Б п т б алчп '>&-,'ю^у'^:''лч1
Патент 404186
Авторы
Классы МПК
Б п т б алчп '>&-,'ю^у'^:''лч1
Иллюстрации
Реферат
ОПИСАНИЕ
ИЗОБРЕТЕНИЯ
Союз Советских
Социалистических
Респу6пик
Зависимый от патента №
М. Кл. A 01k 1/17
1
УД1х 636,085.1(088.8)
Заявлено 13.VI11.1971 (№ 694401/1743977/
30-15)
Приоритет 14.VIII.1970, ¹ 64389, США
Гасударственный комитет
Совета Министров CCGQ па делан иаааретений и открытий
Опубликовано 26.Х.1973. Бюллетень № 43
Дата опубликования описния 8.И1.1974
Автор изобретения
Иностранец
Юлиус Бергер (Соединенные Штаты Америки) Иностранная фирма
«Ф. Хоффмаии-Ля Рош и Ко АГ» (Швейцария) Заявитель
КОРМОВАЯ ДОБАВКА
Изобретение относится к кормовым добавкам, стимулирующим рост животных, в частности домашней птицы.
Известны стимулирующие кормовые добавки, содержащие витамины, антибиотики, аминокислоты, гормонные препараты.
Предлагается кормовая добавка, которая с целью ускорения роста животных, в частности домашней птицы, содержит антибиотик
Х-5108 или его физиологически активные соли.
Антибиотик Х-5108 вырабатывается 5/гер/omyces sp, Х-5108, АТСС 21386.
Streptomyces sp. Х-5108 выделен из образца почвы, отобранного на Бермудских островах.
Культура этого организма получила лабораторный индекс Streptomyces sp. Х-5180, подкультура 3191-2 была выставлена в Американской коллекции типов культур, в Токвилле, штамм Мэримнь, где эта культура была внесена в коллекцию АТСС под регистрационным номером 21386. Виды Streptomyces, идентифицированные как Streptomyces sp.
Х-5108, включают все штаммы Streptomyces, вырабатывающие антибиотик Х-5108 и не могущие быть дифференцированными от штамма
АСС 21386 и его подкультур.
Штамм Streptomyces Х-5108 АТСС 21386 имеет следующие особенности.
Оценка степени рос rа. Культура дает хорошо развитый и разветвленный мице5 лий на субстрате и характерный воздушный мицелий на многих средах. В условиях погружения бактерии развиваются в виде твердых и крупных особей и в зависимости от применяемой питательной среды они могут
10 быть бесцветными, желты., и, желтова"î-коричневыми или оливково-коричневыми. Они представляют собоп коричневато-черные пятна по краям зоны роста на агар-агаре из экстрактов дрожжевого солода.
Воздушный мицелий характеризуется умеренным развитием, имеет бархатистую текстуру и пигментирован в серовато-белый, светлый, умеренно-серый и желтовато-серый цвет
20 с тонкими белыми краями на ранней стадии роста.
Наблюдаются концентрические кольца и образование секторов из колоний сеоого цвета.
25 Сравнение некоторых свойств Sirepiomyces sp.
Х-5108 со свойствами других культур приведено в табл. 1.
404186
Таблица 1!
Streptomyсез Sp.
Griseolutcs
PusPureofus- 1г1б 1ас
cus S.
Aurefаcters 5.
Ап((ЫоЛcus
Spec
Свойство
Риветта и
Петерса
М 11
Пфайзера
15784-1
Ледерле
А-377
Уоксмена
Умезава
Х-5108
Sm
PA
Серый
Х-5108
Серый
Антитрихомонас
Серый
Тетрациклин
Серый
Стрептолин
+
Таблица 2
Растворительпигмент
Характер роста
Воздушный мицелий и/или споры
Среда
Обратный цвет хороший
Воздушный. Мицелий беловатый; спорообразование хорошее; споры белые
Агар-агар Чапека с сахарозой
Светло-желтый
Слабокоричневатый хороший*
Воздушный. Мицелий от сходного с пушинками до порошкообразного, белый, становится при спорообразовании дымчато-серым
Аспарагиндекстроза
0,25 %
Отсутствует
От оранжевого до канареечно-желтого
Воздушный. Мицелий от белого до светло-серого; спорообразование хорошее, споры серые
Агар-агар с пептоном и томатной пастой
Оранжево-темножелтый то же то же
Спорообразование хорошее, споры становятся дымчато-серыми с белыми краями
Агар-агар с крахмалом
Оранжево-желтый
Агар-агар Краинского с глюкозой
Воздушный. Мицелий белый; спорообразование хорошее; споры становятся дымчато-серыми
Лимонно-желтый
Агар-агар „микрофил" (ВБ1) Отсутствие спорообразования
Слаботемный
Светло-желтый
Питательный агар-агар с экстрактом дрожжей
Отсутствие спорообразования
Темный
От сероватого до желтовато-коричневого
Агар-агар с глицерином
Влажный, кремового цвета
Отсутствует от удовлетворительного до хорошего (10 дней) Светло-желтый хороший
Тампон из картофеля
Отсутствие спорообразования
Черный
Тампон из моркови
Отсутствие спорообразования то же ) Рост хороший в течение 8 дней при 24, 28, 32 и 37 С, но не при 42 С.
Рост хороший при применении бульона с триптоном (темный пигмент, отрицательная реакция на индол по прошествии 3 дней); питательного бульона ГДА, бульона Чапека с сахарозой, бульона Краинского с глюкозой и бульона с глицерином и цитратом кальция.
Поверхность спор
Мор ф олог и я
Цвет
Образование меланина
Образование антибиотика
Источник углерода:
Глюкоза о-ксилоза
L-карабиноза
L-рамноза о-фруктоза о-раффиноза о-маннит
L-инозит
Салицин
Галактоза
+
+
+ !
+ не испытали
Sm
PA
Серый
Олеандомицин
Sm
PA
Серый
Хлортетраци клин
Sm
PA
Серый
Гризеолутеин
404186
Таблица 3
Период иикубации
Характер роста
Среда
Бульон с opI аническим нитратом
Умеренный, без спор
Бульон с органическим нитратом
Желатин (15,) при
18 С
Удовлетворительный, темный, растворимый пигмент
Желатин (15%) при
18 С
Рост от удовлетворительного до хорошего; коричневато-черный пигмент, отсутствие спор
Слабое ожижение
Агар-агар с пентоном и железом (Клиглер) Хороший, слабое спорообразование
Лакмусовое молоко
Удовлетворительный поверхностный рост
Удовлетворительный поверхностньш рост; отсутствие спорообразования
Лакмусовое молоко
Хороший; слабое образование белых спор
Яичный агарагар Дорсета
Очень хороший рост; в основном хорошее образование светло-серых спор
Яичный агарагар Дорсета
Таблица 4
П р о д о л >к е н и е
Использование ) Компоненты
Компоненты
Использование" ) d-Рибоза
d-Галактоза
d-Манноза
Целлобиоза
Лактоза
Мальтоза
Декстрин
Дульцит
Эритрит
Сорбит
Глицерин
Сульфат аммония
Нитрат натрия
Нитрит натрия
Ацетамид
Аспарагин
Тирозин
DL-Триптофан
Источник углерода
0 — 1
0 — 1
Источник азота
Крахмал ) 0 — отсутствует, 1 — плохое, 2 — удовлетворительное, 3 — хорошее.
L-Арабиноза
L-Рамноза
d-Ксилоза
d-Маннит
L-Инозит
Глюкоза
Фруктоза
Сахароза
Раффиноза
Ацетат
Цитрат
Малат
Оксалат
Салицилат
Сукцинат
Тартрат
Фенол (0,1%) Хороший, темный пигмент
Физиологическая реакция
Восстановления нитрата нс наблюдается, газов не образуется
Восстановления нитрата ие наблюдается, газов не образуется
Ожнжения желатина ие наблюдается
Хромогенная-образу тся мсланин
Цвет лакмуса не меняется; помутнения или осветления не наблюдается
Светло-коричневатый цвет; отсутствие помутнения или осветления
Небольшое количестьо темного пигмента
404180
М о р ф о л о г и я. Цепи спор, образующиеся на воздушном мицелии, разветвляются моноподиально и симподиально с образованием прямых цепей, петель, крючков, растянутых и имеющих неправильную форму спиралей (3 — 4 витка), также имеющих метлообразное расположение. Цепочки бывают как короткими, так и длинными, но преимущественно они содержат более 10 спор. На большинстве сред наблюдается образование склеропий.
Споры являются удлиненными и имеют овальную форму и цилиндрическую. Поверхность спор гладкая.
Физиология. Растворимый пигм е н т. На агар-агаре с экстрактом дрожжей и экстрактом солода образуются следы коричневого пигмента.
Культура является хромогенной (образует меланин) на агар-агаре с пептоном-железом и тирозином, а также на бульоне с триптономэкстрактом дрожжей. Характеристики культур
Streptomyces sp. Х-5108 (инкубация 14 дней.
Температура 28 С) приведены в табл. 2.
Физиологические реакции Streptomyces sp.
Х-5108 приведены в табл. 3.
Кроме того, для Streptomyces sp. наблюдается хорошее использование 1 -арабинозы, dфруктозы, d-маннита, 1 -рамнозы, d-раффинозы и сахарозы; плохое использование d-ксилозы, L-инозита и полное отсутствие использования целлюлозы.
Характер использования органического азота для Streptomyces sp. (период инкубации
14 дней. Температура 28 C) приведен в табл. 4. Культура хорошо развивается при
24 — 57 С, но не развивается при 42 или 50 С.
Культивирование продуцента Streptomyces
sp. Х-5108 с целью получения желаемого антибиотика Х-5108 осуществляют с применением самых различных способов ферментации, При ферментации в колбах порцию спор, взятую со среза культуры на агар-агаре, инокулируют в 100 мл питательной среды в конической колбе Эрленмейера объемом 500 мл и инкубируют при температуре около 28 С на вращающейся качалке в течение 7 дней. Пробы бульона отбирают на третий, пятый и седьмой день. Аналогично при приготовлении больших порций бульона продукт инокулирования готовят в конических колбах Эрленмейера емкостью 6 л или в пирексовых бутылках объемом 22,2 л, снабженных устройствами для аэрации, отбора проб и т. д. Аэрацию в бутылках и резервуарах создают за счет продувания стерильного воздуха через сбраживаемую среду. При выполнении процесса в резервуарах дополнительное перемешивание осуществляют за счет механических лопастных мешалок. Для контролирования процесса пенообразования употребляют такие антипенообразователи, как свиной лярд, соевое масло и т. д.
Streptomyces sp. Х-5108 может культивироваться в самых различных культуральных жидких средах. Особенно ценными для по5
15 го
3О
65 лучения нового антибиотика являются среды, содержащие источник ассимилируемого углерода, например, крахмал, глюкозу, мелассу и источник ассимилируемого азота, такой как белки, гидролизаты белков, полипептиды, аминокислоты, жидкость, получаемую при обработке початков кукурузы, аммониевые соли, и неорганических катионов и анионов, таких как калий, натрий, кальций, магний, сульфат, фосфат, хлорид и т. д. Микроэлементы, такие как кобальт, медь, железо, молибден, бор поступают в среду в качестве примесей к другим компонентам среды.
Активность антибиотика Х-5108 оценивают при испытаниях его in vitro по зоне ингибирования грамположительной бактерии Bacillus Е обычным методом диффузии в среде агар-агара с чашкой и пластинкой. В другом случае пользуются для испытаний грамположительной бактерией Bacillus simplex. Обе бактерии дают зону ингибирования — 20 мм при использовании раствора с концентрацией ед/мл. При этом методе испытаний культуру испытуемого микроорганизма выращивают в питательном бульоне, например, в бульоне с триптиказой с соей, в течение 24 — 42 час при
28 C на вращающейся качалке (100 мл среды в конической колбе Эрленмейера объемом
500 мл). Концентрация продукта для инокулирования, использовавшегося для инокулирования слоя для посева в 4 мл, составляет
0,25 — 0,5 /о, этот слой наливают на 20 мл уже застывшего питательного слоя агар-агар а в чашке Петри.
Чашки помещают в холодильник по меньшей мере на 2 час до отбора и заполнения их испытуемым раствором, содержащим антибиотик. Затем чашки инкубируют при 35 С в течение 18 час, и диаметры зон ингибирования измеряют с точностью до 0,5 мм. Вычисление числа (ед/мл) производят на основании стандартных кривых.
Для производства антибиотика целесообразно пользоваться сложными азотсодержащими веществами из различных источников, такими, как например, растительные материалы (соевые бобы или хлопковая мука, овсяная мука, твердое вещество томатной пасты, растворимые вещества, образующиеся при ферментации зерна), материалами животного происхождения (рыбная мука, продукт, получаемый при проваривании мясной муки, продукты гидролиза аминокислот) и клетками микробов (дрожжи «торула»).
Источниками углерода служат, например, глюкоза, глицерин, декстрин, и кукурузный крахмал. Кроме неорганических солей, обычно присутствующих в природных средах, можно вводить дополнительные соли, такие как фосфат калия, карбонат кальция, сульфа магния и микроэлементы, которые иногда улучшают рост и выход антибиотика (в зависимости от компонентов уже присутствующих в основной среде). Одной из рекомендуемых сред для производства антибиотика Х-5108 в
404186
Таблица 5
Продолжение
Активность антибиотика, ед/мл
Активность антибиотика, ед/мл
Возраст, Возраст, Источник азота
Источник азота дни дни
12
18
26
41
50
52
57
37
138
19
51
34
12
47
21
16
22
26
16
Таблица 6
Состав среды, %
Ферментация в колбах в течение
7 дней
Растворимое вещество,Дистиллеро"
Кукурузный крахмал
Твердое вещество томатной пасты в резервуарах в течение 6 дней
Глюкоза
100:120
71: 46
150
0,5
100
0,5
86:119
0,5
150:124
125:126 не испытывали
140
1,5
180
1,5
0,1
0,1
97 (4 дня) 94
КэНРО
СаСО>
„профло" крахмал
1% отвара из мяса с мукой
1% ВУ-100 („Коммершиал
Солвентс Корпорейшн" )
1% „Профло" („Тредерс Ойл
Милл Компани" )
1% овсяной муки („Куокер
Отс Компани" )
1% „Сойалоз (обезжиренной муки соевых бобов)
1% белковой муки из арахиса
1% белковой муки из кокосовых орехов
1% твердого вещества томатной пасты
1% муки с льняным маслом
1% кукурузной муки
1% высушенного экстракта из зерна кукурузы вместе с растворимыми веществами (Х. Уоркер)
1% „Солудри" („Шпили Дистиллерс")
1% рыбьей муки (Гортон)
1% отходов рыбы (Уилкинсон)
2% смеси молочного сахара с альбуминомэ)
1% высушенных дрожжей
„торула"
1% автолизата дрожжей
„нейшенел"
1% гидролизата сои, образовавшегося под действием энзимов
1% гидролизата белков пшеницы, образовавшегося при кислотном гидролизе („Гурон Миллэ")
2% гомогенизированной отжатой рыбы" )
1% протопентона № 366 („Уилсон Лабораториз")
1% твердого вещества кукурузных початков
1% навара мяса с мукой
1% остатка после ферментации зерна (ВУ-100)
1% обезжиренной муки из семян хлопка (.Профло"
1 б отходов рыбы )
1% высушенного экстракта из кукурузы с растворимыми веществами (Х. Уокер)
1% обезжиренной муки из семян хлопка )
1% обезжиренной муки из семян хлопка
0,25% „Профло" э *
2,0% „Профло" э
1О/ Профло", 1% глюкозы*)
1 б „Профло".1 У крахмалаэ)
1% „Профло", 1% глицеринаэ)
1% „Профло", 1% желтого сахара*)
1% „Профло, 1% лактозы )
I% „Профло", 1% маннита ) ) Среда не содержит декстрина ) Среда не содержит СаСОэ
* *) Среда не содержит СаСОа или КяНРО
Выход антибиотика, ед/мл
404ll86
Та блица 7
Характеристика резервуара
День сбора
Активность, ед/мл
Состав среды, %
Загрузка среды, л
Материал
Объем, л
1% высушенного вещества после экстракции, 1% декстрина, 0,1% KRHPO4, 0,1% СаСО>
295
454
Нержавеющая сталь
1% 1-глутамата натрия, 1% декстрина, О, 1% твердого вещества кукурузных початков, 0,15% КаНРО4 0,05% МяЯО, 454
295
То же
1% твердого вещества томатной пасты, 1% высушенного растворимого вещества после экстракции зерен кукурузы, 1% кукурузного крахмала, 0,5% глюкозы, 0,5% СаСОз 0,1% КзНРО4
295
200
454
0,5% „Профло, 0,5% высушенного растворимого вещества после экстракции зерен кукурузы, 0,5% твердого вещества томатной пасты, 0,5% пасты из экстракта мяса (протопентон № 366), 1% крахмала, О, 1% СаСО„О, 1% К2НРО4
14500
1900
Углеродистая сталь
1% „Профло", 0,5% жидкости из кукурузных початков, 1,0% кукурузного крахмала, 0,1% СаСОз, 0,1% КаНРО4
То же
220
260
340 больших аппаратах для ферментации, является среда, содержащая 1% обезжиренной муки из семян хлопка, 0,5% концентрата жидкости, получаемой при выщелачивании кукурузы, 1% кукурузного крахмала, 0,1%
К..НРО,, 0,1 % карбоната кальция.
В табл. 5 приведена характеристика питательпых веществ для антибиотика Streptom aces sp. Х-5108 во встряхиваемых колбах, а в табл. б — влияние изменения питаStreptomyces sp. Х-5108 хорошо растет также и образует антибиотик на некоторых химических синтетических средах, содержащих аммониевые соли, нитрат или аминокислоты (глутамат, аргинин, глицин), служащие источниками азота вместе с глюкозой, декстрином, крахмалом, цитратом, ацетатом, служащими источниками углерода, с добавкой таких солей, как фосфат калия, карбонат кальция и сульфат магния и с микроэлементами, включающими ионы двухвалентного железа, двухвалентной меди, двухвалентного марганца, двухвалентного кобальта, двухвалентного цинка. Результаты форментации 51гео/отусез
sp. Х-5108 на различных синтетических средах приведены в табл. 8.
Продукция антибиотика Х-5108 возрастает при хорошей аэрации среды для ферментации. Кроме того, получение антибиотика
Х-5108 может быть осуществлено при любой температуре, обуславливающей удовлетворительный рост микроорганизма. Так например, Streptomyces sp. Х-5108 выращивался в колбах, инкубировавшихся при температуре 24, 28, 30 и 32 С. Испытания антибиотика через тельных веществ на выход этого антибиотика во встряхиваемых колбах и резервуарах.
Все среды, кроме специально оговоренных случаев, содержат 1% декстрина, 0,1%
5 К2НРО4 и 0,1% СаСОз.
В каждые 100 мл среды для инокулирования вносят 1 мл суспензии спор Streptomgces sp.
Х-5108.
Результаты ферментации в резервуарах с
10 различными средами приведены в табл. 7 три, четыре, пять и шесть дней показали, что примерно один и тот же максимальный выход может быть достигнут при любой температуре в пределах 24 — 32 С. Наибольший вы45 ход достигается через три — четыре дня при
30 и 32 С, в то время, как для его достижения при температуре 28 С требуется четыре дня, а при температуре 24 С вЂ” пять— шесть дней. Величина рН среды во время про50 цесса ферментации остается почти нейтральной или становится слабо кислой. Конечная величина рН зависит от присутствующих буферных веществ от первоначальной величины рН среды, которая должна быть почти нейт55 ральной до стерилизации.
В процессе выделения и очистки антибиотика Х-5108 можно использовать самые различные способы, например, способ экстракции растворителем, способ периодической экс60 тракции или непрерывной противоточной экстракции «из жидкости в жидкость», осуществляемый в экстракционных колоннах и метод хроматографии, основанный на проникновении в гель сырого антибиотика, выделенного из
65 культуральной среды.
40418G
Продолжение
Таблица 8! Возраст, дни
В озраст АктиВность
1 ант. биотика, сД/ил
АктиВность антибиотика, ед/мл
Состав среды, %
Состав среды, ",, 1,0% глутамата натрия, 1% декстрина, 0,1% К4НРО„
0,05% MgSO,, 1,0% смеси аминокислот, 1% декстрина
0,1% К,НРО4, 0,1% солей
ЧБР №
BBI бульон Чапека — Докса
1,0% аргинина, 1,0% декстрина, 0,1% К,НРО4, 0,1/
СаСО,, 0,05% MgSO4
1,0% Д1.-аспаргиновой кислоты, 1,0 % декстрина, 0,1% К,НРО4, 0,1% СаСО„
0,05% Мф04
1 5
7,6
6,6! !
11,5
47,4 натрия, 0,5% хлористого натрия, 0,025% Мф04
7Н40, 0,01% KsHPO4
0,01.% КН РО4 0,3% СаСО,, 0,001%,MnSO4. 4Н О, 0,004 ;
MgSO4. 7Н40, 1,6. 10
К4Сг40-, 0,8
0,8
Таблица 9
Антибиотик НатриеХ-5108, вая соль, вес, „вес, Элементы
Углерод
Водород
61, 48
7,81
3,32
24,45
2,94
63,63
7 81
3,48
25,08
Азот
Кислород (ио разности)
Натрий
Антибиотик Х-5108 из культуральной среды выделяют путем отделения мицелия при помощи фильтрования или центрифугирования.
"-атем его экстрагируют из профильтрованного или процентрифугированной среды как периодический или противоточиый метод распределительной экстракции. Зкстракции растворителем осуществляют в интервале величин рН 3 — 7,5 с использованием не смешивающихся с водой сложных эфиров в качестве растворителя, этилацетат, амилацетат, бутилацетат и тому подобные алифатические сложные эфиры. Рекомендуется пользоваться бутил а цетатом. Лучшая систем а р а створ ителей для использования при противоточном распределительном методе состоит из смеси этилацетата, изопропанола и 0,1 н. водного раствора вторичного фосфата натрия.
Конечную очистку антибиотика Х-5108 осуществляют методом хроматографии, основанным на проникновении в гель. Очистка основана на адсорбции предварительно очищенного препарата антибиотика, например, препарата, полученного при экстракции растворителем, на геле декстрана с поперечными связями или на полимеризованном геле декстрана. Предварительно очищенный препарат антибиотика подвергают хроматографированию на сефадексе BH-20 с элюированием спиртом.
После фильтрования или центрифугирования среды для ферментации для анализа антибиотика Х-5108 пользуются методом хроматографии на тонком слое или методом хроматографии на бумаге. В связи со свойствами антибиотика, визуальную оценку пятен осуществляют с использованием флуоресцентного метода; кроме того, можно пользоваться методом биоавтографии. Хроматографировапие лучше проводить на стеклянных пластинках с силикагелем. Применяемая ири хроматографии на тонком слое система растворителей состоит из хлороформа, метанола и водного гидрата окиси аммония, 0,1% глутамата натрия, 0,6% (1ЧН4)2НРО„1 % глюкозы, 1)% декстрина, 0,1%
К,НРО„0,1 % СаСО„, 0 1% KCl 0>05% Мф04 I 5
0 33% РНД,НРО„1 5% глюкозы, 0,1% цитрата натрия, 0,05% ацетата антибиотик Х-5108 после очистки представляет собой аморфное желтое вещество. Для получения солей этого антибиотика с катио25 í",ìè пользуются антибиотиком Х-5108 и фармацевтически приемлемым неорганическим или органическим основанием. К числу солей антибиотика Х-5108 относятся соли с щелочиыми металлами, такие, KBK натриевая и ка30 лиевая соли, соли со щелочноземельными металлами, такие как кальциевая соль.
Эти соли получают при использовании водных растворов гидратов окиси щелочных и щелочноземельных металлов. Так, растворы
35 антибиотика Х-5108 в водном растворе гидрата окиси натрия, водном растворе гидрата окиси калия или гидрата окиси кальция образуют натриевую, калиевую или кальциевую соль. Эти соли употребляют для тех же био40 логических целей, что и антибиотик. В связи с тем, что растворы солей антибиотика Х-5108, в особенности натриевой соли, обладают значительно большеи стабильностью, чем растворы aíòèáèîòèêà в несолевой форме, пользуют45 ся слабо щелочными буферными растворами для очистки путем противоточного распределения и смесями растворителей с аммиаком при хроматографии на тонком слое, что приводит и снижению концентрации антибиотика
50 в рас-воре
Антибиотик содержит следующие элементы (см. табл, 9):
404186
4,000
4,000
28,000
45
0,025
Антибиотик Х-5108 растворим в спиртах, например, в метаноле, этаноле, 1- и 2-пропаноле, и в трет-бутиловом спирте; в несмешивающихся с водой сложных эфирах, например, в этилацетате, амилацетате, бутилацетате, алифатических сложных эфирах; растворим в хлороформе. Антибиотик нерастворим в воде. Натриевая соль антибиотика Х-5108 растворима в воде, низших спиртах, таких как метанол, этанол, изопропанол и бутанол, и в N,N-диметилформамиде; слабо растворима в амиловом спирте, тетрагидрофуране и диоксане; очень слабо растворима в ацетоне, амилацетате, бутилацетате и этилацетате и нерастворима в бензоле, хлороформе и диэтиловом эфире.
Ниже приведены различные физические свойства антибиотика Х-5108: (сс) о = — 82,8 (с=0,52 этанол)
ИК-спектр антибиотика Х-5108 (таблетки с бромистым калием), см- . 3400 (широкая);
1660 (сильная); 1580 (широкая); 1580, 1380, 1250, 1100, 1040 и 995.
ИК-спектр натриевой соли антибиотика
Х-5108 (таблетки с бромистым калием), см- и 3400 (широкая); 1645, 1570, 1500, 1388, 1105 и 1000.
Для УФ-спектра Хм„„ммк
334 (Е1 см =403, 0,1 н. НСI);
233 (Е у см = 610, 0,1 н. HCI);
206 (Е1 см =500, 0,1 н. HCI);
327 (Е1"„=423, буферный раствор изопропанол/К2НРО4 с рН 7;
231 (Egсм =660, буферный раствор изопропанол/К НР04 с рН 7;
327 (Егер =416; 0,1 н. КОН;
231 (E 1с, мм=647, 0,1 н. КОН).
ЯМР-спектр антибиотика Х-5108 (СНС1, и тетраметилсилана — внутренний стандарт), б:
0,92; 1,66 и 2,03, 3,16 и 3,43 и в области сигналов характерной для олефинов.
Антибиотик Х-5108 обладает широким спектром микробицидной активности. Спектр определен методом с чашкой и пластиной, с диффузией в среде агар-агара. Антибиотик
Х-5108 имеет низкую оральную и парентеральную токсичность, значительную активность против стрептококков при систематическом (оральном) и местном (субкутанном) введении, активность против пневмококков и кишечного кокцидиоза.
Антибиотик Х-5108 употребляется в качестве активного ингредиента в новых и ценных препаратах, которые при оральной даче домашней птице приводят к усиленному росту и повышенной эффективности питания животных. Введение этих препаратов осуществляют путем примешивания их к сбалансированным в отношении питательности кормам для домашней птицы. Активный ингредиент — антибиотик Х-5108 вводят в концентрированную, предвари:ельно полученную смесь, которая в дальнейшем может быть добавлена к корму для домашней птицы. При приготовлении твердой предварительно изготовленной смеси, содержащей антибиотик Х-5108, любой подходящий носитель или инертный наполнитель может вести себя как инертный ингредиент при условии, что он является инертным по отношению к активному антибиотику, используемому в качестве добавки, и нетоксичен для домашней птицы, получающей этот препарат.
Такому требованию удовлетворяют многочислепные твердые материалы, источники минеральных продуктов, такие как измельченная устричная скорлупа, съедобные злаковые растения, материалы растительного, морского или животного происхождения, например, которые содержатся в кормах животного происхождения; кукурузная мука, мука, получаемая из цитрусовых растений, соевая мука, рыбья мука, отходы мяса, высушенные остатки после сбраживания и т. п.
Количество антибиотика Х-5108, требующееся для достижения желательного стимулирования скорости роста и повышения эффективности кормления, варьируют на 100 вес, ч. корма примерно 0,0001 — 0,01 вес. ч. антибиотика.
П р и м ер 1. Определение стимулирующего рост эффекта антибиотика Х-5108.
Основной рацион готовят из следующих ингредиентов, вес. :
Измельченное желтое зерно кукурузы 56,075
Мясо и костная мука (50% белков)
Рыбья мука (60% белков)
Соевая мука (50% белков)
Дегидратированная мука из моцерны 1,000
Животный мир 4,000
Метионин 0,200
Минеральный фосфат 0,250
Карбонат кальция 1,200 йодированная соль 0,250
Добавка витаминов 1,000
Добавка следовых минеральных компонентов
К этому рациону прибавляют антибиотик
Х-5108 в количестве 50 мг антибиотика на
1 кг рациона.
Стимулирующие рост эффекты антибиотика
Х-5108 определяют путем непринудительного кормления домашней птицы рационом с добавкой антибиотика Х-5108. Для испытаний берут 1-дневных цыплят породы «скрещенных бройлеров».
При опытах пользуются группами, состоящими из 5 цыплят мужского пола и 5 цыплят женского пола. Этим группам дают свободный доступ к корму. Случайное распределение дублеров позволяет выравнять влияние таких факторов, как обогрев, свет и положение, Птиц наблюдают в течение двухнедельного периода времени, и вес цыплят измеряют через 14 дней. Регистрируют также коли404186 способом, за исключением того, что контролЬным цыплятам дают свободный доступ к корму, содержавшему те же питательные ингредиенты, но не содержавшему добавки анти5 биотика Х-5108. чество потреблявшегося корма и вычисляют эффективность кормления по сравнению с контрольными экземплярами.
Одновременно проводят контрольные опыты, при которых пользовались описанным выше
Средний конечный вес — средний начальный вес испытательной группы
Привес, Средний конечный вес — средний начальный вес контрольной группы
>(100
В табл. 10 приведены результаты этих опытов.
Т аблица 10
Улучшение эффективности кормления, %
Эффективность кормления, %
Привес за
2 недели ) Добавка антибиотика (мг/кг корма) Привес, %
Антибиотик
Х-5108
Антибиотик
Х-5108
Антибиотик
КонтРоль у 5108 Контроль
Антибиотик
Х-5108
Антибиотик
Х-5108
Контроль
Контроль
Контроль
1,39
1,55
154 8 185 12
+12
100
120
":) Среднее значение для 40 цыплят. цыплятам дают корм с добавкой, содержав25 шей активный ингредиент в количестве 5, 10, 25, 50 и 100 мг на 1 кг рациона. Эти опыты повторяют для лучшего подтверждения результатов. При контрольных опытах четыре группы по 10 цыплят питаются основным ра30 пионом, лишенным добавки антибиотика. При всех опытах скорость роста за двухнедельный период времени сравнивают с ростом контрольной группы. Регистрируют также потребление корма и улучшение эффективности пи35 тания по савнению с контрольной группой.
В табл. 11 приведены результаты опытов.
Таблица 11
Эффективность питания
Процент улучшения эффективности питания
Уровень питания, мг/кг
Привес за 2 недели, г
Число птиц
Привес,%
Добавка
+12
+ 7
—, 16
25
+ 9
+13
+14
100
Предмет изобретения в частности домашней птицы, она содержит
60 антибиотик Х-5108 или его физологически акКормовая добавка, отличающаяся тивные соли. тем, что, с целью ускорения роста животных, Из приведенной таблицы видно, что цыплята, питавшиеся с добавкой 50 мг антибиотика
Х-5108 на 1 кг корма дают усиленный рост по сравнению с группой контрольных цыплят.
В то же время, как показывает 10%-ное улучшение эффективности питания, те же птицы извлекают больше пользы из получаемого корма.
Пример 2. Опыт, описанный в примере 1, включая контрольный опыт, повторяют несколько раз с использованием того же основного рациона. При этих опытах уровень антибиотика Х-5108 варьируют. Испытательным
Контроль
Антибиотик Х-5108
Контроль
Антибиотик Х-5108
Контроль
Антибиотик Х-5108
Контроль
Антибиотик Х-5108
Контроль
Антибиотик Х-5108
Контроль
Антибиотик Х-5108
48
24
18
18
48
18
48
18
48
149
152
173
146
149
183
149
149
182
117
114
123
123
124
122
1,54
1,37
1,47
1,38
1,59
1,37
1,51
1,39
1,54
1,41
1,54
1,33