Способ получения вещества, обладающего

Способ получения вещества, обладающего

Иллюстрации

Показать все

Реферат

 

390699

О П И С

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советских

Социалистических

Республик

К ПАТЕНТУ

Зависимый от патента №

М. Кл. А 61k 25/00

Заявлено 23ЛХ.1966 (№. 1102799/31-16) Приоритет 07. I I I.1966, № 6129, Народная Республика Болгария

Государственный комитет

Совета Министров СССР по делам изобретений и открытий

УДК 615.771.7(088.8) Опубликовано 11Х1!.1973. Бюллетень № 30

Дата опубликования описания 29.XL1973

Автор изобретения

Иностранец

Богданов Иван Георгиев (Народная Республика Болгария) Иностранная фирма

«Тексим Энтрепрайз Экономик д«Эта» (Народная Республика Болгария) Заявитель

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ВЕЩЕСТВА, ОБЛАДАЮЩЕГО

ПРОТИ ВОО ПУХОЛ ЕВОЙ АКТИ В НО СТЬЮ

Изобретение относится к области медицины, а именно к способам получения противоопухолевых препаратов.

Известен способ получения вещества, обладающего противоопухолевой активностью, например антибиотика аураитина, заключающийся в том, что культуру продуцеита, выращенную на средах, содержащих питательные экстракты, экстрагируют органическим растворителем с дальнейшим выделением из экстракта целевого продукта.

В качестве продуцента противоопухолевого препарата предлагают использовать один из штаммов культуры рода Lactobacillus, а именно Lactobacillus bulgaricus var. tumoronuroticans 1  — 51 № 93 или № 100, Lactobacillus

helveticus var. tumoronecroticans № 31 или Lactobacillus acidophilius var. tumoronecroticans № 43, который выращивают в аиаэробных условиях на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли в течение 18 — 24 час при температуре

28 — 50 С, цельные или разрушенные клетки экстрагируют водой или фенолом, а целевой продукт выделяют из экстрактов либо осаждением минеральной или органической кислотой при рН 1,5 — 4,0, либо высаливанием, либо осаждением посредством органических растворителей, смешивающихся с водой.

Пример 1. Культурой Lactobacillus bulgaricus var. tumoronecroticans I  — 51 засевают

200 мл,питательной среды, содер>кащей (%) соевого эKcTipaKTB — 3, пвптона — 5, мясного эк5 стракта — 0,5, дрожжевого экстракта — 0,5; сахарозы — 0,5 и сульфата магния — 0,1. Культивирование производится при температуре 37 С в течение 24 час, рН культуральной жидкости доводят до 6,5 и затем цеитрпфугируют при

10 5000 об/мин в течение 30 мин.

Мышам с хорошо развитой саркомой 180, имплантированной подкожным путем, вводят внутривенно 0,5 мл надосадочной жидкости.

Ни у одной из 20 подопытных мышей ие обра15 зовалось некроза опухоли. Осадок бактериальиых IKJIcTQIK измельчают в сту пе с кварцевым,песком и экстрагируют посредством

100 мл дистиллироваииои воды. Смесь центрифугируют при 5000 д и надосадочиую жид20 кость дозой 0,5 мл вводят внутривенно мышам с caplKQMQII 180. Через 24 час некроз опухоли обнаружили у 17 из 20 мышей, а через 10 дней

8 животных были излечены.

Пример 2. 3000 мл надосадочной жидкос

25 ти, полученной после гомогенизации разбавленных водой бактериальных клеток, приливают к 6000 мл 96%-ного раствора этанола.

Смесь выдерживают в течение 2 час при 4 С, затем центрифугируют.

390699

Предмет изобретения

Составитель С. Щеиева

Редактор К. Шаиаурова Техред Л. Грачева Корректор А, Васильева

Заказ 3060/14 Изд. № 1753 Тираж 467 11одппспос

Ц11ИИПИ Государствсипого ко.. итста Совета Министров СССР по делам изобретеиий и открытий

Москва, )K-35, Раушская паб., д. 4/5

Типография, пр. Сапунова, 2

Надосадочпую жидкость огделшот и осадок растворяют в 600 л1л воды,,затем центрифутпруют для удаления нерастворимых остатко», 200 л1л раствора Ilо7кисляют соляной ктчслотой, Qciao+5IT,рН Jo 2. Осадок QT7c 75110T ueIITрифугированием, промывают этаполом и высушивают. Получают 9,4 г сухol о вещества, П р и.м е р 3. 200 л1л чистого раствора, полученного после обраоотки бактериальных клеток способом, описанным в примере 2, смешивают с сульфатом аммоги1я до 0,4 насыще шя и ставят па 2 час в холоди 1»IIII прп 4 С.

Смесь цептрифугпруют. Надосадочпую жидкость удаляют, осадок растворяют в воде и доводят рН до 7. Раствор диализируют через целлофан в проточной воде в течение 18 час.

Диализованную жидкость центрифугируют, чтобы отделить небольшой нерастворившийся остаток, затем лиофилизируют. Получаю"

7,4 г сухого вещества.

Пример 4. К 1000 мл надосадочной >кидкости, полученной после гомогенизации разбавленных водой бактериальных клеток, приливают 10 мл 20%-ного раствора хлористого кальция. Осадок центрифугируют и растворяют в

100 мл дистиллированной воды. К этой суспензии добавляют 3 г амоерлита. После сильного взбалтывания смесь центрифугиру ют и надосадочную жидкость лиофилизируют. Получают 1,8 г сухого вещества.

Пример 5. 500 лл надосадочной жидкости, полученной после гомогенизации разбавленных водой бактериальпых клеток, смешивают с 500 лл 90%-ного фенола. Смесь сильно взбалтывают в течение 1 час при 4 С и центрифугируют при 5000 об!л1ин в течение 30 л1ин.

Водную и фенольную фазы отделяют. Водную фазу подкисляют соляной кислотой, доводя рН до 2. Осадок отделяют центрифугирование;1, затем промывают этанолом и ацетоном и высуш и в ают.

К фенольной фазе добавляют ацетат натрия до 1%-ной концентрации, после чего добавляют четыре объема этанола. Осадок цептрифугируют, промывают этаполом и ацетоном, затем высушивают.

П р имер 6. 100 г вла>кпых бактсрпаaün»1. клеток, промытых 50 объемами физиологического раствора и отцентрифугироваппых, смешивают с 1000 мл све>кедистиллирова иного

90%-ного фенола. Смесь взбалтывают г, тсче5

30 ние 1 час при 10 С и центрифугируют. Слой фенола отделяют, и к 100 мл этого слоя добавляют ацетат натрия (1%) и четыре объема

96%-ного эталона. Полученный осадок центрифугируют, промывают этанолом и ацетоном и высушивают.

П р и м ер 7. 4800 г влажпых нативных бактериальных клеток разбавляют в 2000 мл яичного белка и добавляют солевой раствор, доводя общий объем до 14 000 мл. Суспепзию выдерживают при 37 С в течение 3 час при непрерывном взбалтывании, 13 000 мл этой смеси центрифугируют при

8000 об)л1ин в течение 30 мин. Надосадочную жидкость отделяют. Осадок обезжиривают в три приема смесью в равных объемах спирта и эфира. После выпаривания получают сухое вещество.

10 г вещества разбавляют 100 мл солевого раствора. Подкислив смесь соляной кислотой до рН 2, добавляют 100 мг пепсина. Смесь выдерживают в течение 4 час при 37 С, постоянно взбалтывая. Затем смесь центрифугируют при 2700 об!мин в течение 15 л1ин. Надосадочную жидкость отделяют. Осадок растворяют в исходном объеме солевого раствора, нейтрализуют от рН 7 и цецтрифугируют при 800 об)чин в течение 30 мин. Осадок промывает спиртом и высушивают. Надосадочную жидкость лиофилизируют.

Способ получения вещества, обладающего противоопухолевой активностью, отличающийся тем, что штамм культуры рода Lactobacillus, а именно, Lactobacillus bulgaricus var, tumoronecroticans 1. — 51 № 93 или № 100, 1 actobacillus helveticus var. tumoronecroticans № 31 или Lactobacillus acidophilius var. tumoronecroticans № 43 выращивают в анаэробных условиях па питательной среде, содержащей источники углерода, азота и минеральные соли в течение 18 — 24 час при температуре

28 — 50 С, цельные или разрушенные. клетки экстрагируют водой или феполом, а целевой продукт выделяют из экстрактов либо осаждением минеральной или органической кислотой при рН 1,5 — -1,0, либо вь1салпванием, лиоо оса>кденпем посредством органических растворителей, смешива1ощпхся с водой.