Способ определения антител
Иллюстрации
Реферат
357984
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕН ИЯ
К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
Союз Советских
Социалистических
Республик
Зависимое от авт. свидетельства №
Заявлено ЗО.XI.1970 (№ 1602515/31-16) с присоединением заявки №
Приоритет
Опубликовано ОЗ.XI.1972. Бюллетень № 34
Дата опубликования описания 26.XII.1972
М. Кл. А 61k 23/00 комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров
СССР
УДК 576.8,097.5(088.8) Автор изобретения
Л. В. Воробьев
Заявитель
СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ
Изобретение опносится,к медицине, а, имен но к иммунологическим методам .исследования, Известен способ определения а нтител путем HGIIQJlbçoâà íèÿ одного из вариантов Бепрямого метода люминесцентной ми кроско,пии, согласно которому фиксированный в маз ке корну скуля рный а нтиген о|брабатывают испытуемыми антителами, а затем флуоресцирующей антиглобулиновой сывороткой. Известный способ не обеспечивает чувствительности реакции при облучении акриламид ного геля ультрафиолетовым светом.
Цель изобретения — увеличение чувствительности реакции и определение антител как к кор пускулярным, TBIK и,к растворимым анти генам — достигается тем, что специфический антигон метят флуорохромом, комплекс антитело-меченый антитен отделяют от свободного меченого антигена диск-электрофорезом в акриламидном геле .и .результат учитывают по HIHTBHcHBности свечения свободного и связанного а нтигена.
Пример. Для испытания чувспвнтель ности и слользуют традиционный объект иммуноло гии — алыбумин человеческой сыворотки. Окрашенный известным спосо бом альбумин фильтруют через .колонку с сефадексом, предварительно уравновешенную электродным буфером. Одновременно с,освобождением альбуии на от избытка флуорохрома (флуоресцеина изотиоцианата натрия) происходит замена физраствора электродным буфером. Элюат собирают в отдельные про5 бирки порциями по 1 — 1,5 мл. Наиболее ярко окрашенную |порцию элюата обозначают, |как раствор меченого альбумина. С одержание белка в расвворе, о пределяемое,по Лоури, соста.вляег 4 — 5 мгlмл.
Приготовляют столбики 7о о -.ного акриламидного геля, и спользуя для мелкопори сгого геля трис- буфер с рН 7,5, а для крупно пористого геля трис-буфер с рН 5,5. В ка15 честве электродного буфера используют трис-,вероналовый |буфер с рН 7,0. Приготовив гели и раствор меченого альбумина, ттристу пают к определению его рабочей дозы.
Для этого приготовляют последовательные
20 разделения меченого альбумина. 0,05 или
0,1 мл каждого разведения на носят на столбики геля и проводят электрофорез. После окончания электрофореза гели просматривают в ультрафиолетовом свете и отмечают
25 последнее разведение антигена, дающее четкую .светящуюся полосу в нижней части геля.
Это разведение, принимают за рабочую дозу меченого антигена.
Приготавливают последовательные разве30 дения изучаемой сыворотки. Смешивают
0,05 мл каждого разведения сьпворотки с ра357984
Предмет изобретения
Составитель T. Головина
Техред T. Ускова
Корректоры: А, Степанова и Н. Прокуратова
Редактор Г. Ивчинкова
Заказ 4112/4 Изд. № 1715 Тираж 406 Подписное
ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР
Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5
Типография, пр. Сапунова, 2 бочей дозой меченого альбумина. По 0,1—
0,15 мл смеси наносят на гели и лроводят электроф,орез.
При,наличии в сыворотке а нтител они соединяются с меченым антигеном. Ком плеыс антитела-меченый антиген в силу своей большой величины и маленького заряда о стается в верхней части геля, а. свободный меченый антиген быстро перемещает ся в нижнюю ч алость геля.
После окончания фореза тели просматри:вают .в ультрафиолетовом свете и отмечают последний гель, тде светящаяся полоса находится в верхней части. Это и будет наибольапее, разведение сыворотки, связывающее рабочую дозу;меченого а нти гена, т. е. ее т1нтр.
С пособ определения антител путем взаимодействия со специфическим .ант игеном с ino5 следующим просмотром препарата в ультрафиолетовых лучах, отличающийся тем, что, с целью увеличения чувствительности и возможно1сти применения,метода для определе= ния антител;как к корпуокулярным, так и
10 растворимым антигенам, специфический а нтиген метят флуорохромом, юм плекс а нтителомеченый антигерои отделяют от свободного м аченого антигена диск — электрофореаом в акриламидном геле и результат учитывают
15 по интенсивности свечения свободного и: связанного антигена.