Способ серологического диагностированиябактерий группы bacilius thuringiensisiimfp'isvrrvnp'j^r-i--"-'-ч. :^.f, iiii /ti ,l:!iif'^^*'^oteha12

Способ серологического диагностированиябактерий группы bacilius thuringiensisiimfp'isvrrvnp'j^r-i--"-'-ч. :^.f, iiii /ti ,l:!iif'^^*'^oteha12

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

3784I2

ОП ИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Союз Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от авт. свидетельства ¹â€”

М. Кл .. С 12k 1 04

Заявлено 04Л .1971 (№ 1662012i30-15) с присоединением заявки №вЂ”

Приоритет—

Опубликовано 18ЛЧ.1973, Бюллетень № 19

Дата опубликования описания 18Л 1.1973

Комитет по делам изобретений и открытий при Совете Министров

СССР

УДК 63:576.8(088.8) Авторы изобретения

Е. H. Михайлов, Г. А. Плужников и К. Е. Акоева

Заявитель Среднеазиатский научно-исследовательский институт фитопатологии

СПОСОБ СЕРОД О ГИЧ ЕСКОГО ДИАГНОСТИРОВАНИЯ 1 -:- C - .-. - 1.,—,,,"„;,ä-

БАКТЕРИЙ ГРУППЫ Bacillus thuringiensis

:- :-- -". 1 еМА

Изобретение отнооилгся к области микробиологии и может найти применение при идентификац??и и дифференциальной диапно сти ке энтомопатогенных к ристаллообраз1ующих бакте1рий, используемых при пр омышленном производстве ба1ктерсоальных инсекпицидов.

В настоящее время сероло гическую д|иагностику;ва риететс(в бактерий группы thuringiensis проводят при помощи реа кции флагеллярной а гглют инацги, Основанной на мето1дах, раз1работаиных фра нцузски ми учеными Baipжак и Бонф уа. Эта реакция заключается и воздействии на оу опенз ию исследуемых бактерий агглютини1рующими MQHocbliBopoTIKaми к Н-антигену, каждая из которых имеет специф1??чность к огдельному ва р иетету.

Полу чение моносыво1рото1к производят раздельной имму н изацией ?сроликов многократным и п1рогрессирующими дозами суспензо?й бактерий каж1дотпо ва риетета группы Вас.

thuringiensis и последующ?см п1р1и данием сывороч?к ам сел ект1ивных овойсгв. С елективные свойства сывороткам придают методом насыщения — осаждением общих àíгител бактеРиальной су1спензией других ва1риетето1в. Бакте р1иальные суспензия (суспенз?си Н) штаммов каждого вариетета пол учают обработкой их фо1рмалином, т. е. разрушением осиатических групповых анги генов. Для получения качествениных результатов 1реакции апглютинаци;I необход??мым условием в получении бактериальных суапензий я вл яется предварительное селекцианирование ?сульгу1р по п р изнаку большой мобпльносги в п роблр ках Кредкп.

Однако этим способом диагностики невозможно дифференци1ро1вать все узкие таксономические группы Bacillus thuringiensis по их иммунологической опец иф??чносги в связи с ис??Ользова н?1ем фл агеллВрной моносывоpoTIv?I, полученной под воздейспвием ограниченного состава антигенных факторов: исследо ватели де Баржак и Бонфуа отнесли вариететы Вас.

thuringiensis var dendrolimus и Вас. thurin?e?гз?з var. sotto к одному и тому же четвертому сиротину, а вариететы Вас. thuringiensis

var subtoxicus u Bacillus thuringiensis var

entomocidus — к шесгому серотипу, несмотря

20 на то, что покультурально-.биохимическим п ризнака,м он и огнесены зги ми учеными к самостоятельным вариететам. Кроме тото, этим способом невозможно проводить эксп ресс реакции на п редметном стекле вви1ду образования в популяции бактерий К-форм, приводящих к спонтанной агглютинации. Проведение диагностической реакции связано с большими затратами времени на селекционирование исследуемой культуры по признаку большей моби IbHocT?1.

378412

Предмет изобретения

Составитель М. Дранишников

Техред Т. Миронова Корректор В. Жолудева

Рсдак-.ор T. Шагова

Заказ 338/1075 Изд. М 478 Ти.раж 467 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий прп Совете Мшшстров СССР

Москва. Я-35, Раушская наб., д. 4/5

Тип. Харьк, фил. пред. «Патент»

Цель изобретен ия — дифференциация бактерий по более узким теысономическим признака м.

Это дастигается получением преципити ру1ощих мс носьвво роток к отдельным вариететам

Bacillus thuringiensis. Преципитирующие моносьвво ротки получают удалением гетерологических антител из нативных cbllaolpoTQK кроликов, ги пернммуниз и рова нных а нтигенами бактерий типовых ва риететэв, а а нтигены получают ультразвуковой дезинтипрацией клеток.

Применение в диатности|ке прецяпитирующих моносывороток позволяет использовать реакцию д войной диффузии в геле, благодаря чему результаты становятся известны через

1 — 2 дня и имеют четко выраженные ха рактеристихи, док ументируемые в виде фопопрафий и зарисовок или могут сохраняться в виде постоянного препарата. Применение в .д иагностике метода Оухтерлони, особенно при использовании и м муноэлектрофореза, позволяет получить информацию об антиген ной структуре вариететов исследуемых бактерий, а применение красителей и гистохимичео1сих методов анализа — хиMè÷eoêóþ np Hlpoäó отдельных компонентов антигена.

Используя предлагаемый способ диагностики с помощью преципитирующих моносывороток, удалось подтвердить таксономическую новизну группы диких штаммов H отнести их к новому вариетету asiae — mediae sp.

nova, которые ранее идентифицировались с культурой Bacillus thuringiensis чаг thuring iens is Вег 1 шег.

Способ серологического диагностирования бактерий группы Bacillus thuringiensis, включающий воздействие на их антигены моносыворотками, имеющими специфичность к отдельным вариететам и последующую регист15 рацию результатов, отличающийся тем, что, с целью дифференциации бактерий по более узким таксономическим группам, в качестве моносывороток берут преципитирующие сыворотки, полученные гипериммунизацией лабораторных животных, в частности кроликов, антигенами бактерий типового штамма, с последующим удалением из сыворотки гетерологических антител путем истощения антигенамп других вариететов, а антигены исследуемых бактерий и типовых штаммов готовят посредством выращивания культур обычными приемами с дальнейшим разрушением клеток, например, ультразвуком.