Способ определения соотношения живых и мертвых клеток микроорганизмов

Способ определения соотношения живых и мертвых клеток микроорганизмов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

СП ИКАНИЕ 351892

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Соеетсиих

Социалистических

Респуолин

Зависимое от авт. свидетельства №

Заявлено 16.Х1.1970 (№ 1492884/28-13) M. Кл. С 12k 1/64 с присоединением заявки №

Комитет оо аелам изобретений и открытий ори Совете Министров

СССР

Приоритет

Опубликовано 21 1Х.1972. Бюллетень ¹ 28

Дата опубликования описания 2.II.1973

УДК 663.11:576.8.93,.1 (688.8) Авторы изобретения С. К. Манешии, А. А. Аревшатяи, Ж. К. Лория и H. К. Манешин

Заявитель Всесоюзный научно-исследовательский институт биосинтеза белковых веществ

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СООТНОШЕНИЯ ЖИВЫХ

И МЕРТВЫХ КЛЕТОК МИКРООРГАНИЗМОВ

Изобретение относится к микробиологической промышленности, точнее к способам определения соотношения живых и мертвых клеток микроорганизмов.

Известен способ определения соотношения живых и мертвых клеток микроорганизмов облучением светом, вызывающим флуоресценцию клеток.

Предлагаемый способ является более простым и дает возможность непрерывного измерения соотношения живых и мертвых клеток.

С этой целью облучают непосредственно культуральную среду при 400 †4 нм, а затем регистрирую г собственную флуоресценцию окисленной и восстановленной форм пор фиринов, содержащихся в исследуемых клетках микроорганизмов с последующим определением по интенсивности облучения количества живых и мертвых клеток.

Предлагаемый способ заключается в следующем.

Систему микроорганизмов в виде суспензии, например взятой из ферментера, или в прессованном виде, или в виде разведенных в воде при различной концентрации микроорганизмов, а также микроорганизмов выращенных на плотных агаризованных средах помещают в кювету или между двумя покровными стеклами и облучают светом в области

400 — 420 нм и измеряют интенсивность флуоресценции микроорганизмов в области 630

5 и 580 нлт. Затем определяют соотношение живых и мертвых клеток микроорганизмов по отношению интенсивностей флуоресценции в этих областях.

Пр и мер. 4 зы суспензии дрожжей Candi10 da, выращенных на углеводородах с концентрацией 60 г!л, без дополнительной обработки помещают в квадратную кювету. Одну из стенок кюветы, расположенную под углом 45 к направлению возбуждающего излучения, 15 облучают светом длиной волны 404,7 ни. Разложение флуоресце;щпи клеток дрожжей в спектр проводят с помощью монохроматора

ЗМР, интенсивность флуоресценции дрожжевых клеток в области 630 íя и 580 нлт реги20 стрируют на потенциометре КСП-4. По отношению интенсивностей флуоресценции в области 630 нм и в области 580 нл определяют отношение количества живых и мертвых клеток, содержащихся в суспензии.

25 Из таблицы видно, что расхождение между измерениями предлагаемого способа и конт. ролем не превышают +1,5%.

3о1892

Соотношение живых и мертвых клеток в сусиензии дрожжей, выращенных на углеводородах

Контрольный метод

Предлагаемый метод

Отклонение пре.слагаемогоого метода от контрольного, OO интенсивность флуоресценции, 630 нл (жи.вые), отн. ед, интенсивность флуоресценции, 580 нл (а1ертвые), отн. ед.

Концентрация; отношеотношеживые клетки, мертвые клетки, ние ние

И

8 и г/л ж/м

06 г0

0,59

0,01

5,3

16 3

5,25

84 6

0,095 0,01

7,3

7,33

12 3

88 7

5,65

5,5

15+3

85 5

9,0

9,0

10 = 2

90 10

6,7

6,8

150

87 6

4,83

4,9

83 7

17 3

400

Без разведения

Прессованные

С разведением

0,52

+ 0,001

0,15 - 0,001

3,47

3,55

78 8 22*5

Составитель М. Ларина

Текред Л. Евдонов

Редактор Г. Ивченкова

Корректоры: Л. Чуркина и Н. Прокуратова

Заказ 73 8 - Изд. Уо 1334 Тираж 406 Подписное

ЦНИИПИ Коз итста по дела:l изобретений и открытий при Совстс Мипнстров СССР

Москва,,1К-35, Раушская паб., д. 4М

Типография, пр. Сапунова, 2

Способ обеспечивает контроль состояния микробиологической системы, содержащей от

1,0 г/л до прессоьанного состояния с точностью 2с е, что в четыре раза превышает точность определения известным ранее способом.

Кроме того, предлагаемый способ дает возможность вести контроль состояния микробиологической системы непрерывно и автоматизированно.

Предмет изобретения

Способ определения соотношения живых и мертвых клеток микроорганизмов путем облучения светом, вызывающим флуоресценцию клеток, огличаюцнйся тем, что, с целью упрощения процесса и повышения точности определения, облучению подвергают непосред5 ственно культуральную среду в области длин волн преимущественно равных 400 — 420 нл, а затем регистрируют собственную флуоресценцию окисленной и восстановленной форм порфиринов, содержащихся в исследуемых

10 клетках микроорганизмов, с последующим определением по интенсивности облучения количества живых и мертвых клеток.