Патент ссср 378409

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

3784О9

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Загисимое от авт. свидетельства №вЂ”

Заявлено 16.Х.1969 (№ 1370733/30-15) с присоединением заявки №вЂ”

Приоритет =

Опубликовано 18 1Ч.1973. Бюллетень ¹ 19

Дата опубликования описания 18Х1.1973

М. Кл. C 12d 9/00

Комитет по делам изобретений и сткрыти пои Совете Министров

СССо

" 1 К 615.779.9:576. .852.1 (088.8) Авторы изобретения

Г. С. Муромцев, Е, П. Давыдова и М, М. Клягина

Всесоюзный научно-исследовательский институт фитопатологии

Заявитель

LJTAMM-МУТАНТ Actinomyces streptomycini № 66 — 463 (ВНИИФ) — ПРОДУЦЕНТ ЦИКЛОГЕКСИМИДА

Таблица 1

С бульоном

Хоттингера и глюкозой

Бледно-желто-зеленого пергаментного цвета (l св)

Г)а ево-желтый (2 da) Обильный, палевый, зеленоватожелтый (2 ва) Палевый, зеленоСоевая вато-желтый

12 дв

Предложенный штамм-мутант Act. streptornycini № 66 — 463 — продуцент циклогексимида, получен из штамма Act. streptomycini ¹ 66 в результате многоступенчатого отбора при естественном рассеве и последующей обработки зтнленимином и УФ-лучами. Исходный для селекции штамм синтезировал 100 — 200 мг/л цнклогекспмида; штамм-мутант образует

900/ 1200 мг/л.

Антибиотик циклогексимид (актидион, нара мицин) /з(2 (3,5 диметил-2 оксициклогексил)2 оксиэтил) глютаремид — С 5Н2з04 применяется как фунгицид для борьбы с возбудителямй многих грибных заболеваний растений. Крдме того, OH применяется как рейеллент против грызунов, как ингибитор синтеза белка, а также испытывается как противоопухолевой антибиотик (Suginra a. о., 1958).

По таксономическим признакам штамм

Act. streptomycini № 66 — 463 близок к штаммам Str. griseus, которые применяются в США (Whiffen, 1948) и Венгрии (Uoros, 1966) для получения циклогексимида, но отличается от них культуральными признаками — окраской воздушного мицелия, цветом выделяемого в среду пигмента, способностью к потреблению различных источников углеродного питания.

По морфологическим признакам штамммутант Act. streptomgcNi № 66 — 463 не отличается от исходного для селекции штамма

¹ 66. При выращи ванин на агарнзованных питательных средах штамм образует разветвленный воздушный мицелий. Спороносцы прямые, собраны в пучки. Споры круглые и

5 овальные.

Различия между штаммами наблюдаются в способности к биосинтезу циклогексимида, а также по некоторым культуральным признакам и способности к потреблению различных

1С источников углеродного питания.

Для описания культур альных признаков штаммы выращивают на тех средах, на которых более четко проявляются различия. Для оценки цвета воздушного мицелия используют

15 шкалу Pranser а. Различные индексы одного и тогo же цвета указывают на различия в оттенках и интенсивности окрашивания (cM. табл, 17

Штамм

Агаризова иная

cpeaa I исходный (№ 66) I мутант 1Чв 463

378409

Пзлево-желтый (2 Ва)

Палево-желтый (1 ва)

Палево-желтый (2 ds) Пшеничная

Картофельная

Палево-желтый (2 ва)

Палево-желтый (2 ва)

Палево-желтый (2 ва) Палево-желтый (2 ва)

Палево-желтый (2 ва)

Палево-желтый (1 ва)

Палево-желтый (1 ва)

Палево-желтый (1 ва)

Палево-желтый (1 ва)

Палево-желтый (2 ва) Палево-желтый (2 ds)

Палево-желтый (I ва)

Палево-желтый (2 (1в)

Палево-желтый (2 da)

Палево-желтый (2 4в)

Палево-желтый (2 dn)

Палево-желтый (2 ds) Таблица 2 Араби- МальтоЛактоза ноза

i Сахароза

Штамм

Глюкоза Галактоза Маннит

Крахмал

+- ++ !

+ ++ I —,+

Исходный (¹ 66)

Мутант (№ 463) ++ -!+++

++ —;-+

Условные обозначения

+ — Слабый рост; ++ — хороши"; +++ — очень обильиьш рост.

Штамм

Агаризованная

cPe-" исходный (¹ 66) мутант Я 463

Среда с бульоном

Хоттингера и сахарозой

Среда Чапека

С ГЛЮКОЗОЙ

Среда Чапека с галактозой

Среда Чапека с лактозОЙ

Среда Чапека с сахарозой

Среда Чапека с глицерином

Среда Чзпека с мзннитом

Среда Чапека с арабинозой

Штамм № 66 — 463 следует выращивать на голодном агаре (20 г агар-агара; 1. л воды; рН 7,0), а хранить на двух средах: водном агаре и картофельной среде (200 г картофеля, 1 л воды, 20 г агар-агара; рН=7,0).

Для накопления циклогексимида культуру следует выращивать в ферментационной среде, в состав которой входят 5 мл кукурузного экстракта, 80 г глюкозы; 5 г (NH4)gSO4, 5 г

СаСОз, 1 л воды; рН 7,0 — 7,2. В качестве посевной используется среда с соевой мукой и глюкозой (10 г соевой муки; 10 г глюкозы;

5 г мела, 1 л воды; рН 7,0 — 7,2). Максимальное количество циклогексимида при глубинном выращивании культур в пробирках на ротационной качалке (220 †2 об/мин) образуется на шестые — восьмые сутки ферментации (в ферментерах типа chemap — на шестые сутки).

При хранении штамма-мутанта в течение двух лет его активность не снизилась.

Предложенный штамм-мутант позволяет увеличить концентрацию циклогексимида в культуральной жидкости в 5 †раз (по сравнению с исходной культурой).

Предмет изооретения

Штамм-мутант — Actinomyces streptomyИз приведенных данных видно, что штамммутант отличается от исходного штамма окраской воздушного мицелия па всех перечисленных выше средах. Различия наблюдаются и в цвете пигмента, выделяемого в среду. При выращивании на среде с бульоном Хоттингера и глюкозой штамм № 66 выделяет в среду желтый пигмент, а № 66 — 463 — желто-бурый; на соевой среде штамм № бб выделяет светлобурый пигмент, а штамм № 66 463 буроватозеленый.

Штамм-мутант № бб — 463 отличается от исходного штамма и по способности потреблять различные источники углеродного питания. Штамм № 66 — 463 лучше потребляет галактозу, сахарозу, и арабинозу, но слабее— маннит, крахмал, глицерин, лактозу и арабинозу (см. табл. 2) Штамм-мутант Act. Strep20 tomycini № 66 — 463 зарегистрирован в коллекции чистых культур Всесоюзного научноисследовательского института фитопатологии (под № 66 — 463) .

2Б cini № 66 — 463 (ВНИИФ) — продуцент цпклогексимида.

Морфология. Воздушный мицелий разветвленный, ооильный. Спороносцы прямые, собраны в пучки. Споры круглые и овальные.

В среду выделяет пигмент, цвет которого з зависимости от среды варьирует от желтова. то-зеленоватого до бурого.

Агаризованная среда с бульоном Хоттингера и глюкозой. Колонии палевого, зеленоватожелтого цвета, крупные, приподняты над агаром. Основание колоний светло-коричневого цвета, продуцирует желтый. пигмент.

Жидкая среда с бульоном Хоттингера и глюкозой. На вторые сутки образует желтую

4О пленку беловато-зеленоватого цвета. Продуцирует зеленовато-желтый пигмент.

Антагонистические свойства. Активен in

vitro против многих грибов, в том числе против Cryptococcus neoformans, Saccharomyces

46 cerevisiae, Saccharomyces ellipsoides, Pichia

membranifaciens, Porulaspora fermentati n

Saccharomyces pastorianns.

Биосинтетическая активность. При глубинном культигировании на, среде с глюкозой и сернокислым алюминием образует 900—

1200 л г/ г циклогексимида.