Спосов получения антибиотика группы аксеномицинов

Спосов получения антибиотика группы аксеномицинов

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

ф = ° тт@., ь! т;, °:,",:.: -1 ; ..Ф.;.

ОП И САНИ Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

- К и АТЕН ТУ

37799l

Союз Советских!

Социалистических

Республик

Зависимый от патента ¹

М. Кл. А 61k 21/ОО

Заявлено 29ЛЧ.1971 (№ 1646887/31-16)

Приоритет 04Х.1970, № 24144, А/70, Италия

Опубликовано 17.IV.1973. Бюллетень М 18

Комитет по делам изобретений и откомтий при Совете Министров

СССР

УДК 615.779:931 (038;8) Дата опубликованйя описания 2.Х.1973

Авторы изобретения

Иностранцы

Эрнесто:Котта, Пьера Джулита и Аврора Санфилиппо (Италия) Иностранная фирма

«Сочиета Фармасьютикал> (Италия) Заявитель

СПОСОВ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИБИОТИКА ГРУППЫ

АКСЕНОМИ ЦИ НОВ

Известен способ получения антибиотиков аксеномицина А и аксеномицина В, заключающийся в том, что культуру Streptornyces

lisand F. 1. 2604 выращивают в аэробных условиях на среде, содер>кащей источники углерода, азота и минеральные соли, в течение

60 — 160 час при температуре 23 — 37 С и при рН среды 6,0 — 9,0. Комплекс аксеномицинов

Л и В выделяют экстракцией с последующим его разделением на аксеномицин Л и аксеномицин В.

Целью предло>кенного . изобретения является получение аксеномицина Д, который отличается от аксеномицина Л и аксеномицина B по физико-химическим свойствам.

По предлагаемому способу культивирование продуцента осуществляют при интенсивности аэрации 0,7 — 2,0 л воздуха на 1 л среды в минуту и при интенсивности перемешивапия, соответствующей расходу энергии

2 — 4 вт на 1 л среды, а источник углерода в среде составляет не менее 10%.

П р и ме р 1. Колбу емкостью 2000 лтл, содержащую посевную среду, стерилизуют при

120 С в течение 20 мин. Среда имеет следующий состав (/о): декстрин — 4, карбонат кальция вЂ,5, кукурузное сырье вЂ,0,,казеин — 1,0, сульфат аммония — 0,2, дикалийфосфат — 0,01, вода — до 100, Колбу инокулируют суспензией спор, смытых с 4 косяков 15-дневной культуры, выращенной на картофельно-глюкозо-агаровой среде.

Культуру инкубируют при 28 С в течение

48 час на круговои качалке при 120 об/мин.

50 лтл суспензии этой культуры используют для пнокулпрования стеклянного фериентера емкостью 5 л, содержащего 3 л среды, имеющей описанный выше состав. Содержимое

1о ферментера перемешивают со скоростью

500 об/мин двумя турбинно-дисковыми пропеллерными мешалками с режущими крыльями и продувают воздух со скоростью 0,7 л/л среды в минуту. Процесс ведут в течение

15 24 — 28 час при температуре 27 — 28 С.

Затем полученной суспензией инокулируют стеклянный ферментер емкостью 5 л, содержащий 3 л питательной среды, которая имеет следующий состав (с/с ): глюкоза — 10 — 12, соевая мука — 3, кукурузное сырье — 2,0, карбонат кальция — 1,0, хлористый натрий — 0,25, соевое масло — 0,5, вода — до 100. Количество вносимой суспензии составляет 5 /о от объема питательной среды.

25 Ферментацию проводят в течение 136 час при постоянном перемешивании со скоростью

500 об/лтин двумя турбинно-дисковыми пропеллериыми мешалками с шестью режущими плоскостями, продувку воздухом ведут со

30 скоростью 1 л/л среды в минуту. После окон377991

Концентрация глюкозы, %

Аксеномицнн Д, т/мл

1350

2050

Концентрация

KH PO„%

Аксеномицнн Д, 7/л4л

0,005

0,01

0,05

1005

Скорость перемешнвання, Об/Л4иН

Подача воздуха, л/л в минуту

Аксеномицнн

Д 1/л4л

650

4100

1,0

1,7

1,0

1,7

Выздоровевших животных, %

Доза, л4г/кг

2,5

5,0

65 чания ферментации получают следующие результаты:

Пример 2. Ферментацию проводят в условиях, описанных в примере 1, в ферментере емкостью 5 л, используя среду, содержащую

12% глюкозы, с добавлением различного количества КНзРО4.

При этом получают следующие результаты:

Пример 3. Ферментацию проводят в ферментере емкостью 5 л, используя среду, содержащую 12% глюкозы, в условиях, описанных в примере 1, при перемешивании со скоростью 500 — 650 об/мин, скорости подачи воздуха от 1 до 1,7 л/л среды в минуту и получают следующие результаты:

Пример 4. В стальной ферментер емкостью 80 л, содержащий 50 л среды, имеющей состав, описанный в примере 1, вносят 500 мл суспензии культуры, выращенной в колбе емкостью 2000 мл в условиях примера 1.

Инкубацию проводят в течение 24 час при перемешивании и аэрации. Затем полученной суспензией засевают ферментер из нержавеющей стали емкостью 500 л, в котором находится 300 л питательной среды, имеющей следующий состав, %: глюкоза — 13,0, соевая мука — 3,0, кукурузное сырье — 2,5, карбонат кальция — 1,2, хлористый натрий — 0,25, соевое масло — 0,6, вода до 100.

После 136 час инкубации при 28 С при перемешивании двумя турбинно-дисковыми пропеллерными мешалками, имеющими восемь режущих плоскостей (поглощаемая мощность

2,5 вт/л) при интенсивности аэрации 0,7 л/л в минуту и противодавлении 1 атм активность

4 культуральной жидкости составляет 3050у/мл.

Мицелий, собранный при фильтровании

14 л культуральной жидкости, экстрагируют двумя порциями бутанола по 4 л. Экстракты объединяют и концентрируют до объема

300 мл. Осадок, полученный после центрифугирования, промывают этиловым эфиром и сушат в вакууме, Полученный таким образом продукт растворяют в метаноле, фильтруют, пропускают через колонку с кремниевой кислотой и элюируют сор бированный целевой продукт смесью этилацетат: метанол: вода (125:25: 17). В процессе элюирования наличие целевого продукта контролируют методом тонкослойной хроматографии.

Первые фракции (около 2 л элюата) отбрасывают. Последующие фракции содержат аксеномицин Д, который выделяют после отгонки растворителя в вакууме. После кристаллизации из смеси метанол — изопропанол получают 7 г целевого продукта.

Аксеномицин Д растворим в спиртах, нерастворим в воде и бензоле, плавится при 174—

175 С с разложением, (сс)" D=+11 (с=0,5 метанол); Rf =0,35 над силикагелем (этилацетат: изопропанол: вода 100: 35: 5).

УФ-спектр аксеномици на Д имеет максимумы при 250, 255 и 330 mp и плечо при 265—

268 mp. Е" 1 см 138 (255 гпц).

Инфракрасный спектр имеет следующие частоты: 3400, 2980, 2950, 2890, 1735, 1705, 1675, 1630, 1610, 1465, 1385, 1355, 1290, 1265, 1195, 1170, 1115, 1080, 1050, 1005, 995, 975, 945, 925, 896, 865, 810, 700 см .

Состав по данным анализа, %: 60,25 С, 7,92

Н, 30,35 О.

Аксеномицин Д обладает высокой антигельминтной и противогрибковой активностью и активностью, против простейших.

Антигельминтную активность проверяют на группах мышей (численность каждой группы

10 штук), экспериментально зараженных

Hymenolepis папа. Аксеномицин Д вводят перорально между 12 и 20 днем после заражения (результаты эксперимента приведены ниже) .

Острая токсичность аксеномицина Д, выраженная через ?.Рзо, для мышей составляет

200 мг/кг при пероральном введении.

Предмет изобретения

1. Способ получения антибиотика группы аксеномицинов путем аэробного выращивания культуры Streptomyces lisandri 1. М. 1(. U 3935 (Streptomyces lisandri F. 1. 2604) на жидкой питательной среде, содержащей источники азота, углерода и минеральные соли, в тече377991

Составитель С. Щенева

Техред 3. Тараненко Корректоры; Н. Прокуратовй н Т. Гревцова

Редактор К. Шанаурова

Заказ 2641/5 Изд. № 1677 Тираж 467 Подписное

ЦИИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, K-35, Раушская наб., д. 4/6

Типография, пр. Сапунова, 2 о ние 60 — 160 час при температуре 23 — 37 С и при рН среды 6,0 — 9,0 с последующим выделением целевого продукта обычными приемами, отличающийся тем, что, с целью получения аксеномицина Д, культивирование осуществляют прп интенсивности аэрации 07—

2,0 л воздуха на 1 л среды в минуту и при интенсивности перемешивания, соответствующей расходу энергии 2 — 4 вт на 1 л среды.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что

5 источник углерода в среде составляет не менее 10