> I! C,!n ц!.;1((ОВ т! "(>Π—, И (т)от т; я) (Ол (ЮГО Ра;.,СЛС! Ill>I
1y, )It).< птрация раствора 3!o!in, lcра
35 Н()СЛ ОГО ОГДС,(С((НИ, омер а и о альбу15
1,0
19,0
38,0
0,2
19,0
-1,o г
/, О
G,014
4,2
45 П р е д м е i и 3 о б i) å т с и I я
Способ разделе:(пя белковых смесей элск— —, рофорезо I с I! p! Ixlcilpllllp ., геля, напри. !Ср
ПОЛИ Я Ь PH;i H:!ili;r ilo! 0, GT.! ((Чп(0((> ((((Ст(TC 3!, ЧТО, 50 . . ц.льio повьппе(п!я эффект(И>пocr;! разделс1:тЯ, ЕГО ВСДУт В Ка. (ЕРС, РаЗДЕЛЯЕМОЙ МСМ .,;>atta»!!i !!3 геля Ia о;(ну !lvTpeii»IOIо и две наружные казцpLI, обьсм котор(.!х:, сньшс ооъс 3 Внутрсl!1!ci!, с DTI(,l:OHCIIHåì и измснс55 !!1 с31 (21(раплсп:151 тока прп дос! H:!(cll lii LH Ili-!!!. Й !.О !C pX!IOCTIi .,(С.,(б13 Япь(сг!СД3 (ощи:)1 Ilo подВ(3>кпост!! белком и обменом содержи>1010 па":у>п.п>Г(камер, В 0;I!IOEI из которых содсрЖ!iг >1 IIBHÎO;ICC под",.ИжпblЙ бс IOK C
60 p: и((ем указа:шы.; опера!HII до полного раз;,,P . l C H I I 5r С И Е CH i 3 КО М (I O I I P H T I>I .
1) xccëc;,013!! I ис выдс: е(!ного препарата мономера сыво;>оloтп(c(0 альбу3пша апалити icским элсктрофорсзом в полиакриламидном
40 Гслс по азываст полную его однородность; в пр парате олигомсров пс обнаружена примссь ъ(оно,(cj>а.
321740
Составитель Н. Лн1ипова
Редактор Л. Новожилова
Техред Л. Евдонов
Заказ 117/8 Изд. 11з 1759 Тираж 473 По писное
ЦНИИП14 Комитета по дела.;; изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4 5
Типографии, ьр. Сапунова, 2
Корректоры: О. Зайцева и Е. Михеева