Способ определения серотонина в биологических жидкостях
Патент 331312
Классы МПК
Способ определения серотонина в биологических жидкостях
Иллюстрации
Реферат
4 т .-.ъ.. >p ю?т
0пНСАННЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
33l3l2
Союз Советских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства №
Заявлено 21.! 1/.1970 (№ 1428560/31-16) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано 07.111.1972. Бюллетень № 9
Дата опубликования описания 17.IV.1972
М. Кл. G 01п 33/16
Комитет по делам изобретений и открытий ори Совете Министров
СССР
УДК 616-008.84(088.8)
612. 129 (088.8) Авторы изобретения
Ю. А. И. Плюшкис и Б. К. Тваска
Заявитель
Научно-исследовательский институт экспериментальной и клинической медицины
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СЕРОТОНИНА
В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ
Изобретение относится к биохимии и касается способа определения серотонина в биологических жидкостях.
Известны способы определения серотонина в биологических жидкостях, например, в плазме, путем перевода его в органическую фазу из тканевого гомогената, промывания, перевода в водную фазу и спектрофлуориметрирования. Эти способы, однако, недостаточно чувствительны и не исключают ошибок определения.
Целью изобретения является увеличение чувствительности и точности метода. Это достигается тем, что серотонин из тканевого гомогената непосредственно переводят в органическую фазу, а в качестве органического растворителя применяют гептиловый спирт.
Для выполнения анализа в центрифужную пробирку с 0,5 мл 3%-ного раствора трилона берут из локтевой вены 5 мл крови и осторожно перемешивают. Для подсчета тромбоцитов крови в лейкоцитарный меланжер набирают кровь до метки 0,5 и до метки 11 3 /с-ный раствор солянокислого кокаина. Кровь центрифугируют при 45 g и 0 — 5 С в течение 5 мин, 2 мл надосадочной плазмы с тромбоцитами переносят в другую пробирку, из которой аналогично забирают плазму в меланжер для подсчета тромбоцитов. Подсчет проводят через
1 — 3 час после взятия крови или плазмы.
Прп определетши серотонина в тромбоцптах отделенную плазму центрифугируют при
1600 g и 0 — 5 С в течение 20 лгин и сливают надосадочную плазму в другую пробирку.
Осадок тромбоцитов (или 2 мл плазмы в случае определения серотонина в плазме) быстро охлаждают до минус 40 С, оставляют на 3—
6 дней и оттаивают. Процедуру замораживания и оттаивания повторяют еще раз, после чего к 2 мл плазмы пли к осадку тромбоцитов добавляют бпдистиллпрованную воду до 4 мл, перемешивают и прибавляют 4 мл боратного буферного раствора (рН 10,0). Смесь насыщают поваренной солью и добавляют 12 лгл гептилового спирта. После перемешивания в течение 10 мин пробирки центрпфугируют прп
1600 g в течение 10 мин, 10 .ил орган ..ческой фазы переносят в другую пробирку с 1,2 мл
О,1 н. соляной кислоты, встряхивают 5 мин и центрифугируют при 36 g в течение 10 мин.
В кювету с 1 м г 6 н. соляной кислоты добавляют 1,0 мл водной фазы. Флуориметрпрование проводят при максимуме спектра возбуждения 295 ммк и сканнировании спектра флуоресценции (максимум при 540 It1tK) на флуоресцентном спектрофотометре. Одновременно анализу подвергают 0,5 мнг серотонпна, 4 мл бидистиллированной воды и I мл надосадочной плазмы без тромбоцитов с добавлением
30 0,5 миг серотонина в качестве внутреннего
331312
Предмет изобретения
Составитель В, Таратута
Техред 3, Тараненко
Корректор E. Исакова
Редактор Д. Пинчук
Заказ 919/11 Изд. № 342 Тираж 448 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров ССС1
Москва, 7К-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 стандарта. Неспецифическую флуоресценцию реактивов вычитают. Для внесения добавочной поправки на неспецифическую флуоресценцию в кювету с исследуемым раствором добавляют каплю концентрированной перекиси водорода и после смешения смесь повторно сканнируют. Измерение интенсивности флуоресценции плазмы без тромбоцитов и внутреннего стандарта позволяет определить содержание серотонина в исследуемой плазме или осадке тромбоцитов. При подсчете тромбоцитов в крови и плазме можно полученный результат пересчитать на концентрацию.
Способ определения серотонина в биологических жидкостях, например, в плазме, путем перевода его в органическую фазу из тканевого гомогената, промывания, перевода в водную фазу и спектрофлуориметрирования, отлича ощийся тем, что, с целью увеличения чувствительности и точности метода, серотонин из тканевого гомогената непосредственно переводят в органическую фазу, а в качестве органического растворителя применяют гептиловый спирт.